检索结果-内蒙古大学图书馆

慢病毒载体介导HCV受体基因OCLN/CD81转染对树鼩骨髓间充质干细胞的影响

中国实验动物学报 2018年第6期26卷 700-707页

作者：陆彩霞孙晓梅王文广匡德宣李娜仝品芬李明学代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队昆明650118

目的观察在体外培养条件下,慢病毒载体介导的HCV受体基因OCLN/CD81转染对树鼩骨髓间充质干细胞生物学特性的影响及基因的表达情况。方法利用本室分离鉴定保存的树鼩BM-MSCs,构建含人OCLN/CD81基因的慢病毒载体,并分别将CD81和OCLN基因... 详细信息

目的观察在体外培养条件下,慢病毒载体介导的HCV受体基因OCLN/CD81转染对树鼩骨髓间充质干细胞生物学特性的影响及基因的表达情况。方法利用本室分离鉴定保存的树鼩BM-MSCs,构建含人OCLN/CD81基因的慢病毒载体,并分别将CD81和OCLN基因转染到BM-MSCs中,荧光倒置显微镜和流式细胞仪检测转染效率,CCK8法检测转染后BM-MSCs的细胞增殖情况,成骨成脂细胞诱导分化检测其多向分化潜能。采用实时荧光定量及WB方法检测HCV受体(OCLN/CD81)基因mRNA和蛋白表达情况和转染后BM-MSCs干性基因的表达。结果以MOI为100转染含人OCLN/CD81基因的慢病毒载体后,LV-CD81转染效率达99.4%,LV-OCLN转染效率22.6%。细胞增殖趋势与未转染基因的BM-MSCs相似,转染后的BM-MSCs仍可以向成骨成脂细胞分化,但能力有所下降。干性基因NANOG mRNA表达增高,差异有显著性(P<0.05),LIN28A mRNA表达下降,差异有显著性(P<0.05)。转染后树鼩BM-MSCs能高效表达所转入的外源基因。结论构建的含人OCLN/CD81基因的慢病毒载体可以成功转染树鼩BM-MSCs,并高效表达所转入的基因,转染后对树鼩BM-MSCs的多向分化潜能有一定的影响。

关键词： OCLN CD81 树鼩骨髓间充质干细胞

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

细胞条件性重编程技术的研究进展

引用

生命科学 2018年第6期30卷 628-636页

作者：李娜李翔李一佳陆彩霞中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南舜喜再生医学工程有限公司

细胞永生化培养技术一直是个难点,条件性重编程技术(conditional reprogramming,CR)可能解决这个问题。CR技术通过将铯源γ射线辐照过的Swiss-3T3-J2小鼠成纤维细胞和人正常细胞或肿瘤细胞共培养,向共培养体系中加入Rho相关蛋白激酶(Rho... 详细信息

细胞永生化培养技术一直是个难点,条件性重编程技术(conditional reprogramming,CR)可能解决这个问题。CR技术通过将铯源γ射线辐照过的Swiss-3T3-J2小鼠成纤维细胞和人正常细胞或肿瘤细胞共培养,向共培养体系中加入Rho相关蛋白激酶(Rho-associated kinase,ROCK)抑制剂Y-27632,使人正常细胞或肿瘤细胞获得部分干细胞特性和在体外无限制扩增的能力,并且撤除J2细胞和ROCK抑制剂之后,细胞能够重新定向分化为原细胞。CR技术在再生医学、药物敏感性测试、基因表达谱分析和异种移植研究等领域具有广阔的发展前景,但目前尚不清楚其具体机制。现从CR技术的研究现状、可能机制和实验方法进行综述,以期为CR技术的研究和应用提供更多的理论基础。

关键词：条件性重编程铯源γ射线 J2小鼠成纤维细胞 ROCK抑制剂Y-27632

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

MPTP诱导树鼩帕金森疾病模型行为学检测方法研究

引用

实验动物与比较医学 2019年第1期39卷 9-14页

作者：张志成宋庆凯黎晓慧李娜黄鑫袁圆王璇李明学代解杰昆明医科大学昆明650500 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队昆明650118

目的建立树鼩急性帕金森疾病(PD)模型,对Catwalk、FPA检测系统作为评价PD行为学的方法进行研究。方法选取14只成年、健康的普通级滇缅树鼩,随机分为模型组(n=10)和对照组(n=4),1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)药物腹腔注射建立急... 详细信息

