检索结果-内蒙古大学图书馆

2017年第十五届中国北方实验动物科技年会

作者：邢进冯育芳岳秉飞贺争鸣孙晓梅代解杰中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心

目的建立巴斯德杆菌的CODEHOPPCR快速检测方法,为实验动物的呼吸道细菌的控制提供参考。方法应用CODEHOP在线简并引物设计工具,比对Genbank中13株巴斯德杆菌的RNA聚合酶β亚基（rpoB）氨基酸序列设计简并引物。对建立CODEHOPPCR方法用2... 详细信息

目的建立巴斯德杆菌的CODEHOPPCR快速检测方法,为实验动物的呼吸道细菌的控制提供参考。方法应用CODEHOP在线简并引物设计工具,比对Genbank中13株巴斯德杆菌的RNA聚合酶β亚基（rpoB）氨基酸序列设计简并引物。对建立CODEHOPPCR方法用21株参考菌株进行特异性和敏感性评价,并应用于实验动物中的巴斯德杆菌检测。结果简并引物PastF6/PastR5扩增标准菌株的目的片段为200 bp左右。能够区分受试的巴斯德杆菌和主要的实验动物呼吸道病原菌。敏感性为0.2 pg/μL pg/μL。在受试的609只实验动物中呼吸道样品中检测出巴斯德杆菌阳性率为19.1%。样品阳性片段经测序验证,准确率为100%。结论所建立的方法具有良好的特异性和敏感性,可用于动物样品中巴斯德杆菌的检测。

关键词：巴斯德杆菌共有序列简并杂合寡核苷酸引物 PCR检测实验动物

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云南省实验动物饲料生产及质量体系建设的思考

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上海畜牧兽医通讯 2017年第6期 53-55页

作者：马进赵远郑红陈丽雄李艳艳杨凤梅禹文海徐鸿界王俊斌刘权段素琴和占龙中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118 云南省实验动物管理办公室云南昆明650500 昆明医科大学云南昆明650500

在生命科学研究领域中,实验动物发挥着重要作用,只有标准化的实验动物,才能获得高水平的实验结果。实验动物饲料的标准化是实验动物标准化的重要组成部分,也是提高实验动物质量的前提。本文分析实验动物饲料发展的现状和存在的问题,对... 详细信息

在生命科学研究领域中,实验动物发挥着重要作用,只有标准化的实验动物,才能获得高水平的实验结果。实验动物饲料的标准化是实验动物标准化的重要组成部分,也是提高实验动物质量的前提。本文分析实验动物饲料发展的现状和存在的问题,对云南省实验动物饲料生产及质量体系建设进行了阐述。

关键词：实验动物饲料生产质量体系

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BALB/c小鼠作为单纯疱疹病毒1型感染模型的免疫学分析

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微生物与感染 2017年第4期12卷 222-228页

作者：张小龙汤贝贝何玉凤段永忠王丽春张志晓周巨民李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 中国科学院/云南省动物模型与人类疾病机理重点实验室中国科学院昆明动物研究所昆明650223

在单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)小鼠感染及其相关研究中,临床病理和免疫学指标对其分析具有重要技术意义。本研究观察了HSV-1在不同条件下感染BALB/c小鼠后的多个免疫学指标,包括外周血单核细胞(peripheral bloo... 详细信息

在单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)小鼠感染及其相关研究中,临床病理和免疫学指标对其分析具有重要技术意义。本研究观察了HSV-1在不同条件下感染BALB/c小鼠后的多个免疫学指标,包括外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)群体中树突细胞比例及功能、血清中和抗体水平、PBMC中HSV-1抗原特异性T细胞水平,以及潜伏感染期小鼠神经组织中CD8^+T细胞浸润情况。结果显示,HSV-1毒株Mckrae、17^+以角膜及滴鼻途径感染3周龄及6周龄BALB/c小鼠后,小鼠PBMC中树突细胞数量增加,并显示出刺激病毒抗原特异性T细胞增殖的能力。病毒感染后35d,小鼠PBMC中未检测到白细胞介素4(interleukin 4,IL-4)^+抗原特异性T细胞,但能检测到低水平的γ干扰素(interferonγ,IFN-γ)^+抗原特异性T细胞;小鼠血清中未检测到或仅能检测到低水平的中和抗体。HSV-1以皮下及足垫注射途径感染BALB/c小鼠90d后,足垫感染途径较皮下感染诱导出更高水平的血清中和抗体,PBMC中可检测到IL-4^+及IFN-γ^+抗原特异性T细胞,但不同毒株及小鼠周龄之间出现T细胞反应程度差异。组织病理学结果表明,各组小鼠三叉神经组织中均有CD8^+T细胞浸润。这些结果提示,不同HSV-1毒株以不同途径感染不同周龄BALB/c小鼠后,均可刺激树突细胞成熟及呈递病毒抗原,但血清中和抗体及PBMC中病毒抗原特异性T细胞水平在不同毒株、感染途径及小鼠周龄之间有差异。

