检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病毒病杂志 2023年第6期13卷 428-435页

作者：马良李冰香王红叶孙明中国医学科学院、北京协和医学院、医学生物学研究所云南昆明650118

2019年底由新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)引起的新型冠状病毒感染疫情暴发,为预防病毒感染,降低病毒的感染率,减少重症率及死亡病例,各国持续加快推进多种类型的疫苗研发及接种。其中,蛋... 详细信息

2019年底由新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)引起的新型冠状病毒感染疫情暴发,为预防病毒感染,降低病毒的感染率,减少重症率及死亡病例,各国持续加快推进多种类型的疫苗研发及接种。其中,蛋白亚单位疫苗以其安全、高效、可规模化生产等优点,受到了广泛的关注。截至2023年初,全球共有36种亚单位疫苗进入Ⅲ期临床研究,19种亚单位疫苗已被授权紧急使用。本文通过分析比较新型冠状病毒不同蛋白组分作为新型冠状病毒疫苗靶点设计的优缺点,聚焦基于受体结合域(receptor binding domain,RBD)的亚单位疫苗设计策略,从蛋白结构、表达系统、纯化方法、佐剂类别及预防效果等方面,对不同的RBD亚单位疫苗的研究进展及临床结果进行了概述,并对RBD亚单位疫苗开发中可能遇到的挑战进行了探讨,以期为新型冠状病毒及其他病原体亚单位疫苗的设计研发提供可行思路。

关键词：新型冠状病毒蛋白亚单位疫苗受体结合域佐剂中和抗体效价

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柯萨奇病毒A组10型免疫荧光检测方法的建立及其在灭活验证中的应用

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中国病毒病杂志 2023年第1期13卷 48-54页

作者：张宇昊杨婷李华岳磊向虹谢天宏张也谢忠平中国医学科学院、北京协和医学院、医学生物学研究所云南昆明650118

目的建立检测柯萨奇病毒A组10型(coxsackievirus A10,CVA10)病毒颗粒的免疫荧光检测方法,使用该方法对病毒的灭活进行辅助验证。方法在非洲绿猴肾细胞(African green monkey kidney cell,Vero)、人恶性胚胎横纹肌瘤细胞(human malignant... 详细信息

目的建立检测柯萨奇病毒A组10型(coxsackievirus A10,CVA10)病毒颗粒的免疫荧光检测方法,使用该方法对病毒的灭活进行辅助验证。方法在非洲绿猴肾细胞(African green monkey kidney cell,Vero)、人恶性胚胎横纹肌瘤细胞(human malignant embryonic rhabdomyoma cells,RD)、非洲绿猴胚胎肾细胞(African green monkey embryonic kidney cells,MA104)三种细胞上检测病毒滴度,绘制滴度曲线确定最敏感细胞;以兔抗CVA10多克隆抗体为一抗、Alexa Fluor®594偶联的山羊抗兔IgG为荧光二抗,对实验条件进行优化,建立检测CVA10的免疫荧光方法,并与灭活验证中细胞盲传实验结果进行比较。结果RD细胞为CVA10最敏感细胞,一抗最佳稀释度为1∶100,二抗最佳稀释度为1∶200。病毒感染RD细胞后24 h可检测到的病毒量下限为50 CCID_(50)/ml,感染4 d时的检测下限为0.5 CCID_(50)/ml。Vero细胞为CVA10的较敏感细胞,相同条件下,病毒感染Vero细胞后24 h可检测到的病毒下限为80 CCID_(50)/ml,5 d时的检测下限为1 CCID_(50)/ml。灭活验证中,免疫荧光结果与细胞盲传实验结果具有一致性。结论成功建立了CVA10的免疫荧光检测方法,该方法可辅助细胞盲传实验进行灭活验证。

关键词：柯萨奇病毒A组10型灭活验证免疫荧光检测敏感性

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脂质纳米粒载体共递送抗原和雷西莫特佐剂对黑色素瘤小鼠细胞免疫应答及瘤体生长的影响

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贵州医科大学学报 2023年第9期48卷 1032-1039页

