检索结果-内蒙古大学图书馆

酵母多糖-角鲨烯复合佐剂对甲型肝炎和乙型肝炎抗原诱导小鼠体液免疫应答的增强作用

中国生物制品学杂志 2013年第4期26卷 473-476页

作者：王丽萍王越王海漩胡云章胡凝珠中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所疫苗研究室云南省重大传染病重点实验室云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南昆明650118

目的探讨酵母多糖-角鲨烯复合佐剂对甲型肝炎(简称甲肝)和乙型肝炎(简称乙肝)抗原诱导小鼠体液免疫应答的增强作用,并对皮下和鼻腔接种的免疫效果进行比较。方法将酵母多糖与角鲨烯按一定比例混合,制成复合佐剂,将不同剂量的复合佐剂与H... 详细信息

目的探讨酵母多糖-角鲨烯复合佐剂对甲型肝炎(简称甲肝)和乙型肝炎(简称乙肝)抗原诱导小鼠体液免疫应答的增强作用,并对皮下和鼻腔接种的免疫效果进行比较。方法将酵母多糖与角鲨烯按一定比例混合,制成复合佐剂,将不同剂量的复合佐剂与HBsAg混合,并设生理盐水对照组、HBsAg对照组、铝佐剂对照组和酵母多糖对照组,均经皮下免疫ICR小鼠1次,分别于免疫后2、4、8、16周,采用ELISA法检测小鼠血清中抗HBsAg IgG抗体水平,筛选复合佐剂的最佳免疫剂量。以复合佐剂的最佳免疫剂量与甲肝抗原混合,并设生理盐水对照组、甲肝抗原对照组、铝佐剂对照组和酵母多糖对照组,均经皮下免疫ICR小鼠1次,分别于免疫后2、4、8周检测小鼠血清中抗甲肝抗原IgG抗体水平。以复合佐剂最佳免疫剂量分别与HBsAg和甲肝抗原混合,并设生理盐水对照组、HBsAg对照组和甲肝抗原对照组,经鼻腔免疫ICR小鼠,共免疫3次,间隔2周,分别于末次免疫后4、8周检测小鼠血清中抗HBsAg和甲肝抗原IgG抗体水平。在试验期间,对小鼠的健康状况进行观察,并对小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏组织进行病理分析。结果酵母多糖-角鲨烯复合佐剂对HBsAg的最佳免疫剂量为2 mg酵母多糖+8μl角鲨烯,该组抗体水平明显高于铝佐剂对照组和酵母多糖对照组(P<0.05);复合佐剂对甲肝抗原也有较好的体液免疫增强作用,抗体水平显著高于铝佐剂对照组和酵母多糖对照组(P<0.05);复合佐剂通过鼻腔免疫,对HBsAg和甲肝抗原的体液免疫应答也有增强作用,但效果不如皮下免疫,甲肝抗原鼻腔免疫效果优于HBsAg(P<0.05)。在试验期内,小鼠均未出现异常反应,各器官均未发生病变。结论酵母多糖-角鲨烯复合佐剂能显著增强甲肝和HBsAg抗原对小鼠的体液免疫应答,免疫效果优于铝佐剂;皮下免疫效果优于鼻腔免疫;在免疫剂量范围内,复合佐剂安全性良好。

关键词：酵母多糖角鲨烯佐剂乙型肝炎表面抗原甲型肝炎抗原

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树鼩呼肠孤病毒的分离鉴定

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Zoological Research 2013年第2期34卷 116-120页

作者：徐娟黄晓燕李晓飞王文广殷安国夏雪山孙晓梅代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 昆明理工大学生命科学与技术学院云南昆明650500

致病性病毒严重危害树鼩（treeshrew,Tupaia）生命健康,但却鲜见有关树鼩自然感染病毒的报道。该研究采集6份因腹泻死亡的野生树鼩粪便,用Vero细胞进行病毒分离,72h后细胞发生病变,特征为颗粒增多、破碎、变圆固缩、拉网及脱落等;电镜... 详细信息

致病性病毒严重危害树鼩（treeshrew,Tupaia）生命健康,但却鲜见有关树鼩自然感染病毒的报道。该研究采集6份因腹泻死亡的野生树鼩粪便,用Vero细胞进行病毒分离,72h后细胞发生病变,特征为颗粒增多、破碎、变圆固缩、拉网及脱落等;电镜观察显示该病毒为球形,双层衣壳,完整直径-75nm。纯化病毒经核酸PAGE电泳后呈现10个核酸节段,并为典型的3：3：4排列。哺乳动物呼肠孤病毒（mammalian orthoreovirus,MRV）L1基因保守区RT-PCR检测、序列分析及进化树构建结果表明,该病毒株属于MRV,且与来源于蝙蝠的呼肠孤病毒分离株（T3/Bat/Germany/342/08）同源性最高。MRV是人兽共患病病毒,该实验首次从树鼩体内成功分离到MRV,对今后研究制定实验树鼩病毒学控制标准具有指导意义,同时为有效预防该病毒在树鼩与人类之间传播提供了实验依据。

