检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物制品学杂志 2022年第11期35卷 1388-1391页

作者：钏鸿云阮朝列莫明和王静王多义朱莲海刘云璨廖国阳周健中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118 云南大学省部共建云南生物资源与利用国家重点实验室云南昆明650091

目的采用Vero细胞生物反应器微载体无血清培养甲型流感病毒。方法将Vero细胞分别采用无血清和有血清培养基于生物反应器(pH 7.2,温度37℃,溶氧量50%,转数60 r/min)中培养24 h,均用无血清培养基进行灌流培养至7 d,进行计数,并按MOI=0.1接... 详细信息

目的采用Vero细胞生物反应器微载体无血清培养甲型流感病毒。方法将Vero细胞分别采用无血清和有血清培养基于生物反应器(pH 7.2,温度37℃,溶氧量50%,转数60 r/min)中培养24 h,均用无血清培养基进行灌流培养至7 d,进行计数,并按MOI=0.1接种H1N1型流感病毒,加入终浓度为1μg/mL的TPCK-胰酶,于生物反应器(pH 7.8,温度33.0℃,溶氧量25%,转数60 r/min)中培养18、22、42、48、66 h,取样,检测血凝效价。结果Vero细胞经无血清和有血清培养基培养7 d的细胞数分别为(133.4±2.0)×104和(193.8±1.3)×104个/mL,接种H1N1流感病毒66 h后血凝效价几何平均数分别为1∶388和1∶675,前者细胞数及病毒血凝效价几何平均数均显著低于后者(t分别为7.068和4.332,P均<0.05)。结论采用Vero细胞通过生物反应器微载体无血清培养H1N1型流感病毒的血凝效价可满足流感病毒裂解疫苗制备的要求。

关键词：流感病毒无血清培养微载体 Vero细胞

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通过定向内胚层的高效分化提高多能干细胞体外生成肝细胞样细胞的效率

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基础医学与临床 2023年第7期43卷 1045-1052页

作者：闫煜聪杨淑春贾玉艳黄粤中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院医学遗传学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的优化多能干细胞(PSCs)体外定向分化为肝细胞样细胞(HLCs)的方法,提高得到HLCs的效率。方法根据体内肝细胞发育的规律,优化多能干细胞逐级诱导分化成HLCs过程中使用的细胞因子,制定出更高效率的肝细胞定向分化体系,并在人胚胎干细胞(... 详细信息

目的优化多能干细胞(PSCs)体外定向分化为肝细胞样细胞(HLCs)的方法,提高得到HLCs的效率。方法根据体内肝细胞发育的规律,优化多能干细胞逐级诱导分化成HLCs过程中使用的细胞因子,制定出更高效率的肝细胞定向分化体系,并在人胚胎干细胞(hESCs)系H9上进行分化实验。通过对分化不同阶段的细胞进行形态学观察、标志基因表达水平的RT-qPCR检测以及流式细胞术测量分析,综合评估得到HLCs的效率。结果在hESCs向定向内胚层(DE)分化阶段的培养基中同时添加细胞因子激活素A、骨形态发生蛋白4(BMP4)和成纤维细胞因子2(FGF2),能显著提高该阶段标志基因的表达量,荧光示踪和流式分选也表明最终得到的HLCs的比例明显增加。结论DE的高效分化能提高PSCs向HLCs的分化效率。

关键词：分化多能干细胞定向内胚层肝细胞样细胞

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亚洲西尼罗河病毒的系统发育及E蛋白分子进化特征分析

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中国生物制品学杂志 2021年第1期34卷 20-25页

作者：蓝青萍冯凯王晓丹潘玥陈俊英孙强明中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的分析亚洲区西尼罗河病毒(West Nile virus,WNV)的流行情况,探讨其系统发育和分子进化特征。方法从NCBI数据库中分别获取亚洲区流行的WNV全基因组序列和E蛋白序列,进行比对和同源性分析后构建系统进化树,分析来自不同株型病毒的结构... 详细信息

