检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物制品学杂志 2021年第10期34卷 1216-1221,1226页

作者：曾洁媛殷琼洲王雷李家洪张莹王丽春李琦涵杭连菊车艳春中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 湖北省疾病预防控制中心湖北武汉430079 湖北省襄州区疾病预防控制中心湖北襄州441199 湖北省襄阳市疾病预防控制中心湖北襄阳441022

目的观察肠道病毒71型(entervirus type 71,EV71)灭活疫苗(人二倍体细胞)适龄接种儿童柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6,CVA6)血清中和抗体变化情况。方法收集EV71灭活疫苗接种儿童的免疫前及免疫后血清,采用微量中和试验检测抗EV71... 详细信息

目的观察肠道病毒71型(entervirus type 71,EV71)灭活疫苗(人二倍体细胞)适龄接种儿童柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6,CVA6)血清中和抗体变化情况。方法收集EV71灭活疫苗接种儿童的免疫前及免疫后血清,采用微量中和试验检测抗EV71和CVA6中和抗体滴度。结果无手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)疾病史及EV71灭活疫苗接种史的6-71月龄儿童的血清抗EV71及抗CVA6中和抗体阳性率分别为27.93%和33.91%,共同阳性率为15.32%;两种抗体阳性率总体呈随月龄增加而逐渐升高的趋势(EV71:χ^(2)=4.436,P <0.001;CVA6:χ^(2)=2.083,P=0.037)。完成EV71灭活疫苗2剂免疫后,抗EV71及抗CVA6中和抗体共同阳性率由15.32%升至32.74%,4个年龄组的抗体共同阳性率也分别由0.00%、8.33%、8.33%和31.11%上升至23.81%、28.00%、13.04%和50.00%;抗EV71中和抗体阳性率(27.93%vs. 98.23%;χ^(2)=119.257,P <0.001)和几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)(7.01 vs. 46.52;χ^(2)=78.730,P <0.001)均较免疫前明显上升;而抗CVA6中和抗体阳性率在免疫前后均为33.91%(χ^(2)=0.000,P> 0.05),GMT在免疫前后差异也无统计学意义(3.09 vs. 4.10;χ^(2)=0.883,P=0.348)。结论 EV71灭活疫苗适龄接种人群EV71及CVA6的隐性感染率和共同隐性感染率较高。接种EV71灭活疫苗对适龄儿童的抗CVA6中和抗体水平无影响,表明EV71和CVA6之间无中和交叉反应。

关键词：肠道病毒71型灭活疫苗柯萨奇病毒A组6型中和抗体隐性感染

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粪便标本中诺如病毒GⅡ拷贝数定量检测方法的建立和应用

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中国感染控制杂志 2020年第10期19卷 864-870页

作者：赵跃丽饶清孙强明张兰胜大理大学药学与化学学院云南大理671000 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的构建诺如病毒GⅡ(Norovirus GenogroupⅡ,NoV GⅡ)拷贝数标准质粒及其检测体系。方法将合成高度保守的NoV GⅡ基因序列片段克隆至pUC57载体上,构建NoV GⅡ标准质粒,采用聚合酶链反应(PCR)进行验证。通过实时荧光定量PCR扩增曲线结... 详细信息

目的构建诺如病毒GⅡ(Norovirus GenogroupⅡ,NoV GⅡ)拷贝数标准质粒及其检测体系。方法将合成高度保守的NoV GⅡ基因序列片段克隆至pUC57载体上,构建NoV GⅡ标准质粒,采用聚合酶链反应(PCR)进行验证。通过实时荧光定量PCR扩增曲线结果绘制C t值与病毒拷贝数的标准曲线,求得其相应的标准曲线方程。采用建立的标准质粒及其检测体系对2018年12月昆明市儿童医院4份临床粪便标本进行检测。结果经PCR验证,NoV GⅡ拷贝数的标准质粒构建正确。采用实时荧光定量PCR的扩增曲线获得C t值与病毒拷贝数相对应的标准曲线方程为Y=-3.972X+39.03,R^2=0.991,4份粪便标本原液NoV GⅡ病毒拷贝数分别为30443.45、9468.40、53176.69、4493.12 copies/μL。结论成功建立用于检测粪便标本中NoV GⅡ病毒拷贝数的标准质粒及其检测体系,可为疾病的预防控制和相关试验研究提供有效的定量检测方法。

