检索结果-内蒙古大学图书馆

生物学杂志 2016年第5期33卷 58-62页

作者：张磊周艳闫姗姗解裕萍耿盼盼孙茂盛李鸿钧中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

脂肪因子adipsin是由脂肪细胞分泌的一类细胞信号蛋白,其在刺激胰岛素分泌、控制血糖中具有重要的调控作用。以重组腺病毒系统作为载体,将adipsin转移至Zucker Diabetic Fatty(ZDF)2型糖尿病大鼠体内,对大鼠进行基因治疗探索,为进一步... 详细信息

脂肪因子adipsin是由脂肪细胞分泌的一类细胞信号蛋白,其在刺激胰岛素分泌、控制血糖中具有重要的调控作用。以重组腺病毒系统作为载体,将adipsin转移至Zucker Diabetic Fatty(ZDF)2型糖尿病大鼠体内,对大鼠进行基因治疗探索,为进一步研究脂肪因子adipsin与代谢性疾病如2型糖尿病等之间相互作用机制提供了前期的基础。首先,通过构建携带adipsin的重组腺病毒质粒p Ad Easy-CMV-adipsin,并在HEK293细胞中成功包装出重组腺病毒Ad-adipsin;其次,通过PCR和Western blotting检测ADIPSIN蛋白在HEK293细胞中的表达;最后,测定重组腺病毒Ad-adipsin滴度,并通过尾静脉注射的方式,将重组腺病毒Ad-adipsin导入2型糖尿病模型大鼠体内,评价脂肪因子adipsin的基因治疗作用。研究结果显示,2型糖尿病模型大鼠ZDF(fa/fa)的空腹血糖值(FPG)、空腹胰岛素值(FINS)、血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白(LDL-c)等与注射重组腺病毒Ad-lac Z的对照组相比有显著下降(P<0.05),并且胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)显著降低(P<0.05),以上结果表明,重组腺病毒Ad-adipsin可以有效改善2型糖尿病模型ZDF大鼠的糖、脂质代谢紊乱,对大鼠2型糖尿病发生发展具有一定的保护效果。

关键词： adipsin ZDF大鼠 2型糖尿病

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CXCL5基因敲除小鼠的繁殖、基因型鉴定及与野生型小鼠的比较

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国际生物制品学杂志 2016年第1期39卷 15-19页

作者：宋杰胡雅洁胡云光李嘉祺王艳翠刘龙丁中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的繁殖和鉴定CXC趋化因子配体5（CXCchemokineligand5，CxcL5）基因敲除小鼠，以获得CXCL5-／-纯合子小鼠并与野生型小鼠进行比较。方法将CXCL5＋/-杂合子小鼠繁殖后，剪取子代小鼠耳组织，提取基因组DNA，用PCR法鉴定子代小鼠的基因... 详细信息

目的繁殖和鉴定CXC趋化因子配体5（CXCchemokineligand5，CxcL5）基因敲除小鼠，以获得CXCL5-／-纯合子小鼠并与野生型小鼠进行比较。方法将CXCL5＋/-杂合子小鼠繁殖后，剪取子代小鼠耳组织，提取基因组DNA，用PCR法鉴定子代小鼠的基因型。采用独立样本t检验比较同周龄同性别CXCL5基因敲除纯合子小鼠与野生型小鼠的体重和结直肠长度，并通过苏木素-伊红染色观察两种基因型小鼠的结肠形态结构。结果经繁殖，共获得60只CXCL5-/-纯合子小鼠和55只野生型小鼠。4、6、8、10周龄雌性CXCL5-/-小鼠的体重分别为（10．08±0．78）、（14．55±0．92）、（18．01±0．68）和（19．75±1．23）g，明显轻于同龄雌性野生型小鼠[（11．43±0．85）、（18．42±0．76）、（20．42±1．63）和（21．27±1．66）g]（t值分别为-2．622、-7．253、-3．042、-1．644，P值均〈0．05）；6、8周龄雄性CXCL5-／-小鼠的体重分别为（17．46±0．74）和（20．62±1．62）g，也明显轻于同龄雄性野生型小鼠[（20．47±1．66）和（23．33±1．67）g]（t值分别为-3．688、-2．885，P值均〈0．05）。6周龄雌性CXCL5-／-小鼠的结直肠长度为（6．86±0．17）cm，与同龄雌性野生型小鼠（7．66±0．11）cm的长度相比，明显较短（t=-8．835，P〈0．05），但结肠的形态结构无明显改变。结论成功获得了CXCL5基因敲除纯合子小鼠，为深入研究CXCL5的生物学功能奠定了基础。