目的分析亚洲区西尼罗河病毒(West Nile virus,WNV)的流行情况,探讨其系统发育和分子进化特征。方法从NCBI数据库中分别获取亚洲区流行的WNV全基因组序列和E蛋白序列,进行比对和同源性分析后构建系统进化树,分析来自不同株型病毒的结构蛋白E的核苷酸和氨基酸的突变率,进一步找出氨基酸的替代位点。结果在中国、马来西亚、印度、以色列、巴基斯坦、伊朗和土耳其等地有血清学感染或回顾性检测阳性报道。将获取的WNV全基因组序列进行系统进化树分析,发现WNV以色列株(HM152773、AF481864)在亲缘关系上与谱系1a株最为接近,而以色列株(AY688948)在亲缘关系上与谱系2株较为接近,印度株(KU978770)与谱系1c接近;将获取的WNV E蛋白序列进行系统进化分析,发现WNV中国株(JX442278,JX42280-JX442282)在亲缘关系上与谱系1a株最为接近。氨基酸序列和核酸序列分析表明,不同株型的E蛋白与谱系2相比,表现为碱基和氨基酸的突变率高,与谱系1a相比,印度株(GQ851605、JX041632、GQ851604和KU978770)的第154和第156位氨基酸分别由天冬酰胺突变为天冬氨酸和丝氨酸(N154D,N154S),丝氨酸突变为脯氨酸和丙氨酸(S156P,S156A),而中国株(AY490240)、巴基斯坦株(JX070655)和以色列株(HM051416)的第156位氨基酸分别由丝氨酸突变为脯氨酸、苯丙氨酸和脯氨酸(S156P、S156F、S156P)。结论通过谱系分析、系统进化树构建、包膜蛋白E氨基酸序列及编码核苷酸序列的比较分析发现,有些位点的改变可能与病毒的毒力、致病性、神经侵袭力、流行等有关,为研究亚洲区不同国家不同株型间WNV的生物学和流行致病性差异提供了参考。

关键词：西尼罗河病毒亚洲包膜蛋白E 系统进化

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基于摩擦纳米发电机的电刺激方式对Ag/ZnO纳米线抗菌性能的影响

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中国科学：技术科学 2021年第7期51卷 850-858页

作者：田静静张京家李颖星欧阳涵李舟中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院医学科学研究中心北京100730 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院检验科北京100730 中国科学院北京纳米能源与系统研究所微纳能源与传感北京市重点实验室中国科学院纳米科学卓越创新中心北京101400 北京航空航天大学生物与医学工程学院生物力学与力生物学教育部重点实验室北京市生物医学工程高精尖创新中心北京100083

本文基于摩擦纳米发电机构建了电场刺激式和电流刺激式两种Ag/ZnO纳米线抗菌系统来探究不同电刺激方式对抗菌性能的影响.采用摩擦纳米发电机为该抗菌系统供电,摩擦纳米发电机能够将生物体运动的机械能转变为电能,采用大肠杆菌为杀菌对象... 详细信息

本文基于摩擦纳米发电机构建了电场刺激式和电流刺激式两种Ag/ZnO纳米线抗菌系统来探究不同电刺激方式对抗菌性能的影响.采用摩擦纳米发电机为该抗菌系统供电,摩擦纳米发电机能够将生物体运动的机械能转变为电能,采用大肠杆菌为杀菌对象.实验结果发现,电刺激能够显著增强该体系的杀菌效率,最高可将杀菌率提高51.71%(P<0.01).此外,通过对比电场和电流式刺激方式的杀菌率发现,电流式的刺激方式优于电场的刺激方式,最高可将杀菌率提高12.93%(P<0.01).此外,对于电场刺激式抗菌体系,交流电刺激的杀菌率高于整流后的直流脉冲电刺激(12.12%,P<0.01);而在电流式的抗菌体系中直流脉冲电刺激优于交流电刺激.该发现不仅有助于揭示电刺激协同抗菌体系的杀菌机制,也对我们日后选择合适的刺激方式进行细胞活性的调节和控制提供了潜在的研究基础.

关键词：摩擦纳米发电机抗菌 Ag/ZnO纳米线电刺激杀菌率

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新生乳鼠侧脑室注射rAAV2/9递送SNCA构建全脑转基因鼠

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中国比较医学杂志 2021年第4期31卷 91-98页

作者：李国祥潘玥胡鹏杜廷福马开利中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所药物安全性评价研究中心昆明650118 中国医学科学院&北京协和医学院医学灵长类研究中心&神经科学中心北京100005

目的快速高效地构建一种人源SNCA(hSNCA)的全脑转基因鼠,并初步探究α-突触核蛋白过表达对小鼠中枢神经系统的影响。方法对新生乳鼠进行双侧侧脑室(intracerebroventricular,ICV)注射携带人源SNCA-EGFP或EGFP的重组腺相关病毒2/9(recomb... 详细信息

