检索结果-内蒙古大学图书馆

病毒学报 2017年第6期33卷 861-867页

作者：宋杰胡雅洁黄星刘龙丁中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

柯萨奇病毒A组16型(Coxsakievirus A 16,CV-A16)与肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV-A71)是引发手足口病(Hand foot and mouth disease,HFMD)的两种主要病原体,然而两者的致病机理仍未完全被阐明。病毒感染对肠道上皮细胞间连接分子排布... 详细信息

柯萨奇病毒A组16型(Coxsakievirus A 16,CV-A16)与肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV-A71)是引发手足口病(Hand foot and mouth disease,HFMD)的两种主要病原体,然而两者的致病机理仍未完全被阐明。病毒感染对肠道上皮细胞间连接分子排布和表达直接与病毒感染造成的后果相关。本研究通过右旋糖苷穿透实验、免疫荧光以及蛋白免疫印迹等技术检测了CV-A16和EV-A71感染对肠道上皮细胞系(Intestinal epithelial cell)FHC后细胞通透性的变化以及细胞间连接分子排布和表达情况。研究结果表明,CV-A16和EV-A71感染FHC可导致其通透性显著增强、连接分子Nectin1、Claudin4、Claudin5、ZO-1以及E-Cadherin的排布被破坏,且表达量显著性降低。这一结果提示了CV-A16和EV-A71感染肠道FHC细胞并在细胞中复制引起肠道上皮细胞损伤,导致肠道上皮细胞间连接分子排布的改变和表达量的减少。

关键词：柯萨奇病毒A组16型(CV-A16) 肠道病毒71型(EV-A71) 手足口病(HFMD) 肠道上皮通透性细胞间连接分子

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树突状细胞、CD8^+ T细胞与单纯疱疹病毒1型的潜伏感染

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中国科学：生命科学 2017年第6期47卷 606-615页

作者：张小龙李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

单纯疱疹病毒1型(HSV-1)属于疱疹病毒α亚科,是一种在人群中广泛传播的病原体.HSV-1病毒感染机体后可在宿主神经系统中建立起长期的潜伏感染,并不时地从潜伏状态"重激活"导致临床症状及体液排毒.病毒抗原特异性CD8+T细胞具有... 详细信息

单纯疱疹病毒1型(HSV-1)属于疱疹病毒α亚科,是一种在人群中广泛传播的病原体.HSV-1病毒感染机体后可在宿主神经系统中建立起长期的潜伏感染,并不时地从潜伏状态"重激活"导致临床症状及体液排毒.病毒抗原特异性CD8+T细胞具有抑制神经细胞中HSV-1"重激活",维持病毒潜伏感染状态的能力.本文从树突状细胞对病毒抗原的递呈,病毒抗原特异性CD8+T细胞的来源、种类、抗原特异性及功能等方面对近年来的研究进展做一综述.

关键词：单纯疱疹病毒1型树突状细胞 CD8+T细胞,潜伏感染

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人诺如病毒最新研究进展

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病毒学报 2017年第5期33卷 785-790页

作者：宋杰董少忠中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

人诺如病毒(Human noroviruses,HuNoVs)是杯状病毒科(Caliciviridae)的一种单股正链RNA病毒,它是导致全球急性非细菌性肠胃炎暴发的主要病原体之一。自1972年美国学者Kapikian利用透射电镜首次观察到首株诺瓦克病毒(Norwalk virus,NV)以... 详细信息

人诺如病毒(Human noroviruses,HuNoVs)是杯状病毒科(Caliciviridae)的一种单股正链RNA病毒,它是导致全球急性非细菌性肠胃炎暴发的主要病原体之一。自1972年美国学者Kapikian利用透射电镜首次观察到首株诺瓦克病毒(Norwalk virus,NV)以来,该病毒在全球范围内多次广泛流行。据报道,全球每年有超过1亿人因感染HuNoVs而发病,其临床症状主要为恶心、呕吐、腹痛和腹泻,多数患者表现为自限性,但也会导致少数婴幼儿、老人和免疫缺陷患者发展成重症,甚至死亡。HuNoVs引起的疫情暴发给全球的公共卫生安全带来了较大的威胁。本文将对HuNoVs的病原学及流行病学、体外培养体系、动物模型、免疫反应和疫苗研发的最新研究进展进行概述。

