检索结果-内蒙古大学图书馆

贵阳医学院学报 2016年第5期41卷 527-531页

作者：刘城秀沈云松李桃意张禹檀林萍姚月婷俞建昆姚宇峰史荔中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 云南省第一人民医院&昆明理工大学附属医院云南昆明650032

目的:探讨云南汉族人群中CD6基因多态性与慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染的关系。方法:随机抽取云南地区汉族人群HCV慢性感染患者434例,健康对照人群444例;采用TaqMan探针基因分型方法对2组人群的CD6基因3个SNPs(rs17824933、rs12360861、rs... 详细信息

目的:探讨云南汉族人群中CD6基因多态性与慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染的关系。方法:随机抽取云南地区汉族人群HCV慢性感染患者434例,健康对照人群444例;采用TaqMan探针基因分型方法对2组人群的CD6基因3个SNPs(rs17824933、rs12360861、rs11230563)进行基因分型,构建CD6基因单倍型,评估上述3个SNPs与HCV慢性感染的关系。结果:两组人群CD6基因SNP-rs17824933(C>G)、SNP-rs12360861(G>A)和SNP-rs11230563(C>T)基因型频率和等位基因频率比较,差异无统计学意义(P>0.05);2组人群的SNP-rs17824933(C>G)、SNP-rs12360861(G>A)和SNP-rs11230563(C>T)单倍型频率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:此次调查的云南汉族群体的CD6基因SNP-rs17824933(C>G)、SNP-rs12360861(G>A)和SNP-rs11230563(C>T)与HCV慢性感染无关。

关键词：肝炎,丙型,慢性多态性单核苷酸基因,CD6 云南

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云南汉族人群HSPA1A基因多态性位点与肺癌的相关性研究

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贵阳医学院学报 2016年第9期41卷 1010-1014,1020页

作者：张新文李盈甫史荔马千里洪超王婷婷俞建昆李传印姚宇峰杨慧娟中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 昆明医科大学第一附属医院干疗科云南昆明650032 昆明医科大学第三附属医院胸外科云南昆明650118

目的：探讨HSPA1A基因多态性与肺癌发生发展的相关性。方法：选取云南地区汉族人群肺癌患者288例为病例组,健康体检人群298例为对照组,采用Taq Man探针基因分型方法对HSPA1A基因中的4个多态性位点（SNPs）位点rs12190359（C〉T）、rs562... 详细信息

目的：探讨HSPA1A基因多态性与肺癌发生发展的相关性。方法：选取云南地区汉族人群肺癌患者288例为病例组,健康体检人群298例为对照组,采用Taq Man探针基因分型方法对HSPA1A基因中的4个多态性位点（SNPs）位点rs12190359（C〉T）、rs562047（C〉G）、rs1008438（G〉T）及rs1043618（G〉C）进行基因分型,研究其等位基因、基因型及所构建的单倍型在两组人群中分布差异。结果：2组人群rs1043618（G〉C）等位基因C和G的分布频率差异有统计学意义（P=0.038）,其中等位基因C是肺癌发生的保护性因素[OR=0.767;95%CI（0.597～0.986）];rs12190359（C〉T）、rs562047（C〉G）和rs1008438（G〉T）的等位基因和基因型的分布差异无统计学意义（P〉0.05）;rs12190359与rs1008438（G〉T）以及rs562047（C〉G）与rs11043618（G〉C）的单倍型在2组间分布频率差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：HSPA1A基因rs1043618（G〉C）等位基因C可能是云南汉族肺癌发生的保护性因素。

关键词：肺肿瘤 HSPA1A 单核苷酸多态性相关性汉族云南

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宿主遗传因素对疫苗接种后免疫反应的影响

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中国生物制品学杂志 2015年第2期28卷 199-203页

作者：李莹姚宇峰史荔中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

疫苗是当今世界预防感染性疾病的主要手段,在降低传染病的发病率和死亡率方面,几乎没有其他干预方式能够达到疫苗的效果。众所周知,机体对疫苗的反应与很多因素有关,包括年龄、性别、种族、身体质量指数、疫苗的质量、注射剂量以及注射... 详细信息

疫苗是当今世界预防感染性疾病的主要手段,在降低传染病的发病率和死亡率方面,几乎没有其他干预方式能够达到疫苗的效果。众所周知,机体对疫苗的反应与很多因素有关,包括年龄、性别、种族、身体质量指数、疫苗的质量、注射剂量以及注射方式等。但就同一种疫苗而言,机体的遗传因素在免疫应答中发挥着重要作用。研究表明,直接或间接参与免疫反应的各种基因,例如,宿主细胞膜上的病毒受体基因、先天Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)基因、细胞因子及其受体基因、人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)基因等,其单个变异或多个的变异均可能与疫苗所引起的免疫应答水平相关。本文就人群遗传因素与免疫反应的相关性作一综述。

