检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物制品学杂志 2014年第11期27卷 1388-1393页

作者：程晨冯敏杨二霞普晶崔萍芳张莹李建平陈姝樾王丽春赵树栋王晶晶李剑兰刘龙丁李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的分析肠道病毒71型（Enterovirus 71,EV71）在病毒增殖的动力学过程中不同时间点的病毒样品所具有的两种结构形式及免疫学特性,为疫苗的研发及质控提供参考。方法利用Opti Prep密度梯度离心获得EV71两种结构形式,电镜扫描观察两种结... 详细信息

目的分析肠道病毒71型（Enterovirus 71,EV71）在病毒增殖的动力学过程中不同时间点的病毒样品所具有的两种结构形式及免疫学特性,为疫苗的研发及质控提供参考。方法利用Opti Prep密度梯度离心获得EV71两种结构形式,电镜扫描观察两种结构形式的颗粒形态;采用病毒微量滴定法测定病毒两种结构形式的感染性滴度;EV71抗原生物素-亲和素酶联免疫（BA-ELISA）方法测定病毒两种结构形式的抗原含量;QRT-PCR法测定两种结构形式的病毒RNA含量;SDS-PAGE及Western blot鉴定病毒两种结构形式。将分离得到的空壳及实心病毒颗粒成分用甲醛灭活后,与Al（OH）3佐剂混合,对小鼠进行皮下多点注射,分别于初免28 d及二免7、14 d,经小鼠尾静脉采血,分离血清,采用微量中和试验法检测抗EV71中和抗体;将二免14 d后的雄、雌鼠合笼,生产后24 h内,用EV71FY-23对乳鼠进行颅内注射,10 d内观察乳鼠存活率。结果经Opti Prep密度梯度离心后,可获得两条沉降系数不同的病毒条带,位于上层的病毒结构成份基本以空心衣壳颗粒形式存在;下层病毒结构成分在感染前期主要为以实心颗粒形式存在,感染后期则以空壳和实心颗粒同时存在,两种结构形式均能被抗EV71特异血清识别。在病毒感染过程中,下层毒粒感染性滴度均比上层毒粒高2~3个log值;两种结构形式的抗原滴度均呈增加的趋势,但下层毒粒抗原滴度增加更为明显;病毒两种结构形式两层的RNA含量不同,下层毒粒中VP0均已裂解形成VP2和VP4,而上层毒粒中以VP0为主要成分。初免后28 d及二免后7、14 d,两种结构形式的EV71均诱导小鼠抗体阳转,但上层毒粒诱导的中和抗体效价及增长速度均明显低于下层毒粒（P均〈0.001）。病毒两种结构形式免疫小鼠产生的乳鼠免疫保护效率均为100%。结论 EV71的两种结构形式虽然具有差异,但作为病毒疫苗抗原用于免疫时,均具有免疫学意义。

关键词：肠道病毒71型结构形式免疫学特性

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一株引起病毒性脑炎的柯萨奇B3病毒的生物学特性分析

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中国病原生物学杂志 2014年第4期9卷 293-298页

作者：李华杨卉娟王东宝柯华昕王玺沈冬王庆玲马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所、云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的通过分析分离自病毒性脑炎病人的一株柯萨奇病毒B3株KMA103-09生物学特性,研究其致病机理。方法将KMA103-09病毒分别按一定量接种至KMB17细胞、RD细胞、VERO细胞、Hep-2细胞、Hela细胞及MRC-5细胞进行培养,观察细胞的生长情况,并采... 详细信息

目的通过分析分离自病毒性脑炎病人的一株柯萨奇病毒B3株KMA103-09生物学特性,研究其致病机理。方法将KMA103-09病毒分别按一定量接种至KMB17细胞、RD细胞、VERO细胞、Hep-2细胞、Hela细胞及MRC-5细胞进行培养,观察细胞的生长情况,并采用微滴法检测病毒在不同时间、不同细胞中的病毒感染滴度;将一定量KMA103-09病毒注射乳鼠和成鼠脑内,观察病毒的致病性,并检查鼠血清中IL-2、IL-4、IL-6、IFN-r、TNF、IL-17A、IL-10含量。结果该病毒株在6种细胞上皆能适应生长,并产生明显的细胞病变效应。病毒在Hela细胞上生长繁殖最快,42h时细胞全部发生病变,感染性滴度达8.625lgCCID50/ml;在MRC-5细胞上病毒的感染性滴度最低,120h才全部发生病变,感染性滴度为5.50lgCCID50/ml。该病毒对一日龄乳鼠致死并在脑、肺和心脏等组织产生病理改变,实验乳鼠血清IL-6、IL-10、TNF含量分别为4.71pg/ml、21.08pg/ml和36.79pg/ml,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),其余4种皆无表达。该病毒对成鼠不致病,脑、肺、心脏病理检查无异常。结论 KMA103-09病毒在Hela细胞生长适应性良好,对乳鼠致病而对成鼠不致病。

