检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物制品学杂志 2014年第4期27卷 472-475页

作者：罗婷李虹娟王霄段志青李萍王海漩胡凝珠胡云章中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 昆明医科大学生物所云南昆明650500

目的探讨甲磺酸去铁胺（deferoxamine，DFO）佐剂对甲型肝炎病毒（hepatitis A virus antigen，HAV）抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响。方法将不同剂量的DFO（0.6、1、4、8mg）佐剂分别与HAV抗原18EU混合，免疫ICR小鼠，并设生理盐水对... 详细信息

目的探讨甲磺酸去铁胺（deferoxamine，DFO）佐剂对甲型肝炎病毒（hepatitis A virus antigen，HAV）抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响。方法将不同剂量的DFO（0.6、1、4、8mg）佐剂分别与HAV抗原18EU混合，免疫ICR小鼠，并设生理盐水对照组（生理盐水200 μl）、HAV抗原对照组（HAV 18 EU）、铝佐剂对照组（铝佐剂300μg＋HAY抗原18EU）和复合佐剂组（HAY抗原18EU＋DFO1mg＋铝佐剂150 μg），均经腹部皮下多点注射，0.2ml／只，共免疫1次。分别于免疫后第4、8、12、16周，采用间接ELISA法检测小鼠血清中抗-HAV IgG水平，并进行安全性试验。结果除生理盐水对照组外，其他各组小鼠血清在各时间点均能检测到抗.HAVIgG；除DFO 0.6mg组外，抗体滴度均在第8周达峰值；不同剂量DFO组的抗体水平均明显高于HAV抗原对照组，其中DFO4mg和8mg组在8～16周时抗体水平显著高于HAV抗原对照组，且差异有统计学意义（P〈0.05），但与铝佐剂对照组比较，差异无统计学意义（P〉0.05）；在8～16周时，同一时间DFO4mg、DFO8mg和复合佐剂组的抗体水平较高，并能维持较长时间，至第16周时仍能达到与铝佐剂对照组相当的水平。结论DFO佐剂能显著增强HAV抗原诱导小鼠的体液免疫应答，有望开发为一种可替代铝佐剂的新型佐剂。

关键词：甲磺酸去铁胺佐剂甲型肝炎病毒抗原体液免疫

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重组Ⅱ型登革病毒NS1的表达及其免疫原性的研究

引用

中国生物工程杂志 2014年第9期34卷 4-8页

作者：李多杨丽娟赵玉娇潘玥陈俊英付娟娟黄新伟邱丽娟孙强明北京协和医学院/中国医学科学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 昆明医科大学第二附属医院中心实验昆明650101

目的:表达制备重组Ⅱ型登革病毒非结构蛋白NS1,检测该重组表达蛋白的免疫原性,为检测试剂盒的研制提供基础。方法:根据Ⅱ型登革病毒NS1蛋白基因序列(GenBank登录号:NC_001474),对基因序列进行编码密码子优化后进行全基因合成,随后,经双... 详细信息

目的:表达制备重组Ⅱ型登革病毒非结构蛋白NS1,检测该重组表达蛋白的免疫原性,为检测试剂盒的研制提供基础。方法:根据Ⅱ型登革病毒NS1蛋白基因序列(GenBank登录号:NC_001474),对基因序列进行编码密码子优化后进行全基因合成,随后,经双酶切将目的片段克隆到表达载体pET28a上,通过IPTG诱导表达;表达产物经Western blot鉴定后,进一步进行蛋白纯化和透析复性,制备获得重组Ⅱ型登革病毒NS1蛋白。收获的NS1蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,通过间接酶联免疫学方法测定其效价,检测其免疫原性。结果:成功构建了Ⅱ型登革病毒NS1蛋白的表达载体。Western blot显示表达的重组蛋白能够被NS1单抗特异性的结合,纯化复性后的重组蛋白在小鼠体内表现出良好的免疫原性。结论:重组表达的NS1蛋白有良好的免疫原性,为以后的NS1单克隆抗体的制备和登革病毒检测试剂盒的研制提供了良好的基础。

关键词：登革病毒重组蛋白 NS1蛋白免疫原性 ELISA

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恒河猴婴猴离乳阶段行为观察及分析

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中国比较医学杂志 2014年第5期24卷 35-41页

作者：李艳艳陈丽雄乞素冬王俊斌杨凤梅赵远鲁帅尧禹文海和占龙中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的了解婴猴离乳期的行为特点及规律,初步探讨婴猴早期断奶后心理和行为的变化。方法采用随意取样和时间记录法对2012年出生的290只婴猴离乳后的行为进行6个月的观察记录。结果离乳后1个月内出现团抱、吸手指、吸同伴身体3种行为,团抱... 详细信息

