检索结果-内蒙古大学图书馆

生物学杂志 2023年第6期40卷 7-11页

作者：施鹏林晓晨周艳李娇春宋泽鑫鲁辰星谭银珍胡晓青陈蓉李鸿钧中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

人诺如病毒(norovirus,NoV)在体外难以培养,不宜采用经典疫苗的方式进行疫苗研发,以腺病毒为载体的重组腺病毒疫苗为诺如病毒疫苗的研发提供另一种路线选择。构建表达人GⅡ.4型诺如病毒VP1蛋白的重组腺病毒为该技术路线的疫苗研发奠定... 详细信息

人诺如病毒(norovirus,NoV)在体外难以培养,不宜采用经典疫苗的方式进行疫苗研发,以腺病毒为载体的重组腺病毒疫苗为诺如病毒疫苗的研发提供另一种路线选择。构建表达人GⅡ.4型诺如病毒VP1蛋白的重组腺病毒为该技术路线的疫苗研发奠定基础。首先使用PCR扩增诺如病毒VP1片段,通过酶切、连接、转化,克隆含VP1基因的pshuttle-CMV-VP1穿梭质粒,再与腺病毒骨架质粒进行同源重组,重组质粒鉴定正确后使用PacⅠ酶切线性化,转染至HEK293细胞进行病毒包装,包装成复制缺陷型的完整腺病毒颗粒命名为rAd-VP1,病毒传代后进行滴度测定,并感染HEK293细胞,通过Western Blot方法鉴定重组腺病毒外源蛋白VP1的表达情况。结果表明,包装传代后的重组腺病毒浓缩后滴度达到CCID_(50)=5×10^(9)/mL,并且能在HEK293细胞成功表达VP1蛋白。研究为rAd-VP1的动物免疫评价和诺如病毒的疫苗研发提供基础。

关键词：诺如病毒主要结构蛋白VP1 腺病毒载体同源重组病毒包装

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一株柯萨奇病毒A组4型云南株的全基因组分析

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中国感染控制杂志 2024年第9期23卷 1061-1069页

作者：陈俊薇冯昌增楚昭阳刘煜菡张名李丽马绍辉云南大学生命科学学院云南昆明650504 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 昆明市妇幼保健院检验科云南昆明650031

目的了解中国云南2022年分离到的一株柯萨奇病毒A组4型(Coxsackievirus A4,CVA4)病毒株的全基因组序列特征,探讨CVA4系统发育特征。方法对CVA4分离株194R3/YN/CHN/2022进行全基因组序列扩增测序,并应用Mega 7.0、Geneious 9.1.4及Simplo... 详细信息

目的了解中国云南2022年分离到的一株柯萨奇病毒A组4型(Coxsackievirus A4,CVA4)病毒株的全基因组序列特征,探讨CVA4系统发育特征。方法对CVA4分离株194R3/YN/CHN/2022进行全基因组序列扩增测序,并应用Mega 7.0、Geneious 9.1.4及Simplot 3.5.1等软件拼接比对,构建CVA4分离株系统进化树,分析其全基因组序列特征。结果194R3/YN/CHN/2022分离株为CVA4,属于C2基因亚型,与我国近年的优势基因亚型一致。重组分析显示,在P2、P3非结构编码区,CVA4病毒分离株可能与EVA114原型株V13-0285、CVA16原型株G-10、CVA14原型株G-14发生过重组。结论云南分离的194R3/YN/CHN/2022属于CVA4中国流行的C2基因亚型,但发生了一定变异。

关键词：柯萨奇病毒A组4型全基因组序列系统进化分析 194R3/YN/CHN/2022

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树突状细胞疫苗的研究进展

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中国生物制品学杂志 2022年第10期35卷 1242-1248页

作者：李兴航(综述) 李琦涵(审校) 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

树突状细胞(dendritic cell,DC)是一类强大的抗原提呈细胞,也是适应性免疫应答的关键步骤,对于诱导T、B细胞介导的细胞免疫和体液免疫是必需的。由于其特殊的免疫学功能,在DC疫苗的研究中备受关注。目前已有一种基于DC的疫苗Sipuleucel-... 详细信息

树突状细胞(dendritic cell,DC)是一类强大的抗原提呈细胞,也是适应性免疫应答的关键步骤,对于诱导T、B细胞介导的细胞免疫和体液免疫是必需的。由于其特殊的免疫学功能,在DC疫苗的研究中备受关注。目前已有一种基于DC的疫苗Sipuleucel-T获批上市,还有多项DC疫苗正在临床试验阶段。本文对DC的生物学特征和功能、DC疫苗的类型以及DC疫苗面临的挑战和前景作一综述。

