检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物工程杂志 2014年第2期34卷 1-6页

作者：谢力王晓囡李杨严敏曹颖李鸿钧孙茂盛中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 昆明学院医学院昆明650214

目的:应用非复制腺病毒表达系统构建表达人轮状病毒非结构蛋白4(NSP4)的重组腺病毒,初步评价其免疫保护效果。方法:构建含野生轮状病毒NSP4基因的穿梭质粒pshuttle-NSP4,与腺病毒骨架质粒pAdeasy经同源重组后在Ad-293细胞中包装获得pAd-... 详细信息

目的:应用非复制腺病毒表达系统构建表达人轮状病毒非结构蛋白4(NSP4)的重组腺病毒,初步评价其免疫保护效果。方法:构建含野生轮状病毒NSP4基因的穿梭质粒pshuttle-NSP4,与腺病毒骨架质粒pAdeasy经同源重组后在Ad-293细胞中包装获得pAd-NSP4重组腺病毒颗粒。电镜、RT-PCR、免疫荧光等方法鉴定病毒特征及在体外细胞中的表达。肌肉注射及滴鼻方式免疫小鼠,检测小鼠血清抗体效价及其中和保护效果。结果:获得了滴度为108.25CCID50/ml的重组腺病毒pAd-NSP4,免疫荧光检测到特异性目的蛋白的表达。二次免疫后肌肉注射和滴鼻小鼠的ELISA血清平均效价分别为1∶320和1∶1436.8;中和抗体效价1∶45.3和1∶71.8。结论:表达轮状病毒NSP4蛋白的非复制型重组腺病毒颗粒具有良好的免疫原性。滴鼻途径比肌肉注射可更加有效地诱导小鼠的免疫应答。

关键词：轮状病毒 NSP4 重组腺病毒 NSP4

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柯萨奇病毒A组16型G20分离株在不同培养条件下的增殖动力学

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中国生物制品学杂志 2012年第8期25卷 963-966页

作者：刘尚允王丽春董承红赵恒杨二霞刘龙丁李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 昆明医学院昆明650031

目的探讨柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CA16)G20分离株在不同培养条件下的增殖动力学。方法常规培养Vero和人二倍体KMB-17细胞,待细胞长至单层,接种G20株病毒,进行病毒蚀斑试验,以0.1 MOI的感染复数分别感染此两种细胞,置不同... 详细信息

目的探讨柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CA16)G20分离株在不同培养条件下的增殖动力学。方法常规培养Vero和人二倍体KMB-17细胞,待细胞长至单层,接种G20株病毒,进行病毒蚀斑试验,以0.1 MOI的感染复数分别感染此两种细胞,置不同温度和pH维持液中进行培养,每2 h收样1次至第24 h,以48 h收样作为对照样,微量滴定法检测病毒滴度,并绘制增殖动力学曲线。结果 G20株病毒在Vero及KMB-17细胞中传代适应后,均可导致细胞病变。G20株病毒在此两种细胞中培养,pH 6.0、pH 6.5时,不同培养温度下,病毒基本不增殖;pH 7.5与pH 7.0的病毒增殖基本一致,增殖速度随温度呈现37℃>35℃>33℃的趋势;在33℃～37℃、pH 7.0～8.0时,病毒均有不同程度的增殖;在41℃、各pH条件下,病毒增殖均明显受到限制。结论病毒在此两种细胞中,37℃,pH 7.5培养条件下,增殖速度及滴度均较理想。

关键词：柯萨奇病毒温度 pH 增殖动力学

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分子排阻高效液相色谱法检测组分无细胞百白破联合疫苗的纯度

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中国疫苗和免疫 2019年第3期25卷 276-280页

作者：梁疆莉马艳顾琴高娜孙明波杨卉娟中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

目的建立组分无细胞百白破联合疫苗(DTaP)纯度分析的分子排阻高效液相色谱(SE-HPLC)方法,用于疫苗生产过程的质量检测指标。方法建立SE-HPLC法检测DTaP中破伤风类毒素(TT)、白喉类毒素(DT)、百日咳毒素(PT)、百日咳丝状血凝素(FHA)、百... 详细信息

目的建立组分无细胞百白破联合疫苗(DTaP)纯度分析的分子排阻高效液相色谱(SE-HPLC)方法,用于疫苗生产过程的质量检测指标。方法建立SE-HPLC法检测DTaP中破伤风类毒素(TT)、白喉类毒素(DT)、百日咳毒素(PT)、百日咳丝状血凝素(FHA)、百日咳黏附素(PRN)五种组分纯化液和TT脱毒液纯度的方法,同时用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法对各组分纯度进行对比检测和分析。结果选TSK-GEL G4000PWXL色谱柱,DTaP组分的SE-HPLC法纯度检测和分析显示,PT、FHA、PRN、DT纯化液的平均纯度分别为98.46%、91.88%、94.16%、90.11%;TT纯化液二聚体、单体的含量分别占74.50%、25.50%,TT脱毒液二聚体、单体的含量分别占57.22%、42.78%。上述结果与SDS-PAGE法的检测和分析结果相似。结论 SE-HPLC法可以用于DTaP五种纯化液的纯度分析,其与SDS-PAGE法都可以对DTaP生产过程中的纯度指标进行监控。