关键词：宿主遗传因素 HLA 免疫反应

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一株柯萨奇病毒B2分离株的VP1基因序列特征分析

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中国生物制品学杂志 2015年第1期28卷 49-53页

作者：苏婷朱艳菊闫姗姗陈俊英杨舜乔潘玥陈伟邵聪文马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的分析一株柯萨奇病毒（Coxsackievirus,CV）B2分离株（CVB2）全VP1基因序列特征。方法用RD细胞对10份HFMD疑似患儿的粪便标本进行病毒分离,利用RT-PCR法从分离的病毒中扩增VP1基因,并测序,采用NCBI BLAST、Mega 6.1和Geneious等软件... 详细信息

目的分析一株柯萨奇病毒（Coxsackievirus,CV）B2分离株（CVB2）全VP1基因序列特征。方法用RD细胞对10份HFMD疑似患儿的粪便标本进行病毒分离,利用RT-PCR法从分离的病毒中扩增VP1基因,并测序,采用NCBI BLAST、Mega 6.1和Geneious等软件进行序列分析,并构建系统进化树。结果从10份HFMD疑似患儿粪便中分离到一株CVB2,命名为509/YN/CHN/2010,其全长VP1基因的核苷酸长度与其他CVB2一致,均为846 bp。与中国其他分离株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为81.0%～95.3%和97.9%～98.9%,而与国外分离株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为81.1%～87.8%和97.9%～98.6%。在进化树上与其他中国分离株分属不同的两个分支,而与M10MG17亲缘关系较近。结论 509/YN/CHN/2010分离株为肠道病毒CVB2,为两个中国分支中的一支。

关键词：柯萨奇病毒B2 VP1基因序列分析

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重组人成纤维细胞生长因子21慢病毒质粒的构建及鉴定

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中国生物制品学杂志 2015年第7期28卷 677-681页

作者：陈瑜徐丽兰杨建波马开利和占龙马进李鸿钧吴正存鲁帅尧中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的构建人成纤维细胞生长因子21(human fibroblast growth factor 21,h FGF21)重组慢病毒质粒,并进行包装和鉴定。方法 PCR扩增人FGF21 ORF序列,经Eco RⅠ和Bam HⅠ双酶切后,连接至慢病毒载体PLV-EF1a-EGFP[2A]Puro,构建重组慢病毒质粒... 详细信息

目的构建人成纤维细胞生长因子21(human fibroblast growth factor 21,h FGF21)重组慢病毒质粒,并进行包装和鉴定。方法 PCR扩增人FGF21 ORF序列,经Eco RⅠ和Bam HⅠ双酶切后,连接至慢病毒载体PLV-EF1a-EGFP[2A]Puro,构建重组慢病毒质粒PLV-EF1a-EGFP[2A]Puro-h FGF21,经293T细胞包装为重组慢病毒颗粒,并感染KMB17靶细胞。荧光显微镜观察293T细胞中报告基因EGFP的绿色荧光,判断重组慢病毒的感染效率;RT-PCR法检测KMB17靶细胞中h FGF21基因m RNA的转录;免疫荧光和Western blot法检测KMB17靶细胞中h FGF21蛋白的表达。结果重组慢病毒质粒PLV-EF1a-EGFP[2A]Puro-h FGF21经双酶切及测序鉴定,证明构建正确,在包装细胞中获得较高的转染效率,重组慢病毒感染KMB17靶细胞72 h后,荧光显微镜下可见EGFP绿色荧光。感染组KMB17靶细胞中存在h FGF21基因m RNA的转录和蛋白的表达。结论成功构建了重组慢病毒质粒PLV-EF1aEGFP[2A]Puro-h FGF21,并于KMB17靶细胞中表达,为FGF21功能与特性的相关研究及基因工程药物的探索和研发奠定了基础。

关键词：人成纤维细胞生长因子21 慢病毒质粒 KMB17细胞

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EV71灭活疫苗(人二倍体细胞)灭活工艺验证

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中国生物制品学杂志 2015年第10期28卷 1063-1066,1071页

作者：王晶晶廖芸王丽春李琦涵刘龙丁程晨夏龙辉尹晓晓张莹中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的对肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）灭活疫苗（人二倍体细胞）的灭活工艺进行验证。方法取3批次经甲醛灭活的EV71灭活病毒收获液样品,分别连续盲传4代,并设病毒对照盲传4代。观察每代次样品的细胞病变情况,采用微量滴定法检测... 详细信息