关键词：诺如病毒GⅡ 病毒拷贝数实时荧光定量PCR 标准曲线

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云南省德宏地区成人地中海贫血筛查中MCV和MCH截断值分析

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检验医学 2021年第12期36卷 1206-1209页

作者：桑国鑫易薇杨必清郭薇霞黄铠林克勤褚嘉祐杨昭庆昆明医科大学云南昆明650500 德宏傣族景颇族自治州人民医院检验科云南芒市678402 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所医学遗传学研究室云南昆明650118

目的探讨云南省德宏地区成人地中海贫血(简称地贫)筛查指标平均红细胞体积(MCV)和平均红细胞血红蛋白含量(MCH)的最佳临界值。方法选取德宏傣族景颇族自治州人民医院9 562名行门诊检查、体检、婚检和遗传咨询的成年人,根据地贫常见基因... 详细信息

目的探讨云南省德宏地区成人地中海贫血(简称地贫)筛查指标平均红细胞体积(MCV)和平均红细胞血红蛋白含量(MCH)的最佳临界值。方法选取德宏傣族景颇族自治州人民医院9 562名行门诊检查、体检、婚检和遗传咨询的成年人,根据地贫常见基因突变检测结果将其分为地贫组(2 662例)和正常对照组(6 900名)。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析MCV和MCH筛查地贫的最佳临界值及效能。结果 MCV筛查地贫的最佳临界值为83.95 fL,敏感性为82.7%,特异性为89.7%;MCH筛查地贫的最佳临界值为28.15 pg,敏感性为88.7%,特异性为89.2%。确定的临界值与目前国内广泛使用的临界值(MCV<80 fL和MCH<27 pg)相比,可显著降低漏诊率;联合使用MCV或MCH筛查地贫,漏诊率最低。结论适合的临界值可显著降低地贫漏诊率,建议具有独特突变谱的流行区建立自己的地贫筛查临界值,联合使用MCV和MCH进行筛查,以提高筛查效率。

关键词：平均红细胞体积平均红细胞血红蛋白含量地中海贫血临界值

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树鼩连接黏附分子A的基因克隆及初步功能研究

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实验动物与比较医学 2020年第3期40卷 196-203页

作者：李晓飞孙晓梅王文广匡德宣陆彩霞仝品芬罕园园李娜代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心昆明650118

目的获取树鼩连接黏附分子A(junctional adhesion molecule A,JAM-A)的全长编码序列并进行分子特征分析,探讨JAM-A作为呼肠孤病毒受体入侵树鼩原代肺细胞的作用机制。方法提取健康树鼩组织总RNA,采用反转录PCR和cDNA末端快速克隆技术获... 详细信息

目的获取树鼩连接黏附分子A(junctional adhesion molecule A,JAM-A)的全长编码序列并进行分子特征分析,探讨JAM-A作为呼肠孤病毒受体入侵树鼩原代肺细胞的作用机制。方法提取健康树鼩组织总RNA,采用反转录PCR和cDNA末端快速克隆技术获取JAM-A基因;Unipro UGENE分析编码氨基酸,使用MEGA 6.0软件最大似然法构建系统发育树;实时荧光定量PCR检测JAM-A在树鼩25个组织和血液中的表达分布情况;于树鼩原代肺上皮细胞上进行受体的特异性抗体阻断处理,然后采用免疫荧光法观察病毒抗原对呼肠孤病毒感染的影响。结果获取了JAM-A基因cDNA全长序列,2962 bp;系统发育树进化分析显示JAM-A基因与人的亲缘关系较啮齿类更近;JAM-A分子广泛表达于树鼩的外周组织,而在呼吸道和消化道表达水平更高。特异性抗体作用于细胞显著降低病毒抗原的免疫荧光积分吸光度值(P<0.0001)。结论首次克隆并分析了JAM-A的基因序列,验证JAM-A分子是呼肠孤病毒入侵树鼩的主要受体,提示树鼩可作为一种新的呼肠孤病毒动物模型。

