检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物工程杂志 2011年第11期31卷 6-10页

作者：贾琴妹吴晋元易山张光明郜岩杨星赵晓南孙茂盛李鸿钧中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 昆明医学院昆明650031

目的:研究人轮状病毒ZTR-5株灭活疫苗的制备及在实验小鼠中的免疫原性评价。方法:轮状病毒ZTR-5株在MA104细胞上经蚀斑筛选纯化后,获得单一克隆接种至Vero细胞上适应性培养,免疫荧光定量检测病毒的感染性滴度,对收获的病毒液进行离心、... 详细信息

目的:研究人轮状病毒ZTR-5株灭活疫苗的制备及在实验小鼠中的免疫原性评价。方法:轮状病毒ZTR-5株在MA104细胞上经蚀斑筛选纯化后,获得单一克隆接种至Vero细胞上适应性培养,免疫荧光定量检测病毒的感染性滴度,对收获的病毒液进行离心、超滤、分子筛纯化,甲醛灭活,抗原定量检测Al(OH)3吸附制备的实验性疫苗。使用不同剂量(8EU、32EU、128EU、256EU)经肌内注射免疫小鼠,共免疫三次,免疫间隔2周。采用间接ELISA法检测血清特异性抗体效价。结果:通过蚀斑纯化,筛选得到一株纯化的病毒株ZTR-5纯-1,在Vero细胞上适应性后感染性滴度达7.35logCCID50/ml;大量培养收获的病毒原液滴度为7.57logCCID50/ml,制备获得轮状病毒样品抗原含量为2 560EU/ml;经肌内注射,初次免疫后,所有剂量组动物均获得抗体阳转,阳转率为100%;第一次加强免疫后,各组血清特异性抗体水平均明显增高,免疫剂量为128EU和256EU的两组小鼠血清抗体效价均达1∶10 240;第二次加强免疫后,各剂量组(8EU、32EU、128EU、256EU)血清抗体效价依次达1∶5 120,1∶7 456,1∶14 481.54,1∶14 481.54。结论:人轮状病毒ZTR-5株可在Vero细胞上稳定增殖,所制备的疫苗具良好免疫原性,用128EU/2次免疫即可获得良好的免疫效果。

关键词：人轮状病毒 Vero细胞灭活疫苗免疫试验

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表达甲型HINl流感病毒神经氨酸酶的重组腺病毒的构建及其免疫原性

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中国生物制品学杂志 2011年第11期24卷 1264-1268页

作者：严敏孙茂盛王文举谢夭宏李太华李鸿钧中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

目的构建表达甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶（Neuraminidase，NA）的重组腺病毒，并检测其免疫原性。方法从质粒pMDl9T-simple-NA中扩增NA基因，克隆至穿梭质粒pShuttleCMV中，经同源重组获得重组腺病毒质粒，转染Ad．293细胞，包装出重... 详细信息

目的构建表达甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶（Neuraminidase，NA）的重组腺病毒，并检测其免疫原性。方法从质粒pMDl9T-simple-NA中扩增NA基因，克隆至穿梭质粒pShuttleCMV中，经同源重组获得重组腺病毒质粒，转染Ad．293细胞，包装出重组腺病毒Ad-NA，***和免疫荧光法检测NA基因在Vero细胞中的转录和表达。CsCl密度梯度离心纯化重组腺病毒，免疫小鼠，ELISA法检测免疫小鼠血清中抗NA抗体滴度。结果重组腺病毒质粒经PacI酶切鉴定表明带有目的基因的穿梭质粒已整合到腺病毒基因组中；NA基因在Vero细胞中成功转录和表达；重组腺病毒可刺激小鼠产生抗NA抗体，初免后4周，抗体水平达最高，为1：100000。结论成功构建了表达甲型H1N1流感病毒NA蛋白的重组腺病毒，其可刺激小鼠产生有效的免疫应答，为甲型HINl流感病毒基因工程疫苗的研发奠定了基础。

关键词：流感病毒A型 H1N1亚型神经氨酸酶重组腺病毒免疫原性 Influenza A, H1N1 subtype Neuraminidase （NA） Recombinant adenovirus Immunogenicity

来源：评论

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慢病毒介导的HIF-1α mODD在肿瘤细胞中的高表达

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医学研究杂志 2011年第12期40卷 28-31页

作者：赵玉娇龙海亭潘玥李华陈俊英施海晶马绍辉孙强明北京协和医学院/中国医学科学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的在肿瘤细胞中利用重组慢病毒介导缺氧诱导因子-1α突变体(HIF-1α mODD)在正常氧压下高表达,以模拟肿瘤缺氧微环境下肿瘤细胞中HIF-1α的高表达,为研究HIF-1介导的缺氧信号通路及其在肿瘤细胞中的作用提供实验模型。方法将含HIF-1α... 详细信息

