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肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型VP1蛋白在人支气管上皮细胞中对天然免疫相关信号分子的表达及T细胞免疫反应的影响

中国生物制品学杂志 2019年第3期32卷 255-260,264页

作者：李好张莹王丽春姜莉范胜涛杨二霞董承红蒋国润张小龙廉亚茹李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省传染病疫苗重点实验室云南昆明650118 艾美康淮生物制药(江苏)有限公司江苏泰州225300

目的探讨肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)和柯萨奇病毒A组16型(coxsakievirus A 16,CA16)VP1蛋白在人支气管上皮细胞中对天然免疫相关信号分子的表达及T细胞免疫反应的影响。方法经RT-PCR法扩增EV71和CA16的VP1序列,插入至载体pcDNA3... 详细信息

目的探讨肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)和柯萨奇病毒A组16型(coxsakievirus A 16,CA16)VP1蛋白在人支气管上皮细胞中对天然免疫相关信号分子的表达及T细胞免疫反应的影响。方法经RT-PCR法扩增EV71和CA16的VP1序列,插入至载体pcDNA3. 1(+),构建重组真核表达质粒pcDNA-EV71-VP1和pcDNA-CA16-VP1。分别转染人支气管上皮细胞16HBE,于转染后24、48和72 h收集样本,进行细胞内天然免疫相关信号分子表达的检测和刺激T细胞增殖的检测。结果经双酶切及测序鉴定,重组真核表达质粒pcDNA-EV71-VP1和pcDNA-CA16-VP1构建正确。与阴性对照组比较,EV71-VP1组IFNγ、OX40L、RANKL、TNF-α和IL-2的水平上调,而CA16-VP1组的上调幅度较小。EV71-VP1及CA16-VP1组16HBE细胞的胞内外提取物均可明显刺激分泌IFNγ的T细胞增殖(P <0. 05)。结论 EV71和CA16 VP1蛋白在人上皮细胞16HBE中表达后,可差异性诱导细胞中天然免疫信号分子表达及相似的非特异性刺激T细胞增殖能力。

关键词：肠道病毒71型柯萨奇病毒A组16型人支气管上皮细胞16HBE 天然免疫获得性免疫

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云南省柯萨奇病毒A组10型的全基因组分析

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昆明医科大学学报 2025年第2期46卷 23-29页

作者：楚昭阳李佳玲陈俊薇冯昌增张名李丽马绍辉中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 昆明医科大学海源学院云南昆明650106 云南大学生命科学学院云南昆明650504 昆明市妇幼保健院检验科云南昆明650031

目的分析从2022年手足口病患儿粪便样品中分离到的柯萨奇病毒A组10型(coxsackievirus A10,CVA10)分离株的全基因组特征。方法经人横纹肌肉瘤细胞(human rhabdomyosarcoma,RD)分离得到该分离株,将其命名为155/YN/CHN/2022。提取病毒RNA,... 详细信息

目的分析从2022年手足口病患儿粪便样品中分离到的柯萨奇病毒A组10型(coxsackievirus A10,CVA10)分离株的全基因组特征。方法经人横纹肌肉瘤细胞(human rhabdomyosarcoma,RD)分离得到该分离株,将其命名为155/YN/CHN/2022。提取病毒RNA,采用反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增其VP1序列,鉴定血清型。然后分段全基组扩增并拼接155/YN/CHN/2022的全基因组序列,利用MEGA7.0、DNAStar7.1和Simplot3.5.1等软件对序列进行分析。结果CVA10分离株155/YN/CHN/2022经扩增及拼接后得到的全基因组序列长为7403 nt,其中5'UTR区为746 nt,3'UTR区为76 nt,编码区长6552 nt,该分离株与CVA10原型株的核苷酸序列和氨基酸序列一致性分别为78.43%和95.30%,而与其他国内外CVA10分离株的核苷酸序列和氨基酸序列一致性分别为91.18%~95.06%和97.63%~98.54%。系统发育分析发现,155/YN/CHN/2022位于C基因型。P1、P2、P3系统发育结果显示,在P2、P3非编码区,该分离株与其他血清型毒株可能发生过重组。Simplot重组分析也显示,CVA10分离株155/YN/CHN/2022可能在非编码区出现重组事件。结论CVA10分离株155/YN/CHN/2022属于C基因型,和近年来中国大陆流行株属于同一基因型。