关键词：树鼩呼肠孤病毒分离鉴定

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埃可病毒9型分离株MSH-KM812 VP1基因的遗传特征

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中国生物制品学杂志 2013年第3期26卷 346-348,353页

作者：潘玥戴素萍朱艳菊李丽邓新强廖宏玮刘雅灵马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 昆明市妇幼保健院云南昆明650031

目的分析2010年昆明市引起手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)的病原埃可病毒9型(Echovirus 9,E9)分离株MSH-KM812 VP1基因的遗传特征。方法分别采用RD细胞和Hep-2细胞对3份HFMD患儿粪便标本进行病毒分离,应用RT-PCR法分2段扩... 详细信息

目的分析2010年昆明市引起手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)的病原埃可病毒9型(Echovirus 9,E9)分离株MSH-KM812 VP1基因的遗传特征。方法分别采用RD细胞和Hep-2细胞对3份HFMD患儿粪便标本进行病毒分离,应用RT-PCR法分2段扩增病毒VP1基因,并进行序列测定。应用NCBI BLAST软件对所测定的节段序列进行比对;Omiga软件对所测定的节段序列的核苷酸及推导的氨基酸序列进行编辑、比对和拼接;应用Mega 5.05软件进行序列分析,并与15个E9参考株的VP1基因序列进行比较,构建基因系统进化树。结果从3份HFMD患儿粪便标本中分离到1株E9,命名为MSH-KM812,其VP1区的核苷酸长度为888 bp。MSH-KM812株与其他15个E9参考株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为78.6%～98.0%和87.5%～99.3%,与中国分离株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为92.7%～98.0%和97.0%～99.3%,其中与中国江苏分离株M10MF37 China2010核苷酸和氨基酸序列同源性最高,分别为98.0%和99.3%,而与德国分离株Hill的核苷酸和氨基酸序列同源性最低,分别为78.6%和87.5%。基因进化树分析显示,MSH-KM812分离株与中国江苏分离株M10MF37 China 2010和中国山东分离株05189-SD-CHN-2005-E9属于同一个进化分枝。结论 MSH-KM812分离株为E9,与中国其他分离株同属一个进化分枝。

关键词：埃可病毒9型 VP1基因序列分析

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呈现人白细胞介素-13抗原表位的病毒样颗粒疫苗的构建

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中国生物制品学杂志 2013年第11期26卷 1533-1539页

作者：唐增华龙琼姚宇峰黄惟巍杨旭孙文佳刘存宝马雁冰魏云林中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118 昆明理工大学生命科学与技术学院云南昆明650500 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南昆明650118

目的构建呈现人白细胞介素-13(interleukin-13,IL-13)抗原表位的病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)疫苗,为开展IL-13主动免疫干预慢性哮喘进程的研究奠定基础。方法通过抗原性及亲水性预测并结合三维结构分析,获得处于人IL-13分子... 详细信息

目的构建呈现人白细胞介素-13(interleukin-13,IL-13)抗原表位的病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)疫苗,为开展IL-13主动免疫干预慢性哮喘进程的研究奠定基础。方法通过抗原性及亲水性预测并结合三维结构分析,获得处于人IL-13分子与其受体结合部位潜在的B细胞表位;根据预测的人IL-13抗原肽,合成寡核苷酸序列,并经变性、退火形成双链DNA片段,插入表达乙肝核心抗原(HBcAg)的pThioHisA-HBcAg(NP)载体中,构建重组表达质粒,转化感受态大肠埃希菌(***)DH5α,IPTG诱导表达;表达的重组蛋白经SDS-PAGE和Western blot分析后,经硫酸铵沉淀、洗涤初步纯化,并经凝胶过滤层析、密度梯度离心、电镜观察检测其VLPs的存在;将纯化后的重组蛋白在不使用任何常规佐剂的情况下免疫昆明小鼠,ELISA法检测小鼠血清中IL-13特异性抗体的滴度。结果预测分析获得了3个潜在的B细胞表位;3个重组表达质粒pThioHisA(NP)-A、B、C经双酶切和测序证实构建正确;表达的重组蛋白HBcAg+A、B、C相对分子质量分别约为20 000、19 000、18 500,可被兔抗人IL-13多克隆抗体特异性识别,并以VLPs形式存在;HBcAg+A和HBcAg+B重组蛋白诱导小鼠产生了较强的抗体应答,血清中IL-13抗体滴度最高可达1∶64 000,而HBcAg+C重组蛋白未见特异抗体应答。结论成功构建了呈现人IL-13抗原表位的VLPs疫苗,该疫苗可有效打破B细胞免疫耐受,免疫小鼠后产生了高滴度的特异性抗体,为进一步在猴体哮喘模型和人类临床试验中开展IL-13疫苗主动免疫干预哮喘疾病进程的研究奠定了基础。