关键词：柯萨奇病毒B3 致病性生物学特性

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表达轮状病毒nsp4基因重组腺病毒的构建与免疫评价

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中国生物工程杂志 2014年第2期34卷 1-6页

作者：谢力王晓囡李杨严敏曹颖李鸿钧孙茂盛中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 昆明学院医学院昆明650214

目的:应用非复制腺病毒表达系统构建表达人轮状病毒非结构蛋白4(NSP4)的重组腺病毒,初步评价其免疫保护效果。方法:构建含野生轮状病毒NSP4基因的穿梭质粒pshuttle-NSP4,与腺病毒骨架质粒pAdeasy经同源重组后在Ad-293细胞中包装获得pAd-... 详细信息

目的:应用非复制腺病毒表达系统构建表达人轮状病毒非结构蛋白4(NSP4)的重组腺病毒,初步评价其免疫保护效果。方法:构建含野生轮状病毒NSP4基因的穿梭质粒pshuttle-NSP4,与腺病毒骨架质粒pAdeasy经同源重组后在Ad-293细胞中包装获得pAd-NSP4重组腺病毒颗粒。电镜、RT-PCR、免疫荧光等方法鉴定病毒特征及在体外细胞中的表达。肌肉注射及滴鼻方式免疫小鼠,检测小鼠血清抗体效价及其中和保护效果。结果:获得了滴度为108.25CCID50/ml的重组腺病毒pAd-NSP4,免疫荧光检测到特异性目的蛋白的表达。二次免疫后肌肉注射和滴鼻小鼠的ELISA血清平均效价分别为1∶320和1∶1436.8;中和抗体效价1∶45.3和1∶71.8。结论:表达轮状病毒NSP4蛋白的非复制型重组腺病毒颗粒具有良好的免疫原性。滴鼻途径比肌肉注射可更加有效地诱导小鼠的免疫应答。

关键词：轮状病毒 NSP4 重组腺病毒 NSP4

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云南汉族人群内质网氨肽酶2基因多态性与非小细胞肺癌遗传易感性的相关性

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中华结核和呼吸杂志 2014年第12期37卷 909-914页

作者：周竞贤马千里郭晨史荔姚宇峰俞建昆张晓琳中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 昆明医科大学第三附属医院胸外科

目的探讨内质网氨肽酶2 （ERAP2）基因多态性与非小细胞肺癌（NSCLC）的相关性.方法收集云南地区汉族人群NSCLC患者223例,健康体检者205名.采用Taq Man探针基因分型方法对ERAP2基因单核苷酸多态性（SNP） rs2248374和rs2549782位点进... 详细信息

