检索结果-内蒙古大学图书馆

中国比较医学杂志 2018年第3期28卷 72-77页

作者：宋庆凯李晓飞苗雨润张志成王璇袁圆代解杰孙晓梅中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队昆明650118

目的通过建立树鼩腺病毒(tree shrew adenovirus,TAV)TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,快速准确地检测树鼩腺病毒。方法根据TAV全基因组3’端保守序列设计合成特异性引物;用含目的基因片段的重组质粒作为标准品进行标准曲线绘制,建立TAV ... 详细信息

目的通过建立树鼩腺病毒(tree shrew adenovirus,TAV)TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,快速准确地检测树鼩腺病毒。方法根据TAV全基因组3’端保守序列设计合成特异性引物;用含目的基因片段的重组质粒作为标准品进行标准曲线绘制,建立TAV TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。结果建立的TAV实时荧光定量PCR检测方法特异性好,与树鼩源及其他物种常见病毒无交叉反应;方法的最低检测限度为每微升3.7拷贝,灵敏性强;相关检测系数R2为0.998,扩增效率为95.7%;扩增结果具有良好的线性关系,且重复性检测效果好。结论成功建立了TAV TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,灵敏度高,重复性好,可用于TAV感染的早期快速检测。

关键词：树鼩腺病毒 3’保守区域 TaqMan 实时荧光定量PCR

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丙型肝炎病毒的细胞和实验动物模型研究进展

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中国兽医杂志 2015年第2期51卷 59-62页

作者：陆彩霞匡德宣代解杰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

丙型肝炎是正在严重危害人类健康的一重大传染病,据世界卫生组织（WHO）统计,目前全球丙型肝炎病毒（HCV）感染者达1.7亿,每年新发300万至400万.HCV是单股正链RNA病毒,属于黄病毒科肝炎病毒属,感染后主要引起慢性肝炎、肝纤维化和肝细... 详细信息

丙型肝炎是正在严重危害人类健康的一重大传染病,据世界卫生组织（WHO）统计,目前全球丙型肝炎病毒（HCV）感染者达1.7亿,每年新发300万至400万.HCV是单股正链RNA病毒,属于黄病毒科肝炎病毒属,感染后主要引起慢性肝炎、肝纤维化和肝细胞肝癌.目前已发现6个基因型及多个亚型,这些亚型有不同的地理分布,疾病进程和对药物治疗的不同反应.

关键词：丙型肝炎病毒肝细胞肝癌实验动物模型正链RNA病毒世界卫生组织重大传染病人类健康黄病毒科

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异丙肾上腺素诱导恒河猴心肌损伤模型的初步研究

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中国比较医学杂志 2022年第2期32卷 60-65,93页

作者：李艳艳杨凤梅王俊斌陈丽雄靳玮华和占龙杨飞赵远中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 昆明市第三人民医院胸外科昆明650041

目的应用异丙肾上腺素诱导恒河猴心肌损伤模型方法的初步探索。方法选用11只恒河猴分为高剂量组、低剂量组、对照组。模型组每次注射ISO剂量分别为4.6 mg/kg、3.2 mg/kg,每天2次;对照组注射生理盐水1 mL,每天1次。分别于注射后第1、3、5... 详细信息

目的应用异丙肾上腺素诱导恒河猴心肌损伤模型方法的初步探索。方法选用11只恒河猴分为高剂量组、低剂量组、对照组。模型组每次注射ISO剂量分别为4.6 mg/kg、3.2 mg/kg,每天2次;对照组注射生理盐水1 mL,每天1次。分别于注射后第1、3、5、7天及第2、3、4、5周进行彩色多普勒超声影像检查:左室舒张末期的室间隔厚度(IVSTd)、左室内径(LVEDD)、左室后壁厚度(LVPWTd),收缩末期的室间隔厚度(IVSTs)、左室内径(LVESD)、左室后壁厚度(LVPWTs)、及左心室短轴缩短率(FS)、射血分数(EF)、左心室质量(LVM);心电仪检查心电图变化;同时进行谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、肌酸肌酶(CK)、肌酸肌酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、血小板/淋巴细胞比值(PLR)、中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)等血液生理生化指标检测。结果高剂量组在给药1周内,AST、ALT、LDH、CK、CK-MB、PLR、NLR明显升高;IVSTd、IVSTs、LVPWTd、LVPWTs、LVEDD、LVESD增加,EF、FS降低。与高剂量组相比,低剂量组变化不明显。心电结果显示给药后至第5周持续出现T波、ST段不同程度的改变。结论皮下注射ISO可诱导恒河猴心肌损伤,心脏超声、心电图及血液学的综合指标可作为恒河猴无创心脏损伤模型的评价依据。

关键词：异丙肾上腺素恒河猴心肌损伤

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帕金森疾病动物模型的研究进展

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中国比较医学杂志 2018年第5期28卷 21-27页

作者：张志成袁圆王璇宋庆凯代解杰昆明医科大学昆明650500 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

帕金森疾病(Parkinson’s disease,PD)是一种神经退行性疾病,现多认为是遗传和环境因素相互作用的结果。典型特征是黑质纹状体中多巴胺神经元丧失以及多巴胺缺乏相关的典型帕金森运动特征。动物模型在阐明PD的发病机制、测试新的治疗方... 详细信息