关键词：白细胞介素-13 病毒样颗粒疫苗

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RNAi技术对EV71病毒感染恒河猴星状胶质细胞所需细胞磷酸酶谱的分析

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中国科学：生命科学 2013年第6期43卷 509-518页

作者：郭素杰马娜岳磊张莹刘龙丁王晶晶廖芸赵红玲纳锐雄李昭李琦涵中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 昆明医科大学昆明650500 昆明医科大学第二附属医院医学影像室昆明650101

肠道病毒71型(EV71))已被证明是引起近年来亚洲-太平洋地区频发的手足口病重症并导致患者死亡的最主要病原体.但是,其是如何感染神经系统并导致严重神经系统病理损伤的分子机制尚不明确.在前期针对EV71感染星状胶质细胞的研究工作基础上... 详细信息

肠道病毒71型(EV71))已被证明是引起近年来亚洲-太平洋地区频发的手足口病重症并导致患者死亡的最主要病原体.但是,其是如何感染神经系统并导致严重神经系统病理损伤的分子机制尚不明确.在前期针对EV71感染星状胶质细胞的研究工作基础上,本研究利用针对恒河猴细胞内磷酸化/去磷酸化系统的共212个磷酸酶基因的siRNA库,分别下调了分离自恒河猴大脑并经纯化培养的星状胶质细胞内相应的磷酸酶的表达,并在此背景条件下比较了EV71在该细胞中的增殖特征,并对若干可以通过其表达水平及其活性的变化而直接影响EV71增殖的磷酸酶做了进一步分析.结果表明,恒河猴星状胶质细胞中若干与调控信号通路相关的酪氨酸磷酸酶和丝/苏氨酸磷酸酶对EV71的增殖具有调控作用,而病毒亦可能通过与这些磷酸酶的相互作用对所感染的星状胶质细胞的免疫反应性产生相应的影响.

关键词：肠道病毒71型小干扰RNA 星状胶质细胞磷酸酶

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病毒及宿主遗传因素对丙型肝炎病毒感染治疗作用的研究进展

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国际遗传学杂志 2013年第1期36卷 24-31页

作者：曹丹凤郭晨史荔中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是一种主要经过血液传播的肝炎病毒,是造成慢性肝炎、肝硬化甚至肝癌的主要原因之一。急性感染者,大约30%发生自发清除。已进展为慢性丙型肝炎(chronic hepatitis C,CHC)的患者,经抗病毒治疗,大约40... 详细信息

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是一种主要经过血液传播的肝炎病毒,是造成慢性肝炎、肝硬化甚至肝癌的主要原因之一。急性感染者,大约30%发生自发清除。已进展为慢性丙型肝炎(chronic hepatitis C,CHC)的患者,经抗病毒治疗,大约40%得到持久的HCV清除。目前,聚乙二醇干扰素-α(pegylated interferon-α,PEG-IFN-α)和利巴韦林(ribavirin,RBV)联合治疗是慢性丙型肝炎的标准治疗方案。近年的研究发现,不同基因型病毒感染的患者对治疗的敏感性有所不同,而不同种族和不同个体对干扰素治疗的应答也有很大差异,即影响慢性丙型肝炎患者抗病毒治疗疗效的因素主要是病毒和宿主两方面。此文就不同的人群基因背景和感染的HCV不同亚型两个方面对慢性丙型肝炎患者治疗效果的影响作一综述。

关键词： HCV 基因型 IL-28B HLA KIR

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猕猴抵抗素基因克隆及序列分析

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实验动物与比较医学 2013年第1期33卷 23-27,38页