关键词：手足口病柯萨奇病毒A组10型全基因组进化分析

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基孔肯雅病毒研究进展

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中国医药导报 2019年第19期16卷 70-73页

作者：程美慧陶玉芬刘建生刘红旗中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所感染和免疫实验室

基孔肯雅病毒(CHIKV)是一种虫媒病毒,可通过埃及伊蚊和白纹伊蚊传播,感染率高,能够引起长达数月至数年的关节炎症状,严重者会造成残疾甚至致死。近几年来,CHIKV在全球范围内广泛传播,每年可导致数百万人感染。本文从临床症状、病理机制... 详细信息

基孔肯雅病毒(CHIKV)是一种虫媒病毒,可通过埃及伊蚊和白纹伊蚊传播,感染率高,能够引起长达数月至数年的关节炎症状,严重者会造成残疾甚至致死。近几年来,CHIKV在全球范围内广泛传播,每年可导致数百万人感染。本文从临床症状、病理机制、诊断方法等几方面介绍了CHIKV的最新研究进展,其中CHIKV感染的病理机制是重点描述的部分,了解CHIKV感染的致病机制将有助于找到预防和治疗方法来对抗这种虫媒病毒感染。

关键词：基孔肯雅病毒虫媒病毒临床症状病理机制诊断方法

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轮状病毒VP6抗原表位嵌合疫苗载体系统构建及嵌合疫苗研制

轮状病毒VP6抗原表位嵌合疫苗载体系统构建及嵌合疫苗研制

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作者：陈元鼎潘小霞滕玉梅赵冰心袁静夏文跃王晶文喻玲杨筱舟中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所

本项目运基因克隆和重组表达技术,构建了以人轮状病毒VP6为载体(VP6F)的外源抗原表位表达载体系统,并以VP6F为载体,构建了轮状病毒、轮状病毒/乙肝病毒、轮状病毒/脊灰病毒抗原表位嵌合蛋白疫苗。本项目研制的病毒抗原表位嵌合蛋白疫... 详细信息

标准号: 1800260197

本项目运基因克隆和重组表达技术,构建了以人轮状病毒VP6为载体(VP6F)的外源抗原表位表达载体系统,并以VP6F为载体,构建了轮状病毒、轮状病毒/乙肝病毒、轮状病毒/脊灰病毒抗原表位嵌合蛋白疫苗。本项目研制的病毒抗原表位嵌合蛋白疫苗不需要增值活病毒,不需要制备病毒样品,所以不存在病毒遗传变异和基因重组的生物安全风险和疫苗相关疾病的临床副作用风险。本项目成果为开发可以克服现有轮状病毒、脊灰病毒和乙型病毒缺陷的新型嵌合疫苗打下了坚实的基础。用该项目部分研究内容获得2项云南省“应用基础类”基金的资助(1.“RV VP6抗原表位疫苗载体系统构建和RV嵌合疫苗研究”,项目编号2013FZ130;2.“轮状病毒/脊髓灰质炎病毒抗原表位嵌合疫苗研究”,项目编号2012FD039 );获得3项专利授权。该项目部分研究内容已发表13篇论文。

关键词：轮状病毒基因克隆疫苗表达载体系统

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不同年龄段雌性Wistar大鼠不同骨骼区域骨密度值的测定与比较

不同年龄段雌性Wistar大鼠不同骨骼区域骨密度值的测定与比较

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第十五届中国实验动物科学年会

作者：叶尤松王陈芸李哲丽马开利唐东红中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所

目的提供不同年龄段雌性Wistar大鼠不同骨骼区域骨密度参考值。方法选取30只SPF级雌性Wistar大鼠,分别在6月龄、10月龄、12月龄、24月龄和30月龄时,采用双能X线骨密度仪依次测量大鼠头部、上肢、大腿、躯干、肋骨、骨盆、脊柱及全身等... 详细信息

