检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物制品学杂志 2014年第6期27卷 747-751页

作者：张莹赵红玲王丽春刘龙丁董承红李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的探讨肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）灭活疫苗（人二倍体细胞）毒种FY23-KB株在KMB-17细胞中连续传代的遗传稳定性。方法比较疫苗株FY23-KB在Vero细胞中生长的第2代（FY23-V-2）与在KMB-17细胞中适应性生长的第12（FY23-KB-1... 详细信息

目的探讨肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）灭活疫苗（人二倍体细胞）毒种FY23-KB株在KMB-17细胞中连续传代的遗传稳定性。方法比较疫苗株FY23-KB在Vero细胞中生长的第2代（FY23-V-2）与在KMB-17细胞中适应性生长的第12（FY23-KB-12）、14（FY23-KB-14）、16（FY23-KB-16）代,以及FY23-KB-14与在KMB-17细胞中适应性生长的第19（FY23-KB-19）、20（FY23-KB-20）、21（FY23-KB-21）代的VP1区序列及毒力变化情况,分析该疫苗株的遗传稳定性。结果与在Vero细胞上分离的原始毒株FY23-V-2相比,在KMB-17细胞中适应性生长的FY23-KB株的原始种子（第12代）、主种子（第14代）和工作种子（第16代）的VP1区序列出现了3个碱基突变,引起2个氨基酸改变,分别为VP1的第226位的Ser突变为Pro和第282位的Asn突变为Asp;与第14代基因序列相比,第19、20、21代的VP1区序列,分别有6、8和11个碱基突变,其中大部分为无意义突变,仅在第21代出现了两个位点（P134和P230）的氨基酸改变;所有代次的病毒滴度均维持在6.5～7.0 lgCCID50/ml。结论EV71灭活疫苗（人二倍体细胞）毒种FY23-KB株在KMB-17细胞中连续传代,VP1序列未发生明显变化,毒力均一,遗传性状方面保持了较好的稳定性,从分子水平证明了该疫苗的安全性。

关键词：肠道病毒71型疫苗二倍体细胞系遗传稳定性

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柯萨奇病毒A组16型临床分离株的生物学特性分析

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中国生物制品学杂志 2014年第5期27卷 607-611,616页

作者：姜广菊李华杨婷刘正玲谢天宏龙润乡岳磊罗芳宇谢忠平中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的对引起手足口病（hand,foot and mouth disease,HFMD）的重要病原体柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirus group A type16,CA16）临床分离株的生物学特性进行分析,为后续的疫苗研发奠定基础。方法从昆明地区HFMD临床疑似患者178份咽... 详细信息

目的对引起手足口病（hand,foot and mouth disease,HFMD）的重要病原体柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirus group A type16,CA16）临床分离株的生物学特性进行分析,为后续的疫苗研发奠定基础。方法从昆明地区HFMD临床疑似患者178份咽拭子及粪便标本中分离并鉴定CA16毒株,并对病毒的生长特性、蚀斑形态以及对乳鼠的致病性等生物学特性进行分析。结果共分离出7株CA16病毒：KM1、KM15、KM154、KM165、KM168、KM263、KM881,均属于B1亚型;病毒在Vero细胞上增殖较快,多数毒株4～6 d即可达到增殖高峰,但感染性滴度差别较大,最低为4.75 lgCCID50/ml,而最高可达7.78 lgCCID50/ml;各毒株在Vero细胞上培养相同时间形成的蚀斑形态不同,其中KM15、KM154、KM168蚀斑呈圆形,针尖样大小,边缘较清晰,KM1、KM881、KM263、KM165蚀斑较大,不规则,边缘较模糊;各毒株毒力均较强,经乳鼠颅内注射后,乳鼠均于3～6 d陆续开始发病,除KM168、KM154、KM15组乳鼠为不同程度的发病及死亡外,其他组乳鼠发病率及病毒致死性死亡率均达100%;各毒株对乳鼠的脑、心肌、肺、肌肉、脊髓和肝脏等组织均有不同程度的损伤,其中损伤较严重的组织为脑和肌肉。结论分离的CA16毒株对Vero细胞均具有良好的适应性,蚀斑清晰,毒力较强,且多数毒株感染性滴度较高,可用于CA16病毒致病机理的研究及疫苗的研发。

