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实验动物与比较医学 2021年第2期41卷 174-180页

作者：阮蕾颖孙晓梅中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

以小鼠为代表的啮齿类实验动物一直以来作为人类探索树突状细胞(dendritic cells,DCs)系统的有力工具活跃在各个研究平台。早期人们对于DCs的了解主要来源于对小鼠模型的研究,并根据其表面标志、细胞形成和迁移特性等进行初步分类。目前... 详细信息

以小鼠为代表的啮齿类实验动物一直以来作为人类探索树突状细胞(dendritic cells,DCs)系统的有力工具活跃在各个研究平台。早期人们对于DCs的了解主要来源于对小鼠模型的研究,并根据其表面标志、细胞形成和迁移特性等进行初步分类。目前,小鼠不同DCs亚群的分类方法还没有完全统一,这大大阻碍了人们对DCs的进一步研究与利用。因此需要深入开展小鼠DCs亚群的基础研究,寻找科学、有效、公认的DCs分类方法定义不同的亚群。本文从小鼠DCs细胞亚群分类方法、常见细胞类型、特性及与人类DCs的比较等方面进行综述,阐述目前小鼠DCs亚群分类及特性的研究现状,同时总结了目前待解决的问题。为深入了解DCs亚群的功能及特性提供参考,并期望通过总结亚群相关的问题提出研究方向。

关键词：树突状细胞细胞亚群分类小鼠

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CA16感染树鼩肺成纤维细胞模型的建立及其受体SCARB2的表达

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中国实验动物学报 2019年第4期27卷 479-484页

作者：王文广匡德宣李娜陆彩霞罕园园仝品芬孙晓梅代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队

目的探讨建立CA16感染树鼩肺成纤维细胞(tree shrew lung fibroblasts,TSLF)实验模型的可行性。方法用肠道病毒CA16感染TSLF,以人肺成纤维细胞(KMB-17)作对照,镜下观察细胞病变情况,间接免疫荧光实验观察病毒蛋白和感染相关受体SCARB... 详细信息

目的探讨建立CA16感染树鼩肺成纤维细胞(tree shrew lung fibroblasts,TSLF)实验模型的可行性。方法用肠道病毒CA16感染TSLF,以人肺成纤维细胞(KMB-17)作对照,镜下观察细胞病变情况,间接免疫荧光实验观察病毒蛋白和感染相关受体SCARB2蛋白的表达情况,探针法实时荧光定量PCR检测病毒载量,以β-Actin作内参染料法实时荧光定量PCR检测受体SCARB2基因的相对表达量,结合基因序列比对,分析其与感染的相关性。结果 CA16感染TSLF,可引起明显的细胞病变,免疫荧光实验可见病毒和受体SCARB2蛋白,以100TCID50/10^5 cells的比例感染TSLF可在48 h左右病毒载量达到最高,SCARB2基因有与感染相关的高表达,而其基因序列也与人有较高同源性。结论 CA16可感染TSLF,树鼩SCARB2可参与感染。

关键词： CA16 树鼩肺成纤维细胞感染 SCARB2

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树鼩中APP基因特征描述及可变剪接体的分型鉴定

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中国实验动物学报 2017年第2期25卷 132-137,152页

作者：罕园园孙晓梅匡德宣陆彩霞陈玲霞仝品芬王文广李娜代解杰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队昆明650118

目的区分并鉴定树鼩中APP基因mRNA的多种可变剪接体,对APP基因特征进行描述,并确定其在各组织中的表达分布。方法参考已知人的和树鼩基因组预测的APP基因序列,设计树鼩APP基因mRNA剪切体外显子的共同特异性引物。分别从树鼩不同组织中... 详细信息

目的区分并鉴定树鼩中APP基因mRNA的多种可变剪接体,对APP基因特征进行描述,并确定其在各组织中的表达分布。方法参考已知人的和树鼩基因组预测的APP基因序列,设计树鼩APP基因mRNA剪切体外显子的共同特异性引物。分别从树鼩不同组织中提取总RNA,反转录为c DNA,利用高保真酶扩增目的剪切体DNA。根据PCR扩增产物电泳条带的有无和大小初步判断剪接体的型别,最后将PCR产物胶回收进行测序鉴定,对获得的基因进行特征描述,并结合定量PCR的结果确定了各剪接体在不同组织中分布情况。结果结果表明树鼩APP剪接体的全长为3514 bp,有一个109 bp的5’-UTR,1092bp的3’-UTP。APP基因在调查的9个物种中高度同源保守,显示树鼩与灵长类存在一个较近的亲缘关系。通过三维建模获得了树鼩和人的APP基因共同拥有的4个结构域。同时确认这4种通过外显子跳跃产生的APP可变剪接体在不同组织中的分布和表达。4种检测到的剪接体APP770,APP695,APP751,APP677均表达于肺、肾和肠,表达量最高的是肺、肌肉和睾丸。结论对树鼩APP基因可变剪接体的表达研究,有助于推动树鼩作为阿尔茨海默病模型深入研究疾病的发生机制和药物研发。