关键词：连接黏附分子A 基因克隆呼肠孤病毒树鼩

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肠道病毒71型致病机制及免疫反应研究进展

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实验动物与比较医学 2020年第5期40卷 449-455页

作者：施梅言陆彩霞代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心昆明650118

肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)主要经由胃肠道或呼吸道传染人类,是引起手足口病的主要病原体之一,还能导致神经系统性疾病,如神经源性肺水肿,甚至死亡,严重威胁婴幼儿生命安全。虽然EV71的全病毒灭活疫苗已经上市,但其感染导致的... 详细信息

肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)主要经由胃肠道或呼吸道传染人类,是引起手足口病的主要病原体之一,还能导致神经系统性疾病,如神经源性肺水肿,甚至死亡,严重威胁婴幼儿生命安全。虽然EV71的全病毒灭活疫苗已经上市,但其感染导致的并发症的致病机制及免疫反应尚未完全明确。本文对EV71的致病机制、免疫应答及免疫原性方面的动物实验研究进展进行综述,为深入研究EV71提供理论支持。

关键词：肠道病毒71型致病机制动物实验免疫反应

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脊髓灰质炎病毒检测方法的比较研究

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中国病原生物学杂志 2020年第8期15卷 947-952页

作者：施红媛傅宇婷马汝飞李琼芬李国良张杰刘小畅叶慧王竞冬石昊昱杨晓蕾杨净思中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118 云南省疾病预防控制中心天津市疾病预防控制中心杭州市妇产科医院

目的比较不同的脊髓灰质炎病毒(Poliovirus,PV,以下简称脊灰病毒)检测方法,为选择合理的优化检测方案提供参考。方法选取广西壮族自治区柳州市1200名2~3月龄健康婴儿,分为IPV和OPV不同序贯免疫共12组,每组100人,按照0、28、56d免疫程序... 详细信息

目的比较不同的脊髓灰质炎病毒(Poliovirus,PV,以下简称脊灰病毒)检测方法,为选择合理的优化检测方案提供参考。方法选取广西壮族自治区柳州市1200名2~3月龄健康婴儿,分为IPV和OPV不同序贯免疫共12组,每组100人,按照0、28、56d免疫程序接种疫苗,随机抽取各组入组时前10%的受试对象在第二剂疫苗接种前和第二、三剂疫苗接种后第7、14、28d采集粪便标本,利用实时荧光定量PCR和细胞培养法对粪便中可能存在的PV进行初筛对比,对细胞培养法分离出的阳性标本,分别用中和试验、单克隆抗体间接ELISA法和逆转录-PCR鉴定其型别,并比较3种方法分型结果的一致性。结果实时荧光定量PCR检测PV阳性率为76.4%,细胞培养法为59.7%,差异有统计学意义(χ^2=32.998,P<0.01)。中和试验、ELISA、RT-PCR 3种方法对细胞培养物中PV的检出率具有高度的一致性(Kappa>0.8)且具有较高的鉴别诊断准确性(ROC曲线面积A接近1),分型结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论实时荧光定量PCR法对粪便中PV的检出率较细胞培养法高,但不能判断PV是否具有感染性。中和试验、ELISA、RT-PCR 3种方法对PV的分型一致性较高,可根据实验室和临床需求合理选择使用。

关键词：脊髓灰质炎病毒检测方法比较

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脊髓灰质炎免疫策略进展及疫苗供应现状

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中国生物制品学杂志 2019年第5期32卷 584-588,593页

作者：傅宇婷刘小畅赵婷杨净思北京协和医学院中国医学科学院医学生物学研究所云南昆明650000

脊髓灰质炎(简称脊灰,poliomyelitis)是由脊灰病毒引起的急性肠道传染病,严重危害人类健康和社会经济发展。1988年,全球消灭脊灰倡议行动启动以来,全球脊灰病例减少了99%以上。近年来野生型脊灰病毒(wild poliovirus,WPV)的流行呈降低趋... 详细信息

