检索结果-内蒙古大学图书馆

实验动物科学 2023年第1期40卷 83-86页

作者：陈丽雄王俊斌靳玮华李艳艳赵远马进杨凤梅徐鸿界刘权陈丽玲中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 昆明医科大学昆明650500

在本饲养场发现一只雌性猕猴肛门下方有一约6 cm×6 cm肿大凸起,饮食正常、体温正常、精神状况良好。对其凸起物进行触诊,质地坚硬,用针管刺入抽取有淡黄色液体流出,随着液体的抽取凸起物体积变小,血液生理生化检测,红细胞、血红蛋... 详细信息

在本饲养场发现一只雌性猕猴肛门下方有一约6 cm×6 cm肿大凸起,饮食正常、体温正常、精神状况良好。对其凸起物进行触诊,质地坚硬,用针管刺入抽取有淡黄色液体流出,随着液体的抽取凸起物体积变小,血液生理生化检测,红细胞、血红蛋白、红细胞压积低于参考值,血小板、血小板压积、平均血红蛋白浓度、单核细胞比率、中性粒细胞数、单核细胞高于参考值。白蛋白与球蛋白比值、总蛋白、白蛋白、γ-谷氨酸转肽酶、尿酸、铁低于参考值。谷草转氨酶、尿素、肌酐高于参考值。根据临床症状,初步怀疑该猕猴肛门下方为会阴疝,结合临床血常规、生化指标的检测,建议尽快进行手术修复。通过临床症状、血常规、生化指标的检测,确诊该猕猴所患疾病为会阴疝,通过麻醉外科手术修复治疗及术后护理,患病猕猴痊愈。

关键词：猕猴会阴疝诊治

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F基因型腮腺炎减毒活疫苗(人二倍体细胞)SP-A株工作种子批的建立与检定

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中国新药杂志 2021年第15期30卷 1381-1385页

作者：邱恒田文志王微郑俊杰任芳芳段颖融李琦涵王晶晶中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

目的:以人二倍体细胞KMB-17株为细胞培养基质建立F基因型腮腺炎减毒活疫苗SP-A株工作种子批。方法:在细胞工厂中以血清浓度为5%的MEM培养基培养KMB-17细胞,待细胞生长至单层后,分别按照0.020,0.050和0.100感染复数(multiplicity of infe... 详细信息

目的:以人二倍体细胞KMB-17株为细胞培养基质建立F基因型腮腺炎减毒活疫苗SP-A株工作种子批。方法:在细胞工厂中以血清浓度为5%的MEM培养基培养KMB-17细胞,待细胞生长至单层后,分别按照0.020,0.050和0.100感染复数(multiplicity of infection, MOI)的比例接种病毒,逐日检测病毒滴度,绘制病毒增殖动力曲线以确定最适MOI和最佳收获时间。制备工作种子批,测定其病毒滴度及热稳定性,同时进行鉴别实验、无菌检查、分枝杆菌检查、支原体检查、病毒外源因子检查和小疏水蛋白(small hydrophobic protein, SH)核酸序列检查。利用该工作种子制备3批病毒收获液和疫苗原液并进行相关质量检定。结果:根据病毒增殖动力曲线,确定工作种子批的最适MOI为0.020,接种后d 7为病毒最佳收获时间,按此条件制备了工作种子批并完成检定,结果符合《中华人民共和国药典》2020年版三部腮腺炎减毒活疫苗毒种制造及检定质量要求。利用该工作种子批制备了3批病毒收获液和疫苗原液,经检定均符合《中华人民共和国药典》2020年版三部病毒收获液和原液的制造及检定规程要求。结论:建立F基因型腮腺炎减毒活疫苗SF-A株工作种子批,为后续F基因型腮腺炎减毒活疫苗的产业化提供了支持。

关键词：腮腺炎疫苗工作种子生产工艺检定

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树鼩脊髓微血管内皮细胞的分离培养及EV71感染实验

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实验动物与比较医学 2021年第2期41卷 148-154页