作者：金育罗佳何春艳罗忠瑞张玉芳刘野中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118

目的探讨脂质纳米粒(LNP)载体共递送抗原和雷西莫特(R848)佐剂对黑色素瘤小鼠细胞免疫应答及瘤体生长的影响。方法取对数期生长小鼠黑色素瘤(B16F10-OVA)细胞接种于30只小鼠右侧前肢皮下构建黑色素瘤模型,模型鼠随机均分为空白(Blank)组... 详细信息

目的探讨脂质纳米粒(LNP)载体共递送抗原和雷西莫特(R848)佐剂对黑色素瘤小鼠细胞免疫应答及瘤体生长的影响。方法取对数期生长小鼠黑色素瘤(B16F10-OVA)细胞接种于30只小鼠右侧前肢皮下构建黑色素瘤模型,模型鼠随机均分为空白(Blank)组(生理盐水100μL)、LNP+抗原组(肿瘤疫苗多肽50μg和LNP 10μg)、LNP+R848组(LNP 10μg和R8483.18μg)、R848^(+)抗原组(肿瘤疫苗多肽50μg和R8483.18μg)及LNP+R848^(+)抗原组(肿瘤疫苗多肽50μg、LNP 10μg及R8483.18μg),均采用肌肉注射、2次免疫、间隔7 d,免疫处理期间每2 d测量1次各组小鼠肿瘤体积的变化,第2次免疫结束后第7天麻醉处死各组小鼠,取瘤体制备细胞悬液;采用流式细胞术检测各组小鼠肿瘤细胞中CD4阳性T淋巴细胞(CD4^(+)T)和CD8阳性T淋巴细胞(CD8^(+)T)细胞分泌的溶酶体相关膜蛋白1(CD107a)、干扰素γ(IFN-γ)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达。结果LNP+R848^(+)抗原组小鼠黑色素瘤体积低于Blank组、LNP+抗原组、LNP+R848组及R848^(+)抗原组(P<0.05);LNP+R848^(+)抗原组小鼠肿瘤组织中CD4^(+)T和CD8^(+)T细胞分泌的CD107a、IFN-γ及TNF-α表达高于Blank组、LNP+抗原组、LNP+R848组及R848^(+)抗原组(P<0.05)。结论LNP载体共递送抗原和R848佐剂可增强黑色素瘤小鼠的细胞免疫应答及抑制瘤体的生长。

关键词：佐剂,免疫共递送脂质纳米粒雷西莫特肿瘤疫苗细胞免疫

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病原体感染角膜炎机制及动物模型研究进展

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中国比较医学杂志 2022年第4期32卷 137-144页

作者：陈柳邱敏代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 昆明医科大学昆明650500

感染性角膜炎是世界范围内的眼科常见疾病,是导致视力丧失和失明的重要原因。对微生物性角膜炎发病机制的全面认识、建立相关疾病的动物模型在研究宿主感染的免疫应答和感染机制、药物研发等方面扮演着重要作用,为临床治疗策略选择及基... 详细信息

感染性角膜炎是世界范围内的眼科常见疾病,是导致视力丧失和失明的重要原因。对微生物性角膜炎发病机制的全面认识、建立相关疾病的动物模型在研究宿主感染的免疫应答和感染机制、药物研发等方面扮演着重要作用,为临床治疗策略选择及基础研究提供了科学依据。随着医学研究的深入,我们对感染性角膜炎动物模型及致病机制进行归纳总结,期望对此有一个全面了解。

关键词：感染性角膜炎发病机制动物模型

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脂质体包被SARS-CoV-2 N基因的候选DNA疫苗转染人源细胞效率研究

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云南大学学报（自然科学版） 2022年第5期44卷 1062-1068页

作者：周健左原源赵雨芊赖清润郑惠文赵鑫秦丽张兴龙施海晶刘龙丁李恒中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118 云南大学生命科学学院云南昆明650091