脊髓灰质炎(简称脊灰,poliomyelitis)是由脊灰病毒引起的急性肠道传染病,严重危害人类健康和社会经济发展。1988年,全球消灭脊灰倡议行动启动以来,全球脊灰病例减少了99%以上。近年来野生型脊灰病毒(wild poliovirus,WPV)的流行呈降低趋势,而一些使用口服脊灰减毒活疫苗(oral live attenuated poliomyelitis vaccine,OPV)的国家正面临疫苗衍生脊灰病毒的风险。因此,世界卫生组织(WHO)调整了脊灰免疫策略,要求所有目前接种OPV的国家,在免疫程序中至少增加1剂脊灰灭活疫苗(inactivated poliovirus vaccine,IPV)。IPV能避免OPV使用过程中的疫苗相关脊灰型麻痹(vaccine-associated paralytic poliomyelitis,VAPP)、疫苗衍生脊灰病毒(vaccine-derived poliovirus,VDPV)和疫苗重组脊灰病毒(vaccine recombinant poliomyelitis virus,VRPV)的发生。WHO要求使用IPV和二价脊灰减毒活疫苗(bivalent oral poliovirus vaccine,bOPV)序贯免疫程序替代三价脊灰减毒活疫苗(trivalent oral poliovirus vaccine,t OPV),逐步实现全程接种IPV。

关键词：脊髓灰质炎口服脊髓灰质炎减毒活疫苗脊髓灰质炎灭活疫苗免疫策略

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2019年昆明市手足口病病原学及其分子特征分析

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职业与健康 2021年第18期37卷 2505-2508页

作者：李丽张磊张名马绍辉昆明市妇幼保健院检验科云南昆明650031 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所医学遗传室云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的了解2019年云南省昆明市手足口病的病原学及其分子特征,为手足口病防治提供一定参考依据。方法采用半巢式逆转录聚合酶链式扩增(reverse transcription-pdy merase chain reaction,RT-PCR)方法对242份临床标本进行检测,对通用引物... 详细信息

目的了解2019年云南省昆明市手足口病的病原学及其分子特征,为手足口病防治提供一定参考依据。方法采用半巢式逆转录聚合酶链式扩增(reverse transcription-pdy merase chain reaction,RT-PCR)方法对242份临床标本进行检测,对通用引物检测结果为阳性的PCR产物进行测序和生物信息学分析以鉴定其型别及分子特征。结果从收集到粪便样品242份中检出肠道病毒阳性166份,总阳性率为68.60%;共检测到8种肠道病毒A群病毒,其中柯萨奇病毒A6型(CV-A6,30.72%)和A4型(CV-A4,15.06%)为2个主要优势病原体,并分别属于D3和F基因型;另外,男性肠道病毒阳性率多于女性(P<0.05),且以<5岁为主。结论昆明地区存在多种肠道病毒感染或流行,且CV-A6和CV-A4为HFMD的主要病原并同属于中国流行株。

关键词：手足口病病原学肠道病毒A群流行病学

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实验树鼩肠道螺杆菌属细菌特征分析

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动物学杂志 2020年第2期55卷 238-246页

作者：古文鹏贾杰施梅言邱丹丹阮蕾颖李娜仝品芬代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心昆明650118 云南省疾病预防控制中心急性传染病防制所昆明650022

近年来,树鼩(Tupaia belangeri)作为一种新型的实验动物被广泛应用于生物医学研究的各个领域。本研究组前期的研究结果显示,螺杆菌属(Helicobacter)是树鼩肠道微生物群落中相对丰度最高的一类细菌,但其具体的细菌种类和结构特征仍然不... 详细信息

