检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物制品学杂志 2018年第5期31卷 547-551页

作者：周健李国良宋绍辉欧阳圣洁刘泽戴永娟廖国阳李卫东中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118

目的建立利用生物反应器制备Vero细胞流感H1N1全病毒灭活疫苗的新工艺。方法利用Vero细胞作为流感病毒增殖的细胞基质,分别以无血清培养液Pro VERO和含血清DMEM培养液,利用5 g/L微载体cytodex-1在3 L硅化生物反应器中进行培养,培养温度(... 详细信息

目的建立利用生物反应器制备Vero细胞流感H1N1全病毒灭活疫苗的新工艺。方法利用Vero细胞作为流感病毒增殖的细胞基质,分别以无血清培养液Pro VERO和含血清DMEM培养液,利用5 g/L微载体cytodex-1在3 L硅化生物反应器中进行培养,培养温度(37±0.5)℃,溶解氧(50±20)%,p H 7.2±0.2,搅拌速度(50±20)r/min,待细胞在微载体上长成单层后,以0.1 MOI接种流感病毒Vero细胞高产适应株H1N1/JD/Va,将收获的病毒液经Sepharose 4FF和Capto Q两级纯化,灭活后制备疫苗原液及成品,按照《中国药典》三部(2015版)方法对其进行检定。结果使用无血清细胞培养液培养Vero细胞24 h贴壁率约83%,含血清细胞培养液培养24 h贴壁率为112%;灌流培养方式培养至第6天时,细胞均长至单层,无血清细胞培养液最终细胞数达到(133.4±2.0)×10~4个/m L,含血清细胞培养液最终细胞数达到(353.4±5.9)×10~4个/m L。无血清病毒维持液培养,第66 h收获病毒液血凝效价为388,单位细胞产毒比例为2.9;含血清病毒维持液培养,第66 h收获病毒液血凝效价为891,单位细胞产毒比例为2.5。用含血清细胞培养液培养Vero细胞接种病毒,收获病毒液制备的疫苗原液及成品经检测,各项指标均符合《中国药典》三部(2015版)相关要求。结论建立了3 L生物反应器含血清细胞培养液培养Vero细胞和H1N1流感病毒的新工艺,为进一步放大生产规模奠定了基础。

关键词：生物反应器 Vero细胞微载体 H1N1流感病毒

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人二倍体细胞株KMB-17细胞代次检测模型的建立

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中国生物制品学杂志 2018年第1期31卷 28-30,34页

作者：李育中陈晨杨建波杨勤兴周海军寸韡中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118

目的建立人二倍体细胞株KMB-17细胞代次与端粒长度之间的关系模型。方法将KMB-17细胞按照1∶2的分种率连续传代,以传代后再长满瓶为1代,取第22、25、28和30代KMB-17细胞,提取基因组DNA,采用实时荧光定量PCR法检测端粒重复拷贝数(T)及单... 详细信息

目的建立人二倍体细胞株KMB-17细胞代次与端粒长度之间的关系模型。方法将KMB-17细胞按照1∶2的分种率连续传代,以传代后再长满瓶为1代,取第22、25、28和30代KMB-17细胞,提取基因组DNA,采用实时荧光定量PCR法检测端粒重复拷贝数(T)及单个拷贝基因(S),以T/S值表示不同代次KMB-17细胞的端粒长度。结果第22、25、28和30代KMB-17细胞的T/S值分别为1 224±48、818±86、671±118和505±41,T/S值随细胞代次的增加而降低。结论 KMB-17细胞代次与细胞端粒长度间具有明显相关性,即细胞代次越高,细胞端粒长度越短。

关键词：人二倍体细胞 KMB-17细胞细胞代次端粒

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基于Vero细胞的流感病毒高产株的研究进展

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中国生物制品学杂志 2018年第3期31卷 319-322页

作者：徐国峰廖国阳李卫东中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118

流感是由流感病毒引起的严重急性呼吸道疾病,目前,接种疫苗是预防流感的最有效手段。Vero细胞是WHO推荐用于生物制品的细胞系,大多数流感病毒在Vero细胞上生长性能较差,因此筛选一株具有Vero细胞稳定高产特性的流感病毒母本株是Vero细... 详细信息