目的快速高效地构建一种人源SNCA(hSNCA)的全脑转基因鼠,并初步探究α-突触核蛋白过表达对小鼠中枢神经系统的影响。方法对新生乳鼠进行双侧侧脑室(intracerebroventricular,ICV)注射携带人源SNCA-EGFP或EGFP的重组腺相关病毒2/9(recombinant adeno-associated virus2/9,rAAV2/9)(1.5×10^(13) genome copies(GC)/mL),在2周和3个月龄用免疫荧光及Western blot检测α-突触核蛋白的表达模式及亚细胞定位,并用免疫荧光及免疫组化探究星形胶质细胞、小胶质细胞及病理性α-突触核蛋白的变化。结果用rAAV2/9侧脑室注射的方式成功构建了hSNCA全脑转基因鼠,α-突触核蛋白在整个脑中广泛表达,且趋向于在嗅球、皮层、海马、间脑及中脑中高表达。进一步研究发现,在嗅球、皮层、海马的CA2/3区及小脑的浦肯野细胞中观测到α-突触核蛋白在神经元胞核中表达的现象,α-突触核蛋白过表达引起了胶质增生。此外,在嗅球及大脑皮层检测到α-突触核蛋白Ser129磷酸化(pS129)及聚集。结论快速成功地构建了一种hSNCA全脑转基因小鼠模型,其α-突触核蛋白持久地高表达,并出现胶质增生和病理性α-突触核蛋白表达的现象,为研究α-突触核蛋白的生理功能及其在帕金森病(Parkinson’s disease,PD)中的作用奠定一定的基础。

关键词： α-突触核蛋白转基因乳鼠注射胶质增生

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1株悬浮培养的Vero细胞驯化及其生物学特性研究

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昆明医科大学学报 2024年第6期45卷 7-14页

作者：付兰博阮朝列陈昶旭高羽鲍晓琳刘伯川周健李卫东中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118 云南大学生态与环境学院&省部共建云南生物资源保护与利用国家重点实验室云南昆明650091

目的将贴壁培养的Vero细胞驯化成悬浮培养细胞,并对其生物学特性进行研究。方法采用无血清培养和“摇床适应法”对细胞进行培养优化,对其进行成瘤性、短串联重复序列(short tandem repeat,STR)分析、透射电子显微镜形态,以及对流感病... 详细信息

目的将贴壁培养的Vero细胞驯化成悬浮培养细胞,并对其生物学特性进行研究。方法采用无血清培养和“摇床适应法”对细胞进行培养优化,对其进行成瘤性、短串联重复序列(short tandem repeat,STR)分析、透射电子显微镜形态,以及对流感病毒敏感性检测。结果成功建立悬浮细胞系Vero-S,Vero-S细胞生长期在24~72 h,平台期在108~144h之间,衰退期在144h以后,细胞PDT为36 h,细胞密度在14.01~14.88×10^(8)个/L之间,细胞平均圆度在0.73~0.75之间,细胞直径在12.12~14.44μm之间。Vero-S细胞在裸鼠皮下形成肿瘤,而悬浮培养前的Vero细胞不具有成瘤性;STR显示为猴源细胞系;电镜下细胞结构完整;Vero-S细胞对流感病毒感染不敏感。结论悬浮细胞系Vero-S细胞的生长经历与贴壁细胞类似的生长期、平台期、衰退期,且细胞大小均一,建立的悬浮培养基能够支持Vero-S细胞高密度生长。STR结果表明悬浮Vero细胞具有完全的遗传稳定性,透射电镜下与贴壁Vero细胞无明显区别。为细胞悬浮驯化培养技术提供参考价值,并可用于细胞致肿瘤的机理研究。

关键词： Vero细胞细胞悬浮驯化技术成瘤性病毒敏感性

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纳米酶

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化学进展 2023年第1期35卷 1-87页

作者：范克龙高利增魏辉江冰王大吉张若飞贺久洋孟祥芹王卓然樊慧真温涛段德民陈雷姜伟芦宇蒋冰魏咏华李唯袁野董海姣张鹭洪超仪张紫霞程苗苗耿欣侯桐阳侯亚欣李建茹汤国恒赵越赵菡卿张帅谢佳颖周子君任劲松黄兴禄高兴发梁敏敏张宇许海燕曲晓刚阎锡蕴中国科学院生物物理研究所、中国科学院纳米酶工程实验室、蛋白质与多肽药物所重点实验室北京100101 郑州大学基础医学院、纳米酶医学研究中心郑州450001 南京大学现代工程与应用科学学院生物医学工程系、南京微结构国家实验室(筹)江苏省功能材料设计原理与应用技术重点实验室南京210023 中国科学院深圳先进技术研究院、深圳合成生物学创新研究院深圳518055 中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院北京100005 北京理工大学材料学院北京100081 南开大学生命科学学院生物活性材料教育部重点实验室天津300071 东南大学生物科学与医学工程学院南京210096 中国科学院长春应用化学研究所、稀土资源国家重点实验室、化学生物学实验室长春130022 中国科学技术大学合肥230026 国家纳米科学中心理论室北京100190