关键词：无细胞百白破疫苗分子排阻高效液相色谱法纯度

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一株柯萨奇病毒A9分离株的VP1基因遗传特征分析

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中国生物制品学杂志 2016年第1期29卷 18-22页

作者：王晓辉张海浩俞泽煦杨舜乔朱艳菊白巍邵聪文马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的分析引起病毒性脑炎（viral encephalitis,VE）的一株柯萨奇病毒（Coxsackievirus,CV）A9分离株（CVA9）的VP1基因遗传特征。方法采用KMB17细胞对VE患儿粪便标本进行病毒分离,利用RT-PCR法从分离的病毒中扩增VP1全基因,并测序,采... 详细信息

目的分析引起病毒性脑炎（viral encephalitis,VE）的一株柯萨奇病毒（Coxsackievirus,CV）A9分离株（CVA9）的VP1基因遗传特征。方法采用KMB17细胞对VE患儿粪便标本进行病毒分离,利用RT-PCR法从分离的病毒中扩增VP1全基因,并测序,采用Mega 6.1和Geneious 5.6.5等软件分析其序列,并构建系统进化树。结果从5份VE患儿粪便中分离到一株人CVA9,命名为A108/YN/CHN/2009,其全长VP1基因的核苷酸长度与其他CVA9一致,均为906 bp。与中国其他分离株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为88.4%～98.2%和96.4%～99.3%,而与国外分离株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为81.0%～96.0%和92.7%～99.0%。在进化树上与其他中国分离株属同一分支中不同两个亚分支,与JB141230009亲缘关系较近。结论 A108/YN/CHN/2009分离株为肠道病毒CVA9血清型,与其他中国分离株同属一个基因簇。

关键词：柯萨奇病毒A9 VP1基因遗传特征

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1型单纯疱疹病毒疫苗的研究进展

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中国生物制品学杂志 2018年第4期31卷 445-448页

作者：徐兴丽李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

1型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 1,HSV-1)感染可导致口唇疱疹、生殖器疱疹、脑炎等症状,并可长期潜伏于神经系统。目前尚无干预手段能有效预防疱疹病毒原发感染以及控制疱疹病毒潜伏感染和复发性感染。疫苗依然被认为是控... 详细信息

1型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 1,HSV-1)感染可导致口唇疱疹、生殖器疱疹、脑炎等症状,并可长期潜伏于神经系统。目前尚无干预手段能有效预防疱疹病毒原发感染以及控制疱疹病毒潜伏感染和复发性感染。疫苗依然被认为是控制病毒感染的理想方式。本文就HSV-1疫苗的研究进展作一综述。

关键词： 1型单纯疱疹病毒疫苗

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柯萨奇病毒A组16型cDNA感染性克隆的构建

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中国生物制品学杂志 2018年第1期31卷 14-17,23页

作者：李嘉祺李洪哲郑惠文宁若彤范海涛杨泽宁胡雅洁刘龙丁中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的构建柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CA16)c DNA感染性克隆。方法提取CA16基因组RNA,经RT-PCR得到基因组全长c DNA,插入至TOPO-XL-PCR载体,获得CA16全长c DNA克隆。采用T7聚合酶系统将线性基因组c DNA体外转录出病毒基因组R... 详细信息

目的构建柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CA16)c DNA感染性克隆。方法提取CA16基因组RNA,经RT-PCR得到基因组全长c DNA,插入至TOPO-XL-PCR载体,获得CA16全长c DNA克隆。采用T7聚合酶系统将线性基因组c DNA体外转录出病毒基因组RNA,纯化后转染Vero细胞,获得拯救病毒。通过RT-PCR、基因测序及免疫荧光法对拯救病毒进行鉴定,并对拯救病毒与母本病毒的增殖特性进行比较。结果病毒基因组RNA转染Vero细胞后48 h,可见典型的肠道病毒致细胞病变。拯救病毒经RT-PCR、基因测序和免疫荧光鉴定为CA16,且与母本野生型病毒增殖特性基本一致。结论成功构建了具有感染性的CA16全长c DNA克隆,为研究CA16基因功能和研发CA16新型疫苗奠定了基础。

关键词：柯萨奇病毒A组16型感染性克隆病毒拯救

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云南省柯萨奇病毒A组6型全基因组特征分析

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中国生物制品学杂志 2022年第8期35卷 922-927页

作者：张名冯昌增刘红波王晓辉许丹菡丛山日何陆涛张光贤马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的分析2015年云南省4株柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6,CV-A6)分离株的全基因组特征。方法取手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)患儿粪便样本,制备悬液,接种至人横纹肌肉瘤细胞,CV-A6致细胞病变(CPE)后,收集病毒液,提取... 详细信息