目的建立树鼩急性帕金森疾病(PD)模型,对Catwalk、FPA检测系统作为评价PD行为学的方法进行研究。方法选取14只成年、健康的普通级滇缅树鼩,随机分为模型组(n=10)和对照组(n=4),1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)药物腹腔注射建立急性PD模型,对照组注射等体积0.9%氯化钠溶液。结果成功建立树鼩急性PD模型。建模1d后,与对照组树鼩相比,模型组树鼩空间利用指数下降、低运动性出现次数(BLM)指数显著升高(P均<0.001),表明模型组空间利用能力受损、活动度下降;模型组右前爪(RF)、左前爪(LF)最大接触面积减少,RF、LF和右后爪(RH)爪印最大接触面积平均压力,以及RF、RH、LF爪印平均压力及四肢平均力量均下降(P均<0.05),反映了树副肌肉僵硬度升高,可以作为PD步态分析的定量指标;0~15 Hz(TI1)震颤显著增强(P<0.01),能较好模拟PD患者静止性震颤的临床表现。结论MPTP致树鼩急性PD模型能较好模拟PD早期的临床表现。Catwalk、FDA检测系统可提供系统、客观、可靠的PD行为学数据。

关键词：帕金森疾病树鼩 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP) 动物模型行为学 Catwalk步态分析系统 FPA分析系统

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

EV71和CA16研究进展综述

引用

生命科学 2018年第3期30卷 241-247页

作者：宋杰胡雅洁董少忠中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

手足口病(hand-foot and mouth disease,HFMD)是一种全球性的传染病,其主要病原体为肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)和柯萨奇病毒A组16型(cosackievirus A 16,CA16)。EV71与CA16同属于小核糖核酸(ribonucleic acid,RNA)病毒科(Picornaviridae)肠道病毒属(Enterovirus)肠道病毒A型(Human enterovirus A)的成员,两者在病原学、感染和复制特征以及感染导致的临床症状和免疫反应有相似的方面,但也有明显不同的方面。现将对EV71和CA16相关的病原学、感染和复制特征以及临床症状和免疫反应研究进行综述。

关键词：肠道病毒71型柯萨奇病毒A组16型手足口病免疫反应

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

CV-A16疫苗候选株 K168-8Ac 低温连续传代效果的评价

引用

中国病毒病杂志 2019年第2期9卷 130-134页

作者：谢天宏宋霞杨婷李华龙润乡岳磊张也何鑫王正鑫谢忠平中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的通过对柯萨奇A组16型(coxsackievirus A16,CV-A16)K168-8Ac毒株低温连续传代后的生长稳定性和免疫原性进行评价,为柯萨奇A组16型减毒疫苗的研究提供指导。方法用本科室筛选的CV-A16疫苗候选株K168-8Ac在KMB17细胞上32℃连续传代到... 详细信息

目的通过对柯萨奇A组16型(coxsackievirus A16,CV-A16)K168-8Ac毒株低温连续传代后的生长稳定性和免疫原性进行评价,为柯萨奇A组16型减毒疫苗的研究提供指导。方法用本科室筛选的CV-A16疫苗候选株K168-8Ac在KMB17细胞上32℃连续传代到第80代(P80),从中选取8个代次的病毒P35、P40、P50、P60、P64、P66、P69、P80,分别进行感染性滴度检测,然后用这8个代次的病毒原液分别免疫BALB/c小鼠,初次免疫后60 d进行加强免疫,于初次免疫后28 d、60 d及加强免疫后7 d、21 d进行采血;同时选取第80代的病毒进行10倍系列稀释至10^(-7),分别用原液和10倍系列稀释的8个稀释度的病毒(即7.75 lgCCID_(50)/ml～1.75 lgCCID_(50)/ml)免疫BALB/c小鼠,初次免疫后第28天进行加强免疫,于初次免疫后28 d、加强免疫后7 d、加强免疫后21 d采血,用体外微量细胞病变法进行中和抗体效价检测。结果 K168-8Ac毒株在32℃条件下在KMB17细胞上连续传代后,8个代次的病毒均有较高的感染性滴度,感染性滴度在7.37 lgCCID_(50)/ml～7.75 lgCCID_(50)/ml间波动(平均为7.56 lgCCID_(50)/ml),表明其增殖特性较稳定。8个代次的病毒免疫小鼠后抗体效价及抗体阳转率之间差异均无统计学意义,初次免疫28 d(一次免疫)中和抗体效价GMT仅为1∶27.1(1∶11～1∶64),但初次免疫60 d时GMT比初次免疫28 d增长了2.0倍,达到1∶54.3;加强免疫后7 d、21 d GMT为1∶422.0和1∶1 140.0,分别比初次免疫28 d增长了15.6倍及42.1倍。用P80的病毒以7.75 lgCCID_(50)～1.75 lgCCID_(50)的剂量免疫小鼠,其中和抗体效价随感染剂量的降低而降低;初次免疫后第28天,7.75 lgCCID_(50)及6.75 lgCCID_(50)两个病毒剂量的中和抗体效价GMT分别为1∶32及1∶14,而5.75 lgCCID_(50)以下的剂量全部阴性;加强免疫后7 d及21 d,病毒含量低至4.75 lgCCID_(50)的GMT仍能达到1∶11,但低于3.75 lgCCID_(50)则为阴性,加强免疫后7 d及21 d,平均中和效价均小于1∶4;P80的病毒初次免疫后第28天加强免疫,加强免疫后7 d及21 d中和抗体GMT为1∶1 552、 1∶2 048;初次免疫后60 d加强免疫组,加强免疫后7 d及21 d GMT为1∶294.1、 1∶1 176.3。结论柯萨奇病毒A组16型K168-8Ac 32℃低温连续传代后具有良好的生长稳定性和免疫原性。

