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中国西部第十二届实验动物管理与学术研讨会

作者：匡德宣孙晓梅江勤芳仝品芬陆彩霞高家红代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

树鼩在生物学特性、生理生化、新陈代谢和基因组等方面近似于人类,被广泛应用于生理学、病理学、病毒学、免疫学、药理学及遗传学等多个领域.迄今为止用于生物医学研究的树鼩大部分来自野生,实验树鼩尚无国家质量控制标准.为丫保证树鼩... 详细信息

树鼩在生物学特性、生理生化、新陈代谢和基因组等方面近似于人类,被广泛应用于生理学、病理学、病毒学、免疫学、药理学及遗传学等多个领域.迄今为止用于生物医学研究的树鼩大部分来自野生,实验树鼩尚无国家质量控制标准.为丫保证树鼩引种、驯化、饲养、繁殖、质量控制及福利的规范化和科学化,提高树鼩繁殖率和成活率.本文从兽医公共卫生及实验动物科学的角度,对野生树鼩的捕捉、运输、检疫、饲养及繁育等方面的基本原则及技术操作和福利要求作一简述,为从事树鼩工作的有关人员及树鼩实验动物化研究提供参考.

关键词：实验用树鼩饲养管理动物福利技术标准

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血管紧张素Ⅱ基因重组杆状病毒的构建

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中国生物制品学杂志 2013年第5期26卷 590-594,602页

作者：欧霞 Yuri Kusov 郭莉莉米锴吴晋元尹娜张光明李鸿钧孙茂盛中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所分子生物室云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 Department of Medical Molecular Biology University Lübeck

目的构建携带血管紧张素I(IAngiotensin Ⅱ,AngⅡ)基因的重组杆状病毒,并利用Bac-to-Bac重组杆状病毒表达系统进行表达。方法将重组杆粒bacmid-P1-2A-4AngⅡs-3ABC(rB/HAngⅡ)转染昆虫细胞sf9,包装出重组杆状病毒rBac-P1-2A-4AngⅡs-3ABC(rBAV),通过光学显微镜和透射电镜观察细胞病变(CPE)及病毒形态,采用蚀斑试验检测病毒滴度,PCR及间接免疫荧光技术验证该病毒及感染细胞中AngⅡ和HAV蛋白的表达。结果重组杆粒rB/HAngⅡ转染sf9细胞96 h后,出现典型的CPE;透射电镜下观察可见典型的杆状病毒颗粒;PCR可特异性的扩增出约3 000和1 000 bp的P1-2A-4AngⅡs和3ABC基因片段;P3代重组杆状病毒滴度约为4×108pfu/ml;感染后的sf9细胞中可见特异性的绿色荧光(AngⅡ蛋白)和红色荧光(HAV结构蛋白)。结论已成功构建了携带AngⅡ基因的重组杆状病毒,并在sf9细胞中获得表达,为研制抗高血压疫苗提供了新的思路。

关键词：血管紧张素Ⅱ 杆状病毒表达系统高血压疫苗

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肠道病毒71型灭活疫苗(人二倍体细胞)原液质量分析

肠道病毒71型灭活疫苗(人二倍体细胞)原液质量分析

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2013中国生物制品年会暨第十三次全国生物制品学术研讨会

作者：董承红蔡路奎纳锐雄赵红玲杨丽仙杨槐彭正华杨增福夏龙辉于丽中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的:按照疫苗生产工艺的最简化原则,从多个方面进行了肠道病毒71型灭活疫苗(人二倍体细胞)详细的技术工艺的探索研究。方法:利用纯化疫苗SDS-PAGE胶各条带质谱分析,系统分析不同的纯化工艺于对肠道病毒71型灭活疫苗(人二倍体细胞)原液... 详细信息

目的:按照疫苗生产工艺的最简化原则,从多个方面进行了肠道病毒71型灭活疫苗(人二倍体细胞)详细的技术工艺的探索研究。方法:利用纯化疫苗SDS-PAGE胶各条带质谱分析,系统分析不同的纯化工艺于对肠道病毒71型灭活疫苗(人二倍体细胞)原液的制备工艺稳定性、复性、高纯度、免疫原性的影响。结果:采用的凝胶过滤层析法相对于其他分离方法,如疏水层析、离子交换层析,有着抗干扰能力强的优点,受分离体系中PH值和盐浓度的影响较小。结论:采用凝胶过滤层析工艺制备的肠道病毒71型灭活疫苗(人二倍体细胞)具有高稳定性、高重复性、高纯度、免疫原性稳定的特性。

关键词：肠道病毒71型灭活疫苗质量管理分离纯化免疫原性

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CA16疫苗候选株的开发和在ICR小鼠体内的免疫学特性分析

CA16疫苗候选株的开发和在ICR小鼠体内的免疫学特性分析

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2013中国生物制品年会暨第十三次全国生物制品学术研讨会