利用脂质体包被含有SARS-CoV-2核衣壳蛋白(nucleocapsid protein;N)基因的候选DNA疫苗,并检测其在人源细胞293T中的转染效率.将SARS-COV-2 N基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1,DNA测序及转染后的质谱测序证明能够表达正确蛋白.利用脂质体... 详细信息

利用脂质体包被含有SARS-CoV-2核衣壳蛋白(nucleocapsid protein;N)基因的候选DNA疫苗,并检测其在人源细胞293T中的转染效率.将SARS-COV-2 N基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1,DNA测序及转染后的质谱测序证明能够表达正确蛋白.利用脂质体包被pcDNA3.1-SARS-COV-2-N基因,并进行超离纯化、核酸电泳、透射电镜等检测发现形成50~100 nm的脂质体纳米颗粒,定量后将纳米颗粒转染293T细胞,并对比脂质体转染与FUGENE~?HD试剂转染效果,表明制备的候选重组脂质体DNA疫苗能够形成稳定的纳米颗粒,并可在人源细胞293T中高效表达.

关键词：脂质体 SARS-CoV-2 N DNA疫苗人源细胞293T

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端粒酶抑制剂6-硫代-2’-脱氧鸟苷诱导肿瘤细胞免疫原性死亡

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中国细胞生物学学报 2024年第2期46卷 214-225页

作者：王梦真段彪白婧罗逸铭马雁冰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所昆明650531 昆明医科大学昆明650500

该文主要探讨端粒酶抑制剂6-硫代-2’-脱氧鸟苷(6-Thio-2’-deoxyguanosine,6-Thio-dG)是否诱导肿瘤细胞免疫原性死亡(immunogenic cell death,ICD),并揭示所产生的ICD的免疫应答特征,为利用6-Thio-d G诱导肿瘤细胞ICD开展免疫治疗提供... 详细信息

该文主要探讨端粒酶抑制剂6-硫代-2’-脱氧鸟苷(6-Thio-2’-deoxyguanosine,6-Thio-dG)是否诱导肿瘤细胞免疫原性死亡(immunogenic cell death,ICD),并揭示所产生的ICD的免疫应答特征,为利用6-Thio-d G诱导肿瘤细胞ICD开展免疫治疗提供基础。首先,用不同浓度的6-Thio-d G处理小鼠黑色素瘤B16-F10、结肠癌CT26、宫颈癌相关肿瘤TC-1和乳腺癌4T1细胞,在不同时间点用显微镜观察细胞死亡情况及形态特征;利用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒定量分析细胞死亡情况;以检测试剂盒以及酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分析细胞死亡过程中免疫介质释放情况;免疫荧光染色实验考察钙网蛋白(calreticulin,CALR)向细胞膜的迁移定位。进一步,建立皮下移植TC-1小鼠肿瘤模型,当肿瘤长至4~5 mm时,注射6-Thio-d G对荷瘤小鼠进行治疗性干预,通过酶联免疫斑点技术(enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT)与流式细胞术分析小鼠的细胞免疫应答情况;免疫组化检测肿瘤组织中高迁移率组蛋白B1(high mobility group box protein B1,HMGB1)的释放情况。研究结果显示,6-Thio-dG可诱导4种肿瘤细胞死亡,死亡特征与细胞类型、药物剂量和处理时间有关;肿瘤细胞经6-Thio-dG诱导后促进了发挥免疫刺激作用的“发现我”信号分子三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)和HMGB1、炎症细胞因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的释放,以及“吃了我”信号分子CALR在细胞膜的聚集。在肿瘤模型中,6-Thio-dG显著抑制了小鼠肿瘤生长,提高了肿瘤组织中HMGB1水平,增强了表达γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)的肿瘤抗原特异性的脾细胞应答,降低了脾细胞中髓源性抑制细胞(myeloid derived suppressor cell,MDSC)的水平。该研究揭示了6-Thio-d G能够诱导肿瘤细胞ICD,在杀伤肿瘤细胞的同时,增强了T细胞的抗肿瘤免疫应答能力,为肿瘤免疫治疗提供了新思路。

关键词： 6-Thio-dG 免疫原性细胞死亡黑色素瘤宫颈癌结肠癌乳腺癌

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轮状病毒NSP4胞质区在杆状病毒系统的表达及其黏膜佐剂效应评价

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中国免疫学杂志 2023年第5期39卷 917-921,927页

作者：谢力曾韦锟李臣孔璟王纪爱陈伟伟李鸿钧孙茂盛昆明学院医学院昆明650214 昆明医科大学第三附属医院昆明650118 中国医学科学院医学生物学研究所北京协和医学院云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118.