关键词：柯萨奇病毒A组16型疫苗低温传代感染性滴度中和抗体效价

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

树鼩PSEN1全长编码序列的克隆及分子特征分析

树鼩PSEN1全长编码序列的克隆及分子特征分析

引用

第十五届中国实验动物科学年会

作者：李明学王文广李娜匡德宣仝品芬黄鑫黎晓慧孙晓梅陆彩霞中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心昆明医科大学

目的获取树鼩早老素蛋白-1(PSEN1)的全长编码序列并进行分子特征分析。方法以树鼩脑组织总RNA为材料,通过RT-PCR、RACE-PCR扩增和序列拼接获得PSEN1基因全长编码序列,进而通过DNAMAN、MEGA等生物信息学软件对其序列和分子特征进行分析。... 详细信息

目的获取树鼩早老素蛋白-1(PSEN1)的全长编码序列并进行分子特征分析。方法以树鼩脑组织总RNA为材料,通过RT-PCR、RACE-PCR扩增和序列拼接获得PSEN1基因全长编码序列,进而通过DNAMAN、MEGA等生物信息学软件对其序列和分子特征进行分析。qRT-PCR和Western Blot进一步分析PSEN1在树鼩各个组织的表达模式。结果本研究克隆鉴定了树鼩PSEN1基因,其cDNA的开放阅读框全长1128 bp,编码375个氨基酸。通过系统发育谱系树、氨基酸序列对比分析,发现树鼩PSEN1与小鼠、大鼠等相比更接近人类和非人灵长类动物。qRT-PCR和western blot的结果表明,树鼩PSEN1在脑组织的表达量明显高于其他脏器组织。结论本研究成功克隆了树鼩PSEN1基因序列并进行分析,为今后进一步深入研究该基因功能和建立相关疾病动物模型提供理论基础。

关键词：树鼩 PSEN1 分子克隆系统发育分析

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

基于空气动力辅助离子化-超高分辨质谱成像技术的大鼠肾脏组织中多种类代谢物的分布研究

引用

分析化学 2018年第3期46卷 406-412页

作者：王中华何秉淑孙成龙宋肖炜贺玖明张瑞萍再帕尔·阿不力孜中央民族大学生命与环境科学学院生物成像与系统生物学研究中心中国医学科学院/北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室

质谱成像是近年来发展迅速的新型分子成像技术,在生物医药领域受到越来越广泛的关注。本研究采用敞开式的空气动力辅助离子化-高分辨质谱技术,建立了大鼠肾脏组织中内源性代谢物的质谱成像分析方法（AFAI-MSI）。大鼠肾脏组织经冷冻处... 详细信息

质谱成像是近年来发展迅速的新型分子成像技术,在生物医药领域受到越来越广泛的关注。本研究采用敞开式的空气动力辅助离子化-高分辨质谱技术,建立了大鼠肾脏组织中内源性代谢物的质谱成像分析方法（AFAI-MSI）。大鼠肾脏组织经冷冻处理后制备冷冻组织切片,以乙腈-异丙醇-水（4∶4∶2,V/V）为喷雾溶剂,流速为5μL/min,喷雾气（N2）压力为0.6 MPa,空气辅助气流速为45 L/min,质谱扫描范围为70～1000 Da,质量分辨率为70000。采用正离子检测模式的AFAI-MSI方法对大鼠肾脏组织切片进行了成像分析,结果发现有机胺、糖、神经递质、维生素、多肽、有机酸、甘油磷脂、鞘脂、甘油脂、固醇酯等38种不同类型、其含量差异达4个数量级的内源性代谢物,并观察到这些代谢物在肾脏中呈组织特异性分布,直观地呈现了与肾脏渗透压梯度形成有关的胆碱、乙酰胆碱、甜菜碱、磷酸胆碱和甘油磷酸胆碱等多种小分子代谢物的皮质-髓质轴向分布特征。上述结果表明,基于超高分辨质谱的AFAI-MSI分析方法无需样品预处理,灵敏度高,代谢物覆盖范围宽,可同时获取多种小分子代谢物的结构、含量及其空间分布信息,有望为肾脏中内源性代谢物的原位表征和代谢调控机制研究提供一种新的分析方法。