关键词：树鼩 APP基因可变剪接体阿尔茨海默病模型

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树鼩腺病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

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中国比较医学杂志 2018年第3期28卷 72-77页

作者：宋庆凯李晓飞苗雨润张志成王璇袁圆代解杰孙晓梅中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队昆明650118

目的通过建立树鼩腺病毒(tree shrew adenovirus,TAV)TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,快速准确地检测树鼩腺病毒。方法根据TAV全基因组3’端保守序列设计合成特异性引物;用含目的基因片段的重组质粒作为标准品进行标准曲线绘制,建立TAV ... 详细信息

目的通过建立树鼩腺病毒(tree shrew adenovirus,TAV)TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,快速准确地检测树鼩腺病毒。方法根据TAV全基因组3’端保守序列设计合成特异性引物;用含目的基因片段的重组质粒作为标准品进行标准曲线绘制,建立TAV TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。结果建立的TAV实时荧光定量PCR检测方法特异性好,与树鼩源及其他物种常见病毒无交叉反应;方法的最低检测限度为每微升3.7拷贝,灵敏性强;相关检测系数R2为0.998,扩增效率为95.7%;扩增结果具有良好的线性关系,且重复性检测效果好。结论成功建立了TAV TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,灵敏度高,重复性好,可用于TAV感染的早期快速检测。

关键词：树鼩腺病毒 3’保守区域 TaqMan 实时荧光定量PCR

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基于16S rRNA测序对树鼩肠道菌群特征与高级别肉瘤的相关性分析

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中国比较医学杂志 2019年第8期29卷 11-16,49页

作者：黄鑫古文鹏黎晓慧李娜贾杰李明学代解杰昆明医科大学昆明650500 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队昆明650118

目的检测高级别肉瘤的树鼩肠道微生物菌群结构,为探讨肠道微生物菌群结构的改变与肿瘤发生的相关性提供科学依据。方法选取3例患有恶性高级别肉瘤树鼩粪便为CA组,6例健康树鼩粪便为对照NO组。通过16SV3+4区引物进行细菌多样性的鉴定,通... 详细信息

目的检测高级别肉瘤的树鼩肠道微生物菌群结构,为探讨肠道微生物菌群结构的改变与肿瘤发生的相关性提供科学依据。方法选取3例患有恶性高级别肉瘤树鼩粪便为CA组,6例健康树鼩粪便为对照NO组。通过16SV3+4区引物进行细菌多样性的鉴定,通过对Reads剪切过滤,OTUs聚类,并进行物种注释及丰度分析,得出两组树鼩肠道微生物结构、丰度以及多样性。结果比较CA组和NO组树鼩肠道微生物结构,多样性指数Chao1指数值、ACE指数值、Shannon指数值差异无统计学意义(P>0.05)。NO组的树鼩肠道菌群OTUs为640种,而CA组为494种,健康树鼩肠道菌群结构呈多样性。在门水平上比较,其中CA组中螺旋体门(Spirochaetes)丰度为0.03%,低于NO组(丰度为0.12%),且差异有统计学意义(P<0.05);CA组厚壁菌门(Firmicutes)丰度为77.79%高于NO组(47.65%),但差异无统计学意义;CA组的拟杆菌门(Bacteroidetes)丰度为0.75%低于NO组(8.31%),但差异无统计学意义。CA组中的乳杆菌属(lactobacillus)是具有统计学意义的生物标识。结论患有高级别肉瘤树鼩的肠道菌群结构丰度和多样性低于健康树鼩,肠道菌群的结构改变及厚壁菌门含量增加可能增加恶性肿瘤的发生。