近年来,树鼩(Tupaia belangeri)作为一种新型的实验动物被广泛应用于生物医学研究的各个领域。本研究组前期的研究结果显示,螺杆菌属(Helicobacter)是树鼩肠道微生物群落中相对丰度最高的一类细菌,但其具体的细菌种类和结构特征仍然不清楚。因此,本研究将开展实验树鼩肠道中螺杆菌属细菌的分布种类和特征分析,为后续实验研究工作提供资料。通过系统采集72只树鼩的粪便样本,提取核酸后采用巢氏PCR法应用属特异性引物扩增螺杆菌属特异性片段,再分别采用7个种特异性引物对属特异性阳性样本扩增螺杆菌种特异性片段,包括肝螺杆菌(***)、家鼠螺杆菌(***)、胆汁螺杆菌(***)、啮齿类螺杆菌(***)、弯曲螺杆菌(Flexispira rappini)、鼩螺杆菌(***)和盲肠螺杆菌(***)。属特异性引物扩增阳性但种引物扩增阴性的样本进行核酸序列测定和BLAST比对分析,确认其最终所属的螺杆菌种类。结果显示,72份树鼩粪便样本中,属特异性引物扩增阳性有18份,总体阳性率为25.0%。其中,盲肠螺杆菌阳性8株、胆汁螺杆菌阳性6株,其余8份阳性样本经过测序和BLAST比对分析后确认为同性恋螺杆菌(***)阳性5株、猫螺杆菌(***)阳性2株和猕猴螺杆菌(***)阳性1株。有4份树鼩粪便样本出现同时携带盲肠螺杆菌和胆汁螺杆菌的情况。将螺杆菌属细菌携带结果与实验树鼩的性别和年龄组进行比较分析后发现,不同性别间以及不同年龄组间,属或种阳性样本情况均无差异(P>0.05)。本研究结果表明,实验树鼩具有较高的螺杆菌携带率,且不分性别和年龄,主要以盲肠螺杆菌、胆汁螺杆菌和同性恋螺杆菌为主。

关键词：实验树鼩盲肠螺杆菌胆汁螺杆菌同性恋螺杆菌 PCR

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诺如病毒VP1蛋白在马克斯克鲁维酵母中的表达及纯化

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中国病毒病杂志 2022年第1期12卷 35-41页

作者：袁军鸿王晓辉吴萍萍冯昌增周峻岗褚嘉祐吕红杨昭庆昆明医科大学云南昆明650500 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所医学遗传学研究室云南昆明650118 国家药品监督管理局疫苗及生物制品质量控制与评价重点实验室四川成都610097 复旦大学生命科学学院上海工业菌株工程技术研究中心上海200438 复旦大学遗传工程国家重点实验室上海200438

目的使用马克斯克鲁维酵母表达系统对GII.17型诺如病毒病毒样颗粒(VLPs)进行表达并对该蛋白纯化方式进行初步探讨。方法对诺如病毒VP1序列进行密码子优化,使用双酶切构建重组质粒,通过醋酸锂转化法筛选获得重组阳性克隆KM-NOV-GII.17... 详细信息

目的使用马克斯克鲁维酵母表达系统对GII.17型诺如病毒病毒样颗粒(VLPs)进行表达并对该蛋白纯化方式进行初步探讨。方法对诺如病毒VP1序列进行密码子优化,使用双酶切构建重组质粒,通过醋酸锂转化法筛选获得重组阳性克隆KM-NOV-GII.17。摇瓶培养72 h后对菌体进行破碎,使用层析柱对目的蛋白进行纯化,并通过电镜观察颗粒形态。结果成功筛选出高表达量KM-NOV-GII.17,通过Q柱及分子筛串联纯化的方式获得了纯度较高的病毒样颗粒,产量约为0.26 g/L,电镜观察结果显示该VP1序列可自组装为大小均一的病毒样颗粒并且与天然病毒颗粒形态相似。结论本研究证实了GII.17型诺如病毒VP1蛋白可通过马克斯克鲁维酵母表达系统获得产量高、均一性好的病毒样颗粒,这为诺如病毒基因重组疫苗的研发提供了新的蛋白表达系统。

关键词：诺如病毒病毒样颗粒马克斯克鲁维酵母表达纯化

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