目的提供不同年龄段雌性Wistar大鼠不同骨骼区域骨密度参考值。方法选取30只SPF级雌性Wistar大鼠,分别在6月龄、10月龄、12月龄、24月龄和30月龄时,采用双能X线骨密度仪依次测量大鼠头部、上肢、大腿、躯干、肋骨、骨盆、脊柱及全身等骨骼区域的骨密度,并进行不同年龄段间和同一年龄段不同骨骼区域间骨密度值的比较。结果随着月龄的增加雌性大鼠头部、上肢、大腿、躯干、肋骨、骨盆、脊柱和全身骨密度值迅速增加至10月龄达到峰值;大鼠头部、上肢、大腿、躯干和肋骨部骨密度值均显著或极显著高于同月龄全身骨密度值(P<0.05或P<0.01),而骨盆和脊柱部骨密度值和同月龄全身骨密度值比较差异无显著性(P> 0.05),相关性分析三者均呈显著正相关(P<0.01)。结论本文提供了雌性Wistar大鼠骨生物学指标的部分背景数据,为以Wistar大鼠为对象的骨代谢研究及其在生物医学领域的应用补充了基础参考资料。

关键词： Wistar大鼠骨骼区域骨密度

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单纯疱疹病毒Ⅰ型基因突变株M3株与水痘带状疱疹病毒减毒活疫苗Oka株感染小鼠的生物学特性比较

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中国生物制品学杂志 2019年第3期32卷 249-254页

作者：柳蕾徐兴丽冯敏何玉凤王丽春张莹李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 昆明医科大学云南昆明650500

目的比较单纯疱疹病毒Ⅰ型(herpes simplex virus typeⅠ,HSV-Ⅰ)基因突变株M3株与水痘带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)减毒活疫苗Oka株感染BALB/c小鼠的生物学特性。方法用不同剂量(103、104、105 PFU/只)的HSV-ⅠM3株及疫... 详细信息

目的比较单纯疱疹病毒Ⅰ型(herpes simplex virus typeⅠ,HSV-Ⅰ)基因突变株M3株与水痘带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)减毒活疫苗Oka株感染BALB/c小鼠的生物学特性。方法用不同剂量(103、104、105 PFU/只)的HSV-ⅠM3株及疫苗剂量的VZV Oka株以不同方式(腹腔、肌肉、鼻腔、足垫)感染小鼠后,对小鼠的急性临床反应、体重变化、病毒增殖、组织病理损伤及病毒重激活等生物学特性进行比较。结果 HSV-ⅠM3及VZV Oka组小鼠均未见弓背、倒毛、单侧眼失明等急性临床症状,体重均呈逐渐上升趋势;器官组织中病毒拷贝数均处于较低水平,且两组差异无统计学意义(P> 0. 05);小鼠脑组织出现轻微局部炎症细胞浸润、出血、胶质小结或无异常,两组差异较小,脊髓组织均未出现明显异常;神经组织与Vero细胞共培养,均未观察到细胞病变(CPE)。结论 HSV-ⅠM3株与VZV Oka株感染小鼠后的生物学特征无明显差异。

关键词：单纯疱疹病毒Ⅰ型突变株水痘带状疱疹病毒减毒活疫苗小鼠生物学特性

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IL-17信号通路在回归热神经性伯氏螺旋体病的致病机制研究

IL-17信号通路在回归热神经性伯氏螺旋体病的致病机制研究

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第十五届中国实验动物科学年会

作者：程美慧刘红旗中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所

目的回归热神经性伯氏螺旋体病(Relapsing fever neuroborreliosis,RFNB)是由伯氏螺旋体感染所引起的一种中枢神经系统疾病综合征,其在欧洲和北美等中的国家报道较多,而在我国,由于我国大量抗生素的使用及我们对其诊断上的不足,掩盖了... 详细信息