目的:应用Bac-to-Bac杆状病毒系统表达轮状病毒(RV)非结构蛋白NSP4的胞质区(CF)片段(47~175 aa),并初步检测其黏膜免疫佐剂效应。方法:将RV NSP4-CF基因片段定向克隆至转座载体pFastBac1,转化DH10Bac并筛选重组杆粒Bac-NSP4-CF。脂质体... 详细信息

目的:应用Bac-to-Bac杆状病毒系统表达轮状病毒(RV)非结构蛋白NSP4的胞质区(CF)片段(47~175 aa),并初步检测其黏膜免疫佐剂效应。方法:将RV NSP4-CF基因片段定向克隆至转座载体pFastBac1,转化DH10Bac并筛选重组杆粒Bac-NSP4-CF。脂质体介导Bac-NSP4-CF转染sf9细胞,收获细胞并传代培养。测定病毒滴度,Western blot检测目的蛋白表达情况。纯化后的重组NSP4-CF与卵清蛋白(OVA)滴鼻共免疫小鼠,并检测其黏膜免疫佐剂效应。结果:在杆状病毒系统中成功获取了NSP4-CF重组蛋白,Western blot检测可见约16 kD的特异性条带;重组NSP4-CF与OVA共免疫小鼠后,小鼠血清OVA特异性IgG、IgA抗体水平与肠道SIgA水平较OVA单独免疫组均有升高(P<0.05);ELISPOT检测结果表明NSP4-CF佐剂组(5μg)分泌IFN-γ的脾细胞平均数均高于OVA组(P<0.05)。结论:经昆虫细胞表达系统可获得RV NSP4胞质区(47~175 aa)重组蛋白,该蛋白与模式抗原经黏膜途径免疫小鼠具有增强系统免疫应答与黏膜免疫应答的佐剂活性,为进一步研究RV-NSP4佐剂活性区域及其分子机制提供了实验基础。

关键词：佐剂轮状病毒 NSP4胞质区杆状病毒黏膜免疫

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一株柯萨奇病毒B组5型分离株V1641/YN/CHN/2016的全基因序列分析

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病毒学报 2022年第3期38卷 573-580页

作者：许丹菡郭伟张名冯昌增丛山日刘双芹马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

对2016年云南省昆明市手足口病相关的柯萨奇病毒B组5型分离株V1641/YN/CHN/2016(简称V1641)全基因组进行测序,并分析其分子变异和进化特点。设计针对V1641的引物,提取病毒RNA,RT-PCR扩增和测序,拼接获得的全基因组序列。利用MEGA7.0.26... 详细信息

对2016年云南省昆明市手足口病相关的柯萨奇病毒B组5型分离株V1641/YN/CHN/2016(简称V1641)全基因组进行测序,并分析其分子变异和进化特点。设计针对V1641的引物,提取病毒RNA,RT-PCR扩增和测序,拼接获得的全基因组序列。利用MEGA7.0.26、Geneious9.1.4和SimPlot3.5.1软件分析全基因序列。V1641毒株基因组全长7 392nt,5’-UTR和3’-UTR分别长744nt和90nt,编码区长6 558nt,与其他CVB5相比未见核苷酸的插入和缺失,编码一个2 185aa的多聚蛋白。CVB5流行株大体上分为两个基因组,中国大陆流行株同原型株Faulkner一起分布于GenogroupⅠ分支,外国流行株大多分布于GenogroupⅡ分支。在GenBank中,V1641与KY303900-417/JS-CHN-2013最为同源,相似性为97.86%。V1641与其他中国大陆流行株的全基因组序列的核苷酸和氨基酸相似性分别为85.1%~97.8%和97.1%~99.6%。V1641在P1、P2和P3区段均与EV-B不同血清型的原型株聚类,经SimPlot3.5.1软件验证,提示有重组事件发生。云南CVB5分离株V1641同中国大陆流行株一样属于GenogroupⅠ基因群,在进化过程中可能发生了重组。中国大陆可能存在多条CVB5传播链。