关键词：树突状细胞疫苗肿瘤预防治疗

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2019年云南省昆明市柯萨奇病毒A组16型毒株的分离鉴定及其VP1基因遗传特征分析

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中国生物制品学杂志 2024年第3期37卷 292-297页

作者：刘煜菡张名郭伟冯昌增许丹菡马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的对2019年云南省手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)患者粪便中分离获得的柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CVA16)毒株的全VP1基因遗传特征进行分析。方法使用人胚肺二倍体KMB-17细胞和非洲绿猴肾Vero细胞分离病毒,... 详细信息

目的对2019年云南省手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)患者粪便中分离获得的柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CVA16)毒株的全VP1基因遗传特征进行分析。方法使用人胚肺二倍体KMB-17细胞和非洲绿猴肾Vero细胞分离病毒,设计针对CVA16全VP1基因序列引物,采用RT-PCR扩增目的基因片段并测序;利用MEGA 7.0和Geneious 9.0.2等软件对全VP1序列进行分析。结果共分离获得26株CVA16毒株,其中有8株KMB-17分离株和18株Vero分离株。随机选取20株CVA16分离株进行分析,发现3株B1a和17株B1b基因亚型;其中17株CVA16 B1b分离株的核苷酸和氨基酸同源性分别为93.8%~100%和98.3%~100%,与国内其他分离株的核苷酸和氨基酸同源性为91.1%~99.2%和97.3%~99.0%;3株B1a分离株的核苷酸和氨基酸同源性为98.0%~98.1%和99.3%,与国内其他B1a分离株的核苷酸和氨基酸同源性为88.7%~98.7%和98.3%~99.7%;17株B1b分离株与其他3株B1a的核苷酸和氨基酸同源性为87.4%~88.4%和97.3%~98.7%。结论2019年昆明地区流行的CVA16属于B1a和B1b基因亚型,以B1b为主,且均为中国内地流行株。

关键词：柯萨奇病毒A组16型 VP1序列分离鉴定进化分析遗传特性

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1株柯萨奇病毒A组10型毒株在KMB17细胞上的遗传稳定性分析

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中国生物制品学杂志 2022年第7期35卷 813-817页

作者：许丹菡张捷丛山日张名冯昌增黄小琴孙浩杨昭庆马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的分析柯萨奇病毒A组10型毒株在人胚肺二倍体细胞(KMB17)上增殖的遗传稳定性。方法将V6-19/XY/CHN/2017毒株适应于KMB17细胞,并连续传代培养至15代。分别提取适应前及适应后第5、10、15代病毒RNA,分段对全基因组序列进行RT-PCR扩增、... 详细信息

目的分析柯萨奇病毒A组10型毒株在人胚肺二倍体细胞(KMB17)上增殖的遗传稳定性。方法将V6-19/XY/CHN/2017毒株适应于KMB17细胞,并连续传代培养至15代。分别提取适应前及适应后第5、10、15代病毒RNA,分段对全基因组序列进行RT-PCR扩增、测序及拼接,利用Maga 7.0、Geneious 6.1.4等软件进行系统进化及同源性分析。结果命名该KMB17细胞适应株为K6-19/XY/CHN/2017,各子代病毒感染性滴度为7.25~7.75 lgCCID_(50)/mL。适应前后4个子代病毒的全基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别为99.99%~100%和99.95%~100%。适应前与适应后第5、10代毒株均无核苷酸和氨基酸序列突变,第15代毒株VP4区域发生1个核苷酸突变(VP4172 A→G)及1个氨基酸突变(VP458 Ile→Val)。结论CV-A10能较好地适应KMB17细胞,K6-19/XY/CHN/2017在KMB17细胞上适应后可保持较高的病毒滴度和遗传稳定性,为后续疫苗研发奠定了实验基础。

关键词：柯萨奇病毒A组10型 KMB17细胞分子特征遗传稳定性

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F基因型腮腺炎减毒活疫苗(人二倍体细胞)SP-A株工作种子批的建立与检定

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中国新药杂志 2021年第15期30卷 1381-1385页

作者：邱恒田文志王微郑俊杰任芳芳段颖融李琦涵王晶晶中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

目的:以人二倍体细胞KMB-17株为细胞培养基质建立F基因型腮腺炎减毒活疫苗SP-A株工作种子批。方法:在细胞工厂中以血清浓度为5%的MEM培养基培养KMB-17细胞,待细胞生长至单层后,分别按照0.020,0.050和0.100感染复数(multiplicity of infe... 详细信息