关键词：诺如病毒(NoVs) 体外培养系统动物模型免疫反应疫苗研发

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柯萨奇病毒A16型抗原与呼吸道黏膜上皮组织内先天淋巴细胞的相互关系及其疫苗应用价值

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微生物与感染 2018年第6期13卷 350-361页

作者：王永蓉廉亚茹蒋国润范胜涛冯敏杨二霞姜莉董承红赵志梅王丽春廖芸张莹李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 艾美康淮生物制药(江苏)有限公司泰州225300

柯萨奇病毒A16型(coxsakievirus A16,CA16)是引起手足口病的主要病原,但其发病及相关免疫机制尚不清楚,导致其疫苗研发面临诸多困难。众多研究表明,呼吸道黏膜上皮细胞及其相关免疫细胞尤其是天然淋巴细胞(innate lymphoid cell,ILC),... 详细信息

柯萨奇病毒A16型(coxsakievirus A16,CA16)是引起手足口病的主要病原,但其发病及相关免疫机制尚不清楚,导致其疫苗研发面临诸多困难。众多研究表明,呼吸道黏膜上皮细胞及其相关免疫细胞尤其是天然淋巴细胞(innate lymphoid cell,ILC),在很大程度上促进病毒感染中天然免疫和适应性免疫反应的激活。然而,ILC在CA16感染诱导的免疫反应中如何发挥作用仍未知晓。为揭示CA16感染过程中ILC与病原的相互关系及发挥的作用,首先利用定量反转录-聚合酶链反应(quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测CA16感染的人支气管上皮细胞16HBE和以特别配制的佐剂导入CA16灭活抗原的小鼠支气管上皮细胞CP-M175中对ILC具有激活效应的重要基因表达情况。然后,将特别配制的CA16灭活疫苗通过鼻腔免疫BALB/c小鼠,分析呼吸道黏膜组织中ILC与病毒抗原之间的相互关系。体内外实验结果均显示,CA16活病毒和灭活的病毒抗原能诱导ILC活化所需信号通路分子的表达增加,且ILC分泌的细胞因子表达增加。免疫荧光和共聚焦显微镜观察结果亦证实,病毒抗原与ILC1/ILC3分别存在共定位现象。比较4种途径/程序免疫的小鼠体内抗CA16中和抗体和特异性细胞免疫应答情况,发现采用特别配制的CA16灭活疫苗免疫小鼠能诱导产生较好的抗病毒免疫应答。结果提示,CA16抗原能通过激活ILC及其相关信号通路诱导产生有效的免疫反应。

关键词：柯萨奇病毒A16型天然淋巴细胞树突细胞呼吸道黏膜

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云南汉族人群NKG2D基因多态性与宫颈癌发生发展的相关性

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贵州医科大学学报 2018年第3期43卷 259-263,304页

作者：杨晓蕾戴书颖王小娜张新文刘舒媛付杰牛步青杨欢唐军王培智李传印中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 昆明医科大学基础医学院云南昆明650500

目的:探讨云南汉族人群NKG2D(member D)基因中的单核苷酸多态性(SNP)位点rs2255336(T>C)及rs2617160(A>T)的多态性与宫颈癌的相关性。方法:选取云南地区汉族宫颈上皮内瘤变(CIN)患者136例作为CIN组、227例宫颈癌患者作为癌症组及... 详细信息

