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实验动物与比较医学 2016年第4期36卷 243-249页

作者：卢孔杰徐婧雯张雪梅吴忠香任芳芳马娜巩蔚严丽蔚朱文兵董少忠中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的原核表达、纯化树鼩CD4蛋白并制备多克隆抗体,检测树鼩体内的CD4蛋白.方法克隆树鼩CD4基因并连接到表达载体,构建重组质粒pET30a（＋）-CD4和pGEX-5X-1-CD4,表达并纯化重组蛋白His-CD4和GST-CD4,用不同佐剂[弗氏佐剂、MF59和A1（O... 详细信息

目的原核表达、纯化树鼩CD4蛋白并制备多克隆抗体,检测树鼩体内的CD4蛋白.方法克隆树鼩CD4基因并连接到表达载体,构建重组质粒pET30a（＋）-CD4和pGEX-5X-1-CD4,表达并纯化重组蛋白His-CD4和GST-CD4,用不同佐剂[弗氏佐剂、MF59和A1（OH）3]制备多抗,用Western blot法检测血清抗体特异性.结果蛋白表达产物His-CD4和GST-CD4的相对分子质量分别约为53.5×103和70.0×103,纯化后蛋白浓度分别为600 μg/mL和1 mg/mL;三组佐剂均能诱导产生抗体,抗体几何平均滴度（Geometric Mean Titer,GMT）的比较结果为：弗氏佐剂组（GMT：97 420）＞Al（OH）3佐剂组（GMT：67 202）＞MF59佐剂组（GMT：55 128）;其中弗氏佐剂组显著高于原蛋白组（P＜0.001）;Al（OH）3组显著高于原蛋白组（P＜0.01）;而MF59组显著高于原蛋白组（P＜0.05）.结论制备了特异性良好的小鼠抗血清,能够特异性地结合树鼩的CD4蛋白.为下一步本实验室制备CD4单克隆抗体、CD4蛋白分子的功能研究以及树鼩的病毒感染模型等免疫相关实验的进行提供了基础.

关键词：树鼩 CD4蛋白表达纯化多克隆抗体

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肠道病毒71型与天然免疫系统相互作用的研究进展

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微生物与感染 2016年第2期11卷 122-128页

作者：张小龙李琦涵中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)为小RNA病毒科肠道病毒属成员,是引起手足口病的主要病原体之一。EV71流行广泛,其感染可引发中枢神经系统疾病,并造成重症手足口病,给公共卫生安全带来极大挑战。EV71的致病机制与病毒和宿主天然免疫... 详细信息

肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)为小RNA病毒科肠道病毒属成员,是引起手足口病的主要病原体之一。EV71流行广泛,其感染可引发中枢神经系统疾病,并造成重症手足口病,给公共卫生安全带来极大挑战。EV71的致病机制与病毒和宿主天然免疫系统的相互作用关系密切,涉及病毒逃逸干扰素反应、病毒抑制核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)信号通路及病毒与天然免疫细胞相互作用等多个环节。本文就近年来EV71与宿主天然免疫系统相互作用的研究进展进行综述。

关键词：肠道病毒71型天然免疫手足口病

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肠道病毒71型与宿主相互作用

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国际生物制品学杂志 2016年第4期39卷 176-181页

作者：张小龙李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所、云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

肠道病毒71型（enterovirus71，EV71）是引起手足口病的主要病原体之一。EV71传播广泛，感染后可引发中枢神经系统疾病，并导致重症手足口病，给公共卫生安全带来极大挑战。EV71的致病机制与病毒和宿主间的相互作用关系密切，涉及EV71... 详细信息

肠道病毒71型（enterovirus71，EV71）是引起手足口病的主要病原体之一。EV71传播广泛，感染后可引发中枢神经系统疾病，并导致重症手足口病，给公共卫生安全带来极大挑战。EV71的致病机制与病毒和宿主间的相互作用关系密切，涉及EV71病毒复制、微RNA等多个环节。此文就近年来这些方面的研究进展做一综述。

关键词：肠道病毒A型, 人病毒复制微RNAs

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病毒逃逸宿主免疫反应机制的研究进展

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生命科学 2016年第1期28卷 118-123页

作者：宋杰胡雅洁刘龙丁中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

先天性免疫反应是宿主抵御病毒感染的第一道防线,也是激活适应性免疫的基础,其在宿主清除病毒的免疫反应中发挥关键作用,成为当前免疫学研究的热点。在先天性免疫反应中,病毒感染细胞后主要通过模式识别受体识别病毒入侵,进而产生干扰... 详细信息