关键词：空气动力辅助离子化质谱成像小分子代谢物肾脏

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

1例HbH病合并β基因罕见纯合突变患者的实验室指标与表型分析

引用

检验医学 2019年第11期34卷 1057-1058页

作者：郭薇霞葛世军易薇番云华杨必清褚嘉祐杨昭庆中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所医学遗传学研究室云南昆明650118 德宏傣族景颇族自治州人民医院检验科云南芒市678402

血红蛋白(hemoglobin,Hb)H病是一种α-地中海贫血(简称地贫)中间型,其分子基础是4个α珠蛋白基因中有3个基因发生点突变或缺失,只能合成少量的α链,多余的β链聚合在一起,形成四聚体HbH(β4),从而导致溶血性贫血[1]。β珠蛋白基因突变... 详细信息

血红蛋白(hemoglobin,Hb)H病是一种α-地中海贫血(简称地贫)中间型,其分子基础是4个α珠蛋白基因中有3个基因发生点突变或缺失,只能合成少量的α链,多余的β链聚合在一起,形成四聚体HbH(β4),从而导致溶血性贫血[1]。β珠蛋白基因突变或缺失导致β链合成速率降低或缺如,可引起β-地贫[2]。HbH病复合β-地贫是一种罕见的地贫类型,由于具有显著的基因型异质性、临床表型异质性以及地区、民族差异性,HbH病复合β-地贫在地贫筛查中容易发生漏诊。

关键词：血红蛋白H病 β-地中海贫血突变基因检测

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

Hb E/Hb Hope双重杂合子的血液学特征和分子诊断

引用

国际检验医学杂志 2019年第19期40卷 2352-2355页

作者：葛世军郭薇霞易薇番云华杨必清褚嘉祐杨昭庆德宏傣族景颇族自治州人民医院检验科云南芒市678402 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所医学遗传学研究室云南昆明650118

目的分析1个傣族血红蛋白(Hb)E复合Hb Hope家系的血液学特征。方法采用全血细胞计数和毛细管Hb电泳检测该家系成员的血液学特点,采用PCR-流式荧光杂交法检测常见的α、β珠蛋白生成障碍性贫血基因突变,用Sanger DNA测序方法检测α、β... 详细信息

目的分析1个傣族血红蛋白(Hb)E复合Hb Hope家系的血液学特征。方法采用全血细胞计数和毛细管Hb电泳检测该家系成员的血液学特点,采用PCR-流式荧光杂交法检测常见的α、β珠蛋白生成障碍性贫血基因突变,用Sanger DNA测序方法检测α、β珠蛋白基因中的罕见突变。结果该家系中先证者的基因型为Hb E复合Hb Hope双重杂合子,血常规检测呈现小细胞低色素,Hb电泳检出含量为71.1%的异常电泳区带HbX,25.2%的Hb E区带,HbA2含量为3.7%,未检出HbA;先证者父亲为Hb Hope杂合子,血常规结果正常,检出含量约为40%的HbX,校正后的HbA2含量为2.9%;先证者母亲为Hb E杂合子,检出24.9%的Hb E带,HbA2高于3.5%。结论 Hb E复合Hb Hope异常血红蛋白病可呈现出较单独的杂合突变更为复杂的血液学表型,结合基因检测有助于揭示复杂血液学结果的分子机制,从而明确诊断,避免误诊和漏诊。

关键词：异常血红蛋白血红蛋白E 毛细管电泳

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

人未成熟朗格汉斯细胞的分选及鉴定

引用

细胞与分子免疫学杂志 2018年第7期34卷 577-582页

作者：王建斌王丽春柳蕾吴化叶程继帅李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的分离并鉴定健康人皮肤组织内未成熟状态的朗格汉斯细胞(LC)。方法把取得的人包皮组织剪成特定大小后采用分散酶Ⅰ(dispaseⅠ)消化过夜,分离表皮和真皮;Ⅰ型胶原蛋白酶在37℃消化表皮组织2 h并结合摇床振荡制成单细胞悬液,通过特异... 详细信息

目的分离并鉴定健康人皮肤组织内未成熟状态的朗格汉斯细胞(LC)。方法把取得的人包皮组织剪成特定大小后采用分散酶Ⅰ(dispaseⅠ)消化过夜,分离表皮和真皮;Ⅰ型胶原蛋白酶在37℃消化表皮组织2 h并结合摇床振荡制成单细胞悬液,通过特异性的分子标志物,应用流式细胞仪分选获得人CD3^-CD14^-CD1a^+CD45^+LC,采用免疫荧光技术检测CD207的表达对其进行鉴定,并用台盼蓝染色检测其活力。结果分选得到未成熟LC,纯度为91. 31%,平均存活率为93. 16%。结论成功分选获得活力好、纯度高的未成熟人LC。

关键词：人朗格汉斯细胞流式细胞仪免疫荧光鉴定

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：