检索结果-内蒙古大学图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2024年第2期44卷 101-109页

作者：张恒肖红剑李海巍杨耀云段金梅李智华中国医学科学院医学生物学研究所病原体感染防控教育部重点实验室(北京协和医学院)昆明650031

目的通过基因序列设计及优化,构建质粒并表达纯化出4种呼吸道合胞病毒(RSV)PreF蛋白,对其免疫原性进行评价。方法分别用Human和CHO密码子优化Coronin-1A和T4三聚体蛋白基因序列,并添加到RSV F蛋白序列后,将上述质粒转染Expi293F细胞进... 详细信息

目的通过基因序列设计及优化,构建质粒并表达纯化出4种呼吸道合胞病毒(RSV)PreF蛋白,对其免疫原性进行评价。方法分别用Human和CHO密码子优化Coronin-1A和T4三聚体蛋白基因序列,并添加到RSV F蛋白序列后,将上述质粒转染Expi293F细胞进行蛋白质表达,收获上清经镍柱纯化后,制备出4种三聚体蛋白,并进行SDS-PAGE分析及Western blot鉴定。于0周和3周免疫动物,采血后进行结合抗体和中和抗体活性检测。结果SDS-PAGE分析及Western blot鉴定结果表明,制备及表达的4种蛋白质具有稳定的三聚体结构;抗原抗体亲和力试验表明,4种三聚体蛋白与RSV特异性单抗8897、D25、Motavizumab、AM14和Palivizumab的亲和力均很强;免疫血清的结合抗体效价和中和抗体效价结果表明,初次免疫后,两种T4三聚体蛋白诱导的抗体水平更高,再次免疫后,Human密码子优化的三聚体蛋白抗体增长幅度较高。结论两种不同的异源三聚体基序添加均可产生有效的三聚体PreF蛋白,并能在小鼠体内诱导出有效的结合抗体和中和抗体。

关键词：呼吸道合胞病毒 PreF三聚体蛋白抗体效价

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呼吸道合胞病毒PreF和PostF重组蛋白疫苗的免疫原性评价

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第2期44卷 110-119页

作者：陈佳敏肖红剑杨耀云张恒李智华李倩倩中国医学科学院医学生物学研究所病原体感染防控教育部重点实验室(北京协和医学院)昆明650031 云南大学生命科学学院昆明650091

目的对比呼吸道合胞病毒(RSV)融合前F蛋白(PreF)和融合后F蛋白(PostF)的免疫原性差异。方法通过SDS-PAGE及Western blot鉴定PreF和PostF的表达,使用Octet仪器检测F蛋白与特异性抗体的亲和力,用PreF和PostF免疫小鼠,检测免疫血清的结合... 详细信息

目的对比呼吸道合胞病毒(RSV)融合前F蛋白(PreF)和融合后F蛋白(PostF)的免疫原性差异。方法通过SDS-PAGE及Western blot鉴定PreF和PostF的表达,使用Octet仪器检测F蛋白与特异性抗体的亲和力,用PreF和PostF免疫小鼠,检测免疫血清的结合抗体与中和抗体差异。结果PreF经改造后以稳定的三聚体形式存在,与单抗D25、8897、AM14、Palivizumab以及Motavizumab均具有很高的亲和力,但PostF缺乏表位Ø构象,并呈现单体构象,与D25、8897、AM14并无明显结合。PreF和PostF免疫小鼠的研究发现,AS01佐剂比铝佐剂更能诱导出高滴度结合抗体和针对RSV Long株的中和抗体。PreF与PostF免疫后诱导的结合抗体与PreF的结合能力相当,PostF免疫后诱导的结合抗体与PostF的结合水平显著高于PreF。结论PreF拥有更多的抗体结合表位,改造后稳定的PreF三聚体重组蛋白能够诱导更强的中和抗体。同时,AS01佐剂免疫效果优于铝佐剂。因此,基于PreF稳定的三聚体结构改造及佐剂的研发对于RSV疫苗的发展至关重要。