关键词：手足口病柯萨奇病毒A组16型生物学特性

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ECHO20病毒株KM／EV20／2010的分离鉴定及其VP1基因序列特征分析

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中国病原生物学杂志 2014年第2期9卷 97-100,134页

作者：潘玥邵聪文吉玛朱艳菊张云昆马忠飞刘建生马绍辉中国医学科学院、北京协和医学院医学生物学研究所、云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的分离并鉴定2010年云南省昆明市甲型肝炎患儿粪便标本中混存的ECHO20（Echovirus20，ECHO20）KM／EV20／2010病毒株，分析其VP1基因遗传特征。方法采用KMB17细胞对大便标本进行病毒分离；采用微量细胞病变法，经WHO肠道病毒组合血清... 详细信息

目的分离并鉴定2010年云南省昆明市甲型肝炎患儿粪便标本中混存的ECHO20（Echovirus20，ECHO20）KM／EV20／2010病毒株，分析其VP1基因遗传特征。方法采用KMB17细胞对大便标本进行病毒分离；采用微量细胞病变法，经WHO肠道病毒组合血清及单价血清对该分离株进行鉴定；采用RT—PCR法扩增病毒VP1基因并进行序列测定，并运用Mega4．0等软件进行分析处理。结果分离毒株经微量中和试验鉴定为ECH020血清型，编号为KM／EV20／2010；经RT—PCR法扩增获得为867bp的VP1基因，与国内分离株核苷酸和氨基酸的同源性分别为79．5％～91．7％和98．9％～99．6％，与国外分离株的核苷酸和氨基酸同源性分别为80．2％～83．2％和96．4％～99．6％；在进化树上云南分离株与GenBank中登录的中国国内2001年山东分离株01352和1998年法国分离株94CF1666形成一个进化分支。结论KM／EV20／2010分离株为肠道病毒ECH020型病毒，可用KMB17人二倍体胚肺成纤维细胞分离增殖。

关键词： ECHO 20病毒 VP1基因序列分析

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乙型脑炎Vero细胞灭活疫苗毒株的遗传稳定性

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中华实验和临床病毒学杂志 2014年第3期28卷 191-193页

作者：张海燕曹晗王俊荣张名梁疆莉马艳顾琴杨卉娟孙明波中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的研究流行性乙型脑炎Vero细胞灭活疫苗毒种（P3毒株）在生产过程中的遗传稳定性,为疫苗的安全性和免疫原性评价提供依据.方法检测P3毒株鼠脑传代一代毒株、主种子、工作种子、疫苗及疫苗续传5代后病毒E蛋白基因核苷酸及氨基酸序列... 详细信息

目的研究流行性乙型脑炎Vero细胞灭活疫苗毒种（P3毒株）在生产过程中的遗传稳定性,为疫苗的安全性和免疫原性评价提供依据.方法检测P3毒株鼠脑传代一代毒株、主种子、工作种子、疫苗及疫苗续传5代后病毒E蛋白基因核苷酸及氨基酸序列,并与GenBank中乙脑病毒P3株（AF036919）进行比对分析,同时比较主种子、工作种子、疫苗及疫苗续传5代后毒株的病毒滴度、抗原含量及效价.结果以上5代次病毒的E蛋白基因核苷酸及蛋白质序列完全相同,同源性均为100％,与GenBank中乙脑病毒P3株（AF036919）比较显示：核苷酸序列中第E9、E10、E324、E330、E1223、E1338基因位点存在差异,同源性为99.73％,其中只有E1223突变引起相应氨基酸aE408突变（L→S）,同源性为99.80％,但该位点为非毒力相关位点,而其他位点均为沉默突变.4个代次疫苗毒株病毒滴度均≥8.0 lgLD50/ml,且各代次抗原含量及效价较为相似.结论在生产乙型脑炎灭活疫苗（P3株）过程中建立的以Vero细胞为基质的乙脑毒种库具有良好的遗传稳定性.