作者：鲁帅尧王俊斌杨凤梅禹文海赵远陈丽雄李艳艳和占龙中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的克隆猕猴抵抗素基因，并对其进行鉴定及序列分析。方法用猕猴腹部脂肪组织提取总RNA，采用RT—PCR进行抵抗素基因扩增，克隆至质粒载体，通过PCR和酶切鉴定后，进行测序，用DNAMAM软件进行序列分析，再用ORFfinder软件确定其编码区... 详细信息

目的克隆猕猴抵抗素基因，并对其进行鉴定及序列分析。方法用猕猴腹部脂肪组织提取总RNA，采用RT—PCR进行抵抗素基因扩增，克隆至质粒载体，通过PCR和酶切鉴定后，进行测序，用DNAMAM软件进行序列分析，再用ORFfinder软件确定其编码区，并用BLAST软件比对。结果RT—PCR产物电泳检测得到了363bp目的条带，重组克隆质粒经PCR和XbaI与PstI双酶切鉴定均为阳性，测序结果经序列分析表明，其与人类抵抗素基因序列的同源性为96％，与大鼠的同源性为67％，与小鼠的同源性为65．7％，基于抵抗素基因的进化树结果表明猕猴与人类有较近的亲缘关系；ORFfinder软件的分析结果表明，编码猕猴抵抗素的氨基酸有108个，与人类抵抗素氨基酸的同源性为92％，仍然具有较高的同源性。结论成功克隆了猕猴抵抗素基因，可为下一步在猕猴中开展相关研究奠定前期基础和提供实验资料。

关键词：抵抗素基因克隆猕猴

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树鼩在人类疾病动物模型中应用研究进展

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实验动物科学 2013年第2期30卷 59-64页

作者：黄晓燕徐娟孙晓梅代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

由于树鼩的生理、生化和解剖学等生物学特性与人类相似,人们利用树鼩建立了多种人类病毒性疾病动物模型,并在细菌感染疾病、呼吸系统、内分泌、神经系统疾病和肿瘤等方面有广泛的研究和应用,本文就树鼩在人类疾病动物模型研究中应用的... 详细信息

由于树鼩的生理、生化和解剖学等生物学特性与人类相似,人们利用树鼩建立了多种人类病毒性疾病动物模型,并在细菌感染疾病、呼吸系统、内分泌、神经系统疾病和肿瘤等方面有广泛的研究和应用,本文就树鼩在人类疾病动物模型研究中应用的新进展进行概述。

关键词：树鼩人类疾病动物模型

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树鼩应用于丙型肝炎病毒相关领域的研究进展

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实验动物科学 2013年第1期30卷 55-60页

作者：匡德宣江勤芳孙晓梅仝品芬高家红陆彩霞代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

丙型肝炎病毒慢性感染已成为世界范围的公共健康问题,由于缺少合适的丙型肝炎病毒研究模型,所以对丙肝病毒感染机制、生活周期和致病机制的研究进展较为缓慢。树鼩属于低等的灵长类动物,许多生物学特性近似于人类。近年来引起医学生物... 详细信息

丙型肝炎病毒慢性感染已成为世界范围的公共健康问题,由于缺少合适的丙型肝炎病毒研究模型,所以对丙肝病毒感染机制、生活周期和致病机制的研究进展较为缓慢。树鼩属于低等的灵长类动物,许多生物学特性近似于人类。近年来引起医学生物界和相关管理部门的重视和关注,国内外的学者在树鼩是否可作为丙型肝炎病毒感染的动物模型方面作过十分有益的尝试。本文介绍了国内外树鼩应用于丙型肝炎病毒模型研究的进展情况及应用前景。

关键词：树鼩丙型肝炎病毒体内外感染受体

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肠道病毒71型灭活疫苗相关研究现状

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国际生物制品学杂志 2013年第4期36卷 195-200页

作者：杨二霞(综述) 张莹(审校) 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

手足口病是一种威胁5岁以下儿童生命健康的传染病,近年来已在亚太地区造成了多次上百万患者发病的大规模暴发,仅在中国大陆,自2008年以来,每年发病人数就超过百万,死亡数百人.然而,由于肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）是导致重症... 详细信息

手足口病是一种威胁5岁以下儿童生命健康的传染病,近年来已在亚太地区造成了多次上百万患者发病的大规模暴发,仅在中国大陆,自2008年以来,每年发病人数就超过百万,死亡数百人.然而,由于肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）是导致重症和死亡病例的主要病原体,而其致病机制尚不清楚,目前尚无有效的治疗性药物,因此EV71疫苗研究成为迫切需要解决的问题.此文就EV71灭活疫苗研究进展进行综述.

关键词：肠道病毒属疫苗,灭活手足口病

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