关键词： BALB/c小鼠单纯疱疹病毒1型免疫学分析

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小鼠resistin基因慢病毒表达载体构建及在KMB17细胞中的表达

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生物技术 2016年第2期26卷 119-125,135页

作者：陈瑜赵远岳俊李鸿钧和占龙马开利马进吴正存唐东红鲁帅尧中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所中国医学科学院医学灵长类动物研究中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

[目的]构建携带小鼠resistin基因的慢病毒表达载体,并高效转导靶细胞。[方法]从小鼠脂肪组织提取总RNA,经PCR扩增、酶切、连接、转化后构建重组质粒;通过293T细胞包装为重组慢病毒颗粒,然后感染KMB17细胞,检测小鼠resistin基因在靶细胞... 详细信息

[目的]构建携带小鼠resistin基因的慢病毒表达载体,并高效转导靶细胞。[方法]从小鼠脂肪组织提取总RNA,经PCR扩增、酶切、连接、转化后构建重组质粒;通过293T细胞包装为重组慢病毒颗粒,然后感染KMB17细胞,检测小鼠resistin基因在靶细胞中的表达。[结果]PCR扩增到预期的342 bp大小的resistin基因目的片段;构建的重组质粒经酶切得到了342 bp大小的目的片段,测序鉴定为小鼠resistin基因序列;重组慢病毒包装可观察到很强的绿色荧光,说明具有较高的质粒转染效率;重组慢病毒感染KMB17后可检测到小鼠resistin基因转录水平和蛋白水平的表达,证明resistin基因得到有效转导并可在靶细胞中高水平表达。[结论]成功构建了携带小鼠resistin基因的慢病毒表达载体并可在KMB17靶细胞中获得高效表达。

关键词： resistin 慢病毒载体靶细胞表达小鼠

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中国非人灵长类动物种质资源现状、问题与发展策略的思考

中国非人灵长类动物种质资源现状、问题与发展策略的思考

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第十五届中国西部实验动物管理与学术交流会

作者：代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所中国实验动物学会灵长类专业委员会昆明650118

非人灵长类实验动物是人类近亲，与人类的遗传物质有75％～ 98.5％的同源性，在组织结构、生理和代谢功能等方面同人类相似，最易解决人类相似的疾病及其发病机制，有些人类疾病只有用非人灵长类实验动物做实验才能成功，是其他实验动...

非人灵长类实验动物是人类近亲，与人类的遗传物质有75％～ 98.5％的同源性，在组织结构、生理和代谢功能等方面同人类相似，最易解决人类相似的疾病及其发病机制，有些人类疾病只有用非人灵长类实验动物做实验才能成功，是其他实验动物不可替代的，成为解决人类健康与疾病问题的基础研究和临床前研究的理想实验动物模型.非人灵长类实验动物的研究将成为促进中国生命科学某些领域的发展或突破，如人类疾病模型、药物开发、神经科学、基因组学和进化生物学、干细胞、以及治疗性克隆研究等.非人灵长类实验动物作为重要的科技支撑条件，在人类疾病的发病机理、诊断、治疗、预防、生物医药和生物制品的生产与质量评价，在引领和支撑生命科学研究、生物技术创新和生物医药产业发展中发挥着不可或缺的重要作用，其战略地位受到了世界各国的普遍重视.本文总结了我国目前非人灵长类动物的资源状况、分布及应用情况;国家支持的基地和平台建设情况及亮点成就.同时，分析了与国外比较存在的差距与急需解决的问题，提出了我国非人灵长类动物资源发展、共享的策略，为我国非人灵长类动物在生命科学和生物医药研究领域中的应用提供有力的支撑，以及产业化发展提供新的思路.

