检索结果-内蒙古大学图书馆

生物学杂志 2015年第3期32卷 15-20页

作者：闫姗姗周艳李溪张磊孙茂盛解裕萍李鸿钧中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 昆明医科大学附属第一医院骨科昆明650032

研究构建靶向抑制人Mbd3表达的sh RNA慢病毒颗粒,感染人脐带间充质干细胞并用嘌呤霉素筛选获得Mbd3稳定下调的细胞系,为进一步探讨Mbd3在诱导型多潜能干细胞形成中的作用提供实验基础。研究根据Gene Bank中公布的Mbd3基因序列设计特异性... 详细信息

研究构建靶向抑制人Mbd3表达的sh RNA慢病毒颗粒,感染人脐带间充质干细胞并用嘌呤霉素筛选获得Mbd3稳定下调的细胞系,为进一步探讨Mbd3在诱导型多潜能干细胞形成中的作用提供实验基础。研究根据Gene Bank中公布的Mbd3基因序列设计特异性si RNA干扰序列并合成可产生sh RNA的双链DNA,经双酶切后克隆至p LVsh RNA-EGFP(2A)Puro载体上构建慢病毒重组质粒,转化DH5α大肠杆菌PCR检测筛选阳性质粒,利用HEK293Ta包装产生含有Mbd3sh RNA的慢病毒颗粒。通过RT-PCR和Western blot检测慢病毒感染人脐带间充质干细胞(h UC-MSC)后Mbd3的转录和蛋白表达情况,进一步检测重组慢病毒对Mbd3的沉默效果并筛选出最佳抑制效果的sh RNA慢病毒载体。结果显示成功构建并筛选出下调Mbd3的最佳慢病毒干扰载体,慢病毒感染人脐带间充质干细胞48h后于荧光显微镜下可见绿色荧光,经嘌呤霉素筛选9 d后,RT-PCR检测Mbd3表达显著降低,Western blot检测Mbd3蛋白表达明显减少。说明构建的sh RNA重组慢病毒包装成功,具有较高的感染活性,可有效抑制人脐带间充质干细胞Mbd3的表达,为后续研究脐带间充质干细胞跨胚层分化打下前期研究基础。

关键词： Mbd3基因基因沉默慢病毒载体 RNA干扰

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病毒样颗粒呈递HPV16CTLs抗原表位对小鼠TC-1移植肿瘤韵免疫干预

病毒样颗粒呈递HPV16CTLs抗原表位对小鼠TC-1移植肿瘤韵免疫干预

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2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会

作者：褚晓杰李杨龙琼夏烨姚宇峰孙文佳黄惟巍杨旭刘存宝马雁冰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心昆明650118

目的:人乳头瘤病毒(HPV)治疗性疫苗在治疗宫颈上皮内瘤变或癌症的临床试验尚缺乏显著疗效.提高肿瘤抗原特异的细胞免疫应答是增强疫苗效力的关键.本研究旨在探索乙肝核心抗原病毒样颗粒(VLPs)作为治疗性疫苗载体的潜能,并评价其免疫学特... 详细信息

目的:人乳头瘤病毒(HPV)治疗性疫苗在治疗宫颈上皮内瘤变或癌症的临床试验尚缺乏显著疗效.提高肿瘤抗原特异的细胞免疫应答是增强疫苗效力的关键.本研究旨在探索乙肝核心抗原病毒样颗粒(VLPs)作为治疗性疫苗载体的潜能,并评价其免疫学特性. 方法:根据文献选择有效的HPV16E7CTLs表位,经基因重组将其DNA片段克隆于乙肝核心抗原优势表位.重组蛋白诱导表达后,经硫酸铵盐析法和蔗糖密度梯度离心纯化,并经高效液相凝胶过滤色谱和电镜分析鉴定.制备的VLPs以预防性和治疗性策略分别对小鼠移植肿瘤进行免疫干预,检测小鼠肿瘤大小变化;此外,在体外以抗原肽刺激脾细胞,以ELISA检测IFN-γ表达水平,ELISPOT检测分泌IFN-γ的淋巴细胞. 结果:呈递HPV16E749-57CTLs表位的重组VLPs可通过基因重组技术有效制备;VLPs预防性免疫完全抑制了TC-1小鼠移植肿瘤生长;VLPs治疗性免疫显著抑制了2-3mm肿瘤的增长,对于5～6mm甚至更大的肿瘤(8～9mm),同样具有明显抑制作用;VLPs结构对疫苗肿瘤抑制效果非常重要;疫苗免疫小鼠脾细胞具有提高的IFN-γ、降低的IL-4与TGF-β1表达,以及增强的分泌IFN-γ的淋巴细胞水平;此外,VLPs刺激机体产生了有效的免疫记忆应答,至少可持续15周;机体预存的抗载体抗体对VLPs疫苗发挥作用未产生显著影响. 结论:本研究强烈提示VLPs可激发有效的细胞免疫应答,是有潜力的治疗性疫苗载体.