先天性免疫反应是宿主抵御病毒感染的第一道防线,也是激活适应性免疫的基础,其在宿主清除病毒的免疫反应中发挥关键作用,成为当前免疫学研究的热点。在先天性免疫反应中,病毒感染细胞后主要通过模式识别受体识别病毒入侵,进而产生干扰素和一系列细胞因子来抵抗病毒入侵或清除病毒;而在适应性免疫中,机体主要通过T细胞和B细胞特异性识别入侵的病毒并将其清除。与此同时,病毒为了能够更好地在宿主细胞中获得生存,进化了多种可逃逸宿主免疫系统的机制。现将主要针对于病毒逃逸宿主免疫反应的一系列机制进行阐述。

关键词：病毒先天性免疫适应性免疫免疫逃逸

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CpG ODN佐剂序列的筛选及其免疫刺激活性研究

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医学研究杂志 2016年第5期45卷 37-42页

作者：赵玉娇蔡路奎王晓丹席珏敏陈俊英潘玥邱丽娟姜黎明孙强明中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的设计和筛选对人PBMC细胞和小鼠脾细胞具有免疫刺激活性的CpGODN序列，研发能用于人用疫苗的有效核酸佐剂。方法根据具有免疫刺激活性的CpGODN序列结构特点，设计并合成出15条候选序列，分别合成并进行非硫代和硫代修饰。分选健康人P... 详细信息

目的设计和筛选对人PBMC细胞和小鼠脾细胞具有免疫刺激活性的CpGODN序列，研发能用于人用疫苗的有效核酸佐剂。方法根据具有免疫刺激活性的CpGODN序列结构特点，设计并合成出15条候选序列，分别合成并进行非硫代和硫代修饰。分选健康人PBMC细胞及Balb／c小鼠脾细胞，以不同CpGODN进行体外刺激，MTT法检测CpGODN诱导细胞增殖水平。随后将筛选出的有效CpGODN序列与人类基因组序列进行同源性比较，以评估其安全性。结果在刺激人PBMC和小鼠脾细胞72h后，硫代和非硫代修饰的15条序列A值均高于阴性对照组，其中IMB—AC5序列刺激人PBMC后A值分别达到0．377和0．334，与阳性对照ISS1018序列A值（0．387和0．338）接近；刺激小鼠脾细胞72h后，A值同样高于其他序列，达到0．571和0．486，与阳性对照ISS1018序列A值（0．588和0．464）接近。综合上述结果，选择5号非硫代序列作为候选佐剂。同源性比较结果显示，该序列与人类基因组序列没有同源性，与部分蛋白编码基因的同源性只有50％～65％，此外其部分序列与人18号染色体上的一些重复序列有同源性，最高同源性达62％。证明筛选出的新型CpGODN佐剂IMB—AC5安全性较高。结论设计筛选出对人PBMC细胞和小鼠脾细胞具有免疫刺激活性的CpGODN序列IMB—AC5，与人类基因组序列具有较低同源性，为进一步研发人用疫苗佐剂奠定基础。

关键词： CpG ODN 佐剂免疫刺激活性同源性

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成年树鼩骨骼系统CT三维可视化模型建立及分析

成年树鼩骨骼系统CT三维可视化模型建立及分析

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第十六届中国西部实验动物管理与学术研讨会

作者：罕园园徐昕陆彩霞匡德宣仝品芬王文广孙晓梅李娜代解杰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南昆明、650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 云南省科学技术院云南昆明650118 云南大学第一医院云南省第二人民医院暨云南省红十字会医院昆明650051

目的建立树鼩骨骼系统的三维可视化模型,为树鼩的骨骼系统疾病诊断提供依据.方法使用日本东芝Aquillonone320排螺旋CT进行扫描,100KV,80mA,球管转数0.35s/转,螺距1.35,图像为0.5mm,层间隔为0.5mm,使用骨算法重建.在并行计算环境中采用...

目的建立树鼩骨骼系统的三维可视化模型,为树鼩的骨骼系统疾病诊断提供依据.方法使用日本东芝Aquillonone320排螺旋CT进行扫描,100KV,80mA,球管转数0.35s/转,螺距1.35,图像为0.5mm,层间隔为0.5mm,使用骨算法重建.在并行计算环境中采用Vitrea软件包,选择Musculoskeletal CT选项,采用容积成像(VR)、多平面成像(MPR)、曲面成像(CPR)技术进行三维重建.结果重建后的可视化模型结构明显、清楚,可以真实地在计算机中重现出树鼩的骨骼系统三维模型.在此模型中,在头骨背面可见五条隆起的嵴,侧面观可见四个大孔：位于前端的外鼻孔、前颌骨后上方的眶下孔、由颧弓所范围着的眼窝和鼓泡外侧的外耳道.此外,可见一些较小的头骨孔,如视神经孔、颌下神经孔.利用该成像技术可定量测定各主要骨骼的长度、前后径、左右径和身长、尾长等数据.尤其是还获得了以往通过解剖难以测量准确的数据：如腭长、臼齿列长等较细微的数据,以及解剖不易获得脊椎前后径及左右径的数据.同时还利用三维可视化技术发现了树鼩存在有骨盆形态不对称、胸廓增大、骨折、跟腱周围滑膜囊钙化的骨骼异常情况.结论所建立的CT三维可视化技术可确定树鼩骨骼系统的特殊特征,对树鼩骨骼系统无侵入性的生态分类、鉴定、进化分析均有重要意义.

