检索结果-内蒙古大学图书馆

贵阳医学院学报 2014年第1期39卷 35-38页

作者：张淑琼张华汪亚玲李晓非王丽萍刘红伟沈云松孙明波姚宇峰史荔昆明市第三人民医院云南昆明650041 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 云南省第一人民医院云南昆明650032

目的:研究人类白细胞抗原G(HLA-G)基因14 bp插入缺失多态与丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)慢性感染的相关性。方法:选取HCV慢性感染者243例(感染组),无血缘关系的汉族健康对照448例(HCV对照组)。采用PCR序列特异引物法检测HLA-G... 详细信息

目的:研究人类白细胞抗原G(HLA-G)基因14 bp插入缺失多态与丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)慢性感染的相关性。方法:选取HCV慢性感染者243例(感染组),无血缘关系的汉族健康对照448例(HCV对照组)。采用PCR序列特异引物法检测HLA-G基因第8外显子3'UTR的1个14 bp插入缺失多态,并比较其在HCV慢性感染人群和健康人群中的分布情况。结果:HLA-G基因14 bp插入等位基因频率在对照组中为0.335,在HCV感染组中为0.348;14 bp插入纯合子基因型频率在对照组中为0.112,在HCV感染组中为0.107。无论是基因型频率还是等位基因频率,在HCV感染组和对照组中均无统计学差异。结论:HLA-G基因14 bp插入缺失多态性与汉族人群中HCV感染的发生无遗传易感染性关联。

关键词：肝炎,丙型,慢性感染白细胞抗原基因 14 bp插入缺失多态关联研究

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携带hFGF21基因慢病毒的制备及鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第12期29卷 1258-1261,1266页

作者：鲁帅尧严敏王晓囡和占龙周艳赵远禹文海李鸿钧中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的包装人成纤维细胞生长因子21(hFGF21)慢病毒颗粒、确定包装细胞人胚肾293T(HEK293T)细胞的形态特征以及对目的基因的转导能力。方法对慢病毒重组质粒Lv105-hFGF21进行测序鉴定,在HEK293T细胞中包装为慢病毒颗粒并浓缩,经反转录PCR(R... 详细信息

目的包装人成纤维细胞生长因子21(hFGF21)慢病毒颗粒、确定包装细胞人胚肾293T(HEK293T)细胞的形态特征以及对目的基因的转导能力。方法对慢病毒重组质粒Lv105-hFGF21进行测序鉴定,在HEK293T细胞中包装为慢病毒颗粒并浓缩,经反转录PCR(RT-PCR)和电镜检测鉴定后,利用实时定量PCR测定病毒滴度。然后感染Vero细胞,经RT-PCR检测hFGF21 mRNA的表达、免疫荧光检测hFGF21蛋白的表达。结果 RT-PCR结果表明重组慢病毒能转录hFGF21 mRNA,电镜检测结果可以看到典型的慢病毒颗粒形态特征,其直径在40～70 nm;重组病毒原液的滴度是3.68×108VG/mL、浓缩液的滴度是1.25×109VG/mL;重组慢病毒感染Vero细胞后经RT-PCR检测到细胞中有hFGF21mRNA表达,免疫荧光测到Vero细胞中有hFGF21蛋白表达。结论成功包装了hFGF21慢病毒颗粒并在靶细胞中获得表达。

关键词：人成纤维细胞生长因子-21 慢病毒颗粒细胞表达

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树鼩模型在人类病毒性疾病研究中的应用进展

树鼩模型在人类病毒性疾病研究中的应用进展

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2014第十一届中国实验动物科学年会

作者：殷安国匡德宣李晓飞张媛孙晓梅夏雪山代解杰昆明理工大学生命科学与技术学院昆明650500 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 昆明理工大学生命科学与技术学院昆明650500

由于树鼩在进化上接近于灵长类动物，在生理、生化及解剖学等生物学特性方面与人类有着相似之处，树鼩得到越来越多的关注，研究人员运用与其他动物相比具有多种优势的树鼩建立了一系列的疾病模型，如病毒类疾病、神经系统、肿瘤等，本... 详细信息

由于树鼩在进化上接近于灵长类动物，在生理、生化及解剖学等生物学特性方面与人类有着相似之处，树鼩得到越来越多的关注，研究人员运用与其他动物相比具有多种优势的树鼩建立了一系列的疾病模型，如病毒类疾病、神经系统、肿瘤等，本文着重就树鼩在人类病毒疾病方面的研究进展进行概述。

关键词：树鼩病毒模型动物

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2010年云南省1株ECHO-9病毒全基因序列的遗传特性分析