关键词：宫颈上皮内瘤人乳头瘤病毒治疗性疫苗病毒样颗粒免疫学特性

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树鼩鞭毛虫的形态学观察及其18S rRNA基因分析

树鼩鞭毛虫的形态学观察及其18S rRNA基因分析

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第十四届中国西部实验动物管理与学术交流会

作者：陈玲霞尹博文李振宇孙晓梅代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的：对树鼩体内的鞭毛虫进行形态学观察及基因分析鉴定.方法：取树鼩回盲部内容物和粪便经过滤离心处理直接涂片和碘液染色镜检,传统方法提取虫体总DNA,PCR扩增该鞭毛虫的18S rRNA,测序后经BLAST进行同源性分析,并应用MEGA5.1绘制系... 详细信息

目的：对树鼩体内的鞭毛虫进行形态学观察及基因分析鉴定.方法：取树鼩回盲部内容物和粪便经过滤离心处理直接涂片和碘液染色镜检,传统方法提取虫体总DNA,PCR扩增该鞭毛虫的18S rRNA,测序后经BLAST进行同源性分析,并应用MEGA5.1绘制系统发育进化树.结果：形态学观察表明树鼩体内的鞭毛虫为三毛滴虫;测序分析表明树鼩鞭毛虫序列18S rRNA与已报道的胎儿三毛滴虫18S rRNA(AY754332.1)同源性高达99％.结论：树鼩体内可感染胎儿三毛滴虫,研究结果为树鼩的寄生虫学质量控制提供依据.

关键词：实验动物树鼩寄生鞭毛虫生理形态 18S核糖体核糖核酸基因鉴定

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树鼩骨髓间充质干细胞体外分离培养及成脂成骨诱导

树鼩骨髓间充质干细胞体外分离培养及成脂成骨诱导

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第十四届中国西部实验动物管理与学术交流会

作者：陆彩霞李晓飞王文广孙晓梅仝品芬匡德宣代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的探讨树鼩骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)的体外分离、传代及定向诱导为脂肪细和成骨细胞的可行性.方法通过密度梯度离心联合贴壁培养法对树鼩骨髓间充质干细胞进行体外分离、扩增、纯化，倒置相差显微镜进行形态学观察.用成脂诱导液(D... 详细信息

目的探讨树鼩骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)的体外分离、传代及定向诱导为脂肪细和成骨细胞的可行性.方法通过密度梯度离心联合贴壁培养法对树鼩骨髓间充质干细胞进行体外分离、扩增、纯化，倒置相差显微镜进行形态学观察.用成脂诱导液(DMEM/F12+10％FBS+100 U/mL青霉素+100μg/mL链霉素+1.0μM地塞米松+0.2mM吲哚美辛+0.01mg/mL胰岛素+0.5mM IBMX)和成骨诱导液(高糖DMEM +10％FBS+100 U/mL青霉素+ 100tg/mL链霉素+50ng/mL BMP-2)对分离的树鼩BM-MSCs分别定向诱导为脂肪细胞和成骨细胞.结果原代和传代细胞为梭形或三角形，可增殖形成克隆.BM-MSCs成脂诱导后油红O染色细胞内出现红色脂滴，成骨诱导后茜素红染色可观察到矿化结节.结论密度梯度离心联合贴壁培养法分离培养树鼩BM-MSCs简便可行，获得的BM-MSCs可体外诱导分化为脂肪细胞和成骨细胞.

关键词：树鼩骨髓间充质干细胞细胞培养成脂诱导成骨诱导

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野生树鼩肠道蠕虫感染调查及分析

野生树鼩肠道蠕虫感染调查及分析

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第十四届中国西部实验动物管理与学术交流会

作者：孙晓梅仝品芬匡德宣陈玲霞王文广陆彩霞代解杰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明 650118

目的调查野生树鼩(TupaiaBelangeri Chinensis)感染肠道蠕虫的主要种类并进行鉴定,为今后树鼩寄生虫检测提供形态学参考,为实验树鼩寄生虫控制提供依据.方法采集203只野外来源的树鼩新鲜粪便,虫卵采用常规粪便直接涂片以及孵化后显微... 详细信息

目的调查野生树鼩(TupaiaBelangeri Chinensis)感染肠道蠕虫的主要种类并进行鉴定,为今后树鼩寄生虫检测提供形态学参考,为实验树鼩寄生虫控制提供依据.方法采集203只野外来源的树鼩新鲜粪便,虫卵采用常规粪便直接涂片以及孵化后显微镜观察;绦虫采用压片、固定染色,以及线虫经透明后体视镜观察,虫卵与成虫相对应鉴定.结果野生树鼩肠道蠕虫的总感染率为75.86％,主要感染种类有3种,经鉴定为长膜壳绦虫、奇口线虫和粪类圆线虫,感染率分别为27.67％,30.06％和51.52％.三种蠕虫的混合感染率为4.55％.两种线虫虫卵在树鼩粪便中多为含胚胎形态.结论野生树鼩肠道蠕虫的感染率较高.对野外引入的新种源必须隔离检疫,进行针对性的药物治疗,才能有效地控制肠道寄生虫病的传播.