纳米酶(Nanozymes)是由我国科学家首次提出的新概念,它是一类具有生物催化功能的纳米材料,能够基于特定的纳米结构催化天然酶的底物并作为酶的代替品。自2007年首次报道以来,全球已有来自于55个国家的420多个研究机构证实了纳米酶的普... 详细信息

纳米酶(Nanozymes)是由我国科学家首次提出的新概念,它是一类具有生物催化功能的纳米材料,能够基于特定的纳米结构催化天然酶的底物并作为酶的代替品。自2007年首次报道以来,全球已有来自于55个国家的420多个研究机构证实了纳米酶的普遍规律。纳米酶的发现第一次揭示纳米材料蕴含一种独特的纳米效应———类酶催化效应。纳米酶作为一种新材料,既有纳米材料本身的理化性质,又有类似酶的催化功能,兼具天然酶与人工酶的优势于一身。其中,纳米结构不仅赋予纳米酶高效催化功能,而且使纳米酶比天然酶稳定,易于规模化生产。另外,纳米酶独特的多酶活性将为设计廉价、稳定、各种各样全新的催化级联反应提供功能分子。纳米酶是多学科交叉融合的典范,2022年被IUPAC评为十大化学新兴技术。在全球从事化学、酶学、材料学、生物学、医学、理论计算等多领域科学家的共同推进下,如今纳米酶已经成为新的研究热点。我国科学家在这一新兴领域一直发挥着引领作用,解析了纳米酶的构⁃效关系,将其催化活性提高了约1万倍,实现了超越天然酶的理性设计,创造了全球首个纳米酶产品,出版了纳米酶学英文专著,发布纳米酶术语及中国/国际标准化。更可喜的是,纳米酶新领域汇集了一大批多学科交叉融合的优秀青年科学家,推动纳米酶进入高速发展阶段,纳米酶的种类已经超过1200多种,其催化机制研究也更加深入,应用研究也从当初的检测逐步拓展到纳米酶催化医学、传感检测、绿色合成、新能源、环境治理等多个领域。本文向读者介绍纳米酶自发现以来的主要进展,包括最近发现的天然纳米酶,期待纳米酶从新概念、新材料衍生出新技术、新产品、新商品,服务人类健康,并带动新学科发展。

关键词：纳米酶酶催化生物催化多酶活性

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基孔肯雅病毒样颗粒的制备

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2021年第3期42卷 42-48页

作者：李会徐靖雯丁开云邹萌刘红旗昆明医科大学昆明650500 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118

为制备高纯度、均一的基孔肯雅病毒的病毒样颗粒,将基孔肯雅病毒的结构蛋白基因序列(C-E3-E2-6K-E1)人工合成后克隆至杆状病毒-昆虫细胞表达载体中;重组质粒转化DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选和PCR鉴定,获得重组杆状病毒杆粒;重组杆... 详细信息

为制备高纯度、均一的基孔肯雅病毒的病毒样颗粒,将基孔肯雅病毒的结构蛋白基因序列(C-E3-E2-6K-E1)人工合成后克隆至杆状病毒-昆虫细胞表达载体中;重组质粒转化DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选和PCR鉴定,获得重组杆状病毒杆粒;重组杆状病毒杆粒转染ExpiSf9昆虫细胞,包装获得重组杆状病毒,并再次感染ExpiSf9昆虫细胞表达基孔肯雅结构蛋白;通过细胞超薄切片验证杆状病毒的产生,并用流式细胞仪测定病毒滴度;免疫荧光、蛋白免疫印迹分析目的蛋白的表达,透射电镜鉴定病毒样颗粒的形成;最后,通过蔗糖密度梯度离心纯化病毒样颗粒。结果表明:成功构建了含基孔肯雅病毒结构蛋白的重组杆状病毒杆粒,获得了高滴度的重组杆状病毒,重组杆状病毒表达了基孔肯雅病毒的结构蛋白,结构蛋白自组装成60~70 nm的颗粒。这一研究通过昆虫杆状病毒表达系统成功制备了纯度高和均一性好的基孔肯雅病毒样颗粒,为基孔肯雅病毒的诊断试剂和疫苗研发奠定了基础。

