检索结果-内蒙古大学图书馆

中国科学：生命科学 2011年第6期41卷 439-448页

作者：李龙刘尚允董承红赵红玲王晶晶张莹纳锐雄谢忠平崔萍芳王丽春廖芸唐东红高家红刘龙丁李琦涵中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

肠道病毒71型作为引起儿童群体常见传染性手足口病（HFMD）的主要病原，具有导致少量感染个体出现脑炎等神经系统病变以及相关心肺功能衰竭的病理学特性．因此其预防性疫苗的研发具有重要的公共卫生意义．在前期工作的基础上，一种EV71... 详细信息

肠道病毒71型作为引起儿童群体常见传染性手足口病（HFMD）的主要病原，具有导致少量感染个体出现脑炎等神经系统病变以及相关心肺功能衰竭的病理学特性．因此其预防性疫苗的研发具有重要的公共卫生意义．在前期工作的基础上，一种EV71灭活病毒疫苗（人二倍体细胞）在本研究中基于恒河猴婴猴模型进行了相应的免疫保护性分析．以160EU剂量对2～3月龄婴猴进行0，4周免疫后，动物在第4周接受了剂量为10。～CCID50的病毒经呼吸道的攻击．对病毒攻击后动物在14天内的临床症状、血液生物学、器官病原学分布以及病理学检测的动态观察表明，经疫苗免疫的动物未出现对照动物所具有的特征性临床表现，其血液生物学及病理学检测均无异常．同时，器官病原学分布亦呈阴性．结合动物中和抗体的明确增长及对照动物的综合表现分析，本文的工作证实了该EV71灭活病毒疫苗（人二倍体细胞）在恒河猴婴猴体内的免疫保护性．

关键词：肠道病毒71型 (Enterovirus 71 EV71) 灭活疫苗免疫原性恒河猴婴猴

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人Semaphorin 4D慢病毒载体的构建及鉴定

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中国生物工程杂志 2011年第7期31卷 1-7页

作者：孙强明潘玥赵玉娇陈俊英施海晶马绍辉北京协和医学院/中国医学科学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的:构建并制备能够有效表达Semaphorin 4D的重组慢病毒。方法:从人急性T细胞白血病Jurkat细胞DNA扩增人Semaphorin 4D基因,克隆至pWPI GW慢病毒载体上,与pVSVG及pSPAX质粒共转染人胚肾293T细胞,包装出重组慢病毒,将纯化后的重组病毒... 详细信息

目的:构建并制备能够有效表达Semaphorin 4D的重组慢病毒。方法:从人急性T细胞白血病Jurkat细胞DNA扩增人Semaphorin 4D基因,克隆至pWPI GW慢病毒载体上,与pVSVG及pSPAX质粒共转染人胚肾293T细胞,包装出重组慢病毒,将纯化后的重组病毒直接感染293T和HUVEC细胞,通过免疫印迹、免疫荧光染色和血管内皮细胞迁移分析等方法检测Semaphorin 4D的表达和诱导血管内皮细胞迁移的作用。结果:重组慢病毒介导Semaphorin 4D在293T和HUVEC内获得表达,能介导血管内皮细胞迁移。结论:成功构建了表达Semaphorin 4D的重组慢病毒载体。

关键词： Semaphorin 4D 慢病毒血管新生基因治疗

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B群脑膜炎球菌lpxL2基因敲除突变株的构建及初步鉴定

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云南大学学报（自然科学版） 2011年第6期33卷 710-715页

作者：李晓晶姬秋彦肖红剑彭正华罗娜杨增福杨槐李健峰李智华徐维明中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

应用基因敲除技术的方法和原理,通过PCR扩增B群脑膜炎球菌lpxL2基因及载体pGBK T7上的Kan抗性片段,lpxL2片段与puc-18载体连接得到重组质粒msb-puc,以重组质粒msb-puc为基础,分别通过反向PCR和酶切2种方法构建lpxL2基因中间片段的缺失,... 详细信息