关键词：树鼩肠道蠕虫长膜壳绦虫奇口线虫粪类圆线虫

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轮状病毒疫苗研究现状

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现代生物医学进展 2015年第22期15卷 4397-4400,4329页

作者：孙晓琴易山解裕萍米锴孙茂盛中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 昆明医科大学云南昆明650500

轮状病毒自上世纪70年代初发现至今,仍是婴幼儿病毒性腹泻最主要的病原体。每年约60万婴幼儿因轮状病毒感染导致严重脱水死亡。轮状病毒疫苗从上世纪90年代初开始研制,至今已有三种疫苗用于预防轮状病毒感染。这三种疫苗均为减毒活疫苗... 详细信息

轮状病毒自上世纪70年代初发现至今,仍是婴幼儿病毒性腹泻最主要的病原体。每年约60万婴幼儿因轮状病毒感染导致严重脱水死亡。轮状病毒疫苗从上世纪90年代初开始研制,至今已有三种疫苗用于预防轮状病毒感染。这三种疫苗均为减毒活疫苗:其中包括单一血清型Rotarix、罗特威和重组5价疫苗RotaTeq。它们已在全球多国使用,有些国家已将其纳入免疫规划。疫苗的使用使人群轮状病毒感染下降,特别是死亡率明显减少。但也出现了一些问题,因此除了减毒活疫苗,也有一些实验室研究其他形式的疫苗,例如重组疫苗、灭活疫苗等。本文主要介绍轮状病毒疫苗的研究现状,为我国轮状病毒疫苗的研究、使用和推广提供一定理论依据。

关键词：轮状病毒疫苗婴幼儿腹泻

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实验树鼩主要内分泌腺的组织学观察

实验树鼩主要内分泌腺的组织学观察

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第十四届中国西部实验动物管理与学术交流会

作者：匡德宣孙晓梅陆彩霞王文广仝品芬殷安国李晓飞代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的了解树鼩主要内分泌腺的组织学结构特征，建立树鼩正常的内分泌腺组织学图谱。方法选取人工饲养的健康树鼩10只，麻醉后放血处死和病理解剖，对甲状腺、甲状旁腺、肾上腺及脑垂体进行病理大体检查和取材，常规病理制片，采用常规... 详细信息

目的了解树鼩主要内分泌腺的组织学结构特征，建立树鼩正常的内分泌腺组织学图谱。方法选取人工饲养的健康树鼩10只，麻醉后放血处死和病理解剖，对甲状腺、甲状旁腺、肾上腺及脑垂体进行病理大体检查和取材，常规病理制片，采用常规组织HE染色技术，显微镜下观察组织学结构。结果 (1)甲状腺呈淡黄色，位于气管两侧，在第2～4气管软骨环之间，呈板状，表面包有薄层被膜，被膜伸人甲状腺实质内分成若干小叶。小叶内有滤泡和滤泡旁细胞，滤泡腔内可见红染胶质。(2)甲状旁腺每侧一个，位于甲状腺颅侧或中部外表面，稍被甲状腺覆盖，呈圆形或卵圆形，其实质由主细胞和嗜酸性细胞组成，并可见腺泡样结构。(3)肾上腺呈卵圆形，赭黄色，位于肾门颅侧，与肾相连。肾上腺外包被膜，实质明显区分为皮质和髓质两部分。皮质从外到内可分为球状带、束状带和网状带。球状带最厚，束状带最薄，网状带介于中间。髓质部细胞形成团块或网状，髓质中央有静脉。(4)脑垂体位于蝶鞍内，没有垂体隐窝，垂体有腺垂体和神经垂体两部组成，表面包有结缔组织被膜。腺垂体分为远侧部、中间部和结节部，神经垂体由神经部和漏洞部组成。结论基本建立了树鼩内分泌腺组织学图谱，其在组织形态学上接近于灵长类动物，可以为研究树鼩内分泌腺的功能和病变，以及建立人类相关疾病的动物模型提供组织学依据。

关键词：树鼩内分泌腺组织学

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实验树鼩的标准化及其应用的研究进展

实验树鼩的标准化及其应用的研究进展

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第七届北京实验动物科学国际论坛

作者：代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心.云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