目的了解婴猴离乳期的行为特点及规律,初步探讨婴猴早期断奶后心理和行为的变化。方法采用随意取样和时间记录法对2012年出生的290只婴猴离乳后的行为进行6个月的观察记录。结果离乳后1个月内出现团抱、吸手指、吸同伴身体3种行为,团抱、吸手指行为在第2、3月显著上升(P<0.05),吸同伴身体行为在第2月显著上升(P<0.05);第2个月,新增的踱步、吸生殖器的行为于第3个月显著上升(P<0.05),爬跨行为随时间的延长无明显变化;第3个月新增吸脚趾行为的比例未随时间的变化而发生改变。其中,雌性同笼发生团抱的比率显著高于异性及雄性同笼(P<0.05);雄性婴猴较雌性婴猴更易发生踱步行为;雄性婴猴吸手指及吸同伴身体的行为发生率显著低于雌性(P<0.05);吸脚趾行为雌、雄发生率无显著差异。结论通过观察婴猴离乳后的行为,观察到团抱、踱步、吸脚趾、吸手指、吸生殖器、吸同伴身体和爬跨7种行为,且各行为均随时间的变化而递增。团抱行为反映了恐惧心理;吮吸行为代表了生理需求及防卫心理;踱步行为初期是无目的,逐渐变成焦虑心理的体现。为研究人类婴幼儿早期断奶后心理和行为的变化,开展心理学、行为学等方面的评估实验提供研究思路和模型。

关键词：离乳婴猴行为恒河猴

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巨大病毒的发现及研究进展

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生命科学 2014年第8期26卷 782-789页

作者：李亚东寸韡中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

人们发现第一个病毒以来,病毒学科取得了迅猛的发展,人们对病毒大小的认知也已经基本成型。21世纪初,科学家发现了拟菌病毒,开启了巨大病毒的大门,此后人们又陆续发现了多种巨大病毒。这些病毒体积较大,基因复杂,已经超出了以往以大小... 详细信息

人们发现第一个病毒以来,病毒学科取得了迅猛的发展,人们对病毒大小的认知也已经基本成型。21世纪初,科学家发现了拟菌病毒,开启了巨大病毒的大门,此后人们又陆续发现了多种巨大病毒。这些病毒体积较大,基因复杂,已经超出了以往以大小区分病毒的标准,其体积和基因组大小甚至与很多原核和真核生物相当。此外,科学家们还发现了数种能够感染巨大病毒和其他核质大DNA病毒(nucleocytoplasmic large DNA virus,NCLDV)的病毒,将其命名为噬病毒体。这一系列新发现极大地触动了人们对病毒认识的知识体系,并导致了关于病毒起源与进化问题的讨论,这在病毒学史上具有重大的意义。

关键词：巨大病毒噬病毒体横向基因迁移拟菌病毒潘多拉病毒

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人叉头转录因子O亚型3基因重组表达质粒的构建及鉴定

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中国生物制品学杂志 2014年第3期27卷 316-319,324页

作者：段志青段云青雷焕贵胡凝珠罗婷李虹娟王霄胡云章中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所疫苗研究室云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 山西农业大学文理学院山西太谷030801 昆明医科大学生物所云南昆明650500

目的构建人叉头转录因子O亚型3(forkhead box class O3,FOXO3)基因重组表达质粒,并检测其在人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中的表达。方法利用3对引物从人cDNA中分别扩增大小为382、829和891 bp的3个目的... 详细信息

目的构建人叉头转录因子O亚型3(forkhead box class O3,FOXO3)基因重组表达质粒,并检测其在人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中的表达。方法利用3对引物从人cDNA中分别扩增大小为382、829和891 bp的3个目的片段,胶回收后进行拼接,获得hFOXO3的CDS片段,与pcDNA3.1(+)载体连接,构建重组表达质粒pcDNA3.1(+)-hFOXO3,转染人PBMC,采用Real-time PCR和Western blot分别检测hFOXO3基因mRNA水平及蛋白表达水平。结果重组表达质粒经双酶切及测序证实构建正确;转染PBMC后,pcDNA3.1(+)-hFOXO3组hFOXO3基因mRNA的水平分别为转染试剂对照组和pcDNA3.1(+)组的2 599.7和2 377.8倍,且差异均有统计学意义(P<0.001);pcDNA3.1(+)-hFOXO3组hFOXO3蛋白的表达水平分别为转染试剂对照组和pcDNA3.1(+)组的2和1.8倍,且差异均有统计学意义(P<0.01);而转染试剂对照组和pcDNA3.1(+)组间hFOXO3基因mRNA水平和蛋白的表达水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论成功构建了pcDNA3.1(+)-hFOXO3重组表达质粒,其在人PBMC中能进行hFOXO3基因mRNA的转录及蛋白的表达,为进一步研究hFOXO3的生物学功能及其作用机制奠定了基础。

