检索结果-内蒙古大学图书馆

病毒学报 2019年第3期35卷 446-453页

作者：黄星宋杰李嘉祺郑惠文李洪哲李恒郭磊刘龙丁中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650000

柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CV-A16)是小核糖核酸病毒科肠道病毒属病毒,是手足口病(Hand,foot and mouse disease,HFMD)的主要病原体之一。CV-A16在世界范围内广泛流行,但目前还没有有效预防CV-A16感染的疫苗上市,CV-A16疫... 详细信息

柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CV-A16)是小核糖核酸病毒科肠道病毒属病毒,是手足口病(Hand,foot and mouse disease,HFMD)的主要病原体之一。CV-A16在世界范围内广泛流行,但目前还没有有效预防CV-A16感染的疫苗上市,CV-A16疫苗的研发仍处于实验室研究阶段。本研究从改善CV-A16诱导体液免疫能力的角度出发,利用反向遗传学手段构建共表达趋化因子配体13的重组A组16型柯萨奇病毒(Coxsackievirus A16-Chemokine(C-X-C motif)ligand 13,CV-A16-CXCL13)。首先利用全基因合成方法设计合成MluⅠ-T7-5'UTR-CXCL13-VP4-VP2-NdeⅠ片段,将该片段插入pCR-XL-TOPO-CV-A16载体中,获得pCR-XL-TOPO-CV-A16-CXCL13克隆载体。将该载体线性化,体外转录出重组病毒RNA并转染细胞,最终获得包装成功的CV-A16-CXCL13重组病毒。使用PCR检测到病毒感染细胞后趋化因子配体13(Chemokine (C-X-C motif) ligand 13,CXCL13)及结构蛋白VP1在基因水平的表达;免疫印记及免疫荧光结果检测到(CXCL13与VP1蛋白水平的表达;电镜结果显示重组病毒为直径20～30nm球状颗粒;增殖曲线显示重组病毒能够在细胞中正常复制。本研究成功构建了CV-A16-CXCL13病毒,为CV-A16感染特征的研究和疫苗研发提供参考。

关键词：柯萨奇病毒A组16型(CV-A16) 趋化因子配体13(CXCL13) 重组病毒反向遗传学

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肠道病毒-D68 2A蛋白对抗病毒IFN-Ⅰ通路影响的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2019年第6期39卷 401-409页

作者：郑惠文杨智尧杨泽宁宋杰黄星李楠丁丽莎李恒李洪哲郭磊储曼曼施海晶刘龙丁中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 美国爱荷华大学 52241

目的观察肠道病毒(EV)-D68蛋白2A在EV-D68病毒感染293T细胞过程中对抗病毒IFN-Ⅰ通路的影响。方法免疫印迹法(Western blot)检测重组2A蛋白、IFN-α因子及信号传导及转录激活因子1(STAT1)的蛋白表达水平;免疫荧光技术(Immunofluorescenc... 详细信息

目的观察肠道病毒(EV)-D68蛋白2A在EV-D68病毒感染293T细胞过程中对抗病毒IFN-Ⅰ通路的影响。方法免疫印迹法(Western blot)检测重组2A蛋白、IFN-α因子及信号传导及转录激活因子1(STAT1)的蛋白表达水平;免疫荧光技术(Immunofluorescence,IF)检测细胞内不同时间点EV-D68病毒VP1与2A的表达;通过观察细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),计算细胞培养半数感染量(50% cell culture infective dose,CCID50)来检测病毒感染性滴度;利用实时荧光定量PCR技术(real-time PCR,RT-PCR)检测IFN-Ⅰ干扰素产生相关基因的表达。结果成功构建pCLIPf-2A质粒,在转染后的24 h,重组蛋白2A有较好的表达。病毒滴度结果表明,2A蛋白在感染后期可以有效促进EV-D68病毒的增殖复制。IFN-α干扰素检测结果表明,EV-D68 2A可以刺激IFN-α的表达。IFN-Ⅰ干扰素相关基因检测表明,EV-D68+2A组、2A组及EV-D68对照组的IFN-Ⅰ干扰素产生相关基因的IFN-α mRNA水平均有不同程度的上调或下调,但是三者诱导相关基因表达上调、下调的趋势不同。对IFN-Ⅰ干扰素通路下游蛋白STAT1检测结果表明,各组均能有效诱导STAT1蛋白的表达。结论EV-D68 2A可以促进抗病毒IFN-Ⅰ通路相关基因及下游蛋白的应答,病毒感染后期,2A可以促进病毒较快增殖。

