检索结果-内蒙古大学图书馆

中国比较医学杂志 2020年第4期30卷 46-55页

作者：李艳艳杨凤梅王俊斌陈丽雄段素琴杨亚平刘雨和占龙马进赵远中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的以树鼩为研究模型,探讨野生树鼩与人工繁育树鼩不同肠段的菌群组成。方法分别收集3只健康野生及人工繁育树鼩七个胃肠段样本,提取细菌总DNA,采用高通量测序技术对16S rRNA基因的V3-V4高变区测序,分析比较菌群结构及多样性。结果不... 详细信息

目的以树鼩为研究模型,探讨野生树鼩与人工繁育树鼩不同肠段的菌群组成。方法分别收集3只健康野生及人工繁育树鼩七个胃肠段样本,提取细菌总DNA,采用高通量测序技术对16S rRNA基因的V3-V4高变区测序,分析比较菌群结构及多样性。结果不同肠段Alpha指数多样性分析显示野生组与人工繁育组树鼩在盲肠和胃Shannon指数存在显著差异(P<0.05)。野生组与人工繁育组各肠段微生物组成存在较大差异,门水平上,野生组直肠、结肠、盲肠及胃四个部位中Firmicutes菌门的平均占比显著高于人工繁育组(P<0.05);人工繁育组直肠、结肠、盲肠及回肠内Spirochaetes菌门的平均占比显著高于野生组(P<0.05);野生组直肠内Bacteroidetes菌门的平均占比显著高于人工繁育组(P<0.05);属水平上,野生组明显高于人工繁育组的主要菌属为:回肠、空肠和胃内的Weissella菌属,直肠内的Bacteroides菌属以及回肠段内的Lactococcus菌属;人工繁育组明显高于野生组的主要菌属为:直肠、结肠、盲肠及回肠内的Brachyspira属,盲肠和胃内的Prevotella9菌属,盲肠和空肠内的Streptococcus属以及回肠中的Lactobacillus菌属。不同肠段菌群功能基因预测显示两组共有5个解剖部位17个基因类别之间的差异有统计学意义(P<0.05)。结论野生树鼩与人工繁育树鼩各肠段菌群组成差异较大;各肠段细菌功能差异较大,且与其生理功能、饮食结构有一定关联;在肠道菌群研究中,应充分考虑粪便样品微生物的组成是否能够完全代表肠道微生物的组成。

关键词：肠道菌群树鼩 16SrRNA测序肠段

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Dicer1缺失对小鼠早期神经发育的影响

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基础医学与临床 2021年第6期41卷 818-824页

作者：刘高澳彭小忠舒鹏程中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室医学灵长类研究中心神经科学中心北京100005 中国医学科学院医学生物研究所云南昆明650118

目的利用Dicer1条件敲除小鼠,通过RNA-seq技术在转录组水平分析microRNAs(miRNAs)对哺乳动物大脑早期发育的影响。方法构建D6-Cre-Dicer1条件敲除小鼠,实验分为对照组(Ctrl)和条件敲除组(cKO)。苏木精-伊红和免疫荧光染色比较敲除前后... 详细信息

目的利用Dicer1条件敲除小鼠,通过RNA-seq技术在转录组水平分析microRNAs(miRNAs)对哺乳动物大脑早期发育的影响。方法构建D6-Cre-Dicer1条件敲除小鼠,实验分为对照组(Ctrl)和条件敲除组(cKO)。苏木精-伊红和免疫荧光染色比较敲除前后组织形态差异;选取E14.5 D6-Cre介导的Dicer1条件性敲除的小鼠背侧皮质,提取总RNA,利用RNA-seq技术分析Dicer1敲除前后转录水平差异。结果与对照组相比,条件敲除组1个月左右致死,P3时皮层神经元发育异常,皮层和海马结构部分缺失;通过RNA-seq分析,共筛选出差异表达基因45个,上调基因11个,下调基因34个(P<0.05)。差异基因富集于NF-κB信号通路、Wnt信号通路、MAPK-ERK信号通路、JAK-STAT信号通路和DNA损伤应激通路等。结论在发育早期E14.5时Dicer1参与调节多条信号通路,影响部分皮层层次标志物的表达,抑制lncRNA Xist的表达,调节皮质发育。

关键词： Dicer1 D6-Cre 大脑背侧皮质 RNA-seq lncRNA Xist

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IDH1调控干扰素通路相关基因IFIT3的表达

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基础医学与临床 2021年第7期41卷 988-994页

作者：唐婉军彭小忠韩为中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室医学灵长类研究中心神经科学中心北京100005 中国医学科学院医学生物学研究所云南昆明650118