关键词：趋化因子CXCL5 基因敲除小鼠繁殖基因型

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驯养繁殖树鼩主要消化腺的组织学观察

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实验动物与比较医学 2016年第1期36卷 13-18页

作者：匡德宣王文广孙晓梅黄晓云陆彩霞罕园园仝品芬代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心/云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的了解树鼩主要消化腺的组织学结构特征,建立树鼩正常的消化腺组织学图谱.方法采用常规组织处理、制片、HE染色及显微镜技术对人工驯养繁殖仔一代树鼩腮腺、颌下腺、舌下腺、胰腺和肝脏进行了组织学观察.结果（1）腮腺为纯浆液性腺... 详细信息

目的了解树鼩主要消化腺的组织学结构特征,建立树鼩正常的消化腺组织学图谱.方法采用常规组织处理、制片、HE染色及显微镜技术对人工驯养繁殖仔一代树鼩腮腺、颌下腺、舌下腺、胰腺和肝脏进行了组织学观察.结果（1）腮腺为纯浆液性腺泡,闰管明显,管壁由单层低立方形上皮细胞组成,官腔充满分泌物.（2）颌下腺为混合性腺体,以浆液性腺泡为主,分泌管较长.（3）舌下腺是以黏液性腺泡为主的混合腺,含有少量闰管.（4）肝脏表面为一薄层致密结缔组织被膜,肝实质为多个分界不明显的肝小叶,肝小叶中央为中央静脉.肝细胞呈多边形,核大而圆,位于细胞中央,多数为单核,少数为双核,细胞质呈红色,胞质内有空泡和小腔隙.汇管区小叶间动脉、小叶间静脉及小叶间胆管结构较为明显.（5）胰腺表面为一层疏松结缔组织被膜,胰腺实质由外分泌部和内分泌部组成.外分泌部包含腺泡和导管,腺泡由浆液性腺细胞组成,导管由闰管、小叶内导管、小叶间导管、叶间导管和胰管组成.内分泌部又称为胰岛,是一些大小不等的细胞团和细胞索,不规则地散布于外分泌部的腺泡之间,胞质染色较外分泌部浅.结论树鼩消化腺在组织形态学上接近于灵长类动物,可以为研究树鼩消化腺的功能和病变,以及建立人类相关疾病的动物模型提供组织学依据.

关键词：树鼩驯养繁殖腮腺颌下腺舌下腺肝脏胰腺组织学

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树鼩角膜内皮细胞体外原代培养方法的建立

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实验动物科学 2016年第5期33卷 1-8页

作者：苗雨润宋庆凯陈玲霞尹博文李晓飞代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室树鼩种子资源中心昆明650118

目的建立树鼩角膜内皮细胞(corneal endothelial cells,CECs)体外分离、培养及纯化的稳定技术,为人类眼科角膜疾病提供新的实验材料。方法通过比较揭膜法、双酶消化法及揭膜-消化两步法,确定每种树鼩原代CECs取材方法的优劣性。分别使用... 详细信息

目的建立树鼩角膜内皮细胞(corneal endothelial cells,CECs)体外分离、培养及纯化的稳定技术,为人类眼科角膜疾病提供新的实验材料。方法通过比较揭膜法、双酶消化法及揭膜-消化两步法,确定每种树鼩原代CECs取材方法的优劣性。分别使用DMEM/F12,M199,Ham’s F12/M199三种培养液以确定树鼩CECs原代细胞最适培养液。使用TGF-β抑制剂、低血清培养法及梯度消化法来探讨树鼩CECs纯化的可行性。苏木精-伊红染色观察细胞形态,根据树鼩神经元烯醇化酶(NES)设计并筛选特异性引物,使用PCR方法检测细胞NES表达情况并用NES抗体进行细胞免疫荧光染色鉴定。结果揭膜法可以快速、有效得到高纯度的树鼩CECs细胞。Ham’s F12/M199培养液是树鼩CECs的最适培养液。使用TGF-β抑制剂可以达到CECs的纯化目的。结论优化的树鼩CECs细胞培养纯化方法对树鼩CECs的体外培养更适宜,优化条件下分离培养的细胞符合CECs的一般特征。

关键词：树鼩角膜内皮细胞体外原代培养优化

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Optiprep连续密度梯度离心方法的建立

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生物技术通讯 2016年第6期27卷 834-837页

作者：张辉毕研伟李智华李亚东宫悦寸韡中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的：试验不同条件,优化Optiprep密度梯度离心方法,建立最佳的Optiprep连续密度梯度,为纯化病毒提供良好的参数。方法：试验不同的旋转角度、重复次数、离心时间,以及用不同浓度的Optiprep制备连续密度梯度等条件,摸索制备连续密度梯... 详细信息