应用基因敲除技术的方法和原理,通过PCR扩增B群脑膜炎球菌lpxL2基因及载体pGBK T7上的Kan抗性片段,lpxL2片段与puc-18载体连接得到重组质粒msb-puc,以重组质粒msb-puc为基础,分别通过反向PCR和酶切2种方法构建lpxL2基因中间片段的缺失,并在缺失位点连入Kan抗性表达盒,从而得到重组质粒mpK,mpK转化B群脑膜炎球菌,并用PCR的方法对转化子进行初步筛选鉴定,初步确定突变株1株.本研究通过基因敲除MenB中LPS合成途径相关基因lpxL2的方法,降低LPS毒性,为B群脑膜炎球菌OMV疫苗的研发做了铺垫.

关键词：脑膜炎奈瑟氏菌外膜囊泡基因敲除脂多糖

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DTaP-sIPV联合疫苗中SabinIPV 免疫原性研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2011年第3期25卷 197-200页

作者：马艳秦敏胡慧琼姬光冯玲高娜顾洁谢炳锋何继红孙明波中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大疾病传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 成都生物制品研究所

目的探讨吸附无细胞百白破-Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗（DTaP-sIPV）的制备工艺,并比较不同配比的DTaP-sIPV中Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗（SabinIPV）三针基础免疫大鼠的中和抗体效价,为确定联合疫苗的最佳制备工艺及抗原剂量配比提供... 详细信息

目的探讨吸附无细胞百白破-Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗（DTaP-sIPV）的制备工艺,并比较不同配比的DTaP-sIPV中Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗（SabinIPV）三针基础免疫大鼠的中和抗体效价,为确定联合疫苗的最佳制备工艺及抗原剂量配比提供参考.方法用不同配比的SabinIPV,制备两批DTaP-sIPV,进行各项指标的检定及稳定性试验,并联合单独的Sabin IPV和GSK制备的DTaP-wIPV对56只Wistar大鼠进行3针免疫,每针间隔1个月,每次免疫后30 d采血并分离血清,采用微量中和试验测定血清中抗脊髓灰质炎病毒3个型别的中和抗体效价.结果两批DTaPsIPV的各项检定指标均符合〈中国药典〉三部（2005版）要求,且稳定性良好.大鼠经3针基础免疫后,其Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒中和抗体的几何平均滴度均显著上升,3针免疫后抗体阳转率已经达到100%.结论经此制备的DTaP-sIPV安全、稳定、有效,且DTaP-sIPV中的SabinIPV在大鼠中有良好的免疫效果,经3针免疫可产生高水平的中和抗体.

关键词：脊髓灰质炎病毒疫苗,灭活抗体,病毒

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人肠道病毒71型与宿主相互作用研究进展

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病毒学报 2011年第5期27卷 505-509页

作者：郭素杰李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

自1969年首次从美国加利福尼亚患者分离出人肠道病毒71型（Human enterovirus 71，HEV71）后，该病毒已在世界范围内造成多次暴发流行，近年来又在中国大陆、中国台湾及其他亚太地区流行。

关键词：肠道病毒71型相互作用宿主中国大陆加利福尼亚暴发流行世界范围亚太地区

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人轮状病毒ZTR-5株灭活疫苗的制备及小鼠血清免疫学评价

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中国生物工程杂志 2011年第11期31卷 6-10页

作者：贾琴妹吴晋元易山张光明郜岩杨星赵晓南孙茂盛李鸿钧中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 昆明医学院昆明650031

目的:研究人轮状病毒ZTR-5株灭活疫苗的制备及在实验小鼠中的免疫原性评价。方法:轮状病毒ZTR-5株在MA104细胞上经蚀斑筛选纯化后,获得单一克隆接种至Vero细胞上适应性培养,免疫荧光定量检测病毒的感染性滴度,对收获的病毒液进行离心、... 详细信息

