检索结果-内蒙古大学图书馆

腺病毒载体的研究进展及其在轮状病毒疫苗研究中的应用

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中国生物制品学杂志 2012年第3期25卷 378-382页

作者：郜岩孙茂盛中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所分子生物学研究室云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 昆明医学院昆明650031

腺病毒载体是一种非常有效的转基因载体,具有高效率、高滴度、低致病性及不整合入宿主细胞染色体等优点,是目前非常具有应用前景的转基因载体。本文就重组腺病毒载体的研究进展、研究中的问题和解决方法及其在轮状病毒疫苗研究中的应用... 详细信息

腺病毒载体是一种非常有效的转基因载体,具有高效率、高滴度、低致病性及不整合入宿主细胞染色体等优点,是目前非常具有应用前景的转基因载体。本文就重组腺病毒载体的研究进展、研究中的问题和解决方法及其在轮状病毒疫苗研究中的应用作一综述。

关键词：腺病毒载体轮状病毒疫苗

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两株灭活轮状病毒疫苗的免疫效果

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中国生物制品学杂志 2012年第3期25卷 262-265页

作者：吴晋元易山张光明李鸿钧谢天宏李思成郜岩贾琴妹杨星赵晓南孙茂盛中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所分子生物学研究室云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 昆明医学院昆明650031

目的研究轮状病毒(Rotavirus,RV)P[8]G1和P[2]G3株灭活疫苗的免疫原性及不同血清型间的交叉识别作用。方法采用Vero细胞转瓶培养RV,经纯化灭活、佐剂吸附等工艺,制备RV P[8]G1和P[2]G3株灭活疫苗,分别经肌内免疫Wistar大鼠和猕猴,采用EL... 详细信息

目的研究轮状病毒(Rotavirus,RV)P[8]G1和P[2]G3株灭活疫苗的免疫原性及不同血清型间的交叉识别作用。方法采用Vero细胞转瓶培养RV,经纯化灭活、佐剂吸附等工艺,制备RV P[8]G1和P[2]G3株灭活疫苗,分别经肌内免疫Wistar大鼠和猕猴,采用ELISA法和微量病毒中和试验检测大鼠和猕猴血清中RV特异性抗体效价和中和抗体效价,流式细胞术检测猕猴血液中CD4+和CD8+T细胞的数量。结果 P[8]G1和P[2]G3株疫苗样品的RV抗原含量分别为10 240和5 120 EU/ml;免疫2次后,P[8]G1和P[2]G3株疫苗诱导大鼠产生的血清IgG抗体GMT分别为(43 407.71±1 654.51)和(41 520.61±2 047.61),诱导猕猴产生的血清IgG抗体GMT分别为(13 654.45±3 125.27)和(10 350.68±997.83);单一血清型疫苗免疫后产生的中和抗体具有型间交叉识别作用;2株疫苗免疫猕猴后均能刺激其CD4+T淋巴细胞增殖,CD8+T淋巴细胞无明显变化。结论 2株RV灭活疫苗均具有良好的免疫原性及型间交叉识别作用。

关键词：轮状病毒疫苗灭活疫苗免疫反应

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灭活轮状病毒疫苗与灭活脊髓灰质炎病毒疫苗联合使用免疫效果评价

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中国生物制品学杂志 2015年第3期28卷 217-222页

作者：牛香莲张光明吴晋元米鍇谢力孙晓琴李鸿钧孙茂盛中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所分子生物学研究室云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的评价灭活轮状病毒疫苗(inactivated rotavirus vaccine,IRV)与灭活脊髓灰质炎病毒疫苗(inactivated poliovirus vaccine,IPV)免疫大鼠后,两种疫苗间免疫效果的相互作用。方法将Wistar大鼠随机分成联合免疫组、间隔免疫组和单疫苗免... 详细信息

