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实验动物与比较医学 2016年第6期36卷 409-414页

作者：孟华清杨婷谢天宏李华岳磊宋霞张也谢忠平中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的评价小鼠在柯萨奇病毒A组16型（CA16）活病毒感染中免疫原性的应用，为减毒活疫苗研究提供实验数据。方法以不同剂量的CA16活病毒通过皮下、腹腔和肌肉途径接种不同年龄的ICR和BALB／C小鼠，采集初次免疫7d、21d、28d以及加强免疫7... 详细信息

目的评价小鼠在柯萨奇病毒A组16型（CA16）活病毒感染中免疫原性的应用，为减毒活疫苗研究提供实验数据。方法以不同剂量的CA16活病毒通过皮下、腹腔和肌肉途径接种不同年龄的ICR和BALB／C小鼠，采集初次免疫7d、21d、28d以及加强免疫7d后的血样：通过微量细胞病变中和法检测中和抗体效价，细胞因子ELISA检测试剂盒检测6种细胞因子含量。结果初次免疫后28d，肌肉、腹腔和皮下途径免疫的小鼠血清抗体阳转率分别为83．33％、40．00％和0．00％，抗体几何平均效价（GMT）分别为1：169、1：32和0；加强免疫后，肌肉、腹腔和皮下途径免疫的小鼠血清抗体阳转率均达100％，抗体GMT分别为1：813、l：609和1：32，肌肉和腹腔途径免疫的小鼠血清抗体GMT平均增长4．8倍和19．0倍；加强免疫7d的抗体阳转率达100％；明显高于初次免疫28d和21d；BALB／c小鼠与ICR小鼠相比，前者的中和抗体效价和抗体阳转率明显高于后者，而小鼠年龄对中和抗体效价和抗体阳转率的影响不显著（P〉0．05）；免疫剂量对中和抗体效价和抗体阳转率的影响显著（P〈0．05），高剂量病毒免疫小鼠后中和抗体效价和抗体阳转率明显比低剂量高（P〈0．05）；细胞因子检测结果显示加强免疫7d后的白细胞介素100L-10）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的含量与初次免疫7d的相比显著增加。结论BALB／c和ICR小鼠可做为CA16活病毒免疫原性评价的动物模型，以4～6周龄的BALB/c小鼠最为敏感。

关键词：柯萨奇病毒A组16型(CA16) 免疫原性细胞因子减毒活疫苗

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人呼吸道合胞病毒Long株的免疫原性初探

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医学研究杂志 2014年第6期43卷 17-21页

作者：李华杨婷岳磊刘正玲姜广菊龙润乡杨蓉罗芳宇谢忠平中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的评价人呼吸道合胞病毒(HRSV)Long株的免疫原性,为进一步的研究疫苗提供实验数据。方法将HRSV制备成纯化抗原,取40只ICR鼠,随机分为4组,分别用纯化HRSV、纯化HRSV+Al(OH)3、并设0.01 mol/L PBS、Al(OH)3对照组,0天、28天免疫小鼠,采... 详细信息

目的评价人呼吸道合胞病毒(HRSV)Long株的免疫原性,为进一步的研究疫苗提供实验数据。方法将HRSV制备成纯化抗原,取40只ICR鼠,随机分为4组,分别用纯化HRSV、纯化HRSV+Al(OH)3、并设0.01 mol/L PBS、Al(OH)3对照组,0天、28天免疫小鼠,采用中和试验检测血清中和抗体,流式检测7种细胞因子。结果初免后28天,加Al(OH)3组与无Al(OH)3组抗体阳转率分别为60%和50%,抗体几何平均效价(GMT)分别为1∶4.49和1∶5.27;加强免疫后,Al(OH)3组与无Al(OH)3组小鼠血清抗体阳转率均达100%,抗体几何平均效价(GMT)分别为1∶17.15和1∶10.56,平均增长3.8倍和2.0倍;中和抗体在组间无差异,而组内初免与再免的中和抗体有统计学差异(P<0.01)。加Al(OH)3样品组与无Al(OH)3样品组,所检测7种细胞因子均诱导IL-6及TNF,与两个对照组间有统计学差异(P<0.05),而另外5种细胞因子则无明显升高。结论人呼吸道合胞病毒Long株可产生良好的免疫效应。