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病毒学报 2013年第2期29卷 132-136页

作者：朱艳菊潘玥陈俊英刘雅灵施海晶廖宏玮孙强明马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

为了解云南省手足口病患者标本中分离到的一株ECHO-9病毒基因组特征,对2010年云南省ECHO-9病毒分离株MSH-KM812-2010全基因组序列测序,并与GenBank中其它ECHO-9病毒株基因组序列比对和分析。MSH-KM812-2010基因组长为7 424bp,编码2 203... 详细信息

为了解云南省手足口病患者标本中分离到的一株ECHO-9病毒基因组特征,对2010年云南省ECHO-9病毒分离株MSH-KM812-2010全基因组序列测序,并与GenBank中其它ECHO-9病毒株基因组序列比对和分析。MSH-KM812-2010基因组长为7 424bp,编码2 203个氨基酸,其结构基因区与其它ECHO-9病毒核苷酸和氨基酸的同源性高于其它型别肠道病毒;而在非结构区,与其它肠道病毒血清型的同源性高于ECHO-9病毒株。VP1系统进化分析显示ECHO-9病毒株可形成A、B和C三个进化分支,MSH-KM812-2010株以及其它中国分离株属于C簇。三个分支之间核苷酸序列的差异大于15.0%可将ECHO-9病毒分为三个基因型。通过重组检测软件3(RDP3)和基本局部比对搜索工具(BLAST)比对分析,发现在非结构区可能存在重组。本文首次对我国分离的ECHO-9病毒全基因组序列的测定和分析,对了解ECHO-9病毒遗传特性具有重要意义。

关键词： ECHO-9病毒全基因组遗传特性

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Ⅲ型登革病毒D9964株在人胚肺二倍体细胞KMB17上适应株选育纯化及其增殖动力学研究

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病毒学报 2013年第3期29卷 287-292页

作者：赵玉娇潘玥阎玲梅岳耀斐杨丽娟陈俊英马绍辉施海晶孙强明中国医学科学院、北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

选育出Ⅲ型登革病毒中国株在人胚肺二倍体细胞KMB17上的适应株并对其生物学特性和增殖动力学进行研究,为研究登革病毒减毒活疫苗奠定基础。Ⅲ型登革病毒中国株D9964经RT-PCR鉴定型别正确后,进行毒种扩增和滴度测定;以4.0MOI接种KMB17细... 详细信息

选育出Ⅲ型登革病毒中国株在人胚肺二倍体细胞KMB17上的适应株并对其生物学特性和增殖动力学进行研究,为研究登革病毒减毒活疫苗奠定基础。Ⅲ型登革病毒中国株D9964经RT-PCR鉴定型别正确后,进行毒种扩增和滴度测定;以4.0MOI接种KMB17细胞,反复传代直至病毒能在细胞中适应和增殖;连续传10代,选育出KMB17细胞适应株,经三轮噬斑纯化筛选适应株,微量滴定法检测10代病毒培养液的感染性滴度;免疫荧光法检测纯化病毒株的抗原性;将病毒纯化株接种KMB17细胞,取第3～7d细胞提取RNA,以Real-time PCR检测病毒适应株在细胞中的增殖动态。结果显示,经适应性培养后Ⅲ型登革病毒中国株D9964能在KMB17细胞中稳定增殖,经噬斑纯化获得了高纯度的细胞适应株,病毒保持了原始毒株良好的抗原性;增殖动力学研究显示第5～6d为病毒在细胞内的增殖高峰期。

关键词：登革病毒人胚肺二倍体细胞适应性增殖动力学

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重组人LIF融合蛋白表达纯化及其活性鉴定

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中国生物工程杂志 2013年第5期33卷 50-55页

作者：孙静王斌段志青胡凝珠李建芳李彦涵胡云章中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的:原核表达重组hLIF融合蛋白并进行诱导表达、纯化及活性鉴定。方法:将hLIF基因克隆至pThioHisA载体,构建融合表达载体pThioHisA-hLIF,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经亲和层析后,Western blot检测目的蛋白的特异性... 详细信息

目的:原核表达重组hLIF融合蛋白并进行诱导表达、纯化及活性鉴定。方法:将hLIF基因克隆至pThioHisA载体,构建融合表达载体pThioHisA-hLIF,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经亲和层析后,Western blot检测目的蛋白的特异性。用小鼠胚胎干细胞脱饲养层培养对纯化后的重组hLIF融合蛋白进行生物活性的鉴定。结果:降低诱导温度和延长诱导时间能增加hLIF融合蛋白的可溶性表达,纯化后的重组蛋白纯度大于95%,Western blot检测显示了良好的特异性。在脱饲养层细胞培养条件下,添加纯化的hLIF融合蛋白能够有效的维持小鼠胚胎干细胞的未分化状态。结论:重组hLIF融合蛋白可在大肠杆菌中高效表达,具有良好的特异性,为干细胞研究及hLIF蛋白的其他功能研究奠定了基础。

