检索结果-内蒙古大学图书馆

中华实验和临床病毒学杂志 2014年第3期28卷 191-193页

作者：张海燕曹晗王俊荣张名梁疆莉马艳顾琴杨卉娟孙明波中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的研究流行性乙型脑炎Vero细胞灭活疫苗毒种（P3毒株）在生产过程中的遗传稳定性,为疫苗的安全性和免疫原性评价提供依据.方法检测P3毒株鼠脑传代一代毒株、主种子、工作种子、疫苗及疫苗续传5代后病毒E蛋白基因核苷酸及氨基酸序列... 详细信息

目的研究流行性乙型脑炎Vero细胞灭活疫苗毒种（P3毒株）在生产过程中的遗传稳定性,为疫苗的安全性和免疫原性评价提供依据.方法检测P3毒株鼠脑传代一代毒株、主种子、工作种子、疫苗及疫苗续传5代后病毒E蛋白基因核苷酸及氨基酸序列,并与GenBank中乙脑病毒P3株（AF036919）进行比对分析,同时比较主种子、工作种子、疫苗及疫苗续传5代后毒株的病毒滴度、抗原含量及效价.结果以上5代次病毒的E蛋白基因核苷酸及蛋白质序列完全相同,同源性均为100％,与GenBank中乙脑病毒P3株（AF036919）比较显示：核苷酸序列中第E9、E10、E324、E330、E1223、E1338基因位点存在差异,同源性为99.73％,其中只有E1223突变引起相应氨基酸aE408突变（L→S）,同源性为99.80％,但该位点为非毒力相关位点,而其他位点均为沉默突变.4个代次疫苗毒株病毒滴度均≥8.0 lgLD50/ml,且各代次抗原含量及效价较为相似.结论在生产乙型脑炎灭活疫苗（P3株）过程中建立的以Vero细胞为基质的乙脑毒种库具有良好的遗传稳定性.

关键词：脑炎病毒,日本疫苗,灭活遗传学,生物化学蛋白质E

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低剂量IL⁃2注射对EV⁃A71乳鼠感染模型的影响

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病毒学报 2022年第4期38卷 866-873页

作者：姬桐李慧张志晓朱文兵杨燕吴忠香董少忠宋杰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所国家药品监督管理局疫苗及生物制品质量控制与评价重点实验室昆明650118

肠道病毒A组71型(Enterovirus 71,EV⁃A71)是引起婴幼儿手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)的主要病原体,研究表明EV⁃A71感染诱发的中枢神经系统(Central nervous system,CNS)并发症与EV⁃A71患儿机体的免疫失调有着密切的关系。白细胞介素⁃2(interleukin⁃2,IL⁃2)是一种能激活T细胞,并维持T细胞分化和增殖的T细胞生长因子,同时也参与炎症或自身免疫性反应。本研究旨在研究低剂量IL⁃2(500 IU/只)对EV⁃A71感染乳鼠模型的影响。研究结果发现,注射低剂量IL⁃2能显著改善EV⁃A71感染BALB/c乳鼠的存活率和疾病指数,能明显减轻EV⁃A71感染BALB/c乳鼠的脑部和肺部的病理损伤,能显著降低EV⁃A71感染Balb/c乳鼠脑部的病毒载量,并且能显著下调IL⁃1β、IL⁃6、IL⁃18和TNF⁃α的表达。本研究的结果初步提示了低剂量IL⁃2用于治疗HFMD的有效性,为IL⁃2用于EV⁃A71感染导致的HMFD患者的临床治疗提供了理论依据。

关键词： EV⁃A71 手足口病低剂量IL⁃2

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肠道病毒71型灭活疫苗灭活验证超速离心条件的优化

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中国生物制品学杂志 2018年第2期31卷 192-194,199页

作者：赵恒袁梅严皎王云飞杨佳蒋国润史磊冯凯杨晓蕾洪超中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所质量检定室云南昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的优化肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)灭活疫苗灭活验证超速离心条件,为EV71灭活疫苗灭活验证样品的处理提供实验依据。方法在不同转速(45 000、40 000、35 000、30 000、25 000 r/min)和时间(120、90、60、30 min)条件下对EV71... 详细信息