目的评价灭活轮状病毒疫苗(inactivated rotavirus vaccine,IRV)与灭活脊髓灰质炎病毒疫苗(inactivated poliovirus vaccine,IPV)免疫大鼠后,两种疫苗间免疫效果的相互作用。方法将Wistar大鼠随机分成联合免疫组、间隔免疫组和单疫苗免疫组:联合免疫组接种IPV后4周,经双侧腿同时免疫IPV和IRV,共2次,间隔4周;单疫苗免疫组2组,分别免疫3针IPV和2针IRV,每针均间隔4周;间隔免疫组免疫1针IPV后4周,开始进行IPV和IRV间隔免疫(每针间隔2周,共6周)。分别于每次免疫后4周经尾静脉采血,分离血清,采用微量中和试验结合免疫荧光抑制方法检测血清抗RV中和抗体水平,ELISA法检测血清抗RV特异性Ig G抗体水平,微量中和试验法检测血清抗脊髓灰质炎病毒中和抗体水平。结果大鼠经2针IRV免疫后,血清抗RV中和抗体和特异性Ig G抗体几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)均明显上升,血清抗体阳转率均达100%;经3针IPV免疫后,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒中和抗体GMT均明显上升,抗体阳转率均达100%;联合免疫组、间隔免疫组和单疫苗免疫组间血清抗RV中和抗体水平、特异性Ig G抗体水平及抗脊髓灰质炎病毒中和抗体水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论 IRV和IPV免疫大鼠后均获得到良好的免疫效果,两种疫苗联合使用时,免疫效果无相互干扰作用。

关键词：灭活轮状病毒疫苗灭活脊髓灰质炎疫苗联合免疫

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灭活轮状病毒与灭活肠道病毒71型联合疫苗的免疫效果

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中国生物制品学杂志 2014年第3期27卷 292-295页

作者：叶静米鍇吴晋元郭莉莉李鸿钧孙茂盛中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所分子生物学研究室云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的评价灭活轮状病毒（rotavirus，RV）与灭活肠道病毒71型（enterovirus71，EV71）联合疫苗的免疫效果及两种抗原间的相互作用。方法将灭活RV与EV71按不同抗原含量配比制成联合疫苗免疫ICR小鼠，同时设单价疫苗组，均经小鼠腿部肌肉... 详细信息

目的评价灭活轮状病毒（rotavirus，RV）与灭活肠道病毒71型（enterovirus71，EV71）联合疫苗的免疫效果及两种抗原间的相互作用。方法将灭活RV与EV71按不同抗原含量配比制成联合疫苗免疫ICR小鼠，同时设单价疫苗组，均经小鼠腿部肌肉注射，隔2周免疫1次，共2次，分别于每次免疫后2周，经小鼠尾静脉采血，分离血清，经56。c灭活30rain后，采用血清中和试验检测小鼠血清中抗RV和抗EV71中和抗体效价。结果初次免疫后14d，各组小鼠血清中RV特异性中和抗体阳转率为50％-67％，中和抗体效价为2．2-2．8，加强免疫后14d，抗体阳转率达100％，中和抗体效价为28．5-35．9。初次免疫后14d，各组小鼠血清中抗EV71中和抗体阳转率为83％-100％，中和抗体效价为4．0-7．1，加强免疫后14d，中和抗体阳转率达100％，中和抗体效价为25．4-71．8；联合疫苗组与单价疫苗组间抗RV及抗EV71中和抗体效价差异无统计学意义（P〉0．05）；Rv和EV71抗原量按160／160EU配比时，可诱导出最高的抗RV抗体及抗EV71抗体应答。结论Rv与EV71联合疫苗可诱导小鼠产生针对两种病毒的体液免疫应答，抗体应答水平与疫苗抗原配比剂量相关，未发现两种抗原间有协同或拈抗作用。

关键词：轮状病毒肠道病毒71型灭活疫苗联合疫苗

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人乳头瘤病毒主要衣壳蛋白L1在大肠埃希菌中的表达

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中国生物制品学杂志 2015年第3期28卷 245-250,256页

作者：杨旭夏烨李亚东金晓媚龙琼孙文佳黄惟巍刘存宝姚宇峰马雁冰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所分子免疫研究室云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南省重大传染病疫苗研发国家地方联合工程研究中心云南昆明650118

目的探讨在大肠埃希菌中不同因素对高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)L1蛋白表达的影响,为研发针对多型别HPV的低价、广谱疫苗奠定基础。方法通过采用非融合、不同融合蛋白形式,不同基因型HPV L1序列,以及同一基因型但不同... 详细信息