关键词： EV-D68病毒感染 2A蛋白抗病毒IFN-Ⅰ通路

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甲基苯丙胺半抗原设计与抗体间接ELISA检测方法的优化

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中国药物依赖性杂志 2021年第1期30卷 30-34页

作者：郑鹏朱喆刘翠秀赵文嵩曾发明李映波中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 云南省公安厅毒品分析及禁毒技术公安部重点实验室昆明650228

目的:提供一种有效的甲基苯丙胺(methamphetamine,MA)半抗原设计,并对MA抗体ELISA检测方法进行优化。方法:将合成的MA半抗原与破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)和牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)分别偶联(TT/BSA-SMA)作为免疫... 详细信息

目的:提供一种有效的甲基苯丙胺(methamphetamine,MA)半抗原设计,并对MA抗体ELISA检测方法进行优化。方法:将合成的MA半抗原与破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)和牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)分别偶联(TT/BSA-SMA)作为免疫抗原和包被抗原,通过梯度稀释法优化ELISA反应体系中抗原最佳包被浓度和最佳酶标抗体浓度(1∶2000-1∶6000)等工作条件,并进行方法的稳定性、特异性验证。结果:优化后最佳的包被缓冲液为磷酸缓冲液(phosphate buffer solution,PBS),2μg·ml-1的包被抗原在37℃2 h后4℃包被过夜为最佳包被反应条件,最佳封闭条件为5%脱脂奶粉封闭120 min,最佳酶标抗体稀释度为1∶3000(1.33μg·ml-1),最佳孵育时间为60 min,最佳底物显示时间为15 min。该方法重复性实验变异系数均在5%以内,并且只能检测出MA抗体,特异性良好。结论:本研究中的半抗原结构能诱导MA抗体的产生,并成功建立间接ELISA检测MA抗体的最佳工作条件,可为MA疫苗临床前研究奠定基础。

关键词：甲基苯丙胺半抗原抗体 ELISA

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一个LAMA2基因复合杂合突变导致的肢带型肌营养不良症隐性23型家系的临床特征及遗传学分析

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中国优生与遗传杂志 2021年第12期29卷 1762-1766页

作者：李文武张志丹王晓辉边成孙浩褚嘉祐李志宏赵正科杨昭庆云南省楚雄彝族自治州人民医院神经内一科云南楚雄675000 中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所遗传室云南昆明650118

目的探讨1例表现为肢带型肌营养不良症(LGMD)患者的临床特征及遗传学特点。方法获取先证者的临床检查资料,采用全外显子组测序技术(WES)筛选患者的候选可疑致病突变,利用Mutation taster、SIFT、Polyphen2等有害性分析软件对候选突变位... 详细信息

目的探讨1例表现为肢带型肌营养不良症(LGMD)患者的临床特征及遗传学特点。方法获取先证者的临床检查资料,采用全外显子组测序技术(WES)筛选患者的候选可疑致病突变,利用Mutation taster、SIFT、Polyphen2等有害性分析软件对候选突变位点进行功能预测。通过Sanger测序法对候选致病突变位点进行验证,并对该患者的临床特点进行分析。结果先证者临床表现为四肢远端肌肉萎缩及肌无力,血清肌酸激酶(CK)升高,肌电图提示肌源性损害。该家系中2例患者的LAMA2基因存在复合杂合突变,其中c.20_21insCCTC(***9Profs*42)杂合移码突变遗传自父亲,该突变为首次报道;c.C4591A(***1531Thr)杂合错义突变来自母亲,突变有害性分析表明两个突变位点均为有害突变。结论结合临床表现与基因检测结果,患者诊断为肢带型肌营养不良症隐性23型(LGMDR23)。LAMA2基因c.20_21insCCTC和c.C4591A复合杂合突变是患者的致病突变。本研究的病例为国内首次报道,进一步丰富了LAMA2基因的致病突变谱,为该病的临床诊断和基因检测提供更多参考依据。

关键词：肢带型肌营养不良 LAMA2基因全外显子组测序

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胞浆接头蛋白Dok5的表达及生物信息学分析

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生物技术 2020年第2期30卷 121-128页

作者：庞云丽杨晶杨云张萌赵思雯鲁帅尧中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118

[目的]构建携带小鼠Dok5基因及其PH、PTB结构域的原核表达载体,并表达对应GST融合蛋白。[方法]从小鼠脑组织提取总RNA,逆转录后经PCR扩增酶切、连接及转化大肠杆菌DH5a,构建携带Dok5全长(FL),PTB、PH结构域的原核表达质粒,经酶切及测序... 详细信息