目的探究在人胶质瘤细胞系LN229中异柠檬酸脱氢酶1基因(IDH1)对RNA结合蛋白(RBPs)表达的影响。方法首先通过慢病毒感染构建IDH1稳定敲低和对照组LN229细胞株,分别对两组细胞株进行转录组测序(RNA-seq),利用limma包分析差异表达基因(DEGs... 详细信息

目的探究在人胶质瘤细胞系LN229中异柠檬酸脱氢酶1基因(IDH1)对RNA结合蛋白(RBPs)表达的影响。方法首先通过慢病毒感染构建IDH1稳定敲低和对照组LN229细胞株,分别对两组细胞株进行转录组测序(RNA-seq),利用limma包分析差异表达基因(DEGs)及其富集通路;然后通过string比对RBP数据库筛选出差异表达的RBPs,构建蛋白相互作用网络并挑选出候选RBPs;最后在IDH1敲低、过表达和R132H突变的细胞系中进行表达量验证。结果在IDH1敲低的LN229细胞株中,利用RNA-seq共筛选到259个DEGs,其中146个表达上调,113个表达下调;这些DEGs中包括14个编码RBP的基因,其中9个RBPs均为干扰素通路相关基因,并且具有密切的相互作用;与对照组相比,IDH1敲低时这9个RBPs表达水平均显著上调(P<0.001),IDH1过表达时仅IFIT3表达显著下降(P<0.01),而IDH1突变时IFIT3的表达水平的改变无统计学意义。结论在人胶质瘤细胞系LN229中,IDH1可调控干扰素通路相关基因IFIT3的表达。

关键词：胶质瘤 IDH1 干扰素通路 IFIT3

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四倍体滋养层干细胞的分离培养与鉴定

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基础医学与临床 2021年第7期41卷 975-981页

作者：王海豫肖翼黄粤中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学遗传学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的建立可在体外培养的小鼠四倍体滋养层干细胞(TTSCs)系,为研究胎盘发育提供新的细胞模型。方法用电融合的方法获得四倍体胚胎并进行体外培养,挑取克隆并传代后获得细胞系。通过中期染色体计数检测染色体数目;RT-qPCR、Western blot... 详细信息

目的建立可在体外培养的小鼠四倍体滋养层干细胞(TTSCs)系,为研究胎盘发育提供新的细胞模型。方法用电融合的方法获得四倍体胚胎并进行体外培养,挑取克隆并传代后获得细胞系。通过中期染色体计数检测染色体数目;RT-qPCR、Western blot、免疫荧光检测标志基因表达;显微注射检测细胞的体内发育潜能。结果建立了可以传代培养并且可在体内发育的TTSCs。分化条件下,TTSCs分化基因的表达量与二倍体滋养层干细胞(TSCs)存在差异(P<0.001)。结论可传代的TTSCs系可以在体外建立,但其维持自我更新及分化的机制与二倍体TSCs有所不同。

关键词：四倍体滋养层干细胞胚胎发育胎盘发育分化

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全外显子组测序检测猫叫综合征2例

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国际检验医学杂志 2021年第6期42卷 759-762页

作者：易薇张志丹杨必清葛世军禹崇飞尹祖伦林克勤黄铠褚嘉祐杨昭庆德宏州人民医院检验科云南芒市678400 中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所医学遗传学研究室云南昆明650118

猫叫综合征又称5p缺失综合征,是由于5号染色体短臂部分或完全缺失所导致的染色体缺失综合征。早在1963年就有研究者就对3例无亲缘关系的猫叫综合征患儿进行了报道,此后世界各地均有发现病例[1]。该病主要的临床特征包括婴儿期似猫叫样... 详细信息

猫叫综合征又称5p缺失综合征,是由于5号染色体短臂部分或完全缺失所导致的染色体缺失综合征。早在1963年就有研究者就对3例无亲缘关系的猫叫综合征患儿进行了报道,此后世界各地均有发现病例[1]。该病主要的临床特征包括婴儿期似猫叫样哭声、独特的面部畸形、智力障碍和生长发育迟缓等[2]。猫叫综合征存在明显的遗传异质性和临床表现差异,患者由于受染色体5p缺失片段的位置、大小、参与的修饰基因、有无伴随其他染色体变异等因素的影响,在临床表型上显示出较大差别[3-4]。

关键词：猫叫综合征染色体核型分析全外显子组测序

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腺苷酸环化酶毒素在无细胞百日咳疫苗中的免疫保护效果评价

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微生物学免疫学进展 2021年第3期49卷 20-25页

作者：张学李婧妍姬秋彦中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的利用小鼠百日咳感染模型评估在无细胞百日咳疫苗中加入腺苷酸环化酶毒素的C端结构域(RTX_(751)),能否提升无细胞百日咳疫苗的免疫保护效果。方法 (1)用腺苷酸环化酶毒素的C端结构域与百日咳毒素(pertussis toxin, PT)、丝状血凝素(f... 详细信息