树鼩(Tupaia belangeri)作为重要的野生动物之一,因生物学特性、生理生化指标和全基因序列等与人类相似,与灵长类实验动物比较,树鼩具有体型小、繁殖周期短、饲养和实验成本低,易于操作等优势,已被广泛地用于生物医学研究.但由于其遗传... 详细信息

树鼩(Tupaia belangeri)作为重要的野生动物之一,因生物学特性、生理生化指标和全基因序列等与人类相似,与灵长类实验动物比较,树鼩具有体型小、繁殖周期短、饲养和实验成本低,易于操作等优势,已被广泛地用于生物医学研究.但由于其遗传背景不清,缺乏动物质量控制标准,实验的重复性和科学性差,因此,开展实验树鼩的标准化研究和人类疾病动物模型创建具有重要的科学意义和现实意义.

关键词：疾病模型实验树鼩标准化构建

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用无血清适应的Vero细胞培养H5N1型流感病毒条件的优化

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中国生物制品学杂志 2015年第7期28卷 741-745页

作者：马磊耿兴良苏杨起杨家方常亚军段男邹俊如刘圆圆刘婧戴宗祥李卫东廖国阳中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 南开大学生命科学学院天津300071

目的优化无血清适应的Vero细胞(SFM-Vero细胞)培养H5N1型流感病毒的条件。方法将H5N1型流感病毒接种于SFM-Vero细胞,于免疫荧光显微镜下观察病毒感染情况。对病毒无血清培养条件MOI(0.05、0.10、0.15、0.20)、细胞培养时间(12、24、36、... 详细信息

目的优化无血清适应的Vero细胞(SFM-Vero细胞)培养H5N1型流感病毒的条件。方法将H5N1型流感病毒接种于SFM-Vero细胞,于免疫荧光显微镜下观察病毒感染情况。对病毒无血清培养条件MOI(0.05、0.10、0.15、0.20)、细胞培养时间(12、24、36、48 h)、培养液基础培养基(DMEM/F12、M199、RPMI1640及MEM:DMEM/F12混合液)、培养温度(33、33.5、34、34.5、35和37℃)、收获时间(24、36、48、60和72 h)、培养液p H值(6.8、7.1、7.4、7.7、8.0和8.3)和TPCK胰酶浓度(0.5、1.0、1.5μg/ml)进行优化,并检测最佳条件无血清培养的H5N1型流感病毒的血凝效价及形态。结果 H5N1型流感病毒对SFM-Vero细胞具有感染性。最佳无血清培养条件为:MOI=0.1和0.15,细胞培养时间36 h,以DMEM/F12为基础培养基,病毒培养温度33.5和34.5℃,病毒收获时间60 h,培养液p H 7.7,TPCK胰酶浓度为1.0μg/ml。最佳条件无血清培养的H5N1型流感病毒的血凝效价为1∶512,电镜下观察病毒形态完整。结论确定了H5N1型流感病毒对SFM-Vero细胞具有感染性,并优化了SFMVero细胞培养流感病毒的适宜条件,为更具有生物安全性流感疫苗的研发奠定了基础。

关键词：无血清培养 Vero细胞 H5N1型流感病毒

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云南汉族人群IL-10基因启动子多态性与HCV慢性感染的相关性研究

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昆明医科大学学报 2015年第1期36卷 15-18页

作者：李莹张淑琼俞建昆汪亚玲姚宇峰史荔中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 昆明市第三人民医院云南昆明650041

目的探讨IL-10基因启动子SNP-1082G/A(rs1800896)、-819C/T(rs1800871)、-592C/A(rs1800872)位点与HCV慢性感染的相关性.方法入选云南地区汉族人群HCV慢性感染患者379例,健康对照364例.采用Taq Man探针基因分型方法对IL-10基因启动子SNP-1082G/A(rs1800896)、-819C/T(rs1800871)、-592C/A(rs1800872)的3个位点进行基因分型,并构建单倍型,评估上述3个SNPs及单倍型与HCV慢性感染的相关性.结果在病例组和对照组中,IL-10基因启动子SNP-1082G/A(rs1800896)、-819C/T(rs1800871)、-592C/A(rs1800872)基因型频率和等位基因频率差异没有统计学意义(P>0.05).单倍型分析结果显示,SNP-1082G/A(rs1800896)、-819C/T(rs1800871)和-592C/A(rs1800872)构建的单倍型频率的差异无统计学意义(P>0.05).结论在云南汉族群体中,IL-10基因启动子SNP-1082G/A(rs1800896)、-819C/T(rs1800871)、-592C/A(rs1800872)与HCV慢性感染没有相关性.

关键词： HCV 慢性感染单核苷酸多态性 IL-10

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