检索结果-内蒙古大学图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2024年第2期44卷 162-169页

作者：孙誉芳赵慧杨惠洁谢莹鲍春婷李淑艳王浇磊李长贵广州医科大学研究生院广州511495 中国食品药品检定研究院呼吸道病毒疫苗室北京102629 北京协和医学院/中国医学科学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 长春生物制品研究所有限责任公司疫苗研究室长春130012

目的制备针对呼吸道合胞病毒(RSV)N蛋白的兔多克隆抗体,以其作为检测抗体建立基于ELISA的快速中和抗体检测方法。方法构建pET30a-N质粒,表达纯化N蛋白,免疫新西兰兔制备针对RSV N蛋白的多克隆抗体作为检测抗体。阳性血清系列稀释后与10... 详细信息

目的制备针对呼吸道合胞病毒(RSV)N蛋白的兔多克隆抗体,以其作为检测抗体建立基于ELISA的快速中和抗体检测方法。方法构建pET30a-N质粒,表达纯化N蛋白,免疫新西兰兔制备针对RSV N蛋白的多克隆抗体作为检测抗体。阳性血清系列稀释后与100半数组织培养感染剂量(TCID 50)/孔的RSV中和,接种Hep-2细胞培养,80%丙酮固定细胞,ELISA方法检测感染细胞中病毒的N蛋白,当每孔的吸光度值低于临界值时,视为中和试验阳性孔,阳性孔血清的最高稀释度为该血清的中和抗体滴度。优化抗体稀释度、检测时间、细胞密度及中和时间,建立基于N-ELISA的中和抗体检测方法,对建立的实验方法进行细胞代次、边缘孔效应、准确性、重复性以及精密度验证,初步应用于人RSV IgG阳性血清检测,分析与微量中和法的相关性。结果成功构建出pET30a-N质粒,表达纯化的N蛋白纯度较高,特异性良好;三免后兔血清效价为1∶51200,可特异性结合RSV;制备的抗RSV N兔多抗的效价为1∶51200,特异性良好,建立的快速中和抗体检测方法在4 d就可检测,中和时间可缩短至30 min,细胞代次、96孔板位置(边缘孔和非边缘孔)对该方法检测无影响,重复性、精密性、准确度良好,建立的方法和微量中和法检测64份RSV IgG阳性人血清,相关系数为0.9296,证明两种方法具有良好的正相关性。结论成功建立基于ELISA的快速中和抗体检测方法,可用于评价RSV疫苗接种后的血清抗体水平。

关键词：呼吸道合胞病毒中和抗体酶联免疫吸附试验

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IL-6对小鼠呼吸系统趋化因子表达谱及免疫细胞组成的影响

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免疫学杂志 2020年第8期36卷 670-675,682页

作者：杨谨溪范琪琪李楠郑惠文李恒杨泽宁陈燕丽候东佩郭磊刘龙丁中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所呼吸道病毒研究室昆明650118

目的探究IL-6对呼吸系统趋化因子表达谱及免疫细胞组成的影响。方法通过real-time PCR对IL-6敲除小鼠的上呼吸道鼻黏膜和下呼吸道肺组织中56种趋化因子及受体的表达谱进行芯片分析,利用流式细胞术对上下呼吸道中免疫细胞组成进行分析;... 详细信息

目的探究IL-6对呼吸系统趋化因子表达谱及免疫细胞组成的影响。方法通过real-time PCR对IL-6敲除小鼠的上呼吸道鼻黏膜和下呼吸道肺组织中56种趋化因子及受体的表达谱进行芯片分析,利用流式细胞术对上下呼吸道中免疫细胞组成进行分析;再使用IL-6蛋白对野生型小鼠进行滴鼻处理,检测鼻黏膜和肺组织内趋化因子表达谱和免疫细胞组成的改变。结果IL-6敲除后小鼠肺组织CXCL5表达显著降低,鼻黏膜中T细胞占比升高,肺组织中肺泡巨噬细胞和CD4^+T细胞占比均降低;IL-6滴鼻后鼻黏膜中CCL3、CXCL2和CXCL3的表达显著升高,肺组织中总白细胞占比显著减少,除中性粒细胞占比增加外,其它免疫细胞均有减少。结论降低或升高IL-6水平均可导致呼吸系统内多种趋化因子表达以及免疫细胞组成发生改变,提示IL-6可调节呼吸系统免疫,尤其是中性粒细胞的免疫反应。