关键词：柯萨奇病毒全基因组进化分析

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病毒通过Rubicon抑制自噬晚期或干扰素的产生实现固有免疫逃逸的研究进展

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细胞与分子免疫学杂志 2025年第1期41卷 83-89页

作者：宿俊玮袁瑾王峰李珺岳磊严敏昆明医科大学基础医学院病原生物学与免疫学系云南昆明650500 浙江大学邵逸夫医院麻醉科浙江杭州310016 云南省普洱市中医医院检验科云南普洱665099 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118

固有免疫反应是宿主抵御病毒感染的第一道防线。通过自噬靶向降解病原微生物,协同模式识别受体诱导干扰素(IFN)产生,是机体抵御病毒感染的重要途径。Rubicon,一种Run结构域Beclin 1相互作用和富含半胱氨酸结构域蛋白,对自噬和IFN产生具... 详细信息

固有免疫反应是宿主抵御病毒感染的第一道防线。通过自噬靶向降解病原微生物,协同模式识别受体诱导干扰素(IFN)产生,是机体抵御病毒感染的重要途径。Rubicon,一种Run结构域Beclin 1相互作用和富含半胱氨酸结构域蛋白,对自噬和IFN产生具有抑制效应。一方面,Rubicon作为磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)复合体的一种结合成分,通过不同的结构域分别与液泡蛋白分选34(Vps34)、紫外线辐射耐受相关基因(UVRAG)、小鸟苷三磷酸(GTP)激酶和RAS癌基因家族成员7(Rab7)相互作用,介导自噬成熟抑制;另一方面,Rubicon抑制核因子κB关键调节因子(NEMO)的泛素化和干扰素调节因子3(IRF3)的二聚化,进而阻断IFN产生相关的信号转导。研究发现卡波西肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)、乙型肝炎病毒(HBV)、仙台病毒(SeV)、丙型肝炎病毒(HCV)等多种病毒,通过调节Rubicon的表达或功能实现固有免疫逃逸,Rubicon有望成为抗病毒治疗的新靶点。

关键词：病毒 Rubicon 干扰素(IFN) 自噬固有免疫逃逸综述

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寨卡病毒母婴传播及动物模型的研究进展

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中国实验动物学报 2021年第2期29卷 256-261页

作者：奎秀莹代解杰北京协和医学院/中国医学科学院医学生物学研究所昆明650118

寨卡病毒(Zika virus)是属于黄病毒科黄病毒属的一种虫媒病毒,可经过埃及伊蚊和白纹伊蚊叮咬传播,也可通过血液、泪液传播,以及性传播和母婴垂直传播。寨卡病毒一旦感染孕妇,就会有导致胎儿感染的可能。成人多出现一些较轻的临床症状,... 详细信息

寨卡病毒(Zika virus)是属于黄病毒科黄病毒属的一种虫媒病毒,可经过埃及伊蚊和白纹伊蚊叮咬传播,也可通过血液、泪液传播,以及性传播和母婴垂直传播。寨卡病毒一旦感染孕妇,就会有导致胎儿感染的可能。成人多出现一些较轻的临床症状,但胎儿更容易受到中枢神经系统的伤害,继而诱发小头畸形,重症脑部发育缺陷以及一些神经系统性炎症,因此,阻断寨卡病毒的传播及感染迫在眉睫。为了能够对寨卡病毒母婴传播途径有更全面的认识,研究其致病机理,并且找到有效的预防、检测和治疗方法,建立成功的动物模型极为关键。文章将对目前已有的寨卡病毒母婴传播在各种动物模型上的研究进展进行综合整理。

关键词：寨卡病毒垂直传播动物模型

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