关键词：人叉头转录因子O亚型3基因原核细胞基因表达

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PEG-6000纯化流感病毒鸡胚尿囊液的研究

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国际检验医学杂志 2014年第1期35卷 1-2,5页

作者：戴宗祥耿兴良周健马磊郭晨周竟贤高清霞张新文姜述德廖国阳中国医学科学院/北京协和医学院/医学生物学研究所/云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的探讨PEG沉淀法纯化鸡胚培养流感病毒尿囊液的工艺,对PEG-6000的浓度、沉淀时间、离心力进行优化,为流感病毒抗原和抗体制备提供了便捷的手段。方法向流感病毒鸡胚尿囊液添加PEG后进行高速离心收集沉淀,检测纯化病毒液效价、病毒形态... 详细信息

目的探讨PEG沉淀法纯化鸡胚培养流感病毒尿囊液的工艺,对PEG-6000的浓度、沉淀时间、离心力进行优化,为流感病毒抗原和抗体制备提供了便捷的手段。方法向流感病毒鸡胚尿囊液添加PEG后进行高速离心收集沉淀,检测纯化病毒液效价、病毒形态,以及卵清蛋白含量。结果 PEG浓度为4%,沉淀时间2h,离心力8 000g条件下,病毒能完全沉淀,杂蛋白卵清蛋白含量低,病毒颗粒完整,浓缩液中病毒血凝效价为1∶10 240。以纯化病毒免疫山羊3次后,血清抗体滴度为1∶1 024且无交叉。结论本研究初步证明优化后的PEG沉淀法对鸡胚培养流感病毒尿囊液中的病毒浓缩、纯化达到了很好的效果。

关键词：流感病毒实验室技术和方法抗原抗体复合物

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一株恒河猴克罗诺杆菌(阪崎肠杆菌)的分离鉴定及序列分析

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中国微生态学杂志 2014年第4期26卷 377-381页

作者：禹文海赵远鲁帅尧乞素冬沈冬李艳艳杨凤梅陈丽雄王俊斌和占龙中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的对恒河猴粪便中分离到的一株克罗诺杆菌进行鉴定,为实验恒河猴疾病检测、鉴别诊断和治疗提供参考依据。方法通过细菌培养特性、菌落形态观察及微生物鉴定系统(ID32 E)生化试验进行菌落鉴定;并进行抗生素敏感试验和小白鼠致病性试验;... 详细信息

目的对恒河猴粪便中分离到的一株克罗诺杆菌进行鉴定,为实验恒河猴疾病检测、鉴别诊断和治疗提供参考依据。方法通过细菌培养特性、菌落形态观察及微生物鉴定系统(ID32 E)生化试验进行菌落鉴定;并进行抗生素敏感试验和小白鼠致病性试验;用PCR方法扩增分离菌株的23S rRNA基因并测序,并将其与GenBank上参考菌株23S rRNA基因核苷酸序列进行同源性分析。结果经细菌形态学和生化鉴定该细菌为克罗诺杆菌,23S rRNA基因序列与GenBank中分离自婴幼儿配方奶粉中的阪崎克罗诺杆菌(CP004091)同源性为98%。药敏试验表明该菌对甲硝哒唑耐药,对其他15种抗生素敏感。致病性试验证明该分离菌株对小白鼠有强致病性。结论该株从恒河猴中分离到的克罗诺杆菌具有较强的致病性,对实验恒河猴饲养及相关研究人员有潜在的危害,因此,在恒河猴饲养及研究过程中应引起重视。头孢、庆大霉素和诺氟沙星等药物可作为治疗恒河猴克罗诺杆菌感染的临床用药。

关键词：恒河猴克罗诺杆菌(阪崎肠杆菌) 分离鉴定序列分析

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基于定型肠道病毒VP1基因的不同巢式或半巢式PCR评价

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中国病毒病杂志 2014年第4期4卷 267-271页

作者：朱艳菊潘玥陈俊英刘建生马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的评价三组基于肠道病毒定型的VP1基因的不同巢式或半巢式PCR方法,建立一种快速、灵敏的分子检测方法用于直接检测临床样品。方法从文献中选出目前常用三组引物,外加一对针对B群肠道病毒改良引物。对代表A群肠道病毒的CVA16毒株和代表... 详细信息