流感是由流感病毒引起的严重急性呼吸道疾病,目前,接种疫苗是预防流感的最有效手段。Vero细胞是WHO推荐用于生物制品的细胞系,大多数流感病毒在Vero细胞上生长性能较差,因此筛选一株具有Vero细胞稳定高产特性的流感病毒母本株是Vero细胞流感疫苗研发及生产的关键环节。本文对流感病毒Vero细胞高产株几种选育方法的研究进展及影响流感病毒Vero细胞产量的相关因素作一综述。

关键词： Vero细胞流感病毒高产株疫苗

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去除百日咳毒素、丝状血凝素中内毒素的工艺探索

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中国生物制品学杂志 2018年第5期31卷 533-537页

作者：姬秋彦高娜梁疆莉胡文顾琴马艳戴永娟李婧妍史荔孙明波衡燮杨卉娟中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118

目的探讨无细胞百日咳疫苗纯化工艺中百日咳毒素(pertussis toxin,PT)、丝状血凝素(filamentous hemagglutinin,FHA)的内毒素去除问题。方法选用Triton法和离子交换层析法,分别对百日咳杆菌发酵液上清和经Capto SP Imp Res柱纯化的发酵... 详细信息

目的探讨无细胞百日咳疫苗纯化工艺中百日咳毒素(pertussis toxin,PT)、丝状血凝素(filamentous hemagglutinin,FHA)的内毒素去除问题。方法选用Triton法和离子交换层析法,分别对百日咳杆菌发酵液上清和经Capto SP Imp Res柱纯化的发酵液进行内毒素去除,按《中国药典》三部(2015版)相关方法检测纯化样品的蛋白含量、内毒素含量、抗原含量,并进行SDS-PAGE分析。结果使用Triton法和离子交换层析法均可以将FHA和PT这两种成分的内毒素在脱毒前阶段降低至200 EU/mg以下。在合适的纯化条件下使用离子层析去除内毒素的能力高于Triton法,而在对抗原的回收率上Triton法又稍占优势。结论使用Triton法和离子交换层析法均可解决FHA和PT去除内毒素的问题,两类工艺下对目的蛋白活性的影响有待进一步研究。

关键词：无细胞百日咳疫苗百日咳毒素丝状血凝素内毒素

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玛咖提取物作为流感疫苗佐剂的体液免疫效果及安全性

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中国生物制品学杂志 2018年第6期31卷 573-576页

作者：朱喆朱文勇马磊李映波中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118

目的探讨玛咖提取物作为流感疫苗佐剂的体液免疫效果及安全性。方法将BALB/c小鼠随机分为4组,每组10只,玛咖提取物佐剂组:含血凝素1.8μg,玛咖提取物0.2 mg;氢氧化铝佐剂组:含血凝素1.8μg,氢氧化铝0.2 mg;无佐剂疫苗组:含血凝素1.8μg... 详细信息

目的探讨玛咖提取物作为流感疫苗佐剂的体液免疫效果及安全性。方法将BALB/c小鼠随机分为4组,每组10只,玛咖提取物佐剂组:含血凝素1.8μg,玛咖提取物0.2 mg;氢氧化铝佐剂组:含血凝素1.8μg,氢氧化铝0.2 mg;无佐剂疫苗组:含血凝素1.8μg;生理盐水组:生理盐水。分别于0、21 d经小鼠腿部肌肉注射免疫2次,0.2 m L/(只·次)。初次免疫后,每隔7 d收集血清,测定小鼠血凝抑制抗体效价。初免后7 d内,每天称量1次小鼠体重,监测各组小鼠体重变化。结果 14、21、28、35、42、49和56 d时间点,玛咖提取物佐剂组小鼠血清血凝抑制抗体效价均显著高于无佐剂疫苗组,差异有统计学意义(P<0.05);与氢氧化铝佐剂组比较,玛咖提取物佐剂组小鼠血清血凝抑制抗体效价7、14和21 d差异无统计学意义(P>0.05),28、35、42、49和56 d差异有统计学意义(P<0.05);组内不同时间点的血凝抑制抗体效价差异有统计学意义(P<0.05);各组小鼠体重变化差异无统计学意义(P>0.05),注射部位未见不良反应。结论玛咖提取物作为疫苗佐剂具有良好的安全性,且佐剂效果明显,有望成为流感灭活疫苗的新型免疫佐剂。