关键词：

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成年树鼩骨骼系统CT三维可视化模型建立及分析

成年树鼩骨骼系统CT三维可视化模型建立及分析

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第八届北京实验动物科学国际论坛

作者：罕园园徐昕陆彩霞匡德宣仝品芬王文广孙晓梅李娜代解杰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室，云南昆明650118 云南省科学技术院，云南昆明650118 云南大学第一医院云南省第二人民医院暨云南省红十字会医院昆明650051

目的:建立树鼩骨骼系统的三维可视化模型,为树鼩的骨骼系统疾病诊断提供依据. 方法:使用日本东芝Aquillonone320排螺旋CT进行扫描,100KV,80mA,球管转数0.35s/转,螺距1.35,图像为0.5mm,层间隔为0.5mm,使用骨算法重建.在并行计算环境... 详细信息

目的:建立树鼩骨骼系统的三维可视化模型,为树鼩的骨骼系统疾病诊断提供依据. 方法:使用日本东芝Aquillonone320排螺旋CT进行扫描,100KV,80mA,球管转数0.35s/转,螺距1.35,图像为0.5mm,层间隔为0.5mm,使用骨算法重建.在并行计算环境中采用Vitrea软件包,选择Musculoskeletal CT选项,采用容积成像(VR)、多平面成像(MPR)、曲面成像(CPR)技术进行三维重建. 结果:重建后的可视化模型结构明显、清楚,可以真实地在计算机中重现出树鼩的骨骼系统三维模型.在此模型中,在头骨背面可见五条隆起的嵴,侧面观可见四个大孔:位于前端的外鼻孔、前颌骨后上方的眶下孔、由颧弓所范围着的眼窝和鼓泡外侧的外耳道.此外,可见一些较小的头骨孔,如视神经孔、颌下神经孔.利用该成像技术可定量测定各主要骨骼的长度、前后径、左右径和身长、尾长等数据.尤其是还获得了以往通过解剖难以测量准确的数据:如腭长、臼齿列长等较细微的数据,以及解剖不易获得脊椎前后径及左右径的数据.同时还利用三维可视化技术发现了树鼩存在有骨盆形态不对称、胸廓增大、骨折、跟腱周围滑膜囊钙化的骨骼异常情况. 结论:所建立的CT三维可视化技术可确定树鼩骨骼系统的特殊特征,对树鼩骨骼系统无侵入性的生态分类、鉴定、进化分析均有重要意义.

关键词：骨骼系统疾病动物模型电子计算机断层扫描三维可视化技术

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高糖高脂灌喂法快速建立2型糖尿病小鼠模型

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医学研究杂志 2016年第6期45卷 25-28页

作者：苏婷岳俊叶君曹晗张磊陈瑜唐东红鲁帅尧中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所、云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的用高糖高脂灌喂法快速建立2型糖尿病小鼠模型。方法将30只小鼠随机分为正常对照组和2型糖尿病组,每组15只,2型糖尿病组小鼠按40mg/kg体重的剂量腹腔注射STZ,连续注射5天停药,同时每天灌喂高糖高脂乳液2ml至4周,然后通过血糖、血脂... 详细信息

目的用高糖高脂灌喂法快速建立2型糖尿病小鼠模型。方法将30只小鼠随机分为正常对照组和2型糖尿病组,每组15只,2型糖尿病组小鼠按40mg/kg体重的剂量腹腔注射STZ,连续注射5天停药,同时每天灌喂高糖高脂乳液2ml至4周,然后通过血糖、血脂、葡萄糖耐量试验、胰岛素耐受试验和组织病理检测等进行2型糖尿病特征的综合评价。结果 2型糖尿病组小鼠空腹血糖值达9.94mmol/L,出现高胆固醇、高甘油三酯和高低密度脂蛋白的混合型高脂血症;葡萄糖耐量试验和胰岛素耐受试验结果表明,糖耐量受损并有明显的胰岛素耐受;组织病理分析发现,肝脏、胰腺和肾脏组织出现不同程度的脂肪变性和炎症。结论快速建立了具有人类2型糖尿病临床和组织病理特征的2型糖尿病小鼠模型。

关键词： 2型糖尿病模型高糖高脂 STZ 小鼠

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肠道病毒71型毒株体外不同温度连续传代其生物学特性变化研究