目的探讨内质网氨肽酶2 （ERAP2）基因多态性与非小细胞肺癌（NSCLC）的相关性.方法收集云南地区汉族人群NSCLC患者223例,健康体检者205名.采用Taq Man探针基因分型方法对ERAP2基因单核苷酸多态性（SNP） rs2248374和rs2549782位点进行基因分型,并构建单倍型,评估上述2个SNP位点及单倍型与NSCLC的相关性.结果病例组和对照组ERAP2基因rs2248374等位基因频率A和G分别为45.5％（203/446）、54.5％（243/446）和37.8％（155/410）、62.2％（255/410）,差异有统计学意义（x2=5.220,P＜0.05）,rs2549782位点GG、GT、TT基因型频率分别为21.5％（48/223）、48.9％（109/223）、29.6％（66/223）和11.7％（24/205）、49.8％（102/205）、38.5％（79/205）;等位基因频率G和T分别为46.0％（205/446）、54.0％（241/446）和36.6％（150/410）、63.4％（260/410）,差异有统计学意义（x2值为8.656和7.741,均P＜0.05）,由rs2248374和rs2549782位点构建的单倍型AG和GT的频率分别为44.6％（199/446）、36.1％（148/410）和53.1％（237/446）、61.7％（253/410）,差异有统计学意义（x2值为6.567,均P＜0.01）.病例组中吸烟和非吸烟患者rs2248374位点的等位基因频率A和G分别为52.9％（72/136）、47.1％（64/136）和42.3％（131/310）、57.7％（179/310）,rs2549782位点的等位基因频率G和T分别为54.4％（74/136）、45.6％（62/136）和42.3％（131/310）、57.7％（179/310）,差异有统计学意义（x2值为4.498和5.831,均P＜0.05）,而鳞癌和腺癌患者的rs2248374位点AA、AG、GG基因型频率分别为17.3％（24/139）、56.1％（78/139）、26.6％（37/139）和27.8％（22/79）、38.0％（30/79）、34.2％（27/79）,rs2549782位点GG、GT、TT的基因型频率分别为18.7％（26/139）、55.4％（77/139）、25.9％（36/139）和27.8％（22/79）、36.7％（29/79）、35.4％（28/79）,差异有统计学意义（x2值为6.999和7.093,均P＜0.05）.结论 ERAP2基因与NSCLC的发生及病理类型有关,rs2248374和rs2549782位点AG单倍型可能增加NSCLC的患病风险（OR=1.435,95％ CI为1.088 ～ 1.893）,而rs2248374和rs2549782位点GT单倍型可能降低NSCLC的患病风险（OR=0.697,95％ CI为0.528 ～0.919）.

关键词：癌,非小细胞肺多态性,单核苷酸内质网氨肽酶2

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信号素4D影响直肠癌裸鼠移植瘤的血管新生

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中国肿瘤临床 2014年第14期41卷 885-889页

作者：丁晓洁李多黄新伟付娟娟潘玥陈俊英孙强明中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所分子流行病学联合实验室昆明市650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

目的:本文利用慢病毒介导的RNA干扰,在结直肠癌裸鼠皮下移植瘤模型中研究信号素4D(Sema4D)对血管新生的影响。方法:包装制备对照慢病毒和Sema4D shRNA干扰慢病毒,感染直肠癌细胞HCT-116。Transwell迁移实验检测对照组和干扰组诱导内皮... 详细信息

目的:本文利用慢病毒介导的RNA干扰,在结直肠癌裸鼠皮下移植瘤模型中研究信号素4D(Sema4D)对血管新生的影响。方法:包装制备对照慢病毒和Sema4D shRNA干扰慢病毒,感染直肠癌细胞HCT-116。Transwell迁移实验检测对照组和干扰组诱导内皮细胞迁移的能力。对照组和干扰组分别接种于裸鼠双侧腋窝皮下。观察记录肿瘤生长,收获移植瘤做免疫组化和免疫荧光检测。结果:研究发现干扰Sema4D的表达能减弱癌细胞诱导内皮细胞迁移的能力,显著减缓移植瘤生长速度并降低瘤内血管密度。结论:由于Sema4D在诱导血管新生中的作用,干扰其信号通路将可能通过抑制血管新生来阻止肿瘤生长或转移,因此Sema4D有可能成为肿瘤抗血管新生疗法中有价值的治疗靶点。

关键词：结直肠癌信号素4D 血管新生移植瘤模型 RNA干扰

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一株引起病毒性脑炎的埃可病毒30型分离株的VP1基因序列特征分析

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中国生物制品学杂志 2014年第2期27卷 163-167页

作者：陈俊英潘玥吉玛张云昆朱云朱艳菊邵聪文马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的分析2009年昆明市病毒性脑炎患儿粪便中分离获得的埃可病毒30型（Echovirus30,Echo30）分离株A363/KM/2009全长VP1基因序列特征。方法从疑似病毒性脑膜炎患儿粪便样本中分离Echo30,提取病毒RNA,采用RT-PCR法扩增病毒VP1基因,并进行... 详细信息