作者：施梅言王璇王文广阮蕾颖代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心昆明650118

目的建立树鼩脊髓来源的微血管内皮细胞体外分离培养技术,用7 1型肠道病毒(enterovirus 71,EV71)感染该细胞,探讨其感染特性,为EV71损伤中枢神经系统机制的研究提供基础。方法采用Ⅱ型胶原酶、分散酶、DNaseⅠ三酶联合两次消化树鼩脊髓... 详细信息

目的建立树鼩脊髓来源的微血管内皮细胞体外分离培养技术,用7 1型肠道病毒(enterovirus 71,EV71)感染该细胞,探讨其感染特性,为EV71损伤中枢神经系统机制的研究提供基础。方法采用Ⅱ型胶原酶、分散酶、DNaseⅠ三酶联合两次消化树鼩脊髓组织后,获取微血管内皮细胞,并进行纯化和鉴定。用E V 7 1感染树鼩脊髓微血管内皮细胞,测定感染不同时间点的细胞及其培养上清液中病毒载量。采用间接免疫荧光法检测细胞中E V 7 1标志蛋白的表达,以确定EV71对树鼩脊髓微血管内皮细胞的感染性。结果分离培养获得的树鼩脊髓微血管内皮细胞呈典型的分支状和串珠状,经过嘌呤霉素纯化培养后的传代细胞主要是不规则的多角状细胞;细胞免疫荧光鉴定结果显示,微血管内皮细胞标志蛋白CD31和血管性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)表达都呈阳性。用感染复数为1的EV71感染树鼩脊髓微血管内皮细胞,可见典型的细胞病变,且病毒滴度可达3.2×10^(6) TCID50/mL,表明EV71可成功感染树鼩脊髓微血管内皮细胞并有效增殖;而且在4 8 h内,细胞培养上清液中病毒载量呈线性升高,而细胞中病毒载量在12 h到达顶峰。间接免疫荧光法在EV71感染后12 h的树鼩脊髓微血管内皮细胞质中可检测到病毒颗粒。结论成功建立了树鼩脊髓微血管内皮细胞体外分离培养方法,确定了EV71对树鼩脊髓微血管内皮细胞的感染性和病毒增殖特性,为开展EV71入侵中枢神经系统的机制研究提供了一定基础。

关键词：脊髓微血管内皮细胞分离培养 EV71 病毒增殖树鼩

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新型冠状病毒非结构蛋白14的表达及酶活性分析

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基础医学与临床 2023年第1期43卷 51-58页

作者：陈双徐婧雯丁开云刘建生彭小忠刘红旗昆明医科大学、基础医学院、免疫学系云南昆明650500 中国医学科学院、北京协和医学院、医学生物学研究所云南昆明650118 中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院、生物化学与分子生物学系北京100005

目的获得纯度较高和有酶活性的新型冠状(新冠)病毒(SARS-CoV-2)非结构蛋白14(Nsp14)。方法根据大肠埃希氏菌(***)的密码子偏好性,分析新冠病毒原始株基因nsp14的稀有密码子,并对其进行优化。将nsp14克隆至4个不同的表达载体并进行表达;... 详细信息

目的获得纯度较高和有酶活性的新型冠状(新冠)病毒(SARS-CoV-2)非结构蛋白14(Nsp14)。方法根据大肠埃希氏菌(***)的密码子偏好性,分析新冠病毒原始株基因nsp14的稀有密码子,并对其进行优化。将nsp14克隆至4个不同的表达载体并进行表达;通过对表达量和可溶性的比较分析,选择一个表达效果最好的重组表达质粒并优化表达条件;目的蛋白经谷胱甘肽亲和柱纯化后,用半胱氨酸家族蛋白酶(3C)切除融合标签,再分别利用谷胱甘肽亲和柱和分子筛柱纯化蛋白质。最后通过尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳对其活性进行鉴定。结果Nsp14的基因在大肠杆菌中表达存在较多的稀有密码子,其中部分稀有密码子呈现近距离分布和串联分布。pGEX6P1-GST-OPTI-Nsp14重组质粒在大肠杆菌中表达的可溶性效果最好,其最佳表达温度为30℃。经纯化后获得了较纯的不含标签的Nsp14,该蛋白具有核酸酶活性。结论本研究成功地表达和纯化出具有核酸酶活性的新冠病毒Nsp14,为进一步推进对新冠病毒Nsp14的结构和功能研究奠定了基础,为筛选靶向Nsp14的抗病毒治疗药物提供了有利的条件。