关键词：基孔肯雅病毒病毒样颗粒昆虫杆状病毒表达系统疫苗

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异丙肾上腺素诱导恒河猴心肌损伤模型的初步研究

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中国比较医学杂志 2022年第2期32卷 60-65,93页

作者：李艳艳杨凤梅王俊斌陈丽雄靳玮华和占龙杨飞赵远中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 昆明市第三人民医院胸外科昆明650041

目的应用异丙肾上腺素诱导恒河猴心肌损伤模型方法的初步探索。方法选用11只恒河猴分为高剂量组、低剂量组、对照组。模型组每次注射ISO剂量分别为4.6 mg/kg、3.2 mg/kg,每天2次;对照组注射生理盐水1 mL,每天1次。分别于注射后第1、3、5... 详细信息

目的应用异丙肾上腺素诱导恒河猴心肌损伤模型方法的初步探索。方法选用11只恒河猴分为高剂量组、低剂量组、对照组。模型组每次注射ISO剂量分别为4.6 mg/kg、3.2 mg/kg,每天2次;对照组注射生理盐水1 mL,每天1次。分别于注射后第1、3、5、7天及第2、3、4、5周进行彩色多普勒超声影像检查:左室舒张末期的室间隔厚度(IVSTd)、左室内径(LVEDD)、左室后壁厚度(LVPWTd),收缩末期的室间隔厚度(IVSTs)、左室内径(LVESD)、左室后壁厚度(LVPWTs)、及左心室短轴缩短率(FS)、射血分数(EF)、左心室质量(LVM);心电仪检查心电图变化;同时进行谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、肌酸肌酶(CK)、肌酸肌酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、血小板/淋巴细胞比值(PLR)、中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)等血液生理生化指标检测。结果高剂量组在给药1周内,AST、ALT、LDH、CK、CK-MB、PLR、NLR明显升高;IVSTd、IVSTs、LVPWTd、LVPWTs、LVEDD、LVESD增加,EF、FS降低。与高剂量组相比,低剂量组变化不明显。心电结果显示给药后至第5周持续出现T波、ST段不同程度的改变。结论皮下注射ISO可诱导恒河猴心肌损伤,心脏超声、心电图及血液学的综合指标可作为恒河猴无创心脏损伤模型的评价依据。

关键词：异丙肾上腺素恒河猴心肌损伤

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DTacP-sIPV联合疫苗在模拟运输振动条件下的稳定性评价

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国际生物制品学杂志 2024年第1期47卷 1-6页

作者：李婧妍蔡路奎梁疆莉高娜王虓宇顾琴姬光姬秋彦杨净思中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明市新发突发高致病性病原体疫苗研发和产业化企业科技创新中心昆明650118

目的评价组分无细胞百日咳-白喉-破伤风(百白破)(diphtheria,tetanus,component acellular pertussis,DTacP)-Sabin株灭活脊髓灰质炎病毒(Sabin strain inactivated poliovirus,sIPV)联合疫苗在模拟运输振动条件下的稳定性.方法选取3批DTacP-sIPV,设计振动条件模拟疫苗运输过程进行稳定性评价.分别于振动前和振动后取样,按照中国药典2020年版三部和内部制造检定规程要求进行成品检测(包括外观、装量、pH、渗透压摩尔浓度、铝含量、游离甲醛含量、戊二醛含量、鉴别、sIPVD抗原含量、百白破效价、无菌、内毒素含量、特异性毒性、异常毒性和毒性逆转检测)、sIPV效力试验、Zeta电位测定、上清液中抗原测定及电子显微镜观察.结果振动前后,3批DTacP-sIPV的检测结果均符合质量标准要求,百白破效价与D抗原水平以及sIPV效力试验结果差异无统计学意义(t值分别在0.21~0.73、0.05~1.34和0.16~1.90,P值均>0.05);Zeta电位以及上清液中抗原(百日咳毒素、丝状血凝素、黏附素)含量与振动前结果差异无统计学意义(t值分别为0.49和0.20~0.80,P值均>0.05);电子显微镜观察结果与振动前比较无明显变化.结论DTacP-sIPV联合疫苗在模拟运输振动条件下稳定性良好.

关键词：白喉-破伤风-脱细胞百日咳菌苗脊髓灰质炎病毒疫苗灭活联合疫苗运输振动稳定性

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