关键词：

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LPS/D-gal诱导小鼠急性肝炎模型及mTOR信号的变化

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中国实验动物学报 2015年第3期23卷 306-311页

作者：李晓菲陶玉芬刘建生李超梁新新叶尤松唐东红刘红旗中国医学科学院和北京协和医学院医学生物学研究所感染与免疫学实验室昆明650118 中国医学科学院医学生物学研究所小动物实验部昆明650118

目的探索LPS/D-gal诱导的急性肝炎中mTOR信号的变化。方法LPS/D-gal通过腹腔注射ICR雌性小鼠诱导急性肝炎模型。观察记录24h内的存活率或在注射后6h收集血清和肝脏组织样本,进行相关的分析。结果LPS/D-gal注射24h内引起小鼠急性死亡。... 详细信息

目的探索LPS/D-gal诱导的急性肝炎中mTOR信号的变化。方法LPS/D-gal通过腹腔注射ICR雌性小鼠诱导急性肝炎模型。观察记录24h内的存活率或在注射后6h收集血清和肝脏组织样本,进行相关的分析。结果LPS/D-gal注射24h内引起小鼠急性死亡。注射后6h,引起血清中转氨酶水平明显升高。肝脏组织炎性因子Tnfa和Il6表达水平上调。HE染色显示明显的炎症细胞浸润,研究结果表明LPS/D-gal可诱导ICR小鼠成为急性肝炎动物模型。此外,肝脏组织免疫印迹分析发现,mTOR和NF-κB信号通路被激活,凋亡相关蛋白Caspase-3的活性增加,凋亡特征性的DNA片段化也显著增强。然而mTOR信号的抑制剂雷帕霉素并不能控制LPS/D-gal引起的肝脏凋亡和提高存活率。结论mTOR信号在LPS/D-gal诱导的急性肝炎的致病机制中可能发挥多重作用。

关键词： LPS/D-gal 急性肝炎凋亡小鼠模型

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嗜血杆菌属CODEHOP PCR检测方法的建立及在树鼩检测中的应用

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中国人兽共患病学报 2015年第11期31卷 994-1000页

作者：邢进冯育芳岳秉飞贺争鸣孙晓梅代解杰中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所北京100050 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118

目的建立树鼩中嗜血杆菌的CODEHOP PCR快速检测方法,为树鼩微生物质量控制提供参考。方法应用CODEHOP在线简并引物设计工具,比对NCBI中6株嗜血杆菌的外膜蛋白序列设计简并引物。通过4株嗜血杆菌标准菌株和24株它属菌株进行特异性和敏感... 详细信息

目的建立树鼩中嗜血杆菌的CODEHOP PCR快速检测方法,为树鼩微生物质量控制提供参考。方法应用CODEHOP在线简并引物设计工具,比对NCBI中6株嗜血杆菌的外膜蛋白序列设计简并引物。通过4株嗜血杆菌标准菌株和24株它属菌株进行特异性和敏感性评价,将建立CODEHOP PCR检测方法,应用于树鼩嗜血杆菌的检测。结果简并引物HF1/HR8和HF3/HR3扩增标准菌株副鸡嗜血杆菌(ATCC 29545)、溶血嗜血杆菌(ATCC 33390)、流感嗜血杆菌(ATCC33391)、副流感嗜血杆菌(ATCC 33392)的目的片段分别为506bp^535bp和344bp^390bp,经测序和NCBI Blast比对,结果准确。两对引物组合,能够有效的区分嗜血杆菌属菌株与它属菌株,检测限最低可达2.1pg/μL。在受试的野生树鼩呼吸道样本中嗜血杆菌阳性率为33.3%(20/60)。结论所建立的方法具有较好的特异性和敏感性,操作简便,能够用于动物样品的嗜血杆菌检测。

关键词：嗜血杆菌 CODEHOP PCR 树鼩简并引物检测

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利用CRISPR/CAS9技术介导LoxP序列靶向引入小鼠SM22α基因

利用CRISPR/CAS9技术介导LoxP序列靶向引入小鼠SM22α基因

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第十二届中国实验动物科学年会

作者：刘超董伟李冰谢英苏利波张力韩梅河北省实验动物重点实验室河北医科大学实验动物学部北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所河北省实验动物重点实验室河北医科大学实验动物学部北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所河北医科大学生物化学与分子生物学教研室河北省医学生物技术重点实验室

目的平滑肌22α(SM22α)是平滑肌细胞(VSMC)骨架相关蛋白,参与VSMC骨架重构,与动脉粥样硬化、高血压等血管重塑性疾病与关.本研究旨在在SM22α基因内部引入LoxP序列,制备基于Cre/LoxP系统的SM22α条件性基因敲除小鼠,研究其在VSMC骨架... 详细信息