作者：杨二霞冯凯李建平陈姝樾张莹董承红程晨普晶姜莉邵聪文董少忠刘龙丁孙乐中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的：柯萨奇病毒A16型(Coxsakievirus A16,CA16)与肠道病毒71型(Enterovirus type 71,EV71)为手足口病(hand-foot-mouth-disease,HFMD)的主要病原。前期的临床研究证实EV71灭活疫苗对CA16没有显著的保护效果。因此,开发有效的抗CA16病毒感染的疫苗和药物对于公共卫生显得十分迫切。方法：本研究从全国各地采集到的34份手足口病患者样本,通过病毒分离、检定,经生物学、免疫学等特性比较,最终选取遗传稳定性高、免疫原性较好的GX-20K-D作为疫苗候选株。结果：该疫苗候选株在KMB17细胞上培养的过程中其18代以内均具有良好的遗传和生物学稳定性,并且其实验用灭活疫苗能在ICR小鼠体内诱导有效的特异性抗体。在受到病毒攻击时,此抗体能对乳鼠形成有效的保护。结论：GX-20K-D毒株能够作为疫苗候选株进行后续的研究开发。

关键词：柯萨奇病毒A16型(CA16) 手足口病(HFMD) 灭活疫苗

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树鼩在人类疾病动物模型中应用研究进展

树鼩在人类疾病动物模型中应用研究进展

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中国西部第十二届实验动物管理与学术研讨会

作者：黄晓燕徐娟孙晓梅代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室. 昆明650118

由于树鼩的生理、生化和解剖学等生物学特性与人类相似,人们利用树鼩建立了多种人类病毒性疾病动物模型,并在细菌感染疾病、呼吸系统、内分泌、神经系统疾病和肿瘤等方面有广泛的研究和应用,本文就树鼩在人类疾病动物模型应用研究中的... 详细信息

由于树鼩的生理、生化和解剖学等生物学特性与人类相似,人们利用树鼩建立了多种人类病毒性疾病动物模型,并在细菌感染疾病、呼吸系统、内分泌、神经系统疾病和肿瘤等方面有广泛的研究和应用,本文就树鼩在人类疾病动物模型应用研究中的新进展进行概述.

关键词：人类疾病动物模型树鼩医学实验

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树鼩血压和心率的无创测定

树鼩血压和心率的无创测定

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中国西部第十二届实验动物管理与学术研讨会

作者：仝品芬陆彩霞江勤芳孙晓梅高家红匡德宣代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明 650118 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明 650118

目的：建立一种树鼩心率和无创血压测定方法,为开展树鼩动物实验提供心率、血压正常的生理参考数据.方法：随机挑选实验树鼩180只,按来源分为野生成年组、F1代自繁成年组和青幼年组三个组,每组雌雄各半,共60只.采用智能无创血压计(鼠仪... 详细信息

目的：建立一种树鼩心率和无创血压测定方法,为开展树鼩动物实验提供心率、血压正常的生理参考数据.方法：随机挑选实验树鼩180只,按来源分为野生成年组、F1代自繁成年组和青幼年组三个组,每组雌雄各半,共60只.采用智能无创血压计(鼠仪)逐只测定 HR(心率)、SBP(收缩压)、DBP(舒张压)和MBP(平均动脉压).结果：野生成年树鼩、自繁成年树鼩和青幼年树鼩心率分别为394.33±37.74BPM、351.61±72.76BPM和378.19±69.04BPM,野生和自繁成年树鼩组有显著差异外(P＜0.05),自繁成年树鼩收缩压、舒张压和平均动脉压均明显低于青幼年树鼩,有极显著差异(P＜o.01).野生成年树鼩和自繁成年树鼩相比,收缩压、舒张压和平均动脉压均无显著性差异(P＞0.05).结论：建立了树鼩无创血压、心率的测量方法,同时获得了野生成年树鼩、F1代自繁成年树鼩和青幼年树鼩的心率和血压参考值范围,丰富了树鼩基础生理数据,可为相关研究提供科学参考.

关键词：实验动物树鼩生理指标心率血压无创测定

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柯萨奇病毒A组16型感染生物学的研究进展

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国际生物制品学杂志 2013年第5期36卷 257-261页

作者：丁东(综述) 普晶(审校) 孙乐(审校) 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 昆明医科大学基础医学院 650031

近年来柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirus A16,CVA16）和肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）在我国引起了手足口病（HFMD）的暴发和流行.CVA16感染的生物学基础研究有助于提高HFMD的防治水平,为HFMD疫苗的研发提供重要依据,此文就CV... 详细信息

近年来柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirus A16,CVA16）和肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）在我国引起了手足口病（HFMD）的暴发和流行.CVA16感染的生物学基础研究有助于提高HFMD的防治水平,为HFMD疫苗的研发提供重要依据,此文就CVA16的生物学特性及其与宿主细胞相互作用的研究进展作一综述.