目的分析2009年昆明市病毒性脑炎患儿粪便中分离获得的埃可病毒30型（Echovirus30,Echo30）分离株A363/KM/2009全长VP1基因序列特征。方法从疑似病毒性脑膜炎患儿粪便样本中分离Echo30,提取病毒RNA,采用RT-PCR法扩增病毒VP1基因,并进行测序。采用NCBI BLAST软件对所测定的序列进行数据库比对;采用Geneious软件对Echo30分离株全长VP1基因的核苷酸及氨基酸同源性进行分析;采用Mega 5.1软件对A363/KM/2009分离株进行VP1基因分析,并与20个参考株的VP1序列进行比较。结果分离株为A363/KM/2009,其VP1基因的核苷酸长度与其他Echo30一致,均为867 bp;与其他Echo30分离株核苷酸同源性在76.9%-95.7%之间,氨基酸同源性在88.7%-99.7%之间;与中国株的核苷酸和氨基酸的同源性分别为84.5%-95.7%和96.9%-99.7%,其中与中国浙江分离株Echo30/zhejiang/10/4的同源性最高,为95.7%;与广西分离株GX10/15的同源性最低,为84.5%。氨基酸序列分析显示,与其他中国株包括脑脊液分离株相比,未见特异的突变位点;与国外分离株的核苷酸和氨基酸同源性分别为76.9%-86.3%和88.7%-97.3%;基因进化树分析显示,与其他中国株分属不同的两个分支,而与Echo30/zhejiang/10/4和Echo30/zhejiang/4/04（CSF）株亲缘关系较近。结论 A363/KM/2009分离株为肠道病毒Echo30,属于中国两个分支中的一支。

关键词：病毒性脑炎埃可病毒30型 VP1基因序列分析

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Vero细胞培养流感病毒的低血清培养基的筛选

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中国生物制品学杂志 2014年第5期27卷 687-690页

作者：耿兴良戴宗祥段盼盼郭琦宋绍辉寸怡娜姜述德廖国阳中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的筛选Vero细胞生长的最适低血清培养基,用于流感病毒的细胞培养。方法分别以MEM、M199、DMEM/F12、DMEM/F12与MEM混合物(1∶1)为基础培养基,添加5%、2%、1%的小牛血清传代培养Vero细胞,通过细胞形态观察、细胞计数及MTT法检测细胞的... 详细信息

目的筛选Vero细胞生长的最适低血清培养基,用于流感病毒的细胞培养。方法分别以MEM、M199、DMEM/F12、DMEM/F12与MEM混合物(1∶1)为基础培养基,添加5%、2%、1%的小牛血清传代培养Vero细胞,通过细胞形态观察、细胞计数及MTT法检测细胞的增殖活力筛选最适基础培养基;将流感病毒接种低血清适应的Vero细胞,检测病毒收获液的血凝效价及残留BSA含量,电子显微镜观察病毒形态。结果以DMEM/F12与MEM混合物(1∶1)为基础培养基,添加2%小牛血清培养的Vero细胞长势良好,细胞数量较多,增殖活力最强。低血清适应的Vero细胞培养的流感病毒血凝效价最高可达1∶512,平均值为1∶384;病毒液中的残留BSA含量约为正常血清培养条件下的1/18;病毒形态完整。结论成功筛选出Vero细胞培养流感病毒的低血清培养基,为更具生物安全性的流感疫苗的研发奠定了基础。

关键词： Vero细胞流感病毒血清培养基生物安全性

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白细胞介素-6对肠道病毒71型感染乳鼠致病理损伤的促进作用

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中国生物制品学杂志 2014年第6期27卷 761-763,769页

作者：王丽春廖芸王晶晶张莹刘龙丁李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的探讨白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)对肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)感染乳鼠致病理损伤的促进作用。方法以ICR乳鼠为感染模型,在EV71感染过程中同时注射IL-6或抗-IL-6抗体,以单独注射IL-6和注射PBS作为对照。接种后每天观... 详细信息