目的:研究人轮状病毒ZTR-5株灭活疫苗的制备及在实验小鼠中的免疫原性评价。方法:轮状病毒ZTR-5株在MA104细胞上经蚀斑筛选纯化后,获得单一克隆接种至Vero细胞上适应性培养,免疫荧光定量检测病毒的感染性滴度,对收获的病毒液进行离心、超滤、分子筛纯化,甲醛灭活,抗原定量检测Al(OH)3吸附制备的实验性疫苗。使用不同剂量(8EU、32EU、128EU、256EU)经肌内注射免疫小鼠,共免疫三次,免疫间隔2周。采用间接ELISA法检测血清特异性抗体效价。结果:通过蚀斑纯化,筛选得到一株纯化的病毒株ZTR-5纯-1,在Vero细胞上适应性后感染性滴度达7.35logCCID50/ml;大量培养收获的病毒原液滴度为7.57logCCID50/ml,制备获得轮状病毒样品抗原含量为2 560EU/ml;经肌内注射,初次免疫后,所有剂量组动物均获得抗体阳转,阳转率为100%;第一次加强免疫后,各组血清特异性抗体水平均明显增高,免疫剂量为128EU和256EU的两组小鼠血清抗体效价均达1∶10 240;第二次加强免疫后,各剂量组(8EU、32EU、128EU、256EU)血清抗体效价依次达1∶5 120,1∶7 456,1∶14 481.54,1∶14 481.54。结论:人轮状病毒ZTR-5株可在Vero细胞上稳定增殖,所制备的疫苗具良好免疫原性,用128EU/2次免疫即可获得良好的免疫效果。

关键词：人轮状病毒 Vero细胞灭活疫苗免疫试验

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表达甲型HINl流感病毒神经氨酸酶的重组腺病毒的构建及其免疫原性

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中国生物制品学杂志 2011年第11期24卷 1264-1268页

作者：严敏孙茂盛王文举谢夭宏李太华李鸿钧中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

目的构建表达甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶（Neuraminidase，NA）的重组腺病毒，并检测其免疫原性。方法从质粒pMDl9T-simple-NA中扩增NA基因，克隆至穿梭质粒pShuttleCMV中，经同源重组获得重组腺病毒质粒，转染Ad．293细胞，包装出重... 详细信息

目的构建表达甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶（Neuraminidase，NA）的重组腺病毒，并检测其免疫原性。方法从质粒pMDl9T-simple-NA中扩增NA基因，克隆至穿梭质粒pShuttleCMV中，经同源重组获得重组腺病毒质粒，转染Ad．293细胞，包装出重组腺病毒Ad-NA，***和免疫荧光法检测NA基因在Vero细胞中的转录和表达。CsCl密度梯度离心纯化重组腺病毒，免疫小鼠，ELISA法检测免疫小鼠血清中抗NA抗体滴度。结果重组腺病毒质粒经PacI酶切鉴定表明带有目的基因的穿梭质粒已整合到腺病毒基因组中；NA基因在Vero细胞中成功转录和表达；重组腺病毒可刺激小鼠产生抗NA抗体，初免后4周，抗体水平达最高，为1：100000。结论成功构建了表达甲型H1N1流感病毒NA蛋白的重组腺病毒，其可刺激小鼠产生有效的免疫应答，为甲型HINl流感病毒基因工程疫苗的研发奠定了基础。

关键词：流感病毒A型 H1N1亚型神经氨酸酶重组腺病毒免疫原性 Influenza A, H1N1 subtype Neuraminidase （NA） Recombinant adenovirus Immunogenicity

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2009年昆明地区流行的肠道病毒71型基因特征分析

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医学研究杂志 2011年第11期40卷 105-108页

作者：陈俊英潘玥李华施海晶赵玉娇孙强明马绍辉中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的分析2009年昆明地区肠道病毒71型分离株VP1的遗传特征。方法采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法从Vero细胞分离的病毒株基因组中扩增出VP1基因,并测序;分别用Mega4.1软件分析其遗传特征。结果中国昆明分离到的6株肠道病毒71型VP1基... 详细信息