关键词：肠道菌群高级别肉瘤 16srRNA测序树鼩

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树鼩实验动物标准化质量控制标准的研究编制

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中国比较医学杂志 2019年第3期29卷 67-71页

作者：匡德宣王文广孙晓梅陆彩霞罕园园仝品芬李娜代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南省实验树鼩标准化与应用研究创新团队昆明650118

树鼩在新陈代谢、生理机能、大体解剖和基因组等方面与人类具有相似性,已被广泛应用于医学和生物学研究领域。作为一种极具价值和科学研究需求的实验动物新资源,标准化质量控制已经成为树鼩使用中亟待解决的技术瓶颈和研究发展的必然趋... 详细信息

树鼩在新陈代谢、生理机能、大体解剖和基因组等方面与人类具有相似性,已被广泛应用于医学和生物学研究领域。作为一种极具价值和科学研究需求的实验动物新资源,标准化质量控制已经成为树鼩使用中亟待解决的技术瓶颈和研究发展的必然趋势。本文对树鼩质量控制团体标准进行归纳总结和分析说明,加强标准的宣传推广和贯彻实施,为树鼩实验动物标准化质量控制及国家标准的制订提供参考依据,最终促进树鼩推广应用和产业化发展。

关键词：树鼩实验动物质量控制标准

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成年树鼩骨骼系统CT三维可视化模型建立及分析

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中国实验动物学报 2017年第2期25卷 153-159页

作者：罕园园徐昕陆彩霞匡德宣仝品芬王文广孙晓梅李娜代解杰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心、云南省重大传染病疫苗研发重点实验室、中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队昆明650118 云南大学第一医院云南省第二人民医院暨云南省红十字会医院昆明650051

目的建立树鼩骨骼系统的三维可视化模型,为树鼩的骨骼系统疾病诊断提供依据。方法使用日本东芝Aquillon one 320排螺旋CT进行扫描,100 k V,80 m A,球管转数每转0.35 s,螺距1.35,图像为0.5 mm,层间隔为0.5 mm,使用骨算法重建。在并行计... 详细信息

目的建立树鼩骨骼系统的三维可视化模型,为树鼩的骨骼系统疾病诊断提供依据。方法使用日本东芝Aquillon one 320排螺旋CT进行扫描,100 k V,80 m A,球管转数每转0.35 s,螺距1.35,图像为0.5 mm,层间隔为0.5 mm,使用骨算法重建。在并行计算环境中采用Vitrea软件包,选择Musculoskeletal CT选项,采用容积成像(VR)、多平面成像(MPR)、曲面成像(CPR)技术进行三维重建。结果重建后的可视化模型结构明显、清楚,可以真实地在计算机中重现出树鼩的骨骼系统三维模型。在此模型中,在头骨背面可见五条隆起的嵴,侧面观可见四个大孔:位于前端的外鼻孔、前颌骨后上方的眶下孔、由颧弓所范围着的眼窝和鼓泡外侧的外耳道。此外,可见一些较小的头骨孔,如视神经孔、颌下神经孔。利用该成像技术可定量测定各主要骨骼的长度、前后径、左右径和身长、尾长等数据。尤其是还获得了以往通过解剖难以测量准确的数据:如腭长、臼齿列长等较细微的数据,以及解剖不易获得脊椎前后径及左右径的数据。同时还利用三维可视化技术发现了树鼩存在有骨盆形态不对称、胸廓增大、骨折、跟腱周围滑膜囊钙化的骨骼异常情况。结论所建立的CT三维可视化技术可确定树鼩骨骼系统的特殊特征,对树鼩骨骼系统无侵入性的生态分类、鉴定、进化分析均有重要意义。

关键词：树鼩 CT三维重建骨骼系统

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树鼩Mfsd2a基因的克隆分析和不同组织表达量的检测

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实验动物与比较医学 2019年第3期39卷 178-186页

目的对树鼩主要促进因子超家族成员2a(Mfsd2a)基因进行克隆、测序和生物信息学分析,并定量检测其组织表达量。方法从树鼩脑和脊髓中提取总RNA,RT-PCR扩增Mfsd2a基因片段,测序后利用生物信息学软件对其序列特征、系统进化、编码蛋白的结... 详细信息