[目的]构建携带小鼠Dok5基因及其PH、PTB结构域的原核表达载体,并表达对应GST融合蛋白。[方法]从小鼠脑组织提取总RNA,逆转录后经PCR扩增酶切、连接及转化大肠杆菌DH5a,构建携带Dok5全长(FL),PTB、PH结构域的原核表达质粒,经酶切及测序鉴定之后,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达蛋白,再利用Clutathion Sepha-rose 4B亲和层析柱纯化得到融合蛋白,并通过Western Botting检测其与相应抗体的反应性。利用生物信息学相关软件(ClustalW2、ProtParam、ProtScale、NetPhos 2.0 Server、***)预测Dok5蛋白的理化性质和磷酸化位点以及二、三级结构。[结果]构建了小鼠Dok5 FL、***的原核表达质粒,并得到了浓度分别为0.3 mg/ml.0.6 mg/mL、1 mg/mL的pGEX 6p-1-Dok5 FL、PH、PTB蛋白,其中Dok5 FL融合蛋白与相应抗体具有良好的反应性。Dok5长度为921 bp,编码306个氨基酸,在人、鼠、猴中高度保守。Dok5相对分子质量为35.453 kDa,理论pl为9.0,包含50个潜在磷酸化位点。[结论]分别得到了63 kDa.39 kDa、37 kDa的Dok5 FL、PH、PTB的GST融合蛋白,预测Dok5是--种亲水性的不稳定蛋白。

关键词： Dok5 原核表达理化性质磷酸化位点蛋白结构

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柯萨奇病毒B组2型SYBR GreenⅠRT-PCR检测方法的建立

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贵州医科大学学报 2020年第3期45卷 315-320页

作者：杨亚平段素琴杨凤梅李艳艳刘权刘雨赵远马绍辉和占龙中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118

目的:建立一种简单快速、灵敏、特异检测柯萨奇病毒B组2型(CVB2)的SYBR Green I逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法。方法:根据CVB2病毒衣壳蛋白1(VP1)的基因保守序列设计带有T7启动子的特异性引物,构建CVB2-T载体的重组质粒,以体外转录获... 详细信息

目的:建立一种简单快速、灵敏、特异检测柯萨奇病毒B组2型(CVB2)的SYBR Green I逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法。方法:根据CVB2病毒衣壳蛋白1(VP1)的基因保守序列设计带有T7启动子的特异性引物,构建CVB2-T载体的重组质粒,以体外转录获得的RNA为标准品,绘制标准曲线;建立检测CVB2的SYBR Green I RT-PCR方法,对该方法特异性、灵敏性及重复性进行评价。结果:该方法在102~109拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,最低检测限度为102拷贝/μL,标准曲线中R^2为0.996,扩增效率为102.2%;且该方法对肠道病毒71型(EVA71)、柯萨奇病毒A组16型(CVA16)、柯萨奇病毒A组10型(CVA10)和柯萨奇病毒A组6型(CVA6)均无交叉反应;组间和组内重复性实验中变异系数(CV)均小于1%。结论:本研究建立的检测CVB2的SYBR Green I RT-PCR方法具有良好的灵敏性、特异性和重复性,可用于CVB2病毒的快速检测和定量分析。

关键词：手足口病逆转录聚合酶链反应柯萨奇病毒感染染料稀释技术

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提高戒断疫苗免疫学效果的策略及验证手段

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中国药物依赖性杂志 2021年第4期30卷 255-258页

作者：刘翠秀郑鹏李映波曾发明昆明医科大学法医学院昆明650500 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 云南省公安厅刑侦总队昆明650228

物质滥用或依赖是当今社会亟待解决的重大公共健康卫生问题之一,酒精依赖、香烟过度吸食及毒品滥用等现象威胁着个人健康及家庭和社会的稳定。在众多预防及治疗方法中,戒断疫苗的免疫疗法具有很大发展前景,目前的相关研究已初具成果,但... 详细信息

物质滥用或依赖是当今社会亟待解决的重大公共健康卫生问题之一,酒精依赖、香烟过度吸食及毒品滥用等现象威胁着个人健康及家庭和社会的稳定。在众多预防及治疗方法中,戒断疫苗的免疫疗法具有很大发展前景,目前的相关研究已初具成果,但是在疫苗产生的免疫学效果上还存在一些不足和挑战,所以很少有成功进入临床阶段的戒断疫苗。为促进技术交流,有必要对一些优化的戒断疫苗方法进行探讨。以下就提高戒断疫苗免疫学效果的方法及相应验证手段进行综述。