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中国病毒病杂志 2016年第2期6卷 113-119页

作者：朱凡丽李华谢天宏杨婷宋霞王玺沈冬刘正玲岳磊谢忠平中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的探究肠道病毒71型(EV-A71)FY23-K株在不同温度下连续传代对其生物学特性的影响,旨在获得EV-A71的减毒候选株。方法在33℃条件下进行FY23-K株克隆筛选,之后分别在33℃及35℃下连续传代,并进行病毒生长增殖特性、乳鼠致病性及在小鼠... 详细信息

目的探究肠道病毒71型(EV-A71)FY23-K株在不同温度下连续传代对其生物学特性的影响,旨在获得EV-A71的减毒候选株。方法在33℃条件下进行FY23-K株克隆筛选,之后分别在33℃及35℃下连续传代,并进行病毒生长增殖特性、乳鼠致病性及在小鼠体内的免疫原性检测,对比分析其各项生物学特性的变化。结果挑选出感染性滴度较高的6个克隆,在33℃条件下连续传代后发现,其感染性滴度逐渐降低,且相同接种条件下,达到75%病变程度的收获时间随代次的增加逐渐延长,至26代后,接种至第8天细胞病变程度只达到40%。而在35℃条件下连续传代的病毒能够稳定增殖,保持良好的生长特性,毒株感染性滴度>6.5lg CCID50/ml;35℃传代后毒株的免疫原性良好,6株克隆株有4株样品的灭活抗原免疫小鼠后抗体的阳转率可达100.0%,GMT可达1∶128,最高的中和抗体效价为1∶512;活病毒免疫小鼠抗体阳转率达88.9%以上,中和抗体效价均>1∶16;传代样品攻击乳鼠后,乳鼠无发病、死亡情况,其脑、脊髓也未产生明显病理性损伤,仅在肌肉组织细胞间隙发现少量的炎性细胞浸润,在脑前额叶出现数个胶质小结。结论 FY-23K克隆株在35℃低温连续传代后有稳定的生长特性和良好的免疫原性,对乳鼠未表现出明显致病性,可作为EV-A71减毒活疫苗进一步研究的候选毒株。

关键词：手足口病肠道病毒71型减毒活疫苗

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小鼠在柯萨奇病毒A组16型活病毒免疫原性评价中的应用

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实验动物与比较医学 2016年第6期36卷 409-414页

作者：孟华清杨婷谢天宏李华岳磊宋霞张也谢忠平中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的评价小鼠在柯萨奇病毒A组16型（CA16）活病毒感染中免疫原性的应用，为减毒活疫苗研究提供实验数据。方法以不同剂量的CA16活病毒通过皮下、腹腔和肌肉途径接种不同年龄的ICR和BALB／C小鼠，采集初次免疫7d、21d、28d以及加强免疫7... 详细信息

目的评价小鼠在柯萨奇病毒A组16型（CA16）活病毒感染中免疫原性的应用，为减毒活疫苗研究提供实验数据。方法以不同剂量的CA16活病毒通过皮下、腹腔和肌肉途径接种不同年龄的ICR和BALB／C小鼠，采集初次免疫7d、21d、28d以及加强免疫7d后的血样：通过微量细胞病变中和法检测中和抗体效价，细胞因子ELISA检测试剂盒检测6种细胞因子含量。结果初次免疫后28d，肌肉、腹腔和皮下途径免疫的小鼠血清抗体阳转率分别为83．33％、40．00％和0．00％，抗体几何平均效价（GMT）分别为1：169、1：32和0；加强免疫后，肌肉、腹腔和皮下途径免疫的小鼠血清抗体阳转率均达100％，抗体GMT分别为1：813、l：609和1：32，肌肉和腹腔途径免疫的小鼠血清抗体GMT平均增长4．8倍和19．0倍；加强免疫7d的抗体阳转率达100％；明显高于初次免疫28d和21d；BALB／c小鼠与ICR小鼠相比，前者的中和抗体效价和抗体阳转率明显高于后者，而小鼠年龄对中和抗体效价和抗体阳转率的影响不显著（P〉0．05）；免疫剂量对中和抗体效价和抗体阳转率的影响显著（P〈0．05），高剂量病毒免疫小鼠后中和抗体效价和抗体阳转率明显比低剂量高（P〈0．05）；细胞因子检测结果显示加强免疫7d后的白细胞介素100L-10）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的含量与初次免疫7d的相比显著增加。结论BALB／c和ICR小鼠可做为CA16活病毒免疫原性评价的动物模型，以4～6周龄的BALB/c小鼠最为敏感。

关键词：柯萨奇病毒A组16型(CA16) 免疫原性细胞因子减毒活疫苗

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