目的利用小鼠百日咳感染模型评估在无细胞百日咳疫苗中加入腺苷酸环化酶毒素的C端结构域(RTX_(751)),能否提升无细胞百日咳疫苗的免疫保护效果。方法 (1)用腺苷酸环化酶毒素的C端结构域与百日咳毒素(pertussis toxin, PT)、丝状血凝素(filamentous hemagglutinin, FHA)、百日咳黏附素(pertussis adhesin, PRN)、氢氧化铝(aluminum hydroxide, Alum)佐剂制备成试验疫苗,对C57BL/6小鼠行腹腔两针免疫。(2)第2针免疫后21 d,用浓度为1×10^(11) CPU/mL的百日咳鲍特菌对小鼠进行气雾攻毒。攻毒后分别在3、7、14、28 d进行取样分析。(3)分析第2次免疫后IgG抗体水平和IgG1/IgG2a比例变化及感染百日咳鲍特菌后不同时间点呼吸道组织细菌载量和细胞因子IFN-γ、IL-17的变化。结果 1/40aP+RTX和1/80aP+RTX的IgG抗体水平高于1/40aP和1/80aP,差异有统计学意义(P<0.05),1/80aP+RTX的IgG2a/IgG1高于1/80 aP,差异有统计学意义(P<0.05);攻毒后14 d, 1/80aP+RTX组肺细菌菌落数最少、气管细菌已清除完毕,IFN-γ、IL-17细胞因子分泌量最低,与Alum组相比差异有统计学意义(P<0.05);Alum组与RTX_(751)组差异无统计学意义(P>0.05)。结论单独的RTX_(751)不能作为保护性抗原;但在小鼠模型中,RTX_(751)加入到无细胞百日咳疫苗可使免疫应答向Th1偏向去增强无细胞百日咳疫苗的免疫保护效果。

关键词：腺苷酸环化酶毒素免疫原性佐剂无细胞百日咳疫苗

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云南省3株柯萨奇病毒A组10型分离株全基因组序列分析

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中国病毒病杂志 2021年第2期11卷 101-106页

作者：许丹菡张名冯昌增丛山日黄小琴孙浩杨昭庆马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的分析手足口病相关的柯萨奇病毒A组10型(coxsackievirus A10,CV-A10)云南省分离株的基因组特征。方法对云南省2009年和2015年3例手足口病患儿临床样本中分离到的3株CV-A10分离株A103/YN/CHN/2015、A72/YN/CHN/2015和R09191/YN/CHN/2009(简称A103、A72和R09191)进行全基因组序列测定,与GenBank中CV-A10代表毒株进行序列比对,使用MEGA 7.0软件进行系统进化分析,应用Simplot3.5.1软件进行重组分析。结果云南省3株CV-A10分离株(A103、A72和R09191)的基因组全长分别为7 417 nt、7 414 nt和7 416 nt,全基因组核苷酸一致性和氨基酸同源性分别为95.6%~99.5%和97.5%~99.0%。3株CV-A10分离株与原型株Kowalik的全基因组核苷酸一致性为79.7%~79.8%,氨基酸同源性为94.7%~95.3%;与国内CV-A10代表株的全基因组核苷酸一致性为93.2%~99.9%,氨基酸同源性为94.9%~99.7%。进化分析发现,3株CV-A10分离株与近年来中国大陆CV-A10流行株同属F基因型,A103株和R09191株在进化树上位于同一分支,A72株位于另一分支。A72株在VP4、VP2、VP1、2B、2C、3A、3B、3C、3D段与厦门分离株相似性最高,核苷酸一致性为96.82%~100.00%。而A103株和R09191株在VP4、VP2、VP3、VP1、2B、3C、3D、3′UTR段与山东分离株相似性最高,核苷酸一致性为94.37%~99.52%。经Simplot软件分析未发现明显的基因重组。结论云南省3株CV-A10分离株与近年中国大陆CV-A10流行株同属F基因型,但属于不同的2个分支,均无明显的重组事件发生。

关键词：柯萨奇病毒A组10型全基因组进化分析手足口病病原学

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不同途径免疫不同动物制备的F基因型腮腺炎病毒抗血清的比较

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中国生物制品学杂志 2020年第11期33卷 1307-1311页

作者：王微邱恒杨振清王雯慧胡云光李琦涵王晶晶中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的利用F基因型腮腺炎病毒浓缩后疫苗原液,经不同途径免疫动物制备抗腮腺炎病毒血清。方法将F基因型腮腺炎病毒浓缩后疫苗原液与弗氏佐剂混合后,经皮下注射、肌肉注射及皮下+肌肉注射的三种途径免疫雌性家兔和雌性豚鼠,均于0、7、14、2... 详细信息