目的回归热神经性伯氏螺旋体病(Relapsing fever neuroborreliosis,RFNB)是由伯氏螺旋体感染所引起的一种中枢神经系统疾病综合征,其在欧洲和北美等中的国家报道较多,而在我国,由于我国大量抗生素的使用及我们对其诊断上的不足,掩盖了该病对我国公共卫生的潜在危险性。但随着我国对大量使用抗生素危害的认识,将来抗生素的使用必将会受到限制,另外随着全球交通和旅游的发展,可能会给回归热螺旋体的流行呈现可乘之机。因此,我们有必要对回归热螺旋体感染开展更加深入的研究。方法本研究主要利用Th17细胞缺陷(IL17-/-)RFNB小鼠模型和C57小鼠,对其腹腔注射感染回归热神经性伯氏螺旋体后进行多重细胞因子检测、菌血症及神经症状观察等,从而验证IL-17信号通路与回归热神经性伯氏螺旋体病的关系。结果我们之前通过建立RFNB小鼠模型发现,T细胞缺陷小鼠不表现任何神经症状。有研究表明Th1和Th17细胞在感染、炎症和自身免疫等引起的中枢神经系统疾病中起非常重要的作用。我们通过建立Th1细胞缺陷(Tbet-/-)和Th17细胞缺陷(IL17-/-)RFNB小鼠模型研究发现,伯氏螺旋体感染对Tbet-/-小鼠无影响。因此,我们推测IL-17信号通路可能在该疾病中起重要作用。为验证这一假设,我们通过多重细胞因子检测发现回归热螺旋体感染的C57小鼠在感染后的第7天可检测到IL17A细胞因子;另外,我们通过建立IL17-/-小鼠模型研究发现,感染回归热螺旋体后的IL17-/-小鼠与野生型小鼠一样有较高的细菌复制效率;此外,值得注意的是,IL17-/-小鼠在感染回归热螺旋体后没有明显的神经症状出现。结论本研究结果表明IL-17信号通路在螺旋体感染诱导的中枢神经系统疾病中起着重要作用。通过回归热中枢神经系统疾病致病机制的研究,可为该病及其他类似疾病的疫苗的研制提供重要的理论基础和指导。

关键词： IL-17信号通路伯氏螺旋体回归热神经症状

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树鼩背部肌肉植入多孔复合材料HAPw/n-ZnO的体内生物学性能

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中国实验动物学报 2019年第4期27卷 466-472页

作者：蒋学泉张文云李娜何武书和丽佳袁艳波中国人民解放军联勤保障部队第九二〇医院口腔科昆明650032 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心昆明650118

目的初步探讨多孔复合材料HAPw/n-ZnO的体内生物学性能。方法选用树鼩15只,雌雄不限,每只背部肌肉均植入多孔复合材料HAPw/n-ZnO、Bio-Oss骨粉、ATLANTIK人工骨、国产金世植骨灵人工骨,多孔复合材料HAPw/n-ZnO为实验组,其余为对照组... 详细信息

目的初步探讨多孔复合材料HAPw/n-ZnO的体内生物学性能。方法选用树鼩15只,雌雄不限,每只背部肌肉均植入多孔复合材料HAPw/n-ZnO、Bio-Oss骨粉、ATLANTIK人工骨、国产金世植骨灵人工骨,多孔复合材料HAPw/n-ZnO为实验组,其余为对照组。术后进行动物大体观察及手术部位观察,4周、8周、12周每次随机抽取4只动物处死,进行埋植部位肌肉组织病理学观察、碱性磷酸酶活性(ALP)及钙含量测定。结果 HE染色显示实验HAPw/n-ZnO组与各对照组肌间质内均可见钙化灶,实验组肌肉可见炎症细胞明显聚集;Masson染色显示实验组与各对照组植入材料周边均可见绿染的胶原纤维;碱性磷酸酶活性及钙含量测定实验组与金世植骨灵组及Bio-Oss骨粉组的差异有统计学意义,金世植骨灵组及Bio-Oss骨粉组优于实验组,与ATLANTIK人工骨组差异无统计学意义。结论多孔复合材料HAPw/n-ZnO在植入树鼩背部肌肉后有成骨活性但未异位成骨,且引起炎症反应。