关键词：玛咖流感疫苗佐剂体液免疫

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单纯疱疹病毒2型疫苗的研究进展

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微生物与感染 2019年第4期14卷 246-251页

作者：柳蕾李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus type 2,HSV-2)是人类疱疹病毒家族中α家族成员,可引起多年龄段的人群生殖器疱疹及其他疱疹疾病。由于该病毒具有复杂的基因结构及感染病理,其感染至今尚无有效的治疗方法。该病毒可抑制机体免疫... 详细信息

单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus type 2,HSV-2)是人类疱疹病毒家族中α家族成员,可引起多年龄段的人群生殖器疱疹及其他疱疹疾病。由于该病毒具有复杂的基因结构及感染病理,其感染至今尚无有效的治疗方法。该病毒可抑制机体免疫系统,在神经细胞潜伏感染,具有重激活特性,因此,其疫苗的研制亦需要复杂的技术,且面临重重的挑战。

关键词：单纯疱疹2型病毒疫苗感染

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Sabin株脊髓灰质炎病毒经透析处理后病毒回收效果评价

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中国生物制品学杂志 2018年第4期31卷 413-416页

作者：赵恒蔡秋龙袁梅李娜李娅娴杨佳刘正玲张晓丽蔡路奎易力中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118

目的采用透析法对Sabin株3个型别的脊髓灰质炎病毒收获液进行透析后的病毒回收效果评价。方法高病毒滴度时,对Sabin株Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型病毒收获液分别进行透析,比较每个型别病毒收获液透析前后的病毒感染性滴度回收率,及透析后的甲醛清除率... 详细信息

目的采用透析法对Sabin株3个型别的脊髓灰质炎病毒收获液进行透析后的病毒回收效果评价。方法高病毒滴度时,对Sabin株Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型病毒收获液分别进行透析,比较每个型别病毒收获液透析前后的病毒感染性滴度回收率,及透析后的甲醛清除率;低病毒滴度时,选取101、100、10-1 CCID_(50)/mL 3个滴度的Sabin株Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型病毒液,分别进行透析,将相同型别及滴度的透析前后样品接种至Hep-2细胞上进行3次传代,比较透析前后细胞病变比率及病毒滴度。结果高病毒滴度时,各型别病毒收获液透析后与透析前相比,样品体积和感染性滴度均未发生较大变化(P>0.05),透析后甲醛清除率达99%以上。101 CCID_(50)/mL低病毒滴度时,各型别病毒3次传代均能100%引起细胞病变;100 CCID_(50)/mL低病毒滴度时,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型病毒第1次传代引起细胞病变比率分别为66%、33%和33%,第2、3次传代均能100%引起细胞病变;10-1 CCID_(50)/mL低病毒滴度时,3个型别病毒3次传代均不能引起细胞病变。所有细胞病变后检测病毒滴度均在6.0 lgCCID_(50)/mL以上。结论 Sabin株3个型别的病毒收获液经透析后,活病毒的回收率较高,基本无损失,透析法可作为该病毒的纯化方法。

关键词： Sabin株脊髓灰质炎病毒透析感染性滴度回收率

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Sabin IPV疫苗在版纳小耳猪体内的免疫原性及安全性研究

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中国实验动物学报 2018年第3期26卷 331-334页

作者：寸怡娜蔡玮宋绍辉周健欧阳圣洁胡文李卫东廖国阳马磊中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118

目的评价Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(inactivated poliovirus vaccine derived from Sabin strain,s IPV)在版纳小耳猪体内的免疫原性及安全性,为新型动物模型提供实验依据。方法采用中国医学科学院医学生物学研究所已经上市的s IPV疫苗... 详细信息