关键词：新型冠状病毒(SARS-CoV-2) 非结构蛋白14(Nsp14) 原核表达蛋白质纯化核酸酶活性

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单纯疱疹病毒1型与阿尔茨海默病的研究进展

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中华微生物学和免疫学杂志 2021年第2期41卷 149-153页

作者：高杨李雪琦李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)感染常引起口唇疱疹,但近年来其引发的生殖器疱疹越来越多,且与阿尔茨海默病等神经系统疾病的发生密切相关。阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是一种慢性进行性的中枢神经系统变... 详细信息

单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)感染常引起口唇疱疹,但近年来其引发的生殖器疱疹越来越多,且与阿尔茨海默病等神经系统疾病的发生密切相关。阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是一种慢性进行性的中枢神经系统变性病,其发病机制尚未完全阐明,目前也缺乏能够明确改善该疾病的药物。关于AD的HSV-1致病假说由来已久,但一直没有确切的证据证明两者之间的联系,本文将对HSV-1导致AD发病机制的研究进展进行简单综述。

关键词：单纯疱疹病毒1型阿尔茨海默病 β淀粉样蛋白 tau蛋白

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微针皮内免疫增强新型冠状病毒S1蛋白免疫原性研究

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中国病毒病杂志 2023年第4期13卷 252-259页

作者：孙鑫陈彩迪毕研伟刘晓娟李俊肖红剑姚宇峰李智华寸韡中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118 昆明医科大学云南昆明650500

目的研究新型皮内免疫方法对新型冠状病毒重组S1(rS1)蛋白的免疫效果。方法112只BALB/c小鼠随机分为对照组[只注射Al(OH)3佐剂]、5μg S1组、5μg S1+Al(OH)3组、10μg S1组、10μg S1+Al(OH)3组、20μg S1组、20μg S1+Al(OH)3组,每组... 详细信息

目的研究新型皮内免疫方法对新型冠状病毒重组S1(rS1)蛋白的免疫效果。方法112只BALB/c小鼠随机分为对照组[只注射Al(OH)3佐剂]、5μg S1组、5μg S1+Al(OH)3组、10μg S1组、10μg S1+Al(OH)3组、20μg S1组、20μg S1+Al(OH)3组,每组分别进行肌内免疫和微针皮内免疫,各组免疫所用S1蛋白与佐剂Al(OH)3质量比为1∶10,共14组,每组8只。免疫程序为0、2和4周3次免疫。通过酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)比较不同免疫途径和免疫剂量诱导的IgG、IgG1和IgG2a结合抗体水平。用SARS-CoV-2野生型(WT)和Omicron(BA.5)假病毒来评估中和抗体的水平。通过酶联免疫斑点实验(enzyme-linked immunosorbent spot,ELISpot)对细胞免疫反应进行评估。抗体终点滴度和中和数据通过Kruskal-Wallis检验进行分析,细胞免疫数据使用单因素方差分析进行分析。结果皮内免疫新型冠状病毒rS1蛋白诱导IgG、IgG1、IgG2a抗体效价高于肌内免疫。免疫rS1蛋白产生的特异性抗血清对新型冠状病毒野生型和Omicron BA.5有明显的中和效果,并且皮内免疫组诱导小鼠产生的中和抗体水平高于肌内免疫组,皮内免疫10μg+Al(OH)3对野生型新型冠状病毒的中和抗体GMT为922,对Omicron BA.5的中和抗体GMT为99。免疫rS1蛋白的小鼠脾淋巴细胞IFN-γ和IL-4水平上升,且皮内组免疫诱导小鼠产生的细胞免疫反应高于肌内免疫组,皮内免疫20μg组引起的IFN-γ水平最高[(370.7±42.36)个免疫斑点];皮内免疫10μg+Al(OH)3组引起的IL-4水平最高[(416.7±51.83)个免疫斑点]。结论皮内免疫引起的免疫应答强于传统的肌内免疫方法,可应用于后续疫苗接种策略。