关键词：白细胞介素-6 趋化因子趋化因子受体呼吸系统中性粒细胞

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诺如病毒感染模型的研究进展

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微生物学免疫学进展 2019年第4期47卷 75-79页

作者：吴琼雯(综述) 刘龙丁(审校) 昆明医科大学中国医学科学院昆明医学生物研究所呼吸道病毒研究室云南昆明650500 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所呼吸道病毒研究室云南昆明650031

诺如病毒(noroviruses, NoVs)为单股正链RNA病毒,属于杯状病毒科(Caliciviridae)诺如病毒属(Norovirus),是引起人类非细菌性急性胃肠炎的主要病原体。每年约有1亿人由于NoVs感染而发病,儿童、老年人以及免疫功能异常者均为易感人群,可... 详细信息

诺如病毒(noroviruses, NoVs)为单股正链RNA病毒,属于杯状病毒科(Caliciviridae)诺如病毒属(Norovirus),是引起人类非细菌性急性胃肠炎的主要病原体。每年约有1亿人由于NoVs感染而发病,儿童、老年人以及免疫功能异常者均为易感人群,可导致患者产生腹泻、呕吐等症状,严重者甚至死亡。由于NoVs的快速变异,无法在体外培养人诺如病毒及缺乏用于口腔感染的小动物模型,这就限制了对NoVs生物学特性的进一步研究。现就NoVs的病原学、病毒受体、细胞模型、动物模型等的研究作一概述。

关键词：诺如病毒受体体外培养系统动物模型肠道菌群疫苗

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Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗与不同剂型Ⅰ＋Ⅲ型脊髓灰质炎减毒活疫苗序贯接种的免疫原性和安全性比较

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中华预防医学杂志 2018年第1期52卷 43-49页

作者：叶慧黄腾英志芳李国良车艳春赵志梅王剑锋杨晓蕾史荔蒋蕊鞠刘小畅莫兆军李长贵杨净思昆明中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所 650118 广西壮族自治区疾病预防控制中心疫苗临床研究所中国食品药品检定研究院呼吸道病毒疫菌室

目的比较Ⅰ＋Ⅲ型脊髓灰质炎减毒活疫苗（人二倍体细胞）（bOPV）糖丸和液体剂型与Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗（sIPV）联合序贯免疫接种在≥2月龄婴儿中的免疫原性和安全性.方法于2015年9月至2016年6月,采用随机、盲法、单中心、平行... 详细信息

目的比较Ⅰ＋Ⅲ型脊髓灰质炎减毒活疫苗（人二倍体细胞）（bOPV）糖丸和液体剂型与Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗（sIPV）联合序贯免疫接种在≥2月龄婴儿中的免疫原性和安全性.方法于2015年9月至2016年6月,采用随机、盲法、单中心、平行对照设计,选择广西柳州市≥2月龄的婴儿为研究对象,将其分为1sIPV＋2bOPV和2sIPV＋1bOPV组,每种序贯免疫程序按bOPV剂型不同再分为糖丸剂型组与液体剂型组,即1sIPV＋2bOPV糖丸组、1sIPV＋2bOPV液体组、2sIPV＋1bOPV糖丸组、2sIPV＋1bOPV液体组,每组100名,按照0、28、56 d的免疫程序,共接种3剂.记录至少接种1剂次受试者（399名）不良反应事件;全程免疫后28 d,采集排除脱落者和违背试验方案者（共350名）血样,采用细胞培养微量中和试验测定抗脊灰病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中和抗体滴度（GMT）,计算抗体阳转率,并对其进行统计学分析.结果1sIPV＋2bOPV糖丸组、1sIPV＋2bOPV液体组、2sIPV＋1bOPV糖丸组、2sIPV＋1bOPV液体组全部不良反应发生率分别为79%（79/100）、76%（76/100）、80%（79/99）和74%（74/100）（χ2=1.23,P=0.747）;严重不良反应发生率分别为6%（6/100）、5%（5/100）、6%（6/99）和4%（4/100）（χ2=0.57,P=0.903）.全程免疫后,1sIPV＋2bOPV糖丸组、1sIPV＋2bOPV液体组、2sIPV＋1bOPV糖丸组、2sIPV＋1bOPV液体组Ⅰ型脊灰抗体阳转率分别为99%（86/87）、100%（83/83）、99%（87/88）、99%（91/92）（χ2=0.94,P=0.815）,Ⅱ型分别为47%（41/87）、57%（47/83）、80%（70/88）、79%（73/92）（χ2=31.56,P〈0.001）,Ⅲ型分别为100%（87/87）、99%（82/83）、100%（88/88）、99%（91/92）（χ2=2.02,P=0.568）;Ⅰ型脊灰抗体GMT分别为4539.68、6243.43、6819.53、7916.29（F=25.87,P〈0.001）,Ⅱ型分别为12.98、10.54、63.75、84.21（F=8.68,P=0.034）,Ⅲ型分别为1172.55、1416.03、2648.89、3250.75（F=14.50,P=0.002）.结论相同序贯免疫程序中,bOPV糖丸剂型与液体剂型在≥2月龄的婴儿中均具有良好的安全性和免疫原性;相同剂型不同免疫程序中,2sIPV组较1sIPV组产生更高的血清中和抗体水平,尤其表现在Ⅱ型、Ⅲ型免疫后抗体GMT水平.