关键词：脑炎病毒,日本疫苗,灭活遗传学,生物化学蛋白质E

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利用翻译延伸因子1-α启动子在毕赤酵母中表达人乳头瘤病毒16L1蛋白

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中国生物制品学杂志 2014年第4期27卷 448-452,457页

作者：金晓媚姚宇峰黄惟巍杨旭孙文佳刘存宝龙琼马雁冰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南昆明650118

目的利用翻译延伸因子1-α(translation elongation factor 1-α,TEF1-α)启动子在毕赤酵母中表达人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)16 L1蛋白。方法从毕赤酵母GS115中扩增组成型TEF1-α启动子(PTEF1-α)基因,通过基因重组替换... 详细信息

目的利用翻译延伸因子1-α(translation elongation factor 1-α,TEF1-α)启动子在毕赤酵母中表达人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)16 L1蛋白。方法从毕赤酵母GS115中扩增组成型TEF1-α启动子(PTEF1-α)基因,通过基因重组替换商业化表达质粒pPink-HC和pPink-LC的启动子PAOX1;在PTEF1-α下游分别克隆绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因和HPV 16 L1基因,构建重组质粒pTEF-GFP和pTEF-16 L1;将重组质粒电转化感受态毕赤酵母PichiaPink strain 1,培养不同时间后,荧光显微镜下观察GFP的表达;分别在YPD、YPG、YPM、YPSor培养基中培养pTEF-16 L1转化菌,检测菌体在不同培养基中的增殖情况;Western blot检测HPV 16 L1蛋白的表达水平。结果重组质粒pTEF-GFP和pTEF-16 L1经双酶切鉴定和序列分析表明构建正确;荧光显微镜检测显示,在不同培养时间PTEF1-α指导了GFP的成功表达,且表达量随培养时间的延长而降低;重组毕赤酵母在YPD和YPG培养基中生长迅速;4种培养基中均有HPV 16 L1蛋白的特异性表达,且在YPG和YPSor培养基中获得了HPV 16 L1蛋白较持续的表达。结论成功实现了组成型启动子PTEF1-α控制的HPV16 L1蛋白的表达,为HPV疫苗的低成本及方便生产提供了一个可供选择的有效方案。

关键词：翻译延伸因子1-α 启动子毕赤酵母绿色荧光蛋白人乳头瘤病毒16 L1蛋白

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灭活轮状病毒与灭活肠道病毒71型联合疫苗的免疫效果

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中国生物制品学杂志 2014年第3期27卷 292-295页

作者：叶静米鍇吴晋元郭莉莉李鸿钧孙茂盛中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所分子生物学研究室云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的评价灭活轮状病毒（rotavirus，RV）与灭活肠道病毒71型（enterovirus71，EV71）联合疫苗的免疫效果及两种抗原间的相互作用。方法将灭活RV与EV71按不同抗原含量配比制成联合疫苗免疫ICR小鼠，同时设单价疫苗组，均经小鼠腿部肌肉... 详细信息

目的评价灭活轮状病毒（rotavirus，RV）与灭活肠道病毒71型（enterovirus71，EV71）联合疫苗的免疫效果及两种抗原间的相互作用。方法将灭活RV与EV71按不同抗原含量配比制成联合疫苗免疫ICR小鼠，同时设单价疫苗组，均经小鼠腿部肌肉注射，隔2周免疫1次，共2次，分别于每次免疫后2周，经小鼠尾静脉采血，分离血清，经56。c灭活30rain后，采用血清中和试验检测小鼠血清中抗RV和抗EV71中和抗体效价。结果初次免疫后14d，各组小鼠血清中RV特异性中和抗体阳转率为50％-67％，中和抗体效价为2．2-2．8，加强免疫后14d，抗体阳转率达100％，中和抗体效价为28．5-35．9。初次免疫后14d，各组小鼠血清中抗EV71中和抗体阳转率为83％-100％，中和抗体效价为4．0-7．1，加强免疫后14d，中和抗体阳转率达100％，中和抗体效价为25．4-71．8；联合疫苗组与单价疫苗组间抗RV及抗EV71中和抗体效价差异无统计学意义（P〉0．05）；Rv和EV71抗原量按160／160EU配比时，可诱导出最高的抗RV抗体及抗EV71抗体应答。结论Rv与EV71联合疫苗可诱导小鼠产生针对两种病毒的体液免疫应答，抗体应答水平与疫苗抗原配比剂量相关，未发现两种抗原间有协同或拈抗作用。

关键词：轮状病毒肠道病毒71型灭活疫苗联合疫苗

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MF59佐剂对脊髓灰质炎灭活疫苗诱导恒河猴细胞免疫应答的影响

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中国生物制品学杂志 2014年第10期27卷 1263-1267页