关键词： HAPw/n-ZnO复合材料异位成骨生物活性炎症反应树鼩

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实验树鼩肠道宏病毒组学研究

实验树鼩肠道宏病毒组学研究

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第十五届中国实验动物科学年会

作者：古文鹏代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所

目的树鼩作为一种新型的实验动物,近年来被广泛应用于生物医学研究领域。但目前尚未有关于实验树鼩的肠道宏病毒组学的报道。方法本研究采集了50份树鼩粪便样本,对粪便样本进行病毒的浓缩和富集,采用Illumina Hiseq高通量测序平台开展... 详细信息

目的树鼩作为一种新型的实验动物,近年来被广泛应用于生物医学研究领域。但目前尚未有关于实验树鼩的肠道宏病毒组学的报道。方法本研究采集了50份树鼩粪便样本,对粪便样本进行病毒的浓缩和富集,采用Illumina Hiseq高通量测序平台开展肠道宏病毒组测序和分析。结果所有的测序reads数在NCBI非冗余核酸数据库、病毒蛋白数据库以及ACLAME数据库中比对到的有效reads数为5.80%。这些有效的reads进一步被分成了三类:有尾噬菌体目(占58.0%)、小RNA病毒目(占16.0%)和疱疹病毒目(占6.0%)。其中,长尾噬菌体科、肌尾噬菌体科和短尾噬菌体科分别占有尾噬菌体目的 46.0%,45.0%和8.0%,是三类最主要的病毒科。小RNA病毒科和疱疹病毒科则分别占小RNA病毒目和疱疹病毒目的 99.0%。根据宿主类型和病毒核酸分类,树鼩肠道中所有相关的病毒被分为噬菌体(占61.83%)、动物特异性病毒(34.50%)、植物特异性病毒(0.09%)、昆虫特异性病毒(0.08%)和其它病毒(3.50%)。其中双链DNA病毒占所有病毒分类的51.13%,其次是单链RNA病毒(33.51%),最后是单链DNA病毒(15.36%)。结论实验树鼩肠道宏病毒组研究结果反映了树鼩的生活方式和饮食习惯等因素,同时该研究提供了树鼩肠道病毒的群落结构和分布特征,为后续树鼩病毒性疾病模型的研究和工作的开展提供了基线资料。

关键词：实验树鼩宏病毒组高通量测序

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树鼩原代皮肤成纤维细胞的分离培养技术

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动物学杂志 2019年第1期54卷 76-86页

作者：白剑焦玲帅杨铭王武代解杰夏雪山昆明理工大学生命科学与技术学院昆明650500 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩标准化研究与疾病动物模型省创新团队昆明650118

建立稳定的树鼩(Tupaiabelangeri)皮肤成纤维细胞的体外培养体系,可为有关此类细胞的实验和疾病树鼩细胞模型提供技术支持。取树鼩大腿内侧皮肤用组织块贴壁法和胶原酶Ⅰ消化法分离皮肤细胞,胰蛋白酶差别消化法纯化细胞;用MEM(10%FBS)... 详细信息

建立稳定的树鼩(Tupaiabelangeri)皮肤成纤维细胞的体外培养体系,可为有关此类细胞的实验和疾病树鼩细胞模型提供技术支持。取树鼩大腿内侧皮肤用组织块贴壁法和胶原酶Ⅰ消化法分离皮肤细胞,胰蛋白酶差别消化法纯化细胞;用MEM(10%FBS)完全培养基和含低血清生长添加物(LSGS)的培养基培养细胞;免疫荧光和蛋白印迹法鉴定细胞,并测定细胞的生长、冻存和复苏特性。经树鼩皮肤细胞分离效果比较,胶原酶消化法比组织块贴壁法更适合用于树鼩原代皮肤细胞分离;对分离及冻存复苏后细胞生长状况观察比较发现,添加了LSGS的MEM培养基更利于细胞存活、生长;细胞形态观察、免疫荧光和蛋白印迹检测鉴定所分离的细胞为树鼩皮肤成纤维细胞。成功建立了树鼩原代皮肤细胞的分离、纯化方法,并优化了该细胞的培养条件。

关键词：树鼩原代皮肤成纤维细胞分离培养鉴定

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