关键词：呼吸道合胞病毒重组F蛋白融合前构象佐剂免疫评价

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人偏肺病毒融合蛋白疫苗研究进展

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第7期44卷 608-613页

作者：王怡丹李智华毕研伟李倩倩中国医学科学院医学生物学研究所病原体感染防控教育部重点实验室(北京协和医学院)昆明650031 云南大学生命科学学院昆明650091

人偏肺病毒是一种常见的呼吸道病毒,属肺炎病毒科偏肺病毒属,2001年首次发现于荷兰,全球广泛分布,能够反复感染婴幼儿、老年人及免疫功能低下者,并引起急性呼吸道感染。目前,尚无有效的预防性疫苗批准上市。本文主要概述人偏肺病毒的病... 详细信息

人偏肺病毒是一种常见的呼吸道病毒,属肺炎病毒科偏肺病毒属,2001年首次发现于荷兰,全球广泛分布,能够反复感染婴幼儿、老年人及免疫功能低下者,并引起急性呼吸道感染。目前,尚无有效的预防性疫苗批准上市。本文主要概述人偏肺病毒的病毒学和流行病学特征,介绍其潜在疫苗关键免疫原融合蛋白的结构和抗原位点,以及基于融合蛋白设计的亚单位疫苗、减毒活疫苗和核酸疫苗研究的最新进展。

关键词：人偏肺病毒疫苗融合蛋白抗原设计

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脊髓灰质炎病毒Sabin株I型感染性克隆的构建及鉴定

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病毒学报 2025年第3期 741-748页

作者：贺小月楚菡傅亦娴赵钰萍廖婧杉杨净思赵婷中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所中国医学科学院呼吸和共病全国重点实验室昆明市新发突发高致病性病原体疫苗研发和产业化企业科技创新中心香港中文大学(深圳)

新型脊髓灰质炎（脊灰）疫苗的构建和病毒减毒机制的探索需要建立脊灰病毒的反向遗传学操作平台。本研究以p GEM T-easy为载体构建Sabin株I型全长c DNA感染性克隆质粒。经体外转录为RNA后转染至Vero细胞进行病毒拯救，48h后观察到明显... 详细信息

新型脊髓灰质炎（脊灰）疫苗的构建和病毒减毒机制的探索需要建立脊灰病毒的反向遗传学操作平台。本研究以p GEM T-easy为载体构建Sabin株I型全长c DNA感染性克隆质粒。经体外转录为RNA后转染至Vero细胞进行病毒拯救，48h后观察到明显的细胞病变效应，获得Sabin株I型拯救病毒，并对拯救病毒的各项生物学特征进行观察和验证。拯救病毒的中和活性与Sabin株I型母株相同，病毒感染性滴度为1×109TCID50/m L，保留了在Vero细胞中复制的特性，与母株相比具有相似的生长曲线，在12～36 h病毒呈指数增长，在36 h复制达到最高峰。透射电子显微镜检测Sabin株I型拯救病毒，可见20～30 nm二十面体病毒颗粒。本研究成功构建脊灰Sabin株I型全长感染性克隆载体，获得脊灰Sabin株I型拯救病毒，为进一步研究脊灰病毒的致病机制及新型疫苗的研发提供了技术平台。

关键词：脊髓灰质炎病毒反向遗传学病毒拯救

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分光光度法检测组分无细胞百白破联合疫苗原液及成品中尿素残留量的适用性验证

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微生物学免疫学进展 2024年第6期52卷 39-46页

作者：姬光廖宏玮刘兴康张玉蓉张佳熠马瑞岚罗浩帆蔡路奎中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所、昆明市新发突发高致病性病原体疫苗研发和产业化企业科技创新中心联合疫苗实验室云南昆明650118