目的利用F基因型腮腺炎病毒浓缩后疫苗原液,经不同途径免疫动物制备抗腮腺炎病毒血清。方法将F基因型腮腺炎病毒浓缩后疫苗原液与弗氏佐剂混合后,经皮下注射、肌肉注射及皮下+肌肉注射的三种途径免疫雌性家兔和雌性豚鼠,均于0、7、14、28和35 d免疫,每次7.5 lgCCID50/mL,于每次免疫后7 d采用微量滴定法检测血清抗体效价。利用抗体效价较高血清对麻疹病毒、风疹病毒和腮腺炎病毒进行干扰试验。结果不同免疫途径均可诱导动物产生抗体,皮下+肌肉注射的免疫方式产生的血清抗体效价高于单独皮下及肌肉注射的免疫方式,差异有统计学意义(P<0.05);在同等免疫剂量下,家兔产生的抗血清效价明显高于豚鼠。家兔抗腮腺炎病毒血清对麻疹病毒、风疹病毒和腮腺炎病毒的滴度均无干扰。结论经皮下和肌肉注射结合的途径免疫家兔,可获得高效价血清抗体,对制备高效价F基因型腮腺炎病毒血清抗体提供了依据。

关键词：腮腺炎病毒 F基因型中和抗体效价免疫途径

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轮状病毒VP3表达载体pEGFP-VP3的构建、表达及功能研究

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生物学杂志 2020年第6期37卷 7-11页

作者：杜静周艳纳璐林晓晨胡晓青汪艺李鸿钧中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

通过构建重组表达载体pEGFP-VP3,将pEGFP-VP3转染MA104细胞,观察VP3的表达情况和表达的VP3对轮状病毒复制的作用,进一步评价构建方式是否成功。GFP荧光和Western Blot结果显示,pEGFP-VP3转染MA104细胞48 h,重组蛋白VP3表达量最高。通过R... 详细信息

通过构建重组表达载体pEGFP-VP3,将pEGFP-VP3转染MA104细胞,观察VP3的表达情况和表达的VP3对轮状病毒复制的作用,进一步评价构建方式是否成功。GFP荧光和Western Blot结果显示,pEGFP-VP3转染MA104细胞48 h,重组蛋白VP3表达量最高。通过RV拷贝数和免疫荧光检测病毒的复制情况,结果均显示重组蛋白VP3可促进病毒复制,为后续更加深入地探究VP3的功能及在轮状病毒复制中的作用提供了实验基础。

关键词：轮状病毒真核表达载体 VP3 病毒复制抗病毒反应

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食蟹猴奇异变形杆菌的分离鉴定及药敏试验

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中国比较医学杂志 2020年第6期30卷 88-92页

作者：刘权刘雨李艳艳杨凤梅马进和占龙禹文海赵远中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的通过对引进食蟹猴肠道微生物检测分离到的奇异变形杆菌进行鉴定和药敏实验,为引进的实验猴微生物检测和如何开展饲养管理、疾病防控提供理论和技术支撑。方法肛拭子采集食蟹猴粪样,进行细菌分离培养、生化鉴定、药敏试验和小鼠致病... 详细信息

目的通过对引进食蟹猴肠道微生物检测分离到的奇异变形杆菌进行鉴定和药敏实验,为引进的实验猴微生物检测和如何开展饲养管理、疾病防控提供理论和技术支撑。方法肛拭子采集食蟹猴粪样,进行细菌分离培养、生化鉴定、药敏试验和小鼠致病性试验。结果 60只食蟹猴中有8只分离到可疑细菌,经鉴定为奇异变形杆菌,表明该群体食蟹猴奇异变形杆菌感染率为13. 3%;药敏试验结果显示该菌对头孢曲松、头孢赛肟,头孢哌酮、头孢唑啉、青霉素等高度敏感,对阿米卡星、庆大霉素、氨苄西林钠、呋喃妥因等中度敏感,对诺氟沙星、四环素、低度敏感、对杆菌肽、环丙沙星、卡那霉素、林可霉素和呋喃唑酮产生耐药性;小鼠致病性试验表明分离到的菌株对小鼠有较强的致病性。结论食蟹猴奇异变形杆菌感染相对较高,该菌对头孢菌素类抗生素较敏感,可在临床中作为首选药物来进行疾病的治疗。该菌有较强的致病性,对食蟹猴群体有潜在的危害性,在平时饲养管理工作中应引起重视。

关键词：食蟹猴奇异变形杆菌分离培养药敏试验

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