帕金森疾病(Parkinson’s disease,PD)是一种神经退行性疾病,现多认为是遗传和环境因素相互作用的结果。典型特征是黑质纹状体中多巴胺神经元丧失以及多巴胺缺乏相关的典型帕金森运动特征。动物模型在阐明PD的发病机制、测试新的治疗方案及药物的研究中,具有十分重要的作用。啮齿类动物、树鼩和灵长类动物等采用不同造模方法所建立的PD动物模型都拥有自己的优势和局限性,所表现出的临床特征和病理机制与人类有所不同。因此,在科学研究中选择所需使用的模型时必须仔细考虑。本文就主要神经毒素及转基因PD动物模型的相关研究进展进行综述。

关键词：帕金森疾病 6-羟基多巴胺 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶神经毒素转基因动物模型

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反向遗传学在轮状病毒研究中的应用

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中国病原生物学杂志 2014年第1期9卷 74-76,87页

作者：谢力李鸿钧孙茂盛昆明学院医学院分子医学研究中心云南昆明650214 中国医学科学院医学生物学研究所/北京协和医学院云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

针对病毒的反向遗传技术可以在基因水平上对病毒基因组进行各种修饰或改造,通过观察病毒的表型变化来判断这些基因操作的效果,从而达到研究病毒及其致病机制的目的。反向遗传技术在RNA病毒的研究中应用广泛,借助反向遗传技术调控病毒基... 详细信息

针对病毒的反向遗传技术可以在基因水平上对病毒基因组进行各种修饰或改造,通过观察病毒的表型变化来判断这些基因操作的效果,从而达到研究病毒及其致病机制的目的。反向遗传技术在RNA病毒的研究中应用广泛,借助反向遗传技术调控病毒基因表达、揭示病毒蛋白功能已较为普遍,尤其是通过基因操作人工"合成"病毒的感染性克隆一直是近年来反向遗传学研究的热点领域。目前轮状病毒的反向遗传操作仅限于借助辅助病毒实现部分基因节段的修饰和替换,尚没有拯救完整病毒的报道。本文就反向遗传技术在RNA病毒拯救,特别是轮状病毒研究中的应用与进展作一简要综述。

关键词：轮状病毒反向遗传病毒拯救感染性克隆综述

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甘氨酸锌对甲肝抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响

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中国生物制品学杂志 2015年第6期28卷 575-578页

作者：陈振普王海漩胡凝珠胡云章昆明医科大学基础医学院云南昆明650500 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所疫苗研究室云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南昆明650118

目的探讨甘氨酸锌(glycine zinc)对甲型肝炎病毒(hapatitis A virus,HAV)抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响。方法将ICR小鼠随机分为7组:甘氨酸锌(200μg,p H 6.5)+HAV组、甘氨酸锌(400μg,p H 6.5)+HAV组、甘氨酸锌(200μg,p H 7.5)+HAV... 详细信息

目的探讨甘氨酸锌(glycine zinc)对甲型肝炎病毒(hapatitis A virus,HAV)抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响。方法将ICR小鼠随机分为7组:甘氨酸锌(200μg,p H 6.5)+HAV组、甘氨酸锌(400μg,p H 6.5)+HAV组、甘氨酸锌(200μg,p H 7.5)+HAV组、甘氨酸锌(400μg,p H 7.5)+HAV组、生理盐水对照组(生理盐水200μl)、HAV抗原对照组(HAV抗原)和铝佐剂对照组(铝佐剂300μg+HAV抗原),每组8只。HAV抗原剂量均为18 EU,各组均经腹部皮下多点注射,200μl/只,免疫1次。免疫4、8、12、16周后,采用间接ELISA法检测小鼠血清中抗-HAV抗原特异性Ig G抗体水平,并进行安全性试验。结果除生理盐水对照组外,其他各组小鼠免疫4周后均产生抗-HAV Ig G,并随着时间的延长呈上升趋势,于免疫后第8周达峰值,此后逐渐下降。不同甘氨酸锌佐剂组的抗体水平均明显高于HAV抗原对照组。免疫后第8周时,铝佐剂对照组和甘氨酸锌佐剂组的抗体水平均显著高于HAV抗原对照组(P均<0.05);甘氨酸锌(400μg,p H 6.5)佐剂组抗体水平与铝佐剂对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论甘氨酸锌能显著增强HAV抗原诱导小鼠的体液免疫应答,其体液免疫增强效果与铝佐剂相当。

关键词：甘氨酸锌佐剂甲肝抗原体液免疫

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甲磺酸去铁胺佐剂对甲型肝炎病毒抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响

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中国生物制品学杂志 2014年第4期27卷 472-475页

作者：罗婷李虹娟王霄段志青李萍王海漩胡凝珠胡云章中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 昆明医科大学生物所云南昆明650500

目的探讨甲磺酸去铁胺（deferoxamine，DFO）佐剂对甲型肝炎病毒（hepatitis A virus antigen，HAV）抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响。方法将不同剂量的DFO（0.6、1、4、8mg）佐剂分别与HAV抗原18EU混合，免疫ICR小鼠，并设生理盐水对... 详细信息

目的探讨甲磺酸去铁胺（deferoxamine，DFO）佐剂对甲型肝炎病毒（hepatitis A virus antigen，HAV）抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响。方法将不同剂量的DFO（0.6、1、4、8mg）佐剂分别与HAV抗原18EU混合，免疫ICR小鼠，并设生理盐水对照组（生理盐水200 μl）、HAV抗原对照组（HAV 18 EU）、铝佐剂对照组（铝佐剂300μg＋HAY抗原18EU）和复合佐剂组（HAY抗原18EU＋DFO1mg＋铝佐剂150 μg），均经腹部皮下多点注射，0.2ml／只，共免