目的分析2015年云南省4株柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6,CV-A6)分离株的全基因组特征。方法取手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)患儿粪便样本,制备悬液,接种至人横纹肌肉瘤细胞,CV-A6致细胞病变(CPE)后,收集病毒液,提取RNA,经RT-PCR分段扩增获得全基因组片段,并进行测序。采用Geneious 9.1.4和Mega 7.0、Simplot等生物学软件进行核苷酸和氨基酸序列比对、系统进化及重组分析,并构建系统进化树。结果4株CV-A6分离株之间核苷酸和氨基酸序列一致性分别为94.8%~97.9%和97.3%~98.4%,与近几年国内流行的CV-A6株核苷酸和氨基酸序列一致性分别为94.6%~97.9%和97.4%~99.1%;分离株在5′UTR、2A、2C、3A、3D、3′UTR区可能存在与毒力和临床表型相关的12个位点。结论4株云南分离株属于CV-A6血清型,为D3a基因亚型。

关键词：柯萨奇病毒A组6型全基因组序列分析

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大肠埃希菌外膜囊泡作为新型外源质粒递送载体的研究

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中国生物制品学杂志 2019年第1期32卷 10-14,19页

作者：舒聪妍王世杰高福兰黄惟巍马雁冰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南昆明650118

目的探讨大肠埃希菌外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)作为新型DNA疫苗递送载体的潜力及价值。方法从大肠埃希菌DH5α的培养上清中经过滤、超滤、超速离心等步骤收集天然分泌的OMVs,采用密度梯度离心法纯化OMVs。将纯化后的OMVs... 详细信息

目的探讨大肠埃希菌外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)作为新型DNA疫苗递送载体的潜力及价值。方法从大肠埃希菌DH5α的培养上清中经过滤、超滤、超速离心等步骤收集天然分泌的OMVs,采用密度梯度离心法纯化OMVs。将纯化后的OMVs与哺乳动物吞噬细胞及非吞噬细胞进行体外孵育,观察不同细胞对OMVs的摄取效率。通过电击转化方式将带绿色荧光蛋白的真核表达质粒pIRES2-EGFP转入OMVs中,并与RAW264. 7细胞共孵育,观察OMVs携带真核表达质粒进入细胞并表达绿色荧光蛋白的情况。结果密度梯度离心法可有效纯化OMVs,纯化后的OMVs进入不同哺乳动物细胞的效率不同,进入吞噬细胞的效率高于非吞噬细胞,经电击转化后,质粒DNA可被导入OMVs中,并随吞噬细胞摄取及表达。结论约5 300 bp的真核表达质粒可用电击方式导入OMVs中,并通过OMVs介导该质粒在吞噬细胞中表达,提示OMVs具有作为新型质粒DNA递送载体的潜力。

关键词：细菌外膜囊泡质粒递送系统 DNA疫苗

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肺炎支原体生物学及其疫苗研究状况

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中国生物制品学杂志 2016年第11期29卷 1221-1224页

作者：李泽华廖国阳中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

急性呼吸道感染的死亡率仅次于心血管疾病,成为威胁人类健康的公共卫生问题。已有多种肺炎相关病原体疫苗上市或研发,但针对支原体引发肺炎的有效疫苗却鲜有报道,加之其特殊的结构特点,使用常规药物很难进行有效治疗,导致发病率逐年增... 详细信息

急性呼吸道感染的死亡率仅次于心血管疾病,成为威胁人类健康的公共卫生问题。已有多种肺炎相关病原体疫苗上市或研发,但针对支原体引发肺炎的有效疫苗却鲜有报道,加之其特殊的结构特点,使用常规药物很难进行有效治疗,导致发病率逐年增加。对支原体引发肺炎的相关机制、预防及治疗手段的研究逐渐成为热点,通过对相关疫苗的研发降低其危险性愈发重要。

关键词：呼吸道感染肺炎支原体疫苗

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宿主遗传因素对疫苗接种后免疫反应的影响

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中国生物制品学杂志 2015年第2期28卷 199-203页

作者：李莹姚宇峰史荔中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

疫苗是当今世界预防感染性疾病的主要手段,在降低传染病的发病率和死亡率方面,几乎没有其他干预方式能够达到疫苗的效果。众所周知,机体对疫苗的反应与很多因素有关,包括年龄、性别、种族、身体质量指数、疫苗的质量、注射剂量以及注射... 详细信息

疫苗是当今世界预防感染性疾病的主要手段,在降低传染病的发病率和死亡率方面,几乎没有其他干预方式能够达到疫苗的效果。众所周知,机体对疫苗的反应与很多因素有关,包括年龄、性别、种族、身体质量指数、疫苗的质量、注射剂量以及注射方式等。但就同一种疫苗而言,机体的遗传因素在免疫应答中发挥着重要作用。研究表明,直接或间接参与免疫反应的各种基因,例如,宿主细胞膜上的病毒受体基因、先天Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)基因、细胞因子及其受体基因、人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)基因等,其单个变异或多个的变异均可能与疫苗所引起的免疫应答水平相关。本文就人群遗传因素与免疫反应的相关性作一综述。

关键词：宿主遗传因素 HLA 免疫反应

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