目的评价Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(inactivated poliovirus vaccine derived from Sabin strain,s IPV)在版纳小耳猪体内的免疫原性及安全性,为新型动物模型提供实验依据。方法采用中国医学科学院医学生物学研究所已经上市的s IPV疫苗,设计s IPV肌肉免疫实验组与野毒株IPV(IPV derived from wild strain,w IPV)肌肉免疫对照组,以及生理盐水阴性对照组,按0、1、2月基础免疫程序,接种版纳小耳猪,于免疫接种前及每剂免疫接种后第30天釆血,检测各组的血清中和抗体水平,评价免疫原性,并通过观察小耳猪的状态及体重情况,评价安全性。结果版纳小耳猪3剂免疫后,s IPV试验组与w IPV对照组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型抗体阳转率均达到了100%,各型中和抗体几何平均滴度(GMT)均远高于1∶8保护水平。版纳小耳猪接种疫苗后体重增加,结果表明s IPV疫苗在版纳小耳猪动物模型中具有良好的安全性。结论 s IPV疫苗在版纳小耳猪体内具有良好的免疫原性及安全性,版纳小耳猪可作为评价s IPV疫苗的新型实验动物模型。

关键词： Sabin株脊髓灰质灭活疫苗版纳小耳猪安全性免疫原性

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CXCL5对DSS诱导的小鼠炎症性肠病的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2018年第3期38卷 187-192页

作者：宋杰胡雅洁李嘉祺胡云光郭磊梅俊杰刘龙丁中国医学科学院&北京协和医学院、医学生物学研究所、云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的本研究旨在探究CXC趋化因子配体5[chemokine （C-X-C motif） ligand 5, CXCL5]在葡聚糖硫酸钠（dextran sulfate sodium，DSS）诱导的炎症性肠病（inflammatory bowel disease, IBD）中的作用及其机制。方法使用3%DSS自由饮用构建小鼠IBD模型，分析CXCL5敲除对小鼠体重、临床症状、存活率、病理损伤和炎性因子分泌的影响。结果研究结果发现，DSS诱导的急性肠炎小鼠血清中的CXCL5明显高于正常对照组，敲除CXCL5后，DSS对小鼠的影响为体重减轻、存活期延长、病理损伤减轻、炎症减弱、炎症因子释放减少。结论以上结果说明，CXCL5可能在DSS诱导的小鼠急性肠炎中促进了炎症因子的释放从而加剧了病理损伤，这一研究结果初步提示CXCL5可能是肠炎治疗的一个重要候选靶标。

关键词：炎症性肠病 CXC趋化因子配体5 炎症因子

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us3基因的缺失对单纯疱疹病毒1型毒力和抗凋亡功能的影响

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微生物与感染 2019年第3期14卷 137-145页

作者：吴化叶牟唐维徐兴丽冯骁王丽春范胜涛李琦涵中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

利用CRISPR/Cas9系统使单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1) ul7、ul41、LAT 基因缺失构建M3减毒株(M3株),在M3株基础上通过缺失 us3 得到M4突变株(M4株)。本研究旨在分析野毒株(McKrae株)、M3株与M4株在毒力和抗细胞... 详细信息

利用CRISPR/Cas9系统使单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1) ul7、ul41、LAT 基因缺失构建M3减毒株(M3株),在M3株基础上通过缺失 us3 得到M4突变株(M4株)。本研究旨在分析野毒株(McKrae株)、M3株与M4株在毒力和抗细胞凋亡方面的差异。结果表明,McKrae组出现明显的临床症状,且100%死亡(P<0.001),而M3、M4组未出现临床症状。M4组小鼠组织中病毒载量明显低于McKrae组和M3组;病理学检测表明,McKrae组出现蛛网膜出血、胶质小结等现象,而M3、M4组未见病理损伤,M4组炎性因子表达与McKrae、M3组相比也显著下降(P<0.01);免疫后M4组较M3组出现高水平的中和抗体、γ干扰素(interferon γ,IFN-γ)和白细胞介素4(interleukin 4,IL-4)抗原特异性T细胞;McKrae株再次感染时,M4组小鼠组织中病毒载量明显低于对照组和M3组;在人急性T细胞淋巴瘤细胞中,M4株相比McKrae株和M3株可明显诱导细胞凋亡。

关键词：单纯疱疹病毒1型减毒株 us3基因细胞凋亡

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