关键词：新型冠状病毒皮内免疫微针体液免疫细胞免疫

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甲型流感病毒T细胞表位预测及HLA-A2限制性抗原肽筛选

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贵州医科大学学报 2022年第5期47卷 530-535,541页

作者：韩雪寸怡娜朱兰芳王泯驿卢天畅姚宇峰史荔陶玉芬中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118

目的通过免疫信息学技术对人类白细胞抗原(HLA)限制性甲型流感病毒T细胞表位进行预测,以期获得通用流感疫苗候选抗原肽。方法以A/California/7/2009(H1N1)为原始毒株,选取流感病毒保守的蛋白聚合酶复合物1(PB1)、核内部蛋白(NP)和基质蛋... 详细信息

目的通过免疫信息学技术对人类白细胞抗原(HLA)限制性甲型流感病毒T细胞表位进行预测,以期获得通用流感疫苗候选抗原肽。方法以A/California/7/2009(H1N1)为原始毒株,选取流感病毒保守的蛋白聚合酶复合物1(PB1)、核内部蛋白(NP)和基质蛋白1(M1)蛋白,通过免疫表位数据库(IEDB)进行HLA限制性流感病毒T细胞表位的预测、簇分析和人群覆盖率分析,将筛选出的HLA-A*02∶01限制性抗原肽进行HLA-A*02∶01结合的亲和力及稳定性验证。结果共获得甲型流感病毒T细胞表位208个,包括75个PB1表位、78个NP表位及55个M1表位,达到95%以上的全球人群覆盖率;获得HLA-A*02∶01限制性抗原肽6条,可覆盖全球76.98%的人群;新发现HLA-A*02∶01限制性抗原肽PB1-395(LLIDGTASL),其对HLA-A*02∶01分子的亲和力和稳定性均优于其他抗原肽,抗原肽PB1-39的亲和性高于M1-58(P<0.0001)。结论PB1-395(LLIDGTASL)对HLA-A*02∶01分子具有较高的亲和力及稳定性,可作为通用流感疫苗候选抗原肽。

关键词：甲型流感病毒 T细胞表位 HLA-A*02∶01 免疫信息学

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非特异性抗体80R的改造对SARS-CoV-2识别增强的研究

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微生物学免疫学进展 2022年第3期50卷 36-42页

作者：李冰香王红叶朱小永王晶晶孙明中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118

目的利用抗体工程技术快速获得严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)的识别抗体。方法针对SARS-CoV抗体80R,因其不能很好地识别SARS-CoV-2-S蛋白,通过不同长度氨基酸重复和延伸等... 详细信息

目的利用抗体工程技术快速获得严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)的识别抗体。方法针对SARS-CoV抗体80R,因其不能很好地识别SARS-CoV-2-S蛋白,通过不同长度氨基酸重复和延伸等策略对80R的重链功能区进行了突变改造。结果改造共获得了12个突变抗体,通过ELISA检测表达的抗体,发现Mu8对SARS-CoV-2的S蛋白识别增强,微量热泳动检测显示Mu8具备了相应的抗体亲和力,K_(d)为(7.29±2.34)μmol/L。结论获得的突变抗体Mu8能够识别、结合SARS-CoV-2的S抗原,该策略为新发病原体识别抗体的快速制备提供了一种可行思路。

关键词：亲和力快速制备抗体改造严重急性呼吸综合征冠状病毒2 微量热泳动

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基于实验猴国家标准对野外救护猴病毒血清学检测分析

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野生动物学报 2023年第2期44卷 266-272页

作者：李世宗李艳艳金志堃李中员杨凤梅靳玮华唐洁陈丽雄刘权孙文亭邓自君赵远和占龙云南森林自然中心昆明650224 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所国家非人灵长类实验动物资源库云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 西双版纳州野生动植物保护管理站景洪666100