作者：张雪梅徐婧雯吴忠香王葳徐小宁董少忠中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所病毒疫苗研究组云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 诺华(中国)生物医学研究有限公司上海200040

目的分析以MF59为佐剂的脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)免疫恒河猴后诱导的细胞免疫应答。方法将恒河猴分为4组:无佐剂低剂量组(IPVL-PBS组)、低剂量MF59佐剂组(IPVL-MF59组)、无佐剂高剂量组(IPVH-PBS组)和低剂量铝佐剂组(IPVL-AL组)。高剂量... 详细信息

目的分析以MF59为佐剂的脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)免疫恒河猴后诱导的细胞免疫应答。方法将恒河猴分为4组:无佐剂低剂量组(IPVL-PBS组)、低剂量MF59佐剂组(IPVL-MF59组)、无佐剂高剂量组(IPVH-PBS组)和低剂量铝佐剂组(IPVL-AL组)。高剂量组IPV每剂中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型抗原含量分别为30、32、42 DU,低剂量组IPV每剂中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型抗原含量分别为3、3.2、4.2 DU,0.5 ml/剂,其中MF59为0.25 ml/剂,氢氧化铝为0.5 mg/剂,均于第1、28、56天经恒河猴后腿肌肉注射,分别于免疫后第28、56、84天采血,分离血清,微量中和试验法检测血清中和抗体效价;分别于免疫后第56和84天,取外周血,分离淋巴细胞,上流式细胞仪检测特异性抗原刺激下的Th1型细胞因子(IL-2、IFNγ、TNF)和Th2型细胞因子(IL-4、IL-5、IL-6)分泌水平,以及CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞比例的分布情况。结果恒河猴经3次免疫后,IPVL-MF59组血清中和抗体阳转率明显高于其他各组,达75%以上。恒河猴免疫后第56天,IPVL-MF59组IFNγ和TNF分泌水平明显高于IPVL-AL组(P均<0.05),IL-6分泌水平明显高于IPVL-PBS和IPVH-PBS组(P均<0.05);免疫后第84天,各组IL-2、IFNγ、TNF均稳定在同一水平,IL-4、IL-5分泌水平均明显高于第56天(P均<0.05)。免疫后第84天,IPVL-MF59组CD8+T淋巴细胞百分比均明显高于IPVH-PBS和IPVL-PBS组(P均<0.05)。结论 MF59佐剂能增强IPV诱导的TNF和IL-6的分泌水平,增强Th1和Th2类反应。

关键词：脊髓灰质炎灭活疫苗 MF59佐剂细胞因子细胞免疫

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两种佐剂甘草酸二铵和苦参素对甲型肝炎病毒抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响

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中国生物制品学杂志 2014年第4期27卷 463-466页

作者：王霄罗婷李虹娟段志青王陈芸王海漩胡云章胡凝珠中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所疫苗研究室云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南昆明650118 昆明医科大学生物所云南昆明650500

目的探讨两种佐剂甘草酸二铵和苦参素对甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响。方法将两种佐剂均按低(100μg)、中(500μg)、高(1 mg)3个剂量,分别与18 EU HAV抗原混合,免疫ICR小鼠,并设生理盐水对照组(... 详细信息

目的探讨两种佐剂甘草酸二铵和苦参素对甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响。方法将两种佐剂均按低(100μg)、中(500μg)、高(1 mg)3个剂量,分别与18 EU HAV抗原混合,免疫ICR小鼠,并设生理盐水对照组(生理盐水200μl)、HAV抗原对照组(HAV抗原18 EU)和铝佐剂对照组(HAV抗原18 EU+铝佐剂300μg),共9组,均经腹部皮下多点注射,共免疫1次。分别于免疫后第4、8、12、16周采血,分离血清,采用ELISA法检测抗-HAV IgG抗体水平。免疫后第16周处死小鼠,分别取甘草酸二铵和苦参素最佳剂量组及生理盐水对照组小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏组织,进行病理观察。结果免疫后第4、8、12、16周,除生理盐水对照组外,其他各组小鼠血清中均可检测到抗-HAV IgG抗体,且抗体水平除甘草酸二铵中剂量组和苦参素低剂量组外,均在第8周达峰值;甘草酸二铵各剂量组小鼠的血清抗体水平均明显高于HAV抗原对照组(P<0.05),其中甘草酸二铵低剂量组的抗体水平最高,且在第8周时超过铝佐剂对照组;苦参素各剂量组小鼠免疫后各周血清抗-HAV IgG抗体水平均显著高于HAV抗原对照组(P<0.05),其中苦参素低剂量组抗体水平最高,其抗体水平在第12周达峰值。实验期间,各组小鼠均未出现异常表现,各组织均未发现病理改变。结论甘草酸二铵和苦参素均能明显增强HAV抗原诱导小鼠体液免疫应答的水平,具有成为新型疫苗佐剂的研发价值。