目的:探讨云南汉族人群NKG2D(member D)基因中的单核苷酸多态性(SNP)位点rs2255336(T>C)及rs2617160(A>T)的多态性与宫颈癌的相关性。方法:选取云南地区汉族宫颈上皮内瘤变(CIN)患者136例作为CIN组、227例宫颈癌患者作为癌症组及483例健康体检人群作为对照组,采用Taqman基因分型法对3组受检者NKG2D基因中2个SNP位点rs2255336(T>C)、rs2617160(A>T)进行基因分型,研究rs2255336(T>C)、rs2617160(A>T)位点的等位基因、基因型及所构建的单倍型在各组中分布频率,用遗传模式分析软件SNPStats分析2个SNP位点的基因型与宫颈癌的相关性。结果:对照组与CIN组NKG2D基因中rs2617160(A>T)等位基因C和T分布频率比较,差异有统计学意义(P=0.049),该位点等位基因A可能是云南汉族人群CIN发生的风险因素(OR=1.31,95%CI为1.00~1.72),而该位点在对照组与癌症组、CIN组与癌症组中的分布频率比较差异无统计学意义(P>0.05);recessive模式为CIN组与对照组分析的最优遗传模式,该模式下TT-AT基因型相对于AA基因型是CIN发生的保护性因素(OR=0.58,95%CI为0.37~0.92);rs2255336(T>C)位点等位基因和基因型在对照组、CIN组、癌症组间的分布频率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:NKG2D基因中多态性位点rs2617160(A>T)的等位基因A可能是云南汉族人群宫颈癌发生的风险因素。

关键词：多态性,单核苷酸 NKG2D 宫颈肿瘤宫颈上皮内瘤变基因型云南汉族相关性

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Benzonase酶去除流感疫苗中Vero细胞DNA条件的优化

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中国生物制品学杂志 2017年第5期30卷 540-545页

作者：徐国峰耿兴良宋绍辉马磊廖国阳李卫东中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的优化非限制性内切酶Benzonase去除Vero细胞制备的H5N1流感疫苗中残余细胞DNA的条件,并结合两步柱层析法使疫苗中DNA残余达到质量要求。方法向H5N1流感病毒浓缩液中添加不同终浓度的Benzonase酶(10、20、30、40、50、60 U/ml),置于3... 详细信息

目的优化非限制性内切酶Benzonase去除Vero细胞制备的H5N1流感疫苗中残余细胞DNA的条件,并结合两步柱层析法使疫苗中DNA残余达到质量要求。方法向H5N1流感病毒浓缩液中添加不同终浓度的Benzonase酶(10、20、30、40、50、60 U/ml),置于37℃酶解不同时间(0.5、1、1.5、2、2.5、3 h),经100 k D超滤离心管,用不同p H(7.10、7.30、7.50、7.70、7.90)的PBS进行洗滤浓缩。将Benzonase酶处理的病毒液经蔗糖密度梯度离心纯化,去除部分杂蛋白,电镜下观察病毒的形态。结合两步柱层析法进一步去除Vero细胞DNA。结果 H5N1流感病毒液经终浓度为10 U/ml的Benzonase酶,37℃处理2.5 h后,用p H为7.50的PBS溶液进行洗滤,其DNA去除率可达99%以上。Benzonase酶处理前后病毒形态一致,结构完整,轮廓清晰。在用酶处理去除原液中大部分Vero细胞残余DNA的基础上,结合两步柱层析法基本可使疫苗残余外源DNA达到100 pg/剂的限定标准。结论非限制性核酸内切酶Benzonase可高效降解H5N1流感病毒液中的DNA,此方法降低流感疫苗中Vero细胞DNA简单可行,大大降低了后续工艺去除DNA的压力,同时结合两步柱层析法可使疫苗中DNA残余达到限定标准,为以Vero细胞为基质大流行流感疫苗的研发奠定了基础。

关键词： Benzonase酶 H5N1流感病毒 Vero细胞 DNA 超滤柱层析

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两种凝胶过滤介质纯化Sabin株脊髓灰质炎病毒效果的比较

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中国生物制品学杂志 2017年第10期30卷 1086-1091,1095页