目的在肿瘤细胞中利用重组慢病毒介导缺氧诱导因子-1α突变体(HIF-1α mODD)在正常氧压下高表达,以模拟肿瘤缺氧微环境下肿瘤细胞中HIF-1α的高表达,为研究HIF-1介导的缺氧信号通路及其在肿瘤细胞中的作用提供实验模型。方法将含HIF-1αmODD基因片段的慢病毒表达质粒pWPI GW/HIF-1α mODD,与pVSVG及pSPAX质粒共转染人胚肾293T细胞,包装制备重组慢病毒,重组病毒经过纯化后直接感染GLC、H157和YTMLC等肿瘤细胞,并在正常氧压条件下培养,通过RT-PCR、免疫印迹等方法检测HIF-1α mODD在细胞中的表达水平。结果重组慢病毒介导HIF-1α mODD在GLC、H157和YTMLC细胞内获得高表达。结论成功模拟了肿瘤细胞在缺氧微环境下高表达HIF-1α的情况,为体外研究HIF-1α在肿瘤血管新生及肿瘤生长中的作用提供途径。

关键词： HIF-1α 慢病毒缺氧微环境

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一株柯萨奇病毒B组5型(Cox.B5)病毒的分离及VP1基因分析

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医学研究杂志 2011年第9期40卷 55-58页

作者：李华杨卉娟柯华昕陈俊英潘玥赵玉娇孙强明马绍辉中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的研究2009年昆明市无菌性脑膜炎的病原柯萨奇B5(coxsackie virus B5,CVB5)分离株(KMA193-09)的VP1基因特征。方法采用RD细胞、Hep-2细胞对患者粪便标本进行病毒分离,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增病毒VP1基因并进行序列测定,用Meg... 详细信息

目的研究2009年昆明市无菌性脑膜炎的病原柯萨奇B5(coxsackie virus B5,CVB5)分离株(KMA193-09)的VP1基因特征。方法采用RD细胞、Hep-2细胞对患者粪便标本进行病毒分离,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增病毒VP1基因并进行序列测定,用Mega 4.0等软件分析处理。结果从无菌性脑膜炎患者粪便标本中,分离到CVB5,其VP1区的核苷酸长度均为831bp,未发现核苷酸插入与丢失。与浙江COXB5/ZHEJIANG/12/02(CFS)株、山东02336/SD/CHN/2002/CB5株及浙江COXB5/ZHEJIANG/13/02株氨基酸同源性最高为98.19%,与国外毒株的同源性为95.67%～97.83%。在进化树上与YZ081/SD/CHN/2005/CB5株显示在同一个分支上。结论分离的肠道病毒为柯萨奇病毒B组5型(CVB5),分离株(KMA193-09)VP1区变异较小。

关键词：无菌性脑膜炎柯萨奇病毒B组5型(Cox.B5) VP1基因分析

来源：评论

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利用恒河婴猴模型对肠道病毒71型传播感染特征的生物学分析

引用

微生物与感染 2011年第3期6卷 133-138页

作者：王晶晶李薇赵红玲刘龙丁唐东红杨丽仙董承红纳锐雄王丽春张莹梁燕廖芸李琦涵中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 昆明医学院昆明650032

本文在前期工作基础上,进一步对肠道病毒71型（EV71）从恒河婴猴的感染个体向其他未感染个体传播的可能性及相关生物学特性做了初步分析。通过喷雾形式经呼吸道感染1~2月龄恒河婴猴（A组）;在观察临床症状同时,于感染后第7天,取该组动... 详细信息

本文在前期工作基础上,进一步对肠道病毒71型（EV71）从恒河婴猴的感染个体向其他未感染个体传播的可能性及相关生物学特性做了初步分析。通过喷雾形式经呼吸道感染1~2月龄恒河婴猴（A组）;在观察临床症状同时,于感染后第7天,取该组动物粪便处理后,将上清液以喷雾形式经呼吸道感染新的婴猴个体（B组）,随后对该次代感染个体进行同样临床观察;并对哺乳B组婴猴的母猴（C组）也进行全面观察和分析。同时,将A组动物粪便处理后的上清液经血液感染的婴猴作为对照。分析临床症状,血液、粪便及咽拭子病毒载量,中和抗体效价,组织病理学改变。结果提示,恒河婴猴作为EV71感染动物模型,能反映病毒在个体间传播的基本生物学特征。依据实验结果,可以初步推断,EV71在易感人群中的主要传播途径是呼吸道;同时,病毒也可从低龄个体向成年个体传播。这些资料为进一步探讨EV71在儿童群体中的发病规律提供了一定的理论依据。

关键词：肠道病毒71型恒河猴传播感染动物模型

来源：评论

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