关键词：重组人LIF融合蛋白原核表达纯化小鼠胚胎干细胞生物活性鉴定

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铝佐剂和免疫程序对Sabin IPV免疫原性影响的研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2013年第2期27卷 102-104页

作者：王芳张名谢炳锋曹晗童少勇王俊荣俞晓平汤洋杨景然孙明波中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大疾病传染病疫苗研发重点实验室昆明550118

目的研究铝佐剂和免疫程序对不同配比的SabinIPV免疫原性的影响。方法用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒原液制备四批SabinIPV，分别为中剂量无佐剂组、中剂量铝佐剂组、低剂量无佐剂组、低剂量铝佐剂组，采用0、1、2月和0、2、4月两种免疫... 详细信息

目的研究铝佐剂和免疫程序对不同配比的SabinIPV免疫原性的影响。方法用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒原液制备四批SabinIPV，分别为中剂量无佐剂组、中剂量铝佐剂组、低剂量无佐剂组、低剂量铝佐剂组，采用0、1、2月和0、2、4月两种免疫程序对大鼠进行3针基础免疫，每针基础免疫一个月后采血，并检测免疫后血清中3个型别的中和抗体水平。结果经过3针基础免疫后，各组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中和抗体几何平均滴度均显著提高，阳转率均达到100％。对不同组别间两种免疫程序比较无显著差异，但相同条件下，0、2、4月免疫程序可诱导产生更高的抗体水平。对相同免疫程序下不同组别进行比对，添加铝佐剂组与无佐剂组相比可以诱导更高的抗体水平。结论铝佐剂和免疫程序可提高SabinIPV免疫原性。

关键词：脊髓灰质炎病毒疫苗灭活氢氧化铝佐剂,免疫免疫接种程序表中和试验

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尿苷二磷酸与尿苷三磷酸两种佐剂对HAV抗原及HBsAg诱导小鼠体液免疫应答的影响

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中国生物制品学杂志 2013年第5期26卷 634-638页

作者：王越王丽萍王海漩胡凝珠胡云章中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所疫苗研究室云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的探讨尿苷二磷酸(Uridine diphosphate,UDP)与尿苷三磷酸(Uridine triphosphate,UTP)两种佐剂对HAV抗原和HBsAg诱导小鼠体液免疫应答的影响。方法分别在HBsAg(1μg)和HAV抗原(18 EU)中加入不同浓度的UDP和UTP(HBsAg组:UDP和UTP均500μg及1、2、5、10 mg,HAV抗原组:UDP和UTP均500μg及1、2 mg),均经腹部皮下多点注射免疫ICR小鼠(HBsAg组:2针,间隔2周,0.1 ml/只;HAV抗原组:单针免疫,0.2 ml/只),并设空白对照组(生理盐水100μl)、抗原组对照组(HBsAg 1μg;HAV抗原18 EU)、铝佐剂组对照组(铝佐剂300μg)、UDP+铝佐剂复合组(HBsAg 1μg+铝佐剂300μg+UDP 2 mg;HAV 18 EU+铝佐剂300μg+UDP 2 mg)和UTP+铝佐剂复合组(HBsAg 1μg+铝佐剂300μg+UTP 2 mg;HAV 18 EU+铝佐剂300μg+UTP 2 mg),分别于末次免疫后(HBsAg组:第4、8、12和16周;HAV抗原组:第4、8、12周)采血,分离血清,ELISA法检测小鼠血清中抗-HBsAg IgG和抗-HAV IgG水平。免疫18周后,分别取HBsAg组中UDP和UTP最佳浓度组及空白对照组小鼠心脏、肝脏、脾脏、肾脏及肺组织进行病理观察。结果除空白对照组小鼠血清检测不到抗-HBsAg IgG外,其余各组小鼠血清抗-HBsAg IgG及抗-HAV IgG水平均在第8周达到峰值,以后逐渐下降。末次免疫后,UDP及UTP各组抗-HBsAg IgG及抗-HAV IgG水平均高于抗原对照组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。HBsAg组UDP+铝佐剂复合组产生的IgG水平明显高于抗原对照组、铝佐剂对照组及UDP和UTP各浓度组(P<0.05);HAV抗原组UTP+铝佐剂复合组产生的IgG水平明显高于抗原对照组、铝佐剂对照组及UDP和UTP各浓度组(P<0.05)。在两种抗原中,UDP和UTP的最佳浓度均为2 mg/只。在设置的浓度范围内,UDP和UTP佐剂均未观察到毒性反应。结论UDP和UTP均能明显增强HBsAg及HAV抗原诱导小鼠的体液免疫应答。