目的对树鼩主要促进因子超家族成员2a(Mfsd2a)基因进行克隆、测序和生物信息学分析,并定量检测其组织表达量。方法从树鼩脑和脊髓中提取总RNA,RT-PCR扩增Mfsd2a基因片段,测序后利用生物信息学软件对其序列特征、系统进化、编码蛋白的结构和理化性质进行分析;以树鼩β-actin为内参,qPCR检测树鼩Mfsd2a基因在不同组织中的表达情况。结果克隆获得Mfsd2a基因片段全长1 796 bp,与NCBI上公布的树鼩Mfsd2a基因预测序列高度一致,比对显示其与MFS转运蛋白超家族同源。其编码区全长1 464 bp,编码488个氨基酸。预测结果显示树鼩Mfsd2a蛋白具有明显的疏水性区域,无信号肽,二级结构元件由α螺旋、β折叠、无规卷曲和延伸链组成。OCTOPUS分析发现Mfsd2a存在12个跨膜结构,修饰结构预测发现Mfsd2a蛋白存在两处N糖基化位点,亚细胞定位发现其可能主要分布于细胞膜和内质网。qPCR检测树鼩不同组织的Mfsd2a表达,结果显示各组织均有表达,在大脑、脊髓中的表达水平相对较高。结论成功克隆了树鼩Mfsd2a基因,建立了该基因表达定量检测方法,为今后利用树鼩神经系统疾病模型深入开展Mfsd2a基因功能研究提供了理论和技术支持。

关键词：树鼩主要促进因子超家族成员2a(Mfsd2a) 克隆分析表达

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恶性疟原虫动物模型及基因编辑研究进展

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实验动物与比较医学 2019年第1期39卷 65-71页

作者：匡德宣王文广孙晓梅代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队

恶性疟原虫是人体疟疾的病原体,恶性疟原虫动物模型是研究人疟原虫感染、慢性致病机制、药物评价和人疟原虫疫苗研制的重要实验材料。迄今为至,恶性疟原虫动物模型研究主要涉及非人灵长类、免疫缺陷小鼠、转基因技术以及CRISPR/Cas9系... 详细信息

恶性疟原虫是人体疟疾的病原体,恶性疟原虫动物模型是研究人疟原虫感染、慢性致病机制、药物评价和人疟原虫疫苗研制的重要实验材料。迄今为至,恶性疟原虫动物模型研究主要涉及非人灵长类、免疫缺陷小鼠、转基因技术以及CRISPR/Cas9系统等领域。本文对恶性疟原虫体内外感染动物模型及基因编辑研究做总结分析,为今后恶性疟原虫动物模型建立及基因编辑研究提供参考。

关键词：恶性疟原虫体外感染体内感染基因编辑

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肠道病毒71型体外感染树鼩肾细胞特性观察

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实验动物与比较医学 2017年第2期37卷 123-129页

作者：王文广匡德宣尹博文陆彩霞罕园园李娜仝品芬孙晓梅蔡路奎代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队昆明650118

目的探讨肠道病毒71型(EV71)对树鼩肾细胞的感染特性。方法通过组织块贴壁法分离培养树鼩原代肾细胞,观察细胞形态并进行传代培养,利用细胞角蛋白18对树鼩肾细胞进行间接免疫荧光鉴定。用EV71感染树鼩肾细胞,通过倒置显微镜观察细胞病... 详细信息

目的探讨肠道病毒71型(EV71)对树鼩肾细胞的感染特性。方法通过组织块贴壁法分离培养树鼩原代肾细胞,观察细胞形态并进行传代培养,利用细胞角蛋白18对树鼩肾细胞进行间接免疫荧光鉴定。用EV71感染树鼩肾细胞,通过倒置显微镜观察细胞病变情况,结合间接免疫荧光实验观察细胞中病毒蛋白的表达情况,采用实时荧光定量PCR技术检测病毒载量,以Vero细胞为对照,研究EV71对树鼩肾细胞的感染情况。结果通过组织块贴壁法可以快速获得树鼢原代肾细胞,并可进行多次传代培养,细胞为梭形,贴壁呈铺路石状,免疫荧光鉴定为肾上皮细胞。EV71可以感染树鼩肾细胞,使之出现明显的细胞变圆、脱落或解体等病变,免疫荧光实验可以观察到病毒蛋白的分布,实时荧光定量PCR检测病毒载量最高可达10~5拷贝/mL,病变情况和增殖趋势与Vero细胞相似。结论 EV71可以体外感染树鼩肾细胞,该细胞模型可为EV71药物筛选和感染机制研究提供平台。

关键词：树购肾细胞肠道病毒 71型(EV71)

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