目的:以人二倍体细胞KMB-17株为细胞培养基质建立F基因型腮腺炎减毒活疫苗SP-A株工作种子批。方法:在细胞工厂中以血清浓度为5%的MEM培养基培养KMB-17细胞,待细胞生长至单层后,分别按照0.020,0.050和0.100感染复数(multiplicity of infection, MOI)的比例接种病毒,逐日检测病毒滴度,绘制病毒增殖动力曲线以确定最适MOI和最佳收获时间。制备工作种子批,测定其病毒滴度及热稳定性,同时进行鉴别实验、无菌检查、分枝杆菌检查、支原体检查、病毒外源因子检查和小疏水蛋白(small hydrophobic protein, SH)核酸序列检查。利用该工作种子制备3批病毒收获液和疫苗原液并进行相关质量检定。结果:根据病毒增殖动力曲线,确定工作种子批的最适MOI为0.020,接种后d 7为病毒最佳收获时间,按此条件制备了工作种子批并完成检定,结果符合《中华人民共和国药典》2020年版三部腮腺炎减毒活疫苗毒种制造及检定质量要求。利用该工作种子批制备了3批病毒收获液和疫苗原液,经检定均符合《中华人民共和国药典》2020年版三部病毒收获液和原液的制造及检定规程要求。结论:建立F基因型腮腺炎减毒活疫苗SF-A株工作种子批,为后续F基因型腮腺炎减毒活疫苗的产业化提供了支持。

关键词：腮腺炎疫苗工作种子生产工艺检定

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mRNA疫苗及其作用机制的研究进展

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中国生物制品学杂志 2021年第6期34卷 740-744页

作者：孟子延马丹婧(综述) 高雪李琦涵(审校) 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目前,重症急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)引起的新型冠状病毒病(Corona Virus Disease 2019,COVID-19)仍在全球迅速蔓延,给人类生活带来了巨大的健康隐患和经济负担,接种疫苗是预防和控制该病毒传播的重要途径。mRNA疫苗是将含有编码抗原蛋白的mRNA导入人体,直接进行翻译,形成相应的抗原蛋白,从而诱导机体产生特异性免疫应答,达到预防免疫的作用。mRNA疫苗是继灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗和病毒载体疫苗后的第三代疫苗,具有针对病原体变异反应速度快、生产工艺简单、易规模化扩大等特点。本文就mRNA疫苗的免疫学特性、分子设计、递送系统、安全性的研究进展及其相应机制作一综述。

关键词： mRNA疫苗重症急性呼吸综合征冠状病毒2 新型冠状病毒病安全性

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绿色荧光蛋白标记的BHK-21细胞源性外泌体的构建及鉴定

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中国生物制品学杂志 2022年第11期35卷 1331-1337页

作者：张娟鲁明朱海莲何丽存顾冉李代英陈俊英潘玥孙强明昆明医科大学云南昆明650500 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 云南省虫媒传染病防控研究重点实验室云南普洱665000

目的构建稳定表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)和外泌体标志蛋白CD63的BHK-21细胞,获得GFP标记的BHK-21源性的外泌体。方法将慢病毒表达质粒pCT-CD63-GFP与辅助质粒pVS-VG(Env)和pSPAX(structure)共转染293T细胞,包装重组慢病毒,测定病毒滴度后感染BHK-21细胞,72 h后用嘌呤霉素筛选稳定表达GFP的细胞。Western blot检测BHK-21细胞中CD63的表达量。取其无外泌体血清培养36 h的稳定转染株细胞上清,获得提取物,经Western blot、透射电镜及粒径分析进行鉴定。将提纯的外泌体与受体细胞BHK-21共培养6 h后,观察外泌体在细胞中的摄取情况。通过Transwell试验检测登革病毒(Dengue virus,DENV)感染后细胞外泌体分泌量的变化。结果筛选出可稳定表达GFP的BHK-21细胞株,并从细胞上清中提取了外泌体。外泌体存在特异性标志蛋白CD63和CD81;透射电镜下,外泌体呈椭圆形,具有双凹圆盘状膜结构,直径在30~200 nm之间;纳米颗粒示踪分析显示,外泌体在110.2 nm处有峰值;荧光显微镜下可见提纯的外泌体发出强烈的绿色荧光信号。提纯的外泌体与受体细胞BHK-21共培养6 h后,可在BHK-21细胞质内见到大量绿色荧光颗粒。Transwell试验发现,DENV感染后,可促进细胞释放外泌体。结论成功构建了携带GFP标记的BHK-21源性外泌体,为研究外泌体在病毒感染细胞中的信号传递提供了工具。