目的分析2009年昆明地区肠道病毒71型分离株VP1的遗传特征。方法采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法从Vero细胞分离的病毒株基因组中扩增出VP1基因,并测序;分别用Mega4.1软件分析其遗传特征。结果中国昆明分离到的6株肠道病毒71型VP1基因的核苷酸和氨基酸同源性为95.4%～97.9%和97.3%～99.7%,与其他C基因型C1、C2、C3和C5的VP1的同源性为87.9%～89.1%和98.3%～99.1%,而与C4基因型的同源型为92.6%～98.5%和97.0%～99.7%,与SHZH98的同源性最低为92.6%和97.0%,与其他基因型的同源性为82.7%～84.6%和96.0%～97.6%。结论 2009年云南昆明流行的肠道病毒71型均为C4基因型;其VP1基因保守性较好。

关键词：肠道病毒71型 C4基因型 VP1基因

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慢病毒介导的HIF-1α mODD在肿瘤细胞中的高表达

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医学研究杂志 2011年第12期40卷 28-31页

作者：赵玉娇龙海亭潘玥李华陈俊英施海晶马绍辉孙强明北京协和医学院/中国医学科学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的在肿瘤细胞中利用重组慢病毒介导缺氧诱导因子-1α突变体(HIF-1α mODD)在正常氧压下高表达,以模拟肿瘤缺氧微环境下肿瘤细胞中HIF-1α的高表达,为研究HIF-1介导的缺氧信号通路及其在肿瘤细胞中的作用提供实验模型。方法将含HIF-1α... 详细信息

目的在肿瘤细胞中利用重组慢病毒介导缺氧诱导因子-1α突变体(HIF-1α mODD)在正常氧压下高表达,以模拟肿瘤缺氧微环境下肿瘤细胞中HIF-1α的高表达,为研究HIF-1介导的缺氧信号通路及其在肿瘤细胞中的作用提供实验模型。方法将含HIF-1αmODD基因片段的慢病毒表达质粒pWPI GW/HIF-1α mODD,与pVSVG及pSPAX质粒共转染人胚肾293T细胞,包装制备重组慢病毒,重组病毒经过纯化后直接感染GLC、H157和YTMLC等肿瘤细胞,并在正常氧压条件下培养,通过RT-PCR、免疫印迹等方法检测HIF-1α mODD在细胞中的表达水平。结果重组慢病毒介导HIF-1α mODD在GLC、H157和YTMLC细胞内获得高表达。结论成功模拟了肿瘤细胞在缺氧微环境下高表达HIF-1α的情况,为体外研究HIF-1α在肿瘤血管新生及肿瘤生长中的作用提供途径。

关键词： HIF-1α 慢病毒缺氧微环境

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一株柯萨奇病毒B组5型(Cox.B5)病毒的分离及VP1基因分析

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医学研究杂志 2011年第9期40卷 55-58页

作者：李华杨卉娟柯华昕陈俊英潘玥赵玉娇孙强明马绍辉中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的研究2009年昆明市无菌性脑膜炎的病原柯萨奇B5(coxsackie virus B5,CVB5)分离株(KMA193-09)的VP1基因特征。方法采用RD细胞、Hep-2细胞对患者粪便标本进行病毒分离,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增病毒VP1基因并进行序列测定,用Meg... 详细信息

目的研究2009年昆明市无菌性脑膜炎的病原柯萨奇B5(coxsackie virus B5,CVB5)分离株(KMA193-09)的VP1基因特征。方法采用RD细胞、Hep-2细胞对患者粪便标本进行病毒分离,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增病毒VP1基因并进行序列测定,用Mega 4.0等软件分析处理。结果从无菌性脑膜炎患者粪便标本中,分离到CVB5,其VP1区的核苷酸长度均为831bp,未发现核苷酸插入与丢失。与浙江COXB5/ZHEJIANG/12/02(CFS)株、山东02336/SD/CHN/2002/CB5株及浙江COXB5/ZHEJIANG/13/02株氨基酸同源性最高为98.19%,与国外毒株的同源性为95.67%～97.83%。在进化树上与YZ081/SD/CHN/2005/CB5株显示在同一个分支上。结论分离的肠道病毒为柯萨奇病毒B组5型(CVB5),分离株(KMA193-09)VP1区变异较小。

关键词：无菌性脑膜炎柯萨奇病毒B组5型(Cox.B5) VP1基因分析

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