关键词：尿苷二磷酸尿苷三磷酸佐剂体液免疫

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柯萨奇病毒A组16型免疫原性及毒株间交叉保护能力的比较分析

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中国生物制品学杂志 2013年第10期26卷 1366-1370,1375页

作者：谢振锋普晶黄泓泰刘正玲董承红刘龙丁王丽春中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所病毒免疫室云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的对柯萨奇病毒A组16型(Coxsackie virus groups A type 16,CoxA16)4个毒株进行免疫原性及毒株间交叉保护能力的比较分析。方法提取CoxA16 G20、KM/M08、MY08和KM208病毒RNA,PCR扩增VP1基因,并进行测序;利用MEGA4.0软件中Bootstrap Test of phylogeny→Neighbor-joining方法对13株CoxA16基于VP1基因全序列构建CoxA16种系进化树并进行基因分型,使用DNAMAN软件对4个毒株VP1核苷酸序列的同源性及其蛋白质氨基酸序列差异位点进行分析。分别用纯化灭活后的4株CoxA16免疫BALB/c小鼠,于初次免疫和二次免疫后的第14、28天采血,分离血清,Western blot法检测G20毒株免疫的小鼠血清中抗体的的特异性;微量中和试验法检测血清中和抗体效价并进行交叉中和试验。结果 G20、MY08和KM208毒株属于B2b基因型,而KM/M08毒株属于B2a基因型;4个毒株间VP1基因核苷酸序列的同源性为91.8%～99.0%;MY08与其他3个毒株相比,在VP1的第102位(N→D)、241位(E→K)和248位(T→A)上存在3个差异氨基酸位点。G20毒株的抗血清可特异识别CoxA16的VP1和VP2蛋白,具有良好的免疫原性;各实验组二次免疫后第28天中和抗体效价均高于其他检测时期,其中MY08组中和抗体效价明显低于其他3组,差异有统计学意义(P﹤0.01);G20、KM/M08、和KM208毒株间的交叉保护能力优于MY08毒株对G20、KM/M08和KM208毒株的交叉保护能力,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 4株CoxA16灭活后均能诱导机体产生相应的中和抗体和交叉保护能力,其中G20、KM/M08和KM208毒株在灭活后,显示了更好的免疫原性和毒株间交叉保护能力。

关键词：柯萨奇病毒免疫原性交叉保护序列分析

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腮腺炎病毒临床口漱液样本的一步法实时荧光定量PCR检测

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中国生物制品学杂志 2013年第6期26卷 861-865页

作者：施海晶王晶晶陈俊英陈巍潘玥赵钢孙强明中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的建立腮腺炎病毒(mumps virus,MuV)临床口漱液样本一步法荧光定量PCR检测方法,为腮腺炎的临床诊断及免疫防控提供依据。方法对101份采集自中国南部3个省、自治区(云南、四川、广西)的临床疑似腮腺炎患者口漱液样本,分别采用细胞培养-... 详细信息

目的建立腮腺炎病毒(mumps virus,MuV)临床口漱液样本一步法荧光定量PCR检测方法,为腮腺炎的临床诊断及免疫防控提供依据。方法对101份采集自中国南部3个省、自治区(云南、四川、广西)的临床疑似腮腺炎患者口漱液样本,分别采用细胞培养-MuV特异的巢式PCR法及TaqMan探针Real-time PCR法进行检测,比较两种方法检测MuV的灵敏性。结果细胞培养-MuV特异的巢式PCR法共检出31份MuV阳性样本,系统进化分析表明,该31株MuV均属于F基因亚型;TaqMan探针Real-time PCR法共检出41份MuV阳性样本,其中包含了细胞培养-MuV特异的巢式PCR法检出的31份阳性样本,TaqMan探针Real-time RT-PCR法对MuV的检出率(40.59%)高于传统细胞培养-巢式PCR法的检出率(30.69%)。结论 TaqMan探针Real-time PCR法的灵敏性、特异性和简便性均优于传统的细胞培养-MuV特异的巢式PCR法,可应用于腮腺炎的临床诊断及免疫防控。

关键词：腮腺炎病毒口漱液实时聚合酶链反应

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