关键词：人呼吸道合胞病毒 Long株细胞因子免疫原性

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树鼩经甲型肝炎减毒活疫苗、乙型肝炎疫苗及联合硫酸乙酰肝素佐剂免疫后的免疫效果评价

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实验动物与比较医学 2017年第2期37卷 113-117页

作者：王东宝胡云章胡凝珠罕园园匡德宣李彦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所疫苗研究室云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南省虫媒传染病防控研究重点实验室昆明650118

目的探讨甲型肝炎减毒活疫苗(HepA-1)、乙型肝炎疫苗(Hbv)以及HepA-1、Hbv分别与佐剂硫酸乙酰肝素(HS)联合对树鼩进行免疫后树鼩体液免疫应答的影响。方法按照疫苗种类、佐剂以及免疫途径将树鼩随机分组,同时设空白对照组,分别于末次免... 详细信息

目的探讨甲型肝炎减毒活疫苗(HepA-1)、乙型肝炎疫苗(Hbv)以及HepA-1、Hbv分别与佐剂硫酸乙酰肝素(HS)联合对树鼩进行免疫后树鼩体液免疫应答的影响。方法按照疫苗种类、佐剂以及免疫途径将树鼩随机分组,同时设空白对照组,分别于末次免疫后的4周、8周、12周、16周和20周尾静脉采血,用ELISA法检测树鼩血清中的特异性IgG抗体水平。结果除空白对照组外,实验组均在末次免疫的第四周检测到抗甲型肝炎病毒(HAV)及抗乙型肝炎病毒(HBV)抗体,抗体水平随着免疫时间延长而逐渐升高并于12周达到峰值,此后逐渐下降。同时,联合HS佐剂组的体液免疫效果均优于单纯疫苗免疫组。并且不同抗原以及联合佐剂采用不同的免疫途径免疫树鼩其免疫效果存在显著性差异。结论通过对树鼩进行疫苗免疫原性和增强免疫效果检测,证实以树鼩作为动物模型进行疫苗评价的可行性。

关键词：树鼩甲型肝炎减毒活疫苗(HepA—1) 乙型肝炎疫苗(Hbv) 硫酸乙酰肝素(HS) 体液免疫

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EV-A71灭活疫苗长期稳定性考察及结果分析

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中国病毒病杂志 2017年第5期7卷 371-374页

作者：何鑫谢天宏洪超李华宋霞罗芳宇王微岳磊杨婷熊增平谢忠平中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的考察肠道病毒A组71型(EV-A71)灭活疫苗的长期稳定性。方法对中国医学科学院医学生物学研究所生产的,在2~8℃条件下保存54个月的Ⅲ期临床样品,进行全面检定以分析各质量指标的变化;用原倍疫苗样品以0、28d两剂腹腔免疫6~8周龄的Balb/... 详细信息

目的考察肠道病毒A组71型(EV-A71)灭活疫苗的长期稳定性。方法对中国医学科学院医学生物学研究所生产的,在2~8℃条件下保存54个月的Ⅲ期临床样品,进行全面检定以分析各质量指标的变化;用原倍疫苗样品以0、28d两剂腹腔免疫6~8周龄的Balb/c小鼠,检测其血清抗体效价,进行疫苗效力单位(EU)测定;用2倍系列稀释法稀释疫苗,取不同稀释度样品免疫6~8周龄的Balb/c小鼠,检测其血清抗体效价,进行半数有效量ED50测定。结果该样品在2~8℃保存54个月,所有指标均在质量标准的合格要求范围内,仅pH值7.4接近标准上限;抗原含量为180 U/ml,与原检测值相比,下降仅9.1%;半数有效量(ED50)为6.29U,与原检测结果4.90U保持了良好一致;疫苗初次免疫小鼠后28d抗体阳转率为100%,中和抗体效价为1∶16~1∶256,GMT值为1∶52,EU值为6.5;加强免疫后第7天,中和抗体效价为1∶1 024~1∶4 096,几何平均滴度GMT大幅度上升至1∶1 552.1,其EU值为194.0;疫苗样品稀释至45 U/ml的抗原量,仍能使免疫小鼠产生100%的抗体阳转,且GMT值达1∶27.9。结论 EV-A71灭活疫苗于2~8℃条件下保存54个月,其质量指标无明显变化。