目的平滑肌22α(SM22α)是平滑肌细胞(VSMC)骨架相关蛋白,参与VSMC骨架重构,与动脉粥样硬化、高血压等血管重塑性疾病与关.本研究旨在在SM22α基因内部引入LoxP序列,制备基于Cre/LoxP系统的SM22α条件性基因敲除小鼠,研究其在VSMC骨架重构中的作用机制.方法利用CRISPR/Cas9技术编辑小鼠SM22α基因.在外显子1～2和3～4的非编码区各设计sgRNA位点并将其定向克隆至pUC57-sgRNA.设计包含外显子2、3及2个LoxP序列且两侧各带有700bp同源臂的环状供体载体.Cas9的mRNA使用mMESSAGE mMACHINE(R) T7Ultra Kit进行体外转录,sgRNA使用线性化的spUC57-sgRNA重组质粒作为模板用MEGAshortscriptTM Kit体外转录合成.将制备好Cas9 mRNA、sgRNA和供体质粒进行混合,其浓度分别为Cas9 mRNA 25 ng/μl,sgRNA 10 ng/μl,供体质粒4 ng/μl.水平显微注射法将其导入170枚C57BL/6×B6D2F1受精卵原核.将注射后存活的约140枚受精卵移植入5只当日见栓的假孕KM雌鼠输卵管中,得到17只子代小鼠,经PCR和测序筛选目标小鼠.结果有一只小鼠等位基因的特定位点插入了LoxP序列,三只小鼠删除了SM22α基因的第2第3外显子.结论借助CRISPR/Cas9技术得到了SM22α基因内部引入LoxP序列的小鼠和SM22α基因敲除小鼠,为研究SM22α在VSMC中的作用机制提供了重要实验条件.

关键词： SM22α VSMC骨架重构 CRISPR/CAS9

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基于表面添加技术的定量质谱成像方法研究

基于表面添加技术的定量质谱成像方法研究

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第六届全国药物分析大会

作者：罗志刚何菁菁贺玖明黄澜再帕尔·阿不力孜中国医学科学院/北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室北京100050 中国医学科学院/北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室北京100050 教育部高等教育教学评估中心北京100081 中国医学科学院/北京协和医学院医学实验动物研究所北京100021 中国医学科学院/北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室北京100050 中央民族大学生物成像与系统生物学研究中心北京100081

在新药研发过程中，定量表征候选新药在动物体内的分布情况对于阐明药物的药效和毒副作用至关重要。定量质谱成像方法因其能够同时提供药物含量及空间分布信息，将成为药效及毒理研究的重要工具。

关键词：表面添加技术空气动力辅助离子化定量质谱成像方法

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利用CRISPR/CAS9技术介导LoxP序列靶向引入小鼠SM22α基因

利用CRISPR/CAS9技术介导LoxP序列靶向引入小鼠SM22α基因

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第十二届中国实验动物科学年会（2016.南宁）

作者：刘超董伟李冰谢英苏利波张力韩梅河北省实验动物重点实验室河北医科大学实验动物学部北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所河北医科大学生物化学与分子生物学教研室河北省医学生物技术重点实验室

目的平滑肌22α（SM22α）是平滑肌细胞（VSMC）骨架相关蛋白,参与VSMC骨架重构,与动脉粥样硬化、高血压等血管重塑性疾病与关。本研究旨在在SM22α基因内部引入LoxP序列,制备基于Cre/L0xP系统的SM22α条件性基因敲除小鼠,研究其在VSMC... 详细信息

目的平滑肌22α（SM22α）是平滑肌细胞（VSMC）骨架相关蛋白,参与VSMC骨架重构,与动脉粥样硬化、高血压等血管重塑性疾病与关。本研究旨在在SM22α基因内部引入LoxP序列,制备基于Cre/L0xP系统的SM22α条件性基因敲除小鼠,研究其在VSMC骨架重构中的作用机制。方法利用CRISPR/Cas9技术编辑小鼠SM22α基因。在外显子1～2和3～4的非编码区各设计sgRNA位点并将其定向克隆至pUC57-sgRNA。设计包含外显子2、3及2个LoxP序列且两侧各带有700bp同源臂的环状供体载体。Cas9的mRNA使用mMESSAGE mMACHINE（?）T7Ultra Kit进行体外转录,sgRNA使用线性化的spUC57-sgRNA重组质粒作为模板用MEGAshortscriptKit体外转录合成。将制备好Cas9 mRNA、sgRNA和供体质粒进行混合,其浓度分别为Cas9 mRNA 25 ng/μl,sgRNA 10 ng/μl,供体质粒4 ng/μl。水平显微注射法将其导入170枚C57BL/6×B6D2F1受精卵原核。将注射后存活的约140枚受精卵移植入5只当日见栓的假孕KM雌鼠输卵管中,得到17只子代小鼠,经PCR和测序筛选目标小鼠。结果有一只小鼠等位基因的特定位点插入了LoxP序列,三只小鼠删除了SM22α基因的第2第3外显子。结论借助CRISPR/Cas9技术得到了SM22α基因内部引入LoxP序列的小鼠和SM22α基因敲除小鼠,为研究SM22α在VSMC中的作用机制提供了重要实验条件。

关键词： SM22a VSMC骨架重构 CRISPR/CAS9

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