目的对肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）灭活疫苗（人二倍体细胞）的灭活工艺进行验证。方法取3批次经甲醛灭活的EV71灭活病毒收获液样品,分别连续盲传4代,并设病毒对照盲传4代。观察每代次样品的细胞病变情况,采用微量滴定法检测病毒感染性滴度,ELISA法检测EV71特异抗原含量,实时定量PCR法检测病毒核酸水平及病毒负链产生情况。结果 3批灭活的疫苗病毒收获液样品经4次盲传后,各代次均未出现明显的细胞病变,经微量滴定法均未检测到EV71感染性滴度。灭活的病毒收获液盲传至第2代时,病毒负链检测已为阴性;至第3代时,EV71抗原检测为阴性;至第4代时,病毒核酸检测为阴性。病毒对照经盲传4代后,各代次均出现明显细胞病变;自第2代开始,感染性滴度维持在106~107 CCID50/ml,抗原含量为200~370 U/ml,且均可检测出明显的病毒核酸及病毒负链增殖。结论通过经典的＂细胞上盲传3代＂的检测方法,并结合实时定量RT-PCR对病毒核酸和负链进行检测,证实经甲醛灭活的EV71灭活疫苗样品已完全灭活。

关键词：肠道病毒71型灭活工艺验证

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柯萨奇病毒A组16型疫苗候选株减毒特性的分析

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中国生物制品学杂志 2015年第5期28卷 441-448页

作者：杨水芝谢天宏李华姜广菊龙润乡杨婷岳磊罗芳宇朱凡丽谢忠平中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的对柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirus A16,CA16）减毒活疫苗候选株进行初步分析,为CA16减毒活疫苗的研制奠定基础。方法将两株CA16疫苗候选株（KM168和KM154）进行低温连续传代减毒,对不同代次病毒进行减毒特性的分析。将候选株病... 详细信息

目的对柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirus A16,CA16）减毒活疫苗候选株进行初步分析,为CA16减毒活疫苗的研制奠定基础。方法将两株CA16疫苗候选株（KM168和KM154）进行低温连续传代减毒,对不同代次病毒进行减毒特性的分析。将候选株病毒收获液免疫ICR乳鼠（颅内注射）及ICR成鼠（腹腔注射）,分别评价减毒疫苗候选株的毒力、免疫原性以及乳鼠作为减毒活疫苗残余毒力评价动物模型的可行性;对病毒进行VP1片段的测序,分析遗传稳定性。结果两个候选株经低温连续传代后,均具有稳定的生长特性及良好的免疫原性,感染性滴度均保持在约7.0 Lg CCID50/ml,免疫小鼠后抗体阳转率达100%,最高GMT约1∶30。乳鼠及成鼠感染病毒后,在大部分组织中能检测到CA16病毒;KM154株在第12代后未对乳鼠产生临床致病性及致死率,病理检测结果主要表现为少量炎性细胞集结,无明显组织损伤,随着传代增加,组织损伤明显减少。两个候选株经低温连续传代后,能保证VP1片段的遗传稳定性。结论低温连续传代可使CA16的毒力明显降低,有望筛选出减毒活疫苗的候选株;1~2日龄ICR乳鼠可以作为CA16减毒活疫苗的候选株毒力评价的动物模型。

关键词：柯萨奇病毒疫苗减毒株

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利用不同碳源进行毕赤酵母高密度发酵及TEF-1启动子指导下的HPV16_L1蛋白表达

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中国生物工程杂志 2015年第10期35卷 39-43页

作者：夏烨黄惟巍杨旭孙鹏艳姚月婷王世杰刘存宝孙文佳白红妹姚宇峰马雁冰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心昆明650118

目的:研究不同碳源对于毕赤酵母菌株在发酵罐中高密度生长,以及对组成型翻译延伸因子-1(TEF-1)启动子指导下HPV16_L1蛋白表达的影响。方法:利用1.5L发酵罐使用不同碳源进行毕赤酵母的高密度发酵,检测在不同碳源利用情况下菌体的增殖动力... 详细信息

目的:研究不同碳源对于毕赤酵母菌株在发酵罐中高密度生长,以及对组成型翻译延伸因子-1(TEF-1)启动子指导下HPV16_L1蛋白表达的影响。方法:利用1.5L发酵罐使用不同碳源进行毕赤酵母的高密度发酵,检测在不同碳源利用情况下菌体的增殖动力学,并以Western blot动态分析HPV16_L1蛋白的表达水平。结果:以甘油作为碳源,菌体细胞湿重可达到510g/L(OD600为189.4),HPV16_L1的表达在72h之前保持高水平;在甲醇和葡萄糖中菌体细胞湿重都可达到220g/L左右(OD600分别为75.3和77.3),甲醇利用下HPV L1蛋白在144h后仍保持较高水平表达,葡萄糖中60h HPV L1表达开始显著下降;在山梨醇作为碳源情况下菌体未能在发酵罐中获得高密度生长;总体上,甘油作为碳源在72h左右可获得最高的目的蛋白收获总量。结论:为实现毕赤酵母高密度生长与异源基因在TEF-1启动子指导下高效表达,以及HPV L1蛋白的简易、有效制备提供了基础。