关键词： EV-A71灭活疫苗肠道病毒A组71型(EV-A71) 疫苗长期稳定性免疫原性手足口病

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血管紧张素Ⅱ基因重组杆状病毒的构建

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中国生物制品学杂志 2013年第5期26卷 590-594,602页

作者：欧霞 Yuri Kusov 郭莉莉米锴吴晋元尹娜张光明李鸿钧孙茂盛中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所分子生物室云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 Department of Medical Molecular Biology University Lübeck

目的构建携带血管紧张素I(IAngiotensin Ⅱ,AngⅡ)基因的重组杆状病毒,并利用Bac-to-Bac重组杆状病毒表达系统进行表达。方法将重组杆粒bacmid-P1-2A-4AngⅡs-3ABC(rB/HAngⅡ)转染昆虫细胞sf9,包装出重组杆状病毒rBac-P1-2A-4AngⅡs-3ABC(rBAV),通过光学显微镜和透射电镜观察细胞病变(CPE)及病毒形态,采用蚀斑试验检测病毒滴度,PCR及间接免疫荧光技术验证该病毒及感染细胞中AngⅡ和HAV蛋白的表达。结果重组杆粒rB/HAngⅡ转染sf9细胞96 h后,出现典型的CPE;透射电镜下观察可见典型的杆状病毒颗粒;PCR可特异性的扩增出约3 000和1 000 bp的P1-2A-4AngⅡs和3ABC基因片段;P3代重组杆状病毒滴度约为4×108pfu/ml;感染后的sf9细胞中可见特异性的绿色荧光(AngⅡ蛋白)和红色荧光(HAV结构蛋白)。结论已成功构建了携带AngⅡ基因的重组杆状病毒,并在sf9细胞中获得表达,为研制抗高血压疫苗提供了新的思路。

关键词：血管紧张素Ⅱ 杆状病毒表达系统高血压疫苗

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人呼吸道合胞病毒截短F1蛋白的表达及免疫原性评价

人呼吸道合胞病毒截短F1蛋白的表达及免疫原性评价

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2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会

作者：李华杨婷岳磊何晓娟朱凡丽谢天宏龙润乡杨蓉罗芳宇谢忠平中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的:克隆重组RSV A型Long株人呼吸道合胞病毒(HRSV)截短F1融合性蛋白,并评价其免疫原性. 方法:采用RT-PCR方法克隆RSV F1截短蛋白序列,克隆至pET28质粒表达载体,构建重组原核表达质粒,转化大肠杆菌Shuffle T7菌株,IPTG诱导表达,表... 详细信息

目的:克隆重组RSV A型Long株人呼吸道合胞病毒(HRSV)截短F1融合性蛋白,并评价其免疫原性. 方法:采用RT-PCR方法克隆RSV F1截短蛋白序列,克隆至pET28质粒表达载体,构建重组原核表达质粒,转化大肠杆菌Shuffle T7菌株,IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blots鉴定后,用Ni亲和层析柱进行纯化.重组蛋白免疫ICR小鼠,用ELISA方法检测血清抗体效价,进行其免疫原性评价. 结果:重组的原核表达质粒经双酶切及测序证明构建成功;表达的F1融合性蛋白片段大小1104bp,表达的蛋白大约368个氨基酸,其相对分子量为44KDa.表达的F1融合性蛋白以包涵体形式存在,纯化后蛋白纯度达90％.重组F1蛋白免疫小鼠效价最高可达1:4096. 结论:原核表达的重组RSV F1蛋白免疫原性好,为单克隆抗体的制备及检测试剂盒的研究奠定基础.