关键词：脊髓灰质炎脊髓灰质炎病毒疫苗,灭活剂型

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肠道病毒EV-D68表面结构蛋白VP2、VP3的原核表达及其特异性分析

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国际免疫学杂志 2018年第5期41卷 477-485页

作者：龙海亭孔璟郑惠文李冰香张寒李恒刘玉斌范海涛于丽廖国阳孙明刘龙丁中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所呼吸道病毒实验室昆明650118 昆明学院医学检验与预防医学教研室昆明650214 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所生物制品八室昆明650118 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所廖国阳实验室昆明650118 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院感染内科北京100730

目的原核表达肠道病毒68型(enterovirus D68,EV—D68)表面结构蛋白VP2、VP3,分析其亲和力和结合力,得到具备高结合力的、可结合特异性记忆性B细胞的EV-D68病毒表面结构蛋白。方法采用PCR法扩增EV-D68病毒的VP2、VP3蛋白基因,插入原核表... 详细信息

目的原核表达肠道病毒68型(enterovirus D68,EV—D68)表面结构蛋白VP2、VP3,分析其亲和力和结合力,得到具备高结合力的、可结合特异性记忆性B细胞的EV-D68病毒表面结构蛋白。方法采用PCR法扩增EV-D68病毒的VP2、VP3蛋白基因,插入原核表达载体pGEX-5X-1,构建重组表达质粒pGEX-5X-1-VP2和pGEX-5X-1-VP3,转化到工程菌Rosetta(DE3)pLy中,异丙基硫代半乳糖苷(i-sopropyl β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,表达的重组蛋白形成包涵体,经超声洗涤、透析复性;采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel immunosorbent,SDS-PAGE)电泳、westem-blot鉴定重组蛋白;竞争性酶联免疫吸附检测(eIlzyme linked immunosorbent assay,EusA)检测蛋白VP2、VP3的蛋白活性和亲和力;藻红蛋白荧光素(phycoeryth面,PE)标记VP2和VP3重组蛋白,结合CD19-APC、CD27-nTc抗体,流式细胞术检测VP2、VP3蛋白结合特异性记忆性B细胞的情况。结果成功构建出重组表达质粒pGEX-5X-1-VP2和pGEX-5X-1-VP3,通过双酶切鉴定及测序分析,确认表达载体构建正确,通过表达纯化,成功获得EV-D68的VP2、VP3蛋白,SDS-PAGE电泳灰度扫描显示,VP2蛋白的纯度可达80%,VP3蛋白的纯度可达75%;经westem-blot和EusA鉴定,均有抗原特异性;通过竞争EusA检测,VP2亲和力常数为2.7×10^7M^-1,为中等亲和力;VP3亲和力常数为3.25×10^6M^-1,为低亲和力;通过流式细胞术可以检测到病毒攻击小鼠后脾脏细胞中的特异性记忆性B细胞。结论成功原核表达,复性纯化得到EV-D68VP2、EV-D68VP3蛋白,两个蛋白均具有较强的抗原特异性,利用流式细胞仪能检测到特异性记忆性B细胞。最终获得了具有较强结合能力,可用于分选抗原特异性记忆性B细胞的EV-D68表面结构蛋白VP2、VP3,为研究VP2、VP3蛋白的中和抗原表位及其广谱中和抗体的分选检测打下了基础。

关键词：肠道病毒68型 VP2蛋白 VP3蛋白原核表达

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