关键词：外泌体乳仓鼠肾细胞绿色荧光蛋白登革病毒

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2018年云南省手足口病与疱疹性咽峡炎柯萨奇病毒A6型全基因组比较分析

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中国生物制品学杂志 2023年第9期36卷 1072-1079页

作者：唐姣连张晓琳张志磊南巍巍薛丽蒋海燕张桢孙强明蒋鸿超昆明市儿童医院(昆明医科大学附属儿童医院) 云南昆明650228 大理大学临床医学院云南大理671000 昆明市儿童医院儿科研究所/云南省儿童重大疾病重点实验室云南昆明650228 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的分析2018年云南省17株引起手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)与疱疹性咽峡炎(herpangina,HA)的柯萨奇病毒A6型(Coxsackievirus A6,CVA6)全基因组特征,了解不同致病CVA6之间的基因差异。方法随机抽取昆明市儿童医院2018年... 详细信息

目的分析2018年云南省17株引起手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)与疱疹性咽峡炎(herpangina,HA)的柯萨奇病毒A6型(Coxsackievirus A6,CVA6)全基因组特征,了解不同致病CVA6之间的基因差异。方法随机抽取昆明市儿童医院2018年临床诊断为HFMD与HA的1909份粪便样本,使用肠道病毒A组通用引物进行检测并筛选CVA6阳性样本。用CVA6全基因组引物进行序列扩增,经BioEdit软件拼接后获得CVA6全基因序列,应用BioEdit、MEGA 7.0、Simplot、Heml 1.0及Phyre2等软件分析CVA6全基因组特征。结果筛选出CVA6阳性样本929份,获得CVA6全基因序列17株(其中9株临床诊断为HFMD,8株临床诊断为HA);17株CVA6在全基因系统进化树上均处于Ⅳ型分支;HA、HFMD代表株未发生明显重组,但在非结构蛋白3D区发生变异;HFMD、HA代表株在VP1的S597T、Q705L和Q663L位点存在差异,在线预测分析发现其VP1二级结构与CVA6原型株一致,未发生改变。结论引起HFMD与HA的17株CVA6之间具有较高的基因组同源性,同时也存在核苷酸及氨基酸差异,这种变化可能对CVA6的复制及适应性产生影响。

关键词：柯萨奇病毒A组6型手足口病疱疹性咽峡炎进化分析重组分析

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2019年云南省昆明市柯萨奇病毒A组4型毒株分离鉴定及其VP1基因特性分析

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中国生物制品学杂志 2022年第2期35卷 144-149,158页

作者：丛山日刘红波许丹菡张名冯昌增黄小琴孙浩杨昭庆马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 威海市人力资源和社会保障局山东威海5323368

目的对2019年云南省手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)患者粪便中分离获得的柯萨奇病毒A组4型(coxsackievirus A4,CV-A4)毒株的VP1基因遗传特征进行分析。方法利用人横纹肌肉瘤RD细胞、人胚肺二倍体KMB-17细胞和非洲绿猴肾Ver... 详细信息

目的对2019年云南省手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)患者粪便中分离获得的柯萨奇病毒A组4型(coxsackievirus A4,CV-A4)毒株的VP1基因遗传特征进行分析。方法利用人横纹肌肉瘤RD细胞、人胚肺二倍体KMB-17细胞和非洲绿猴肾Vero细胞分离病毒,以病毒RNA作为逆转录-聚合酶链反应(reverse transcriptionpolymerase chain reaction,RT-PCR)的模板,扩增病毒完整VP1基因,利用MEGA 6.06和Geneious 9.0.2等软件对VP1序列进行分析。结果选取8株CV-A4分离株进行分析,其完整VP1序列为915 bp,编码305个氨基酸。8株CV-A4云南分离株与CVA4/High Point/USA/1949/AF081295(简称原型株)的核苷酸一致性和氨基酸同源性分别为83.4%~84.6%和97.0%~98.0%;与其他国内CV-A4参考株相比,核苷酸一致性和氨基酸同源性分别为87.7%~97.0%和97.7%~99.3%。8株CV-A4云南分离株相互比对,核苷酸一致性和氨基酸同源性分别为91.0%~99.9%和97.7%~100.0%。CV-A4云南分离株与大部分中国分离株同属C2基因亚型。结论本研究中CV-A4分离株均是中国大陆地区优势流行株。

关键词：柯萨奇病毒A组4型分离鉴定 VP1序列进化分析遗传特性

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