关键词：人呼吸道合胞病毒 F1融合性蛋白基因表达免疫原性

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应用树鼩对硫酸乙酰肝素佐剂的安全性初步评价

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实验动物与比较医学 2017年第5期37卷 390-394页

作者：李彦涵李建芳孙静乌美妮王海璇胡云章中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所疫苗研究室云南省虫媒传染病防控研究重点实验室云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心昆明650118

目的通过检测佐剂硫酸乙酰肝素(HS)对树鼩皮肤的刺激性反应以及佐剂与甲型肝炎减毒活疫苗(Hep A-1)联合免疫树鼩后主要组织器官的病理分析,探讨以树鼩作为动物模型进行安全性评价的可行性。方法根据给药次数和皮肤是否完整将树鼩随机分... 详细信息

目的通过检测佐剂硫酸乙酰肝素(HS)对树鼩皮肤的刺激性反应以及佐剂与甲型肝炎减毒活疫苗(Hep A-1)联合免疫树鼩后主要组织器官的病理分析,探讨以树鼩作为动物模型进行安全性评价的可行性。方法根据给药次数和皮肤是否完整将树鼩随机分组,采用树鼩同体自身左右对比的方法进行皮肤刺激性实验。根据疫苗及佐剂种类将树鼩随机分组,采用皮下免疫方式,免疫后20周取主要组织器官制备病理切片,HE染色,观察主要组织器官病理学特征。结果佐剂HS单次及多次给药对树鼩完整皮肤组和破损皮肤组的受试部位均不产生红斑、水肿等刺激性变化。与对照组相比,HepA-1免疫组以及HepA-1联合HS免疫组的心、肝、脾、肺、肾及大脑组织病理观察,均未见明显异常。结论证实了以树鼩作为动物模型进行疫苗安全性评价的可行性,为以后疫苗及药物评估平台建设提供了基础数据。

关键词：树鼩硫酸乙酰肝素(Hs) 甲型肝炎减毒活疫苗(HepA-1) 皮肤刺激性实验病理分析安全性评价

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硫酸软骨素B佐剂对甲型肝炎病毒疫苗诱导小鼠体液免疫应答的影响

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中国生物制品学杂志 2015年第4期28卷 344-347页

作者：王陈芸孙静李萍余柄廷李建芳李彦涵王海漩乌美妮胡凝珠胡云章中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所疫苗研究室云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南昆明650118 河北大学生命学院河北保定071000

目的探讨硫酸软骨素B(chondroitin sulfate B,CSB)佐剂对甲型肝炎病毒((hepatitis A virus,HAV)疫苗诱导小鼠体液免疫应答的影响,以评价其佐剂效果。方法将ICR小鼠随机分成9组:甲型肝炎减毒活疫苗Hep A-l18 EU+不同剂量CSB(5、25、45、6... 详细信息