目的建立检测组分无细胞百白破联合疫苗(diphtheria,tetanus,and acellular component pertussis combined vaccine,DTacP)原液及成品中尿素残留量的分光光度(spectrophotometry)检测方法,并对其进行方法学验证和初步应用。方法采用分光光度法,通过对加热时间的考察,建立检测百日咳毒素(pertussis toxin,PT)原液、百日咳丝状血凝素(filamentous hemagglutinin,FHA)原液及DTacP成品中尿素残留量的方法。对该方法的反应体系、线性、最低检出限、稳定性及准确度进行验证,并采用该分光光度法检测3批PT原液、3批FHA原液和3批DTacP成品中尿素残留量。结果最佳加热时间为40 min。3.90 mL反应体系和13.00 mL反应体系所得R~2差异无统计学意义(P>0.05);在0.0125~2.0000 mg/L范围内,标准曲线线性良好(R~2≥0.998);最低检出限L=0.0010 mg/L;平行测量和在60 min内读取吸光度均具有良好的稳定性(RSD为0.15%和1.09%);准确度验证试验中,3批PT原液添加3个浓度尿素标准品的回收率在90.08%~103.42%之间,3批FHA原液添加3个浓度尿素标准品的回收率在92.12%~105.44%之间,3批DTacP成品添加3个质量浓度尿素标准品的回收率在90.25%~95.37%之间。3批PT原液、3批FHA原液和3批DTacP成品中尿素残留量检测结果均为合格。结论建立的分光光度法能够准确、有效地检测PT原液、FHA原液及DTacP成品中尿素残留量。

关键词：组分无细胞百白破联合疫苗尿素二乙酰一肟安替比林分光光度法

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细胞治疗技术分类和发展历程

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医学研究杂志 2024年第7期53卷 163-168页

作者：陆茗旸董鹏张建民陈慧何维 T细胞与免疫治疗重点实验室、医学生物学重点实验室、中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院 100005 常州西太湖细胞治疗前沿技术研究院 213000 细胞生态海河实验室天津300020 北京佳德和细胞治疗技术有限公司 101111

细胞治疗是利用患者自体(或同种异体)的细胞,对组织、器官进行修复的治疗方法。然而因为细胞是一个成分复杂、精细调控的活的有机整体,要将其用作药物面临着很大的挑战。因此细胞治疗虽有百年历史,但直到2017年第一个嵌合抗原受体T细胞(... 详细信息

细胞治疗是利用患者自体(或同种异体)的细胞,对组织、器官进行修复的治疗方法。然而因为细胞是一个成分复杂、精细调控的活的有机整体,要将其用作药物面临着很大的挑战。因此细胞治疗虽有百年历史,但直到2017年第一个嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)疗法获批上市,才标志着现代医学进入细胞治疗时代。细胞治疗主要包括干细胞治疗和免疫细胞治疗。干细胞应用广泛,不同来源的干细胞产品为多种神经系统、免疫系统相关复杂难治的疾病的治疗提供了有效途径。随着CAR-T细胞疗法在肿瘤免疫治疗中的成功,多种免疫细胞治疗技术得到了迅猛发展,成为恶性肿瘤治疗领域的研究热点,并逐渐扩大到其他的疾病治疗领域。近年来我国在细胞治疗领域研发水平取得了长足的发展,然而这些细胞治疗技术仍面临着诸多挑战。与传统分子药物比较,细胞治疗是一种高技术型的创新性疾病治疗方案,本文对整个细胞治疗技术的分类、发展历程和最新的研究进展及挑战进行综述,希望能为整个行业的快速发展提供助力。

关键词：细胞治疗干细胞免疫细胞

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结核分枝杆菌新型亚单位疫苗的初步研究

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云南大学学报（自然科学版） 2020年第4期42卷 768-774页

作者：时宇陶玉芬刘建生刘红旗中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所感染和免疫实验室云南昆明650118

为了研发结核新型亚单位疫苗,以纳米颗粒为载体展示结核分枝杆菌主要抗原ESAT6.将ESAT6基因片段克隆到位于pGEX-4T-1载体上的诺如病毒P结构域的Loop2中,转入大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,用GST亲和柱纯化,并通过FPLC分析嵌合纳米颗粒的形... 详细信息