关键词：药物成瘾药物滥用疫苗戒断治疗免疫疗法

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肺炎支原体及其人用疫苗研究进展

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生物技术通讯 2020年第2期31卷 190-195页

作者：梁宇(综述) 廖国阳(审校) 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650031

肺炎支原体是老年人慢性阻塞性肺炎和儿童社区获得性肺炎的重要病原体,近几年引起的难治性和重症肺炎支原体肺炎有增多趋势,对儿童和老年人健康危害严重。疫苗是预防肺炎支原体肺炎的最有效手段,但全球尚无人用肺炎支原体疫苗研制成功,... 详细信息

肺炎支原体是老年人慢性阻塞性肺炎和儿童社区获得性肺炎的重要病原体,近几年引起的难治性和重症肺炎支原体肺炎有增多趋势,对儿童和老年人健康危害严重。疫苗是预防肺炎支原体肺炎的最有效手段,但全球尚无人用肺炎支原体疫苗研制成功,而兽用肺炎支原体减毒活疫苗和灭活疫苗在国内外都已上市。因此,对肺炎支原体的相关致病机制及人用肺炎支原体疫苗的研究逐渐成为热点,通过对肺炎支原体致病机制的深入探索可对人用肺炎支原体疫苗的研发提供重要启示。

关键词：肺炎支原体致病机制疫苗

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趋化因子受体5Δ32突变在中国20个民族群体中的分布

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贵州医科大学学报 2020年第5期45卷 520-525,578页

作者：陶玉芬史磊姚宇峰史荔刘舒媛中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118

目的:探讨趋化因子受体5(CCR5)Δ32突变在中国20个民族群体中的扩散特征。方法:选取中国20个不同民族共计2788例健康无关个体,抽取外周静脉血提取基因组DNA,采用PCR检测CCR5Δ32突变(结果进行测序验证),分析CCR5Δ32突变在中国20个民族... 详细信息

目的:探讨趋化因子受体5(CCR5)Δ32突变在中国20个民族群体中的扩散特征。方法:选取中国20个不同民族共计2788例健康无关个体,抽取外周静脉血提取基因组DNA,采用PCR检测CCR5Δ32突变(结果进行测序验证),分析CCR5Δ32突变在中国20个民族群体中的分布情况,了解CCR5Δ32突变在中国人群中的扩散特征。结果:鄂温克族、回族(宁夏)、塔吉克族中各检测到1例CCR5Δ32基因突变杂合子(rs333 wt/mt),CCR5Δ32突变的频率分别为1.25%、0.68%及1.11%;在云南汉族群体中检测到2例CCR5Δ32基因突变杂合子(rs333 wt/mt),CCR5Δ32突变的频率为0.04%;其余群体中均未检测到CCR5Δ32基因突变。结论:CCR5Δ32基因突变在北方群体分布较多,符合“北高南低”的趋势。

关键词：基因频率趋化因子受体5 民族群体基因突变 Δ32突变

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2004～2018年全国流行性腮腺炎发病特征及重点防控人群分析

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中国当代儿科杂志 2019年第5期21卷 441-444页

作者：蒋蕊鞠殷琼洲徐明珏赵志梅邓燕车艳春中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所科研处云南昆明650118

目的分析2004～2018年我国流行性腮腺炎(简称流腮)的流行病学特征,为确定流腮防控重点人群提供数据支持。方法通过国家人口与健康科学数据共享服务平台和国家卫生健康委员会疾病预防控制局报告的2004～2018年全国流腮报告发病数据,采用... 详细信息

目的分析2004～2018年我国流行性腮腺炎(简称流腮)的流行病学特征,为确定流腮防控重点人群提供数据支持。方法通过国家人口与健康科学数据共享服务平台和国家卫生健康委员会疾病预防控制局报告的2004～2018年全国流腮报告发病数据,采用描述性流行病学方法,分析流腮的发病特征。结果 2004～2018年全国共报告流腮4 272 368例,年平均报告发病率为21.44/10万。2008年起单剂含腮腺炎成份的疫苗加入国家计划免疫,但各年发病率范围仍在12.84/10万～35.59/10万之间。北京、天津和上海实施第2剂麻疹-腮腺炎-风疹联合减毒活疫苗(MMR)常规免疫后,三地区的流腮报告发病率均降至10/10万左右。2004～2016年间3～14岁人群流腮发病占比81.16%。2004～2013各年份多以6岁儿童流腮发病率最高。结论单剂含有腮腺炎成份的疫苗接种对流腮发病率无明显影响。从各年龄组流腮发病率看,6岁儿童最高。建议在学龄前儿童开展第2剂次含腮腺炎成分疫苗接种。[中国当代儿科杂志,2019,21(5):441-444]

关键词：流行性腮腺炎流行病学特征疫苗接种儿童

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