目的探讨硫酸软骨素B(chondroitin sulfate B,CSB)佐剂对甲型肝炎病毒((hepatitis A virus,HAV)疫苗诱导小鼠体液免疫应答的影响,以评价其佐剂效果。方法将ICR小鼠随机分成9组:甲型肝炎减毒活疫苗Hep A-l18 EU+不同剂量CSB(5、25、45、65、85、105μg)组、阴性对照组(生理盐水)、抗原对照组(Hep A-l 18 EU)和铝佐剂对照组[Hep A-l 18 EU+Al(OH)3300μg],每组8只,各组均经皮下注射ICR小鼠,200μl/只。于免疫后的第4、8、12和16周,采用间接ELISA法检测小鼠血清中抗-HAV特异性Ig G抗体水平。在实验期间,观察小鼠的健康状况,并于免疫16周后,取CSB 65μg组及阴性对照组小鼠肾脏、脾脏、肝脏、肺脏、心脏各主要器官,制备病理切片,进行对比观察。结果各组小鼠免疫后第4、8、12、16周,均产生抗-HAV Ig G抗体,除阴性对照组外,抗体水平均随时间的延长逐渐升高,于第8周达峰值,此后逐渐下降。CSB 65μg组抗体可长时间维持在高水平,至免疫后第12、16周,均高于抗原对照组(P<0.05),略高于铝佐剂对照组,最佳浓度为65μg/只。实验期间,各组小鼠均未出现异常;CSB65μg组小鼠肾脏、脾脏、肝脏、肺脏、心脏组织均未观察到病变。结论 CSB可明显增强HAV抗原诱导小鼠的体液免疫应答,具有成为新型疫苗佐剂的研发价值。

关键词：硫酸软骨素B 佐剂甲型肝炎病毒疫苗体液免疫

来源：评论

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病毒样颗粒呈递HPV16CTLs抗原表位对小鼠TC-1移植肿瘤韵免疫干预

病毒样颗粒呈递HPV16CTLs抗原表位对小鼠TC-1移植肿瘤韵免疫干预

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2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会

作者：褚晓杰李杨龙琼夏烨姚宇峰孙文佳黄惟巍杨旭刘存宝马雁冰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心昆明650118

目的:人乳头瘤病毒(HPV)治疗性疫苗在治疗宫颈上皮内瘤变或癌症的临床试验尚缺乏显著疗效.提高肿瘤抗原特异的细胞免疫应答是增强疫苗效力的关键.本研究旨在探索乙肝核心抗原病毒样颗粒(VLPs)作为治疗性疫苗载体的潜能,并评价其免疫学特... 详细信息

目的:人乳头瘤病毒(HPV)治疗性疫苗在治疗宫颈上皮内瘤变或癌症的临床试验尚缺乏显著疗效.提高肿瘤抗原特异的细胞免疫应答是增强疫苗效力的关键.本研究旨在探索乙肝核心抗原病毒样颗粒(VLPs)作为治疗性疫苗载体的潜能,并评价其免疫学特性. 方法:根据文献选择有效的HPV16E7CTLs表位,经基因重组将其DNA片段克隆于乙肝核心抗原优势表位.重组蛋白诱导表达后,经硫酸铵盐析法和蔗糖密度梯度离心纯化,并经高效液相凝胶过滤色谱和电镜分析鉴定.制备的VLPs以预防性和治疗性策略分别对小鼠移植肿瘤进行免疫干预,检测小鼠肿瘤大小变化;此外,在体外以抗原肽刺激脾细胞,以ELISA检测IFN-γ表达水平,ELISPOT检测分泌IFN-γ的淋巴细胞. 结果:呈递HPV16E749-57CTLs表位的重组VLPs可通过基因重组技术有效制备;VLPs预防性免疫完全抑制了TC-1小鼠移植肿瘤生长;VLPs治疗性免疫显著抑制了2-3mm肿瘤的增长,对于5～6mm甚至更大的肿瘤(8～9mm),同样具有明显抑制作用;VLPs结构对疫苗肿瘤抑制效果非常重要;疫苗免疫小鼠脾细胞具有提高的IFN-γ、降低的IL-4与TGF-β1表达,以及增强的分泌IFN-γ的淋巴细胞水平;此外,VLPs刺激机体产生了有效的免疫记忆应答,至少可持续15周;机体预存的抗载体抗体对VLPs疫苗发挥作用未产生显著影响. 结论:本研究强烈提示VLPs可激发有效的细胞免疫应答,是有潜力的治疗性疫苗载体.

关键词：宫颈上皮内瘤人乳头瘤病毒治疗性疫苗病毒样颗粒免疫学特性

来源：评论

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