目的：试验不同条件,优化Optiprep密度梯度离心方法,建立最佳的Optiprep连续密度梯度,为纯化病毒提供良好的参数。方法：试验不同的旋转角度、重复次数、离心时间,以及用不同浓度的Optiprep制备连续密度梯度等条件,摸索制备连续密度梯度的最佳方案,将此最佳方案应用于纯化丙肝病毒（HCV）,并通过q RT-PCR验证纯化效果。结果：通过各种条件的摸索,确立了制备连续密度梯度的最佳方案,即制备10%~40%Optiprep连续密度梯度,在旋转角度为85°时,1号程序设置为30 r/min离心5 s,2号程序设置为0 r/min 15 s,重复1~2程序10次。将此程序用于纯化HCV,得到了较好的纯化效果。结论：建立了制备Optiprep连续密度梯度离心的方法,为进一步提高病毒的纯化效果提供了参数。

关键词： Optiprep密度梯度离心碘克沙醇旋转角度纯化

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腹泻树鼩肠道阿米巴原虫携带情况调查

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实验动物与比较医学 2016年第6期36卷 415-418页

作者：宋庆凯苗雨润尹博文陈玲霞代解杰孙晓梅中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树胸种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的调查腹泻树鼩肠道中阿米巴原虫携带情况，查找可能导致树鼩腹泻的寄生虫类病原，为实验树鼩的寄生虫质量控制提供依据。方法采集78只腹泻树鼩新鲜粪便和全血，分离血清，其中野生来源样本45份，人工繁育样本33份。分别采用生理盐水... 详细信息

目的调查腹泻树鼩肠道中阿米巴原虫携带情况，查找可能导致树鼩腹泻的寄生虫类病原，为实验树鼩的寄生虫质量控制提供依据。方法采集78只腹泻树鼩新鲜粪便和全血，分离血清，其中野生来源样本45份，人工繁育样本33份。分别采用生理盐水涂片法、碘液染色法进行阿米巴原虫形态学检测，采用ELISA方法进行粪便中阿米巴抗原和血清中IgG抗体检测。结果形态学镜检结果显示，野生来源和人工繁育腹泻树鼩肠道中阿米巴原虫携带率分别为42．22％（19／45）、33．33％（11／33）；经ELISA检测粪便中阿米巴抗原，阿米巴原虫携带率分别为64．44％（29／45）、42．42％（14／33）。采用ELISA粪便抗原检出率高于形态学镜检法。经ELISA检测血清IgG抗体阳性率分别为66．67％（30／45）、63．63％（21／33）。结论腹泻树鼩对阿米巴原虫的携带率较高，该原虫可能是导致树询腹泻的病原之一。日常饲养过程中应加强阿米巴病的监测和防治，防止肠道寄生虫病的传播。

关键词：树鼩阿米巴原虫形态学检测 ELISA检测

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腹泻树鼩溶组织内阿米巴原虫携带情况调查

腹泻树鼩溶组织内阿米巴原虫携带情况调查

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第十二届中国实验动物科学年会（2016.南宁）

作者：宋庆凯苗雨润尹博文陈玲霞代解杰孙晓梅中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

目的调查腹泻树鼩肠道中溶组织内阿米巴携带情况,查找导致树鼩腹泻的寄生虫类病原,为实验树鼩的寄生虫质量控制提供依据。方法采集78只腹泻树鼩新鲜粪便和全血,分离血清,其中野生来源样本45份,人工繁育样本33份。分别采用生理盐水涂片... 详细信息

目的调查腹泻树鼩肠道中溶组织内阿米巴携带情况,查找导致树鼩腹泻的寄生虫类病原,为实验树鼩的寄生虫质量控制提供依据。方法采集78只腹泻树鼩新鲜粪便和全血,分离血清,其中野生来源样本45份,人工繁育样本33份。分别采用生理盐水涂片法、碘液染色法进行溶组织内阿米巴形态学检测,采用ELISA法进行粪便特异性抗原和血清中IgG抗体检测。结果形态学镜检结果显示,野生来源和人工繁育腹泻树鼩肠道中溶组织内阿米巴携带率分别为42.22%(19/45)、33.33%(11/33);粪便中特异性抗原经ELISA检测,溶组织内阿米巴携带率分别为64.44%(29/45)、42.42%(14/33);经ELISA检测的血清抗体IgG阳性率分别为66.67%(30/45)、63.63%(21/33)。结论腹泻树鼩对溶组织内阿米巴原虫的携带率较高,该原虫可能是导致树鼩腹泻的病原之一。特异性ELISA粪便抗原检出率高于形态学镜检法。日常饲养过程中应加强阿米巴病的监测和防治,防止肠道寄生虫病的传播。