关键词：柯萨奇病毒肠道病毒属手足口病

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MicroRNA对干细胞调控作用的研究进展

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现代生物医学进展 2013年第16期13卷 3169-3172页

作者：曹颖孙茂盛中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 昆明医科大学云南昆明650031

干细胞是具有自我复制及更新能力的原始不成熟细胞,可向不同组织及器官分化,在胚胎和成体组织中都有存在。干细胞的应用作为组织修复和重建的一种新策略,近几年来受到了医学界和生物学界的广泛关注,而microRNA(miRNA)作为一种长约21～2... 详细信息

干细胞是具有自我复制及更新能力的原始不成熟细胞,可向不同组织及器官分化,在胚胎和成体组织中都有存在。干细胞的应用作为组织修复和重建的一种新策略,近几年来受到了医学界和生物学界的广泛关注,而microRNA(miRNA)作为一种长约21～23个核苷酸的内源性非编码RNA的分子,其通过与靶mRNA结合,发挥负向基因转录调控作用的功能已在研究中被证实,其对细胞乃至生物体的影响也渐渐成为研究的热点。但干细胞与miRNA两者之间是否存在联系,miRNA是否在干细胞的分化、增殖中也具一定有作用,已逐渐成为一项值得研究的课题。这不仅可以使我们更加全面的了解miRNA的作用,也为干细胞的应用提供了新的研究途径和理论依据。因此本文就miRNA及其对胚胎干细胞和成体干细胞的调控做一综述。

关键词： microRNA 干细胞基因调控

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树鼩IL-2 TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

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中国比较医学杂志 2013年第7期23卷 36-40,49页

作者：黄晓燕徐娟王文广殷安国李晓飞孙晓梅夏雪山代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室树鼩种子资源中心云南昆明650118 昆明理工大学生命科学与技术学院云南昆明650500

目的建立检测树鼩IL-2基因TaqMan探针实时荧光定量PCR方法。方法以经ConA诱导培养的树鼩淋巴细胞总RNA为材料,设计特异性引物,通过RT-PCR技术克隆出树鼩IL-2基因,以构建的树鼩IL-2基因质粒为标准品,建立标准曲线,并进行灵敏度检测。结... 详细信息

目的建立检测树鼩IL-2基因TaqMan探针实时荧光定量PCR方法。方法以经ConA诱导培养的树鼩淋巴细胞总RNA为材料,设计特异性引物,通过RT-PCR技术克隆出树鼩IL-2基因,以构建的树鼩IL-2基因质粒为标准品,建立标准曲线,并进行灵敏度检测。结果建立了树鼩IL-2基因mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法,此法检测灵敏度高,线性范围可达102～109拷贝/ul。结论成功建立了树鼩IL-2实时荧光定量PCR方法,此方法灵敏度高、特异性强,检测周期短,为探讨IL-2作用的分子作用机制奠定基础。

关键词：树鼩 IL-2 实时荧光定量 PCR

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树鼩IL-2全长编码序列的克隆及分子特征分析

树鼩IL-2全长编码序列的克隆及分子特征分析

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中国西部第十二届实验动物管理与学术研讨会

作者：黄晓燕徐娟王文广殷安国李晓飞孙晓梅夏雪山代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明 650118 昆明理工火学生命科学与技术学院云南昆明 650500

树鼩作为多种人类疾病模型已受到广泛关注,而免疫因子对于树鼩模型评价至关重要,但目前对其白细胞介素-2(IL-2)的研究鲜有报道.该实验以经ConA (Concanavalin)诱导培养的树鼩淋巴细胞总RNA为模板,RT-PCR克隆出465 bp的树鼩IL-2全长编码... 详细信息

树鼩作为多种人类疾病模型已受到广泛关注,而免疫因子对于树鼩模型评价至关重要,但目前对其白细胞介素-2(IL-2)的研究鲜有报道.该实验以经ConA (Concanavalin)诱导培养的树鼩淋巴细胞总RNA为模板,RT-PCR克隆出465 bp的树鼩IL-2全长编码序列,并采用Clustal W软件分析其序列和分子特征.结果表明树鼩IL-2cDNA编码一个由154个氨基酸组成的蛋白质,其cDNA及氨基酸序列与人的同源性分别为93％及80％,且其整体结构与人IL-2相似.MEGA5.0软件构建的进化树表明,树鼩与人及恒河猴的亲缘关系较近.Pymol软件对树鼩和人IL-2氨基酸序列进行的三维结构模建表明,两者的IL-2分子三维空间结构基本相似,表面火部分区域所带电荷相同,但在某些区域差异较火,且树鼩多出一个糖基化位点,这些差异对抗体的结合可能存在影响.该研究为今后树鼩IL-2单克隆抗体的制备及功能研究奠定了基础.

关键词：人类疾病模型树鼩白细胞介素-2 基因序列单克隆抗体分子特征

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