为了研发结核新型亚单位疫苗,以纳米颗粒为载体展示结核分枝杆菌主要抗原ESAT6.将ESAT6基因片段克隆到位于pGEX-4T-1载体上的诺如病毒P结构域的Loop2中,转入大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,用GST亲和柱纯化,并通过FPLC分析嵌合纳米颗粒的形成效率,最后免疫BALB/c小鼠进行免疫原性的评价.结果表明:研究成功地将ESAT6基因克隆至诺如病毒P结构域的Loop2中,且空间结构模拟提示ESAT6能展示在P纳米颗粒的表面.FPLC分析表明,表达的嵌合蛋白可以高效地自我组装成纳米颗粒.用该嵌合颗粒免疫小鼠后,能诱导产生针对ESAT6重组嵌合颗粒的特异性抗体.进一步分析发现,诱导的抗体主要针对ESAT6的51~70肽段,而不是1~20肽段.综上,研究通过诺如病毒P颗粒成功地展示了结核分枝杆菌主要抗原ESAT6,为进一步研发结核新型亚单位疫苗奠定了基础.

关键词：结核 ESAT6 纳米颗粒亚单位疫苗中和抗原表位

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4种人脐带间充质干细胞来源外泌体提取方法的比较

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中国生物制品学杂志 2025年第1期38卷 89-95页

作者：赵永美孟明耀李金美宋泽鑫周艳杨武李鸿钧中国医学科学院、北京协和医学院医学生物学研究所、云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 昆明医科大学云南昆明650500 昆明医科大学附属延安医院云南省肿瘤免疫防治重点实验室云南昆明650051

目的比较4种人脐带间充质干细胞来源外泌体(exosomes derived from human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSCs-Exos)的提取方法,以期获得简便、高效、经济的外泌体提取方法。方法传代培养人脐带间充质干细胞(human umbilica... 详细信息

目的比较4种人脐带间充质干细胞来源外泌体(exosomes derived from human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSCs-Exos)的提取方法,以期获得简便、高效、经济的外泌体提取方法。方法传代培养人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUC-MSCs),镜下观察细胞形态,并检测细胞增殖能力、特异性表面抗原表达水平及多向分化潜能。分别采用超速离心法、聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)沉淀法、蔗糖沉淀法和Total Exosome Isolation试剂盒法(简称试剂盒法)4种方法提取HUC-MSCs培养上清液中的hucMSCs-Exos,透射电子显微镜观察外泌体形态,纳米颗粒跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)技术检测外泌体浓度及颗粒大小,BCA法检测外泌体总蛋白浓度,Western blot法检测外泌体特异性标志蛋白水平。结果传代培养的HUC-MSCs于镜下观察呈长梭形,漩涡贴壁生长,且细胞增殖速度较快;高表达MSCs特异性表面抗原CD73和CD90,极低表达造血干细胞表面标记物CD34和CD45;具有向脂肪及成骨分化的潜能。4种方法均可提取获得HUCMSCs-Exos,除试剂盒法外,其他3种方法提取的外泌体均呈茶托样双层膜结构且边界清晰;试剂盒法提取外泌体的总蛋白浓度及颗粒浓度均明显高于其他3种方法(F=35.18,P均<0.01);4种方法提取的外泌体均能表达特异性标志物CD63和CD81,除蔗糖沉淀法提取外泌体不表达CD9外,其他方法提取的外泌体均表达CD9。结论4种方法均能提取获得外泌体,其中超速离心法提取外泌体质量稳定;试剂盒法提取外泌体的产量较高,且更省时、更便捷;PEG沉淀法及蔗糖沉淀法提取外泌体的纯度更高。可根据不同的生产需求,选择合适的外泌体分离技术。

关键词：外泌体提取人脐带间充质干细胞

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IL-17信号通路在回归热神经性疏螺旋体病中的作用

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中国医药导报 2021年第10期18卷 4-7,11页

作者：程美慧陆巍张静丁开云刘红旗中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所感染和免疫实验室云南昆明650118