目的优化肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)灭活疫苗灭活验证超速离心条件,为EV71灭活疫苗灭活验证样品的处理提供实验依据。方法在不同转速(45 000、40 000、35 000、30 000、25 000 r/min)和时间(120、90、60、30 min)条件下对EV71收获液进行超速离心,检测离心前和离心后病毒液的滴度,计算回收率,比较不同条件下离心前后病毒回收效果。结果在转速相同或离心时间相同的条件下,EV71的沉淀效果与离心时间或离心转速呈正相关(R^2从0.77和0.88分别增大到0.99),其中,当离心转速超过40 000 r/min时,不同离心时间下病毒的回收率均在90%以上,当离心时间为120 min,离心转速为45 000 r/min时,病毒的沉淀效果最好,回收率最高,达98%。综合离心时间因素,选择离心条件为45 000 r/min-60 min较适宜(回收率为97%),与45 000 r/min-120 min相比,差异无统计学意义(P>0.05);如将时间减为45 000 r/min-30 min,与其他3组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 EV71的沉淀效果与离心转速和离心时间呈正相关,即随着离心转速增大和离心时间的延长,病毒的沉淀效果越好、回收率越高。

关键词：肠道病毒71型超速离心回收率

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云南省柯萨奇病毒A组10型的全基因组分析

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昆明医科大学学报 2025年第2期46卷 23-29页

作者：楚昭阳李佳玲陈俊薇冯昌增张名李丽马绍辉中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 昆明医科大学海源学院云南昆明650106 云南大学生命科学学院云南昆明650504 昆明市妇幼保健院检验科云南昆明650031

目的分析从2022年手足口病患儿粪便样品中分离到的柯萨奇病毒A组10型(coxsackievirus A10,CVA10)分离株的全基因组特征。方法经人横纹肌肉瘤细胞(human rhabdomyosarcoma,RD)分离得到该分离株,将其命名为155/YN/CHN/2022。提取病毒RNA,... 详细信息

目的分析从2022年手足口病患儿粪便样品中分离到的柯萨奇病毒A组10型(coxsackievirus A10,CVA10)分离株的全基因组特征。方法经人横纹肌肉瘤细胞(human rhabdomyosarcoma,RD)分离得到该分离株,将其命名为155/YN/CHN/2022。提取病毒RNA,采用反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增其VP1序列,鉴定血清型。然后分段全基组扩增并拼接155/YN/CHN/2022的全基因组序列,利用MEGA7.0、DNAStar7.1和Simplot3.5.1等软件对序列进行分析。结果CVA10分离株155/YN/CHN/2022经扩增及拼接后得到的全基因组序列长为7403 nt,其中5'UTR区为746 nt,3'UTR区为76 nt,编码区长6552 nt,该分离株与CVA10原型株的核苷酸序列和氨基酸序列一致性分别为78.43%和95.30%,而与其他国内外CVA10分离株的核苷酸序列和氨基酸序列一致性分别为91.18%~95.06%和97.63%~98.54%。系统发育分析发现,155/YN/CHN/2022位于C基因型。P1、P2、P3系统发育结果显示,在P2、P3非编码区,该分离株与其他血清型毒株可能发生过重组。Simplot重组分析也显示,CVA10分离株155/YN/CHN/2022可能在非编码区出现重组事件。结论CVA10分离株155/YN/CHN/2022属于C基因型,和近年来中国大陆流行株属于同一基因型。

关键词：手足口病柯萨奇病毒A组10型全基因组进化分析

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树鼩呼肠孤病毒的分离鉴定

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Zoological Research 2013年第2期34卷 116-120页

作者：徐娟黄晓燕李晓飞王文广殷安国夏雪山孙晓梅代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 昆明理工大学生命科学与技术学院云南昆明650500

致病性病毒严重危害树鼩（treeshrew,Tupaia）生命健康,但却鲜见有关树鼩自然感染病毒的报道。该研究采集6份因腹泻死亡的野生树鼩粪便,用Vero细胞进行病毒分离,72h后细胞发生病变,特征为颗粒增多、破碎、变圆固缩、拉网及脱落等;电镜... 详细信息

致病性病毒严重危害树鼩（treeshrew,Tupaia）生命健康,但却鲜见有关树鼩自然感染病毒的报道。该研究采集6份因腹泻死亡的野生树鼩粪便,用Vero细胞进行病毒分离,72h后细胞发生病变,特征为颗粒增多、破碎、变圆固缩、拉网及脱落等;电镜观察显示该病毒为球形,双层衣壳,完整直径-75nm。纯化病毒经核酸PAGE电泳后呈现10个核酸节段,并为典型的3：3：4排列。哺乳动物呼肠孤病毒（mammalian orthoreovirus,MRV）L1基因保守区RT-PCR检测、序列分析及进化树构建结果表明,该病毒株属于MRV,且与来源于蝙蝠的呼肠孤病毒分离株（T3/Bat/Germany/342/08）同源性最高。MRV是人兽共患病病毒,该实验首次从树鼩体内成功分离到MRV,对今后研究制定实验树鼩病毒学控制标准具有指导意义,同时为有效预防该病毒在树鼩与人类之间传播提供了实验依据。