为了调查分析云南省内野外救护猴病毒血清状况,采用酶联免疫吸附法(ELISA)对来源于云南省范围内救护的野生熊猴(Macaca assamensis)、北豚尾猴(***)、猕猴(***)和短尾猴(***)的猕猴疱疹病毒Ⅰ型(BV)、猴T细胞趋向性病毒Ⅰ型(STLV-1)、... 详细信息

为了调查分析云南省内野外救护猴病毒血清状况,采用酶联免疫吸附法(ELISA)对来源于云南省范围内救护的野生熊猴(Macaca assamensis)、北豚尾猴(***)、猕猴(***)和短尾猴(***)的猕猴疱疹病毒Ⅰ型(BV)、猴T细胞趋向性病毒Ⅰ型(STLV-1)、猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转D型病毒(SRV)和猴痘病毒(SPV)血清抗体水平进行检测。结果表明:野生猴BV、STLV-1和SRV抗体阳性率分别为15.96%、1.06%和3.19%,SIV和SPV抗体未检出。熊猴、北豚尾猴、猕猴和短尾猴的BV抗体阳性率分别为6.98%、0、26.47%和75.00%;熊猴和北豚尾猴SRV抗体阳性率为2.33%和15.38%;仅有猕猴检测到STLV-1抗体,阳性率为2.94%;混合感染率为0。经Fisher确切概率检验法比较,雌性和雄性抗体阳性率无显著差异(p>0.05);熊猴与猕猴、熊猴与短尾猴BV抗体阳性率均具有显著性差异(p<0.05)。老年猴BV及SRV阳性率较高。野生猴病毒抗体阳性率与性别无关,随年龄增长感染率增加,不同物种间部分病毒血清抗体阳性率存在差异。研究结果可为野生动物救护治疗及野生猴疫源疫病监测提供参考。

关键词：野生猴病毒血清抗体国家标准

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肿瘤细胞膜与细菌囊泡膜融合的纳米囊泡及其肿瘤效应

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中国细胞生物学学报 2023年第1期45卷 26-34页

作者：刘清文胡永茂马雁冰昆明医科大学昆明650500 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所昆明650531 云南大学昆明650500

该文主要探讨肿瘤细胞膜与大肠杆菌仿生囊泡(BBV)进行膜融合的纳米囊泡是否可激发抗肿瘤免疫反应。通过Avanti挤出机制备具有两种生物膜特性的融合膜囊泡,采用透射电子显微镜观察囊泡形态,免疫荧光和免疫印迹检测膜提取的成分,电泳和共... 详细信息

该文主要探讨肿瘤细胞膜与大肠杆菌仿生囊泡(BBV)进行膜融合的纳米囊泡是否可激发抗肿瘤免疫反应。通过Avanti挤出机制备具有两种生物膜特性的融合膜囊泡,采用透射电子显微镜观察囊泡形态,免疫荧光和免疫印迹检测膜提取的成分,电泳和共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察膜融合。在此基础上,建立TC-1小鼠肿瘤模型,监测小鼠的肿瘤生长,以融合囊泡免疫进行治疗干预,并以酶联免疫斑点技术(ELISPOT)与流式细胞术分析小鼠免疫应答效果。制备物以纳米膜囊泡形式存在;融合膜囊泡不仅显示两种膜成分的荧光共定位,而且具备两种膜的蛋白成分,免疫荷瘤抑制了小鼠肿瘤的生长,增强了表达IFN-γ的肿瘤特异的脾细胞应答水平,降低了免疫抑制性的髓源性抑制细胞水平。两种生物膜挤压融合形成的纳米融合膜囊泡可激发抗肿瘤免疫,为基于生物膜系统的肿瘤疫苗研究提供了基础。

关键词：肿瘤细胞膜细菌仿生囊泡肿瘤免疫治疗肿瘤疫苗

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