关键词：树鼩溶组织内阿米巴形态学检测 ELISA检测

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树鼩脂肪转录组SNP位点发掘及其功能注释分析

树鼩脂肪转录组SNP位点发掘及其功能注释分析

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第十二届中国实验动物科学年会（2016.南宁）

作者：罕园园孙晓梅匡德宣陆彩霞仝品芬王文广李娜代解杰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

从正常笼养树鼩腹部的脂肪转录组数据开发SNP分子标记。检测了6只动物共计274278568条unigene(总长度43138417 bp)序列信息后,在262980条unigene(5.75%)中共发现SNP位点262980个,SNP发生频率为1/27bp,其中转换(transition)177562个,颠换(transversion)85509个。在所有变异类型中,A/G和C/T发生频率最高,分别达33.85%和33.66%。为进一步对得到的SNP所在基因功能进行分析,将包含SNP位点的262980条unigene通过参比序列进行注释,并对其进行GO分类、COG分类注释和代谢通路注释(KEGG pathway),结合已有研究,筛选到1187个可能脂肪转录组中的可能与脂肪形成和代谢有关的SNP标记。

关键词：树鼩转录组单核苷酸多态性(SNP)、功能注释脂肪形成

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树鼩脂肪转录组SNP位点发掘及其功能注释

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实验动物科学 2016年第3期33卷 13-19页

作者：罕园园孙晓梅匡德宣陆彩霞仝品芬王文广李娜余波代解杰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 云南省科学技术院昆明650118

从正常笼养树鼩腹部的脂肪转录组数据开发SNP分子标记。检测了6只动物共计274 278 568条unigene(总长度43 138 417 bp)序列信息后,在262 980条unigene(5.75%)中发现SNP位点263 071个,SNP发生频率为1/164 bp,其中转换(transition)177 562个,颠换(transversion)85 509个。在所有变异类型中,A/G和C/T发生频率最高,分别达33.85%和33.66%。将包含SNP位点的262 980条unigene通过参比序列进行注释,并对其进行GO分类、COG分类注释和代谢通路注释(KEGGpathway),结合已有研究,分别筛选到1 187个有GO注释、77个有COG注释和1 080条个有KEGG通路注释的脂肪转录组中的可能与脂肪形成和代谢有关的SNP标记。

关键词：树鼩转录组单核苷酸多态性功能注释

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树鼩小肠上皮细胞的体外分离培养与鉴定

树鼩小肠上皮细胞的体外分离培养与鉴定

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第十二届中国实验动物科学年会（2016.南宁）

作者：尹博文陈玲霞宋庆凯苗雨润李晓飞孙晓梅 LI Zhen-yu 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

目的从树鼩小肠分离小肠上皮细胞,探索分离培养方法和条件。为药物开发和病原感染机制研究提供体外细胞模型,并且为建立树鼩小肠上皮细胞系奠定基础。方法采用胶原酶Ⅺ和中性蛋白酶I及DTT联合消化树鼩小肠组织块,得到的细胞经完全培养... 详细信息

目的从树鼩小肠分离小肠上皮细胞,探索分离培养方法和条件。为药物开发和病原感染机制研究提供体外细胞模型,并且为建立树鼩小肠上皮细胞系奠定基础。方法采用胶原酶Ⅺ和中性蛋白酶I及DTT联合消化树鼩小肠组织块,得到的细胞经完全培养液培养,用相差显微镜观察细胞形态,通过MTT法测定细胞生长曲线,并采用细胞角蛋白荧光染色等方法鉴定细胞。结果经优化分离法得到的肠上皮隐窝细胞团在24h后贴壁,6d汇合成片,在显微镜下观察发现细胞团延辐射状向外长出铺路石样和多角状的细胞;第二代后,每隔2d可传代1次;细胞接种3d为对数生长期;细胞角蛋白18进行免疫荧光鉴定后确定为小肠上皮细胞。结论本实验成功地从树鼩小肠分离到了小肠上皮细胞,并且建立了树鼩小肠上皮细胞体外培养的方法。

关键词：树鼩小肠上皮细胞酶消化免疫荧光鉴定

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