关键词：树鼩呼肠孤病毒分离鉴定

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树鼩原代小胶质细胞的分离培养、纯化与鉴定

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动物学杂志 2019年第3期54卷 445-450页

作者：黎晓慧李明学黄鑫张志成袁圆代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 昆明医科大学中国医学科学院医学生物学研究所昆明650500

本文旨在建立树鼩(Tupaia belangeri)小胶质细胞原代培养及纯化的方法,为利用新型实验动物树鼩进行相关研究工作提供实验材料。将新生树鼩大脑皮质机械分离,皮质组织块用胰蛋白酶消化后制成细胞悬液;培养9～10 d后,分别采用直立手拍法... 详细信息

本文旨在建立树鼩(Tupaia belangeri)小胶质细胞原代培养及纯化的方法,为利用新型实验动物树鼩进行相关研究工作提供实验材料。将新生树鼩大脑皮质机械分离,皮质组织块用胰蛋白酶消化后制成细胞悬液;培养9～10 d后,分别采用直立手拍法、温和胰酶消化法以及恒温振荡法分离纯化树鼩小胶质细胞,通过差速贴壁进一步纯化。荧光显微镜下,利用小胶质细胞的特异性标记物CD11b抗体进行鉴定。结果显示,小胶质细胞分离培养第3天时呈静息状态,表现为梭形、杆状、分支状等不规则形态。细胞免疫荧光CD11b呈阳性。不同纯化方法细胞免疫荧光并计数显示,直立手拍法所获得的细胞产量明显高于恒温振荡法(P <0.05),细胞阳性率(> 96%)明显高于温和胰酶消化法(> 90%,P <0.05)。直立手拍法可获得产量及纯度高的树鼩原代小胶质细胞。

关键词：树鼩原代小胶质细胞直立手拍法温和胰酶消化法恒温振荡法

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Sabin IPV基础免疫后不同时间的中和抗体水平研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2012年第3期26卷 196-198页

作者：刘婧马艳孙明波伍胤杰周武刚谢炳锋张名唐聪杨卉娟杨晓蕾中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大疾病传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的探讨不同剂量配比的Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗（SabinIPV）基础免疫后中和抗体的持续时间及加强免疫前后中和抗体水平的变化。方法用不同配比的Ⅰ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒原液制备两批SabinIPV，并使用GSK制备的DTaP—WIPV作为阳性对... 详细信息

目的探讨不同剂量配比的Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗（SabinIPV）基础免疫后中和抗体的持续时间及加强免疫前后中和抗体水平的变化。方法用不同配比的Ⅰ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒原液制备两批SabinIPV，并使用GSK制备的DTaP—WIPV作为阳性对照组，对18只Wistar大鼠进行3针基础免疫后，每间隔3个月采血直到加强免疫前，并同时于加强免疫后1个月采血，并对血清中抗脊髓灰质炎病毒3个型别的中和抗体效价进行初步研究。结果大鼠采用0、1、2月免疫程序进行3针免疫后，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒中和抗体的几何平均滴度随着时间的变化均有所下降，但绝大部分组大鼠的血清中和抗体阳转率仍维持在100％，在加强免疫后，各组的三个型别的中和抗体水平在短期内明显升高。结论SabinIPV有良好的免疫持久性，并在加强免疫后，可产生更高水平的中和抗体。

关键词：脊髓灰质炎病毒疫苗灭活抗体病毒

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两种佐剂甘草酸二铵和苦参素对甲型肝炎病毒抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响

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中国生物制品学杂志 2014年第4期27卷 463-466页

作者：王霄罗婷李虹娟段志青王陈芸王海漩胡云章胡凝珠中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所疫苗研究室云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南昆明650118 昆明医科大学生物所云南昆明650500

目的探讨两种佐剂甘草酸二铵和苦参素对甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响。方法将两种佐剂均按低(100μg)、中(500μg)、高(1 mg)3个剂量,分别与18 EU HAV抗原混合,免疫ICR小鼠,并设生理盐水对照组(... 详细信息