关键词：甘草酸二铵苦参素佐剂甲型肝炎病毒抗原体液免疫

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唑来膦酸对甲型肝炎病毒抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响

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中国生物制品学杂志 2014年第3期27卷 339-341,347页

作者：李虹娟王霄罗婷段志青王海漩胡凝珠胡云章昆明医科大学云南昆明650500 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所疫苗研究室云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的探讨唑来膦酸(zoledronic acid,ZOL)对甲型肝炎病毒(hapatitis A virus,HAV)抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响。方法将不同剂量(10、20、40μg)的ZOL与HAV抗原(18 EU)混合,为ZOL不同剂量组,并设阴性对照组(生理盐水0.2 ml)、阳性对照... 详细信息

目的探讨唑来膦酸(zoledronic acid,ZOL)对甲型肝炎病毒(hapatitis A virus,HAV)抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响。方法将不同剂量(10、20、40μg)的ZOL与HAV抗原(18 EU)混合,为ZOL不同剂量组,并设阴性对照组(生理盐水0.2 ml)、阳性对照组(HAV抗原18 EU)、铝佐剂对照组[HAV抗原(18 EU)+Al(OH)3(100μg)],均经皮下注射ICR小鼠,免疫4、8、12、16周后,经小鼠尾静脉采血,分离血清,采用ELISA法检测小鼠血清中抗HAV抗原特异性IgG抗体水平。免疫16周后,取ZOL 40μg组及阴性对照组小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏组织进行病理切片观察。结果除阴性对照组外,各ZOL剂量组小鼠免疫4周后,均产生抗-HAV IgG,并随着时间的延长呈上升趋势,于第8周后达到峰值,此后逐渐下降;ZOL不同剂量组的抗体水平均明显高于阳性对照组,差异有统计学意义(P<0.05),免疫8周后,40μg组抗体水平最高,为1 079 EU;ZOL 40μg组免疫4和16周后的抗体水平高于铝佐剂对照组,但差异无统计学意义(P>0.05),ZOL的最佳剂量为40μg/只。ZOL 40μg组小鼠心、肝、脾、肺、肾组织均未观察到病变。结论 ZOL可明显增强HAV抗原诱导小鼠的体液免疫应答。

关键词：唑来膦酸佐剂体液免疫

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反向遗传学在轮状病毒研究中的应用

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中国病原生物学杂志 2014年第1期9卷 74-76,87页

作者：谢力李鸿钧孙茂盛昆明学院医学院分子医学研究中心云南昆明650214 中国医学科学院医学生物学研究所/北京协和医学院云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

针对病毒的反向遗传技术可以在基因水平上对病毒基因组进行各种修饰或改造,通过观察病毒的表型变化来判断这些基因操作的效果,从而达到研究病毒及其致病机制的目的。反向遗传技术在RNA病毒的研究中应用广泛,借助反向遗传技术调控病毒基... 详细信息

针对病毒的反向遗传技术可以在基因水平上对病毒基因组进行各种修饰或改造,通过观察病毒的表型变化来判断这些基因操作的效果,从而达到研究病毒及其致病机制的目的。反向遗传技术在RNA病毒的研究中应用广泛,借助反向遗传技术调控病毒基因表达、揭示病毒蛋白功能已较为普遍,尤其是通过基因操作人工"合成"病毒的感染性克隆一直是近年来反向遗传学研究的热点领域。目前轮状病毒的反向遗传操作仅限于借助辅助病毒实现部分基因节段的修饰和替换,尚没有拯救完整病毒的报道。本文就反向遗传技术在RNA病毒拯救,特别是轮状病毒研究中的应用与进展作一简要综述。

关键词：轮状病毒反向遗传病毒拯救感染性克隆综述

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