目的探讨白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)对肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)感染乳鼠致病理损伤的促进作用。方法以ICR乳鼠为感染模型,在EV71感染过程中同时注射IL-6或抗-IL-6抗体,以单独注射IL-6和注射PBS作为对照。接种后每天观察存活乳鼠的数量及活动体征,持续观察11 d,计算乳鼠存活率;Real-time PCR法检测各组乳鼠脑组织中的病毒载量;HE染色观察乳鼠脑组织的病变情况。结果脑部注射局部环境内提高IL-6的含量,能促进EV71对乳鼠的致病作用,可显著促进乳鼠的死亡;脑内注射抗-IL-6抗体对EV71脑内注射的乳鼠具有一定的保护作用。结论 IL-6在EV71感染时对乳鼠的致病具有促进作用,其在中枢神经系统的增高可能参与了EV71感染的免疫病理过程。

关键词：白细胞介素-6 肠道病毒71型感染

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一株鼻病毒A22型的分离鉴定及其VP1基因遗传特征分析

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中国生物制品学杂志 2014年第2期27卷 177-179,184页

作者：戴素萍潘玥邵聪文吉玛朱艳菊张云昆朱云马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的分析2011年昆明市手足口病患儿粪便中分离获得的人鼻病毒（human rhinovirus,HRV）A22型分离株KM4/2011全长VP1基因的遗传特征。方法采用KMB17细胞对手足口病患儿粪便样本中筛查出的1株HRV样品进行病毒分离,应用RT-PCR法扩增病毒VP... 详细信息

目的分析2011年昆明市手足口病患儿粪便中分离获得的人鼻病毒（human rhinovirus,HRV）A22型分离株KM4/2011全长VP1基因的遗传特征。方法采用KMB17细胞对手足口病患儿粪便样本中筛查出的1株HRV样品进行病毒分离,应用RT-PCR法扩增病毒VP1基因,并进行测序,采用BLAST软件对所测定的节段序列进行数据库比对;采用Geneious basic 5.6.5软件进行核苷酸和氨基酸同源性比对;采用Mega 5.05软件将HRV A22及部分HRV A、B和C群全长VP1基因构建系统进化树。结果分离株为KM4/2011,经扩增、测序和序列拼接获得长度为867 bp的VP1基因;KM4/2011株与其他HRV分离株核苷酸和氨基酸的同源性分别为48.1%-91.0%和38.2%-97.6%,其中与HRV A22分离株的核苷酸和氨基酸同源性较高,分别为90.8%-91.0%和97.3%-97.6%;基因进化树分析显示,KM4/2011株与HRV A22基因型属于同一个进化分枝。结论 KM4/2011分离株为HRV A22型,存在地域差异。

关键词：鼻病毒A22型 VP1基因序列分析

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不同肠道病毒71型病毒分离株3C^(pro)序列特征与病毒增殖特性分析

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中国生物制品学杂志 2014年第10期27卷 1248-1252页

作者：施海晶李海巍王晶晶陈俊英潘玥孙强明中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的探讨不同肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)分离株3Cpro中可能存在的部分位点差异与病毒毒力之间的关系。方法将采集自云南昆明的的18名手足口病(hand-foot-and-mouth disease,HFMD)患者的12份咽拭子和6份粪便样本接种Vero细胞,根... 详细信息

目的探讨不同肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)分离株3Cpro中可能存在的部分位点差异与病毒毒力之间的关系。方法将采集自云南昆明的的18名手足口病(hand-foot-and-mouth disease,HFMD)患者的12份咽拭子和6份粪便样本接种Vero细胞,根据细胞病变(CPE)情况收获病毒,二次传代后,收获病毒,提取病毒RNA,以其为模板,PCR扩增VP1和3Cpro,应用Mega 5.1软件对测序结果进行序列比对,Neighbor-Joining法构建进化树,并结合病毒增殖的动力学试验分析不同EV71分离株的增殖特性和特异性位点的相关性。结果共分离出10株能够在Vero细胞中增殖并引起细胞出现典型病变的EV71样本,均属于C4亚型。3Cpro的序列分析显示,3株EV71住院病例和1株门诊病历样本与其他6株门诊病例样本相比,核苷酸序列和氨基酸序列均存在一定的差异,且氨基酸差异主要集中在第56位(V-I)和第158位(V-I)氨基酸位点,有较短的增殖时间和较高的增殖高峰,具有不同3Cpro遗传特征的病毒间增殖速率存在差异。结论不同的EV71毒株的3Cpro序列第56位(V-I)和第158位(V-I)氨基酸位点与病毒病原学特征具有一定的相关性。

关键词：肠道病毒属 3C蛋白酶序列感染增殖

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