目的研究白细胞介素(IL)-17信号通路在回归热神经性疏螺旋体病中的作用。方法将14只C57BL/6野生型小鼠分为两组,S组为6只,E组为8只;8只IL-17信号通路缺陷(IL-17-/-)小鼠为IL-17-/-组。三组小鼠通过腹腔注射感染回归热疏螺旋体DAH菌株后... 详细信息

目的研究白细胞介素(IL)-17信号通路在回归热神经性疏螺旋体病中的作用。方法将14只C57BL/6野生型小鼠分为两组,S组为6只,E组为8只;8只IL-17信号通路缺陷(IL-17-/-)小鼠为IL-17-/-组。三组小鼠通过腹腔注射感染回归热疏螺旋体DAH菌株后,观察小鼠体内菌血症、神经系统发病情况及特异性抗体的发生情况。比较E组和IL-17-/-组小鼠脊髓的病理变化。结果S组小鼠体内有效地复制扩增并引起菌血症,产生螺旋体特异性IgG和IgM,中枢神经系统疾病症状发病率达到100%。E组和IL-17-/-组小鼠体内的菌血症变化水平基本一致,且均能诱导E组和IL-17-/-组小鼠螺旋体特异性IgG和IgM产生。感染9~14 d IL-17-/-组感染回归热疏螺旋体后的中枢神经系统疾病评分低于E组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。IL-17-/-组小鼠脊髓组织中小胶质细胞的数量少于E组小鼠。结论IL-17信号通路在回归热疏螺旋体感染诱导的中枢神经系统疾病中起重要作用。

关键词： IL-17信号通路回归热疏螺旋体神经症状

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免疫菌的抗病毒作用与抗新型冠状病毒肺炎应用潜力

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疾病监测 2022年第4期37卷 445-452页

作者：陈雨露卢思敏罗文博曹治杰杨晶任志鸿曹康丽刘丽云李明定徐建青徐建国中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206 中国医学科学院/北京协和医学院病原生物学研究所北京100730 复旦大学上海公共卫生临床中心上海201508 中山医院&复旦大学生物医学研究院上海200032 浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室浙江杭州310009 国家感染性疾病临床医学研究中心浙江杭州310009 南开大学公共卫生和健康研究院天津300071 中国医学科学院未知细菌发现和功能研究创新单元北京100730

免疫菌是一种可以通过调节免疫功能发挥抗感染作用的促进健康的有益菌,其可能发展为普通食品、功能性食品、佐剂或药品(生物制剂)。免疫菌的免疫调节功能具有菌株特异性,其可通过口服、鼻黏膜、舌下等途径,刺激机体黏膜免疫系统,调节固... 详细信息

免疫菌是一种可以通过调节免疫功能发挥抗感染作用的促进健康的有益菌,其可能发展为普通食品、功能性食品、佐剂或药品(生物制剂)。免疫菌的免疫调节功能具有菌株特异性,其可通过口服、鼻黏膜、舌下等途径,刺激机体黏膜免疫系统,调节固有免疫或获得性免疫,发挥非特异性的抗微生物(细菌和病毒)感染的作用。经口给予植物乳杆菌冠克菌株,可刺激接种疫苗6个月的小鼠升高和维持抗新型冠状病毒(SARS-CoV-2)特异中和抗体水平。接种疫苗后,立即给予植物乳杆菌冠克株,小鼠肺泡灌洗液中抗SARS-CoV-2特异性中和抗体的水平比对照组高8倍以上,同时也提高了肺部局部和全身的SARS-CoV-2特异性细胞免疫应答。临床研究发现,免疫菌可改善新型冠状病毒肺炎(COVID-19)症状,提高患者的抗SARS-CoV-2特异性抗体水平,辅助治疗。需要尽快研究评价免疫菌的最佳使用方案,为防控COVID-19提供一种新的选择。

关键词：免疫菌新型冠状病毒肺炎防控

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