目的探讨两种佐剂甘草酸二铵和苦参素对甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响。方法将两种佐剂均按低(100μg)、中(500μg)、高(1 mg)3个剂量,分别与18 EU HAV抗原混合,免疫ICR小鼠,并设生理盐水对照组(生理盐水200μl)、HAV抗原对照组(HAV抗原18 EU)和铝佐剂对照组(HAV抗原18 EU+铝佐剂300μg),共9组,均经腹部皮下多点注射,共免疫1次。分别于免疫后第4、8、12、16周采血,分离血清,采用ELISA法检测抗-HAV IgG抗体水平。免疫后第16周处死小鼠,分别取甘草酸二铵和苦参素最佳剂量组及生理盐水对照组小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏组织,进行病理观察。结果免疫后第4、8、12、16周,除生理盐水对照组外,其他各组小鼠血清中均可检测到抗-HAV IgG抗体,且抗体水平除甘草酸二铵中剂量组和苦参素低剂量组外,均在第8周达峰值;甘草酸二铵各剂量组小鼠的血清抗体水平均明显高于HAV抗原对照组(P<0.05),其中甘草酸二铵低剂量组的抗体水平最高,且在第8周时超过铝佐剂对照组;苦参素各剂量组小鼠免疫后各周血清抗-HAV IgG抗体水平均显著高于HAV抗原对照组(P<0.05),其中苦参素低剂量组抗体水平最高,其抗体水平在第12周达峰值。实验期间,各组小鼠均未出现异常表现,各组织均未发现病理改变。结论甘草酸二铵和苦参素均能明显增强HAV抗原诱导小鼠体液免疫应答的水平,具有成为新型疫苗佐剂的研发价值。

关键词：甘草酸二铵苦参素佐剂甲型肝炎病毒抗原体液免疫

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树鼩HGF全长编码序列的克隆及分子特征分析

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中国比较医学杂志 2016年第5期26卷 10-18页

作者：李振宇陈玲霞尹博文苗雨润宋庆凯代解杰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的获取树鼩肝细胞生长因子的全长编码序列并进行分子特征分析。方法以树鼩肝组织总RNA为材料,通过RT-PCR扩增和序列拼接获得树鼩肝细胞生长因子全长编码序列,进而通过DNAMAN,Pymol等生物信息学软件对其序列和分子特征进行分析。结果树... 详细信息

目的获取树鼩肝细胞生长因子的全长编码序列并进行分子特征分析。方法以树鼩肝组织总RNA为材料,通过RT-PCR扩增和序列拼接获得树鼩肝细胞生长因子全长编码序列,进而通过DNAMAN,Pymol等生物信息学软件对其序列和分子特征进行分析。结果树鼩HGF分子结构在进化中相对保守,树鼩HGF整体结构与人相似。但树鼩HGFαNK1区域相比人HGF多出一个α螺旋,并且有两个更长的β折叠片,另外,树鼩在该区域存在一个很强的表面正电荷区域。这些差异可能会对树鼩HGF与其受体的作用方式产生影响。结论本实验为明确树鼩HGF与其受体的作用方式和树鼩HGF的合成与制备奠定了基础。

关键词：树鼩肝细胞生长因子分子克隆结构预测

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恒河猴大脑皮质星形胶质细胞的原代培养及鉴定

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中国细胞生物学学报 2017年第1期39卷 58-64页

作者：王建斌冯敏廖芸王丽春张莹范胜涛李琦涵中国医学科学院医学生物学研究所&北京协和医学院云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 中国医学科学院病原生物学研究所&北京协和医学院北京100730

为建立有效纯度高的恒河猴星形胶质细胞体外培养体系,无菌条件下取6月龄恒河猴婴猴的大脑皮质,除去白质,充分剪碎后机械吹打制成细胞悬液接种培养,待原代培养的细胞长满培养皿后,通过恒温摇床振荡和传代差速贴壁除去寡突胶质细胞、成纤... 详细信息

为建立有效纯度高的恒河猴星形胶质细胞体外培养体系,无菌条件下取6月龄恒河猴婴猴的大脑皮质,除去白质,充分剪碎后机械吹打制成细胞悬液接种培养,待原代培养的细胞长满培养皿后,通过恒温摇床振荡和传代差速贴壁除去寡突胶质细胞、成纤维细胞等,得到纯化后的星形胶质细胞,并用GFAP-FITC(glial fibrillary acidic protein-fluorescein isothiocyanate)免疫荧光法对所获细胞进行鉴定。分离培养的细胞具备典型的星形胶质细胞形态,并表达星形胶质细胞特异性抗原GFAP(glial fibrillary acidic protein),纯化后获得了高纯度的恒河猴星形胶质细胞。采用该培养方法成功建立原代恒河猴星形胶质细胞培养体系,为体外研究嗜神经性病毒、神经系统疾病及其相关中枢神经病理机制等提供了可靠的细胞模型。

关键词：星形胶质细胞恒河猴原代培养 GFAP

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