目的探讨在大肠埃希菌中不同因素对高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)L1蛋白表达的影响,为研发针对多型别HPV的低价、广谱疫苗奠定基础。方法通过采用非融合、不同融合蛋白形式,不同基因型HPV L1序列,以及同一基因型但不同序列特征等构建HPV L1非融合及融合表达重组质粒及HPV L1谷胱甘肽巯基转移酶(glutathione-S-transferase,GST)融合表达质粒,转化不同宿主菌(大肠埃希菌DH5α、BL21),在不同的温度下(37、20℃)进行IPTG诱导表达,12%SDS-PAGE分析融合蛋白的表达及其可溶性,Western blot鉴定表达的融合蛋白。结果 HPV 16 L1蛋白在GST融合蛋白形式下获得了高效表达,而非融合表达或硫氧还蛋白融合表达未见明显目的条带;不同的宿主菌未对GST融合蛋白表达水平产生明显影响;在37℃培养条件下,表达的GST融合蛋白以包涵体形式存在,而在20℃培养条件下,部分表达的蛋白以可溶性形式存在;HPV 16 L1基因不同序列获得了类似的表达水平;经酵母密码子优化的HPV 18 L1与HPV 58 L1基因均能以GST融合表达形式获得与HPV 16 L1相似的高效表达。结论在大肠埃希菌中以GST融合形式可获得多基因型别HPV L1蛋白的高效可溶性表达,为病毒样颗粒体外折叠制备奠定了基础,也为其他外源基因在大肠埃希菌中的高效表达提供了参考。

关键词：乳头瘤病毒衣壳蛋白大肠埃希菌表达

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轮状病毒规模化纯化方法的建立

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中国生物制品学杂志 2012年第4期25卷 480-482,491页

作者：张标佟琳易山张光明谢天宏李鸿钧孙茂盛广东医学院组织学与胚胎学教研室广东湛江524023 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所分子生物学研究室云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 广东医学院附属医院危重医学科广东湛江524001

目的建立一种可规模化纯化轮状病毒(Rotavirus,RV)的方法。方法以氯化铯密度梯度离心法(离心法)纯化RV作为对照,分析采用离心-微滤-超滤-层析法(模块法)纯化RV的可行性。透射电镜观察病毒形态;微量滴定法测定病毒的感染性滴度;Bradford... 详细信息

目的建立一种可规模化纯化轮状病毒(Rotavirus,RV)的方法。方法以氯化铯密度梯度离心法(离心法)纯化RV作为对照,分析采用离心-微滤-超滤-层析法(模块法)纯化RV的可行性。透射电镜观察病毒形态;微量滴定法测定病毒的感染性滴度;Bradford法检测纯化前后病毒液的蛋白含量,计算蛋白回收率;以两种方法纯化的病毒免疫BALB/c小鼠,微量中和试验检测小鼠血清中和抗体滴度。结果模块法纯化的RV结构完整,感染性滴度可达(7.15±0.10)lgCCID50,可清除超过95%的蛋白质,蛋白回收率为(2.58±0.06)%,免疫小鼠可诱导中和抗体。模块法纯化的RV蛋白回收率、感染性滴度及诱导的小鼠中和抗体水平均显著高于离心法(P<0.05或P<0.01)。结论模块法可有效纯化RV,为RV灭活疫苗规模化纯化工艺的开发提供了实验依据。

关键词：轮状病毒疫苗纯化层析

来源：评论

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血管紧张素Ⅱ基因重组杆状病毒的构建

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中国生物制品学杂志 2013年第5期26卷 590-594,602页

作者：欧霞 Yuri Kusov 郭莉莉米锴吴晋元尹娜张光明李鸿钧孙茂盛中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所分子生物室云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 Department of Medical Molecular Biology University Lübeck

目的构建携带血管紧张素I(IAngiotensin Ⅱ,AngⅡ)基因的重组杆状病毒,并利用Bac-to-Bac重组杆状病毒表达系统进行表达。方法将重组杆粒bacmid-P1-2A-4AngⅡs-3ABC(rB/HAngⅡ)转染昆虫细胞sf9,包装出重组杆状病毒rBac-P1-2A-4AngⅡs-3ABC(rBAV),通过光学显微镜和透射电镜观察细胞病变(CPE)及病毒形态,采用蚀斑试验检测病毒滴度,PCR及间接免疫荧光技术验证该病毒及感染细胞中AngⅡ和HAV蛋白的表达。结果重组杆粒rB/HAngⅡ转染sf9细胞96 h后,出现典型的CPE;透射电镜下观察可见典型的杆状病毒颗粒;PCR可特异性的扩增出约3 000和1 000 bp的P1-2A-4AngⅡs和3ABC基因片段;P3代重组杆状病毒滴度约为4×108pfu/ml;感染后的sf9细胞中可见特异性的绿色荧光(AngⅡ蛋白)和红色荧光(HAV结构蛋白)。结论已成功构建了携带AngⅡ基因的重组杆状病毒,并在sf9细胞中获得表达,为研制抗高血压疫苗提供了新的思路。

关键词：血管紧张素Ⅱ 杆状病毒表达系统高血压疫苗

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