作者：王虓宇朱云沈武玲平玲蔡玮孙明波中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的比较两种不同的凝胶过滤介质对Sabin株脊髓灰质炎病毒的分离纯化效果。方法将Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒收获液各3批经超滤浓缩后,分别采用Sepharose CL-6B和Sepharose 6FF填料进行凝胶过滤纯化,分段收集各纯化峰,检测D抗... 详细信息

目的比较两种不同的凝胶过滤介质对Sabin株脊髓灰质炎病毒的分离纯化效果。方法将Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒收获液各3批经超滤浓缩后,分别采用Sepharose CL-6B和Sepharose 6FF填料进行凝胶过滤纯化,分段收集各纯化峰,检测D抗原及蛋白含量,计算比活性、蛋白去除率及抗原回收率,确定病毒峰收集范围。取抗原含量最高的病毒收获液,利用DEAE Sepharose FF离子交换填料进行纯化后,检测Vero细胞DNA残留量、Vero细胞蛋白残留量、牛血清白蛋白残留量、抗生素残留量。结果 Sepharose 6FF填料按6%柱体积上样进行凝胶纯化,纯化的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型病毒收获液抗原回收率均值分别为78.69%、78.03%和78.37%,与Sepharose CL-6B填料按3%柱体积上样(77.29%、78.60%和77.36%)相比,差异无统计学意义(P>0.05)。两种填料纯化的各型收获液再经离子交换纯化后,蛋白去除率、比活性、Vero细胞DNA残留量、Vero细胞蛋白残留量、牛血清白蛋白残留量、抗生素残留量检测结果均符合《中国药典》三部(2015版)相关要求,两种填料纯化的各型收获液比活性差异无统计学意义(P>0.05)。结论使用Sepharose 6FF纯化的各型病毒纯化液抗原回收率和比活性与Sepharose CL-6B无明显差异,但可以减少纯化的上样次数,大幅提高纯化效率,可用Sepharose 6FF替换Sepharose CL-6B。

关键词：脊髓灰质炎病毒层析纯化凝胶过滤离子交换

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重组小鼠白细胞介素-33的原核表达制备及其粘膜免疫佐剂活性

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中国生物工程杂志 2017年第4期37卷 26-32页

作者：冯雪军龙琼唐增华黄惟巍刘存宝杨旭孙文佳白红妹马雁冰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心昆明650118

目的:白细胞介素(IL)-33对树突状细胞、巨噬细胞及T细胞等免疫细胞具有重要调控作用。利用大肠杆菌制备重组小鼠的IL-33,并初步考察其作为粘膜免疫佐剂应用的潜能与特点。方法:以IPTG诱导硫氧还蛋白(Trx)/IL-33融合蛋白在大肠杆菌DH5α... 详细信息

目的:白细胞介素(IL)-33对树突状细胞、巨噬细胞及T细胞等免疫细胞具有重要调控作用。利用大肠杆菌制备重组小鼠的IL-33,并初步考察其作为粘膜免疫佐剂应用的潜能与特点。方法:以IPTG诱导硫氧还蛋白(Trx)/IL-33融合蛋白在大肠杆菌DH5α中的表达,并通过QSepharose离子交换和Ni^(++)金属螯合亲和层析纯化Trx/IL-33,进一步经肠激酶切割获得成熟形式的IL-33。重组HBcAg混合纯化的IL-33后经滴鼻免疫小鼠,考察HBcAg特异的IgA及IgG_1、IgG_(2a)的应答。结果:纯化的重组IL-33具有与标准品相当的促巨噬细胞RAW264.7表达TNF-α的体外细胞生物学活性。作为佐剂可显著增强滴鼻粘膜免疫激发的不同粘膜组织中HBcAg特异的IgA应答,以及血清与支气管肺泡灌洗液中特异IgG_1的应答水平,而抑制IgG_(2a)应答。结论:利用大肠杆菌可制备活性IL-33,其具有粘膜免疫佐剂的应用潜能。

关键词：重组白细胞介素-33 表达粘膜免疫佐剂

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不同信号肽对重组B群脑膜炎奈瑟菌H因子结合蛋白表达的影响