目的评价三组基于肠道病毒定型的VP1基因的不同巢式或半巢式PCR方法,建立一种快速、灵敏的分子检测方法用于直接检测临床样品。方法从文献中选出目前常用三组引物,外加一对针对B群肠道病毒改良引物。对代表A群肠道病毒的CVA16毒株和代表B群肠道病毒的CVB5和ECHO20三个毒株分别进行连续10倍稀释至10^-7,对稀释度为10^-3~10^-7的病毒株进行巢式或半巢式PCR。对20份手足口病（HFMD）患儿的粪便样品和16份病毒性脑炎的脑脊液样品进行巢式或半巢式PCR。结果所选三组引物均能检测2.50CCID50/ml CA16病毒;在CVB5和ECHO20检测中,Leitch等设计的引物灵敏度最高,即能够检测含1.12CCID50/ml和1.00CCID50/ml的病毒。在粪便临床样品检测中,Iturriza-Gómara等设计的引物阳性率最高,其中A群肠道病毒检测率为55.0%（11/20）,B群为10.0%（2/20）;而Leitch等设计的引物检测率则为A群为15.0%（3/20）,B群为45.0%（9/20）,其次为Nix等设计的引物检测率为45.0%（其中A群为30.0%,B群为15.0%）,改良的引物为20.0%（4/20）。但脑脊液样品仅有Leitch等设计引物检出,而检出率仅为6.25%（1/16）。结论 Iturriza-Gómara等设计的A群肠道病毒的引物和Leitch等设计的B群的引物组合检测临床样品最佳。

关键词：肠道病毒引物 PCR VP1基因

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儿童剂量不含硫柳汞的流感病毒裂解疫苗的制备及其稳定性研究

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国际检验医学杂志 2014年第9期35卷 1100-1102页

作者：戴宗祥高菁霞马磊郭晨周竞贤姜述德廖国阳中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所/云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的探讨儿童剂量不添加防腐剂的流感疫苗制备及其稳定性。方法将H1N1、H3N2、B型流感病毒接种于鸡胚尿囊液中制备儿童剂量的3批不含硫柳汞的流感病毒裂解疫苗,进行疫苗的稳定性试验。分别采用单向免疫扩散法（SRID）及酶联免疫吸附测定... 详细信息

目的探讨儿童剂量不添加防腐剂的流感疫苗制备及其稳定性。方法将H1N1、H3N2、B型流感病毒接种于鸡胚尿囊液中制备儿童剂量的3批不含硫柳汞的流感病毒裂解疫苗,进行疫苗的稳定性试验。分别采用单向免疫扩散法（SRID）及酶联免疫吸附测定（ELISA）检测血凝素及卵清蛋白浓度,并检测疫苗总蛋白浓度、外观、无菌试验、内毒素、游离甲醛及pH值等。结果疫苗pH值为7.2,总蛋白浓度为182～189mg/mL。2～8℃保存3、6、9、12、18个月及（37.0±2.0）℃放置7、14d,H1N1、H3N2及B血凝素浓度有所下降,但最终均保持在6.0μg/0.25mL以上。结论不添加硫柳汞的流感疫苗稳定性符合《中国药典》（2010版）标准,提高了疫苗的安全性。

关键词：流感疫苗硫柳汞血凝素类,病毒稳定性

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PDX-1腺病毒载体构建及其在脂肪间充质干细胞中的表达

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生物学杂志 2014年第1期31卷 5-10页

作者：王晓囡周艳严敏鲁帅尧李松孙茂盛李鸿钧中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南省重大传染病疫苗研发实验室昆明650118

研究通过重组腺病毒表达系统包装重组腺病毒Ad-PDX-1,通过重组腺病毒将Pancreatic duodenal homeobox1(PDX-1)导入大鼠脂肪间充质干细胞(rat adipose mesenchymal stem cells,rASCs)中,评价PDX-1在rASCs中的表达情况,为进一步探讨ASCs-PDX-1在体内修复糖尿病的潜能提供了实验基础。研究通过构建pAdEasy-CMV-PDX-1腺病毒质粒,在重组腺病毒表达系统PadEasy-1中成功包装出重组腺病毒Ad-PDX-1。培养及鉴定大鼠脂肪间充质干细胞,将携带PDX-1的重组腺病毒感染rASCs,通过RT-PCR、免疫荧光及免疫印迹(Western blotting)检测PDX-1在rASCs中的表达及产物定位。结果显示,构建的重组腺病毒包装成功,具有较高滴度,并能成功感染大鼠脂肪间充质干细胞。PDX-1蛋白定位于细胞核,并可稳定表达,为后续将大鼠脂肪间充质干细胞向胰岛β细胞诱导分化奠定了基础,为糖尿病的干细胞治疗提供依据。

关键词：胰腺十二指肠同源框蛋白1 脂肪间充质干细胞腺病毒载体

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