关键词： TEF-1启动子碳源毕赤酵母高密度发酵 HPV L1蛋白

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埃博拉病毒包膜糖蛋白二级结构及B细胞表位的预测

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中国生物制品学杂志 2015年第1期28卷 30-34页

作者：赵玉娇黄新伟李多邱丽娟孙强明中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的预测并分析从2014年西非埃博拉出血热暴发地区感染患者分离的扎伊尔型病毒株包膜糖蛋白（glycoprotein,GP）的二级结构及B细胞表位。方法通过Gen Bank搜索近期公布的分离自西非地区的扎伊尔型埃博拉病毒株基因组,获得GP1、GP2和s G... 详细信息

目的预测并分析从2014年西非埃博拉出血热暴发地区感染患者分离的扎伊尔型病毒株包膜糖蛋白（glycoprotein,GP）的二级结构及B细胞表位。方法通过Gen Bank搜索近期公布的分离自西非地区的扎伊尔型埃博拉病毒株基因组,获得GP1、GP2和s GP 3种包膜糖蛋白的基因及氨基酸序列,采用互联网服务器在线预测其二级结构及B细胞表位,并分析蛋白的各种氨基酸组成比例及可能的蛋白结合位点,通过亲/疏水性等参数判断氨基酸序列中可能暴露在蛋白结构表面或隐藏在内部的区段。结果在编码GP1、GP2和s GP的氨基酸中,占组成比例最多的均为苏氨酸。GP1和s GP可能的蛋白结合位点较多,且整个蛋白暴露于表面的区域和隐藏区域呈均匀相间分布;GP2结构较前二者特殊,存在一个暴露在蛋白结构表面的大片段的无序结构区域。GP1 N-末端第20～37和166～186区段,GP2 N-末端第361～379区段,s GP N-末端第20～37和166～185区段,可能为跨膜螺旋结构。s GP可能存在4个含有二硫键的区域。B细胞表位分析结果显示,GP1和GP2中疏水区域主要集中在N-末端第1～325位氨基酸之间;亲水区域主要集中在N-末端第326～676位氨基酸之间;亲水与疏水区域分界明显,几乎无交叉;可能存在2个线性表位,分别位于N-末端第324～450、461～676区段;预测共存在25个可能形成构象表位的氨基酸位点或序列,其中可能性在90%以上的位点或序列有6个。结论通过对此次流行于西非的埃博拉病毒包膜糖蛋白的二级结构及可能性B细胞表位的预测,为实验确定埃博拉病毒包膜糖蛋白的结构与功能、B细胞表位免疫识别以及埃博拉病毒预防、治疗和诊断制品的研发提供了参考。

关键词：埃博拉病毒糖蛋白蛋白质二级结构 B细胞表位

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云南汉族人群CD80基因多态性位点与肺癌的相关性

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贵阳医学院学报 2016年第9期41卷 1015-1020页

作者：李传印李盈甫史荔马千里王云飞蔡秋龙洪超俞建昆张新文姚宇峰中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 昆明医科大学第一附属医院干疗科云南昆明650032 昆明医科大学第三附属医院胸外科云南昆明650118

目的：探讨云南汉族人群中CD80基因中的多态性位点（SNPs）rs16829980（A〉G）、rs16829984（G〉C）、rs41271391（G〉T）及rs41271393（C〉T）与肺癌的相关性。方法：选取云南地区汉族人群肺癌患者288例（病例组）,健康体检人群288例... 详细信息

目的：探讨云南汉族人群中CD80基因中的多态性位点（SNPs）rs16829980（A〉G）、rs16829984（G〉C）、rs41271391（G〉T）及rs41271393（C〉T）与肺癌的相关性。方法：选取云南地区汉族人群肺癌患者288例（病例组）,健康体检人群288例（对照组）,采用Taq Man探针基因分型方法对CD80基因中上述4个SNPs位点进行基因分型,研究其等位基因、基因型及所构建的单倍型在两组人群中的分布差异。结果：rs16829980（A〉G）等位基因A和G、rs41271391（G〉T）等位基因G和T、rs41271393（C〉T）等位基因C和T在病例组和对照组中的分布频率的差异具有统计学意义（P=0.018,0.015,0.015）,单倍型分析结果显示GGTT单倍型是云南汉族人群肺癌发生的保护性因素（OR=0.723;95%CI：0.555~0.941）。结论：CD80基因SNPs位点rs16829980（A〉G）中等位基因A、rs41271391（G〉T）中等位基因G以及rs41271393（C〉T）的等位基因C可能是云南汉族人群肺癌发生的危险因素,GGTT单倍型可能是云南汉族人群肺癌发生的保护性因素。

关键词：肺肿瘤 CD80基因单核苷酸多态性相关性汉族云南

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