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中国生物制品学杂志 2017年第2期30卷 141-145,149页

作者：宫悦陈晨李亚东张辉李智华肖红剑毕研伟寸韡中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的探讨不同信号肽对重组B群脑膜炎奈瑟菌H因子结合蛋白(factor H-binding protein,f HBP)表达的影响。方法运用PCR方法将B群脑膜炎奈瑟菌f HBP原始信号肽分别替换为大肠埃希菌主要外膜脂蛋白(major outer membrane lipoprotein,MLP)... 详细信息

目的探讨不同信号肽对重组B群脑膜炎奈瑟菌H因子结合蛋白(factor H-binding protein,f HBP)表达的影响。方法运用PCR方法将B群脑膜炎奈瑟菌f HBP原始信号肽分别替换为大肠埃希菌主要外膜脂蛋白(major outer membrane lipoprotein,MLP)、脂蛋白-28(lipoprotein-28,LP)和流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)P4外膜蛋白信号肽,并将其分别连接至p ET-30a表达载体,转化入大肠埃希菌感受态细胞,IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定蛋白表达水平。结果替换了P4、LP和MLP信号肽的重组B群脑膜炎奈瑟菌f HBP表达量较带原始信号肽的B群脑膜炎奈瑟菌f HBP相比,分别提高了2.68、1.94和2.91倍。结论替换MLP信号肽对重组B群脑膜炎奈瑟菌f HBP蛋白表达的影响最大,为提高B群脑膜炎奈瑟菌f HBP表达量的研究工作提供了新思路。

关键词： B群脑膜炎奈瑟菌 H因子结合蛋白信号肽原核表达

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云南汉族人群HSPA1A基因多态与宫颈癌发生发展的相关性研究

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中华医学遗传学杂志 2017年第6期34卷 909-914页

作者：张新文严志凌史荔杨宏英洪超俞建昆李传印姚宇峰中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 昆明医科大学第三附属医院妇科 650118

目的探讨云南汉族人群中HSPA1A基因多态性与宫颈癌发生和发展的相关性。方法选取宫颈癌患者以及444例癌前病变（CINⅢ期）患者130例，健康正常对照548例。用TaqMan探针基因分型方法对HSPAIA基因的4个SNP位点[rs12190359（C〉T）、rs562... 详细信息

目的探讨云南汉族人群中HSPA1A基因多态性与宫颈癌发生和发展的相关性。方法选取宫颈癌患者以及444例癌前病变（CINⅢ期）患者130例，健康正常对照548例。用TaqMan探针基因分型方法对HSPAIA基因的4个SNP位点[rs12190359（C〉T）、rs562047（C〉G）、rsl008438（G〉T）和rsl043618（G〉c）]进行基因分型，研究其等位基因、基因型及所构建的单倍型在CINUI期患者、宫颈癌患者和健康对照人群中分布频率的差异。结果rs1008438位点等位基因G和T在CINⅢ期组和对照组、癌症组和对照组（P=0．022和0．030）中的分布频率的差异具有统计学意义，而在CINⅢ期组和癌症组中的分布频率差异无统计学意义（P〉0．05）；rs1008438位点基因型GG、GT和TT仅在CINⅢ期组和对照组中分布频率差异具有统计学意义（P=0．047），而在CINⅢ期组和癌症组之间、癌症组和对照组之间的分布频率差异无统计学意义（P〉0．05）。rs12190359、rs562047和rs1043618位点的等位基因和基因型在病例组和对照组中的分布频率的差异均无统计学意义（P〉0．05）。根据连锁不平衡的分析结果，对rs562047、rs1008438和rs1043618三个位点构建的单倍型进行分析，结果未显示有单倍型在各组间分布频率的差异有统计学意义（P〉0．05）。结论HSPA1A基因rs1008438位点等位基因G可能是云南汉族人群宫颈癌发生的保护性因素（OR=0．797；95％CI：0．674-0．943）。

关键词：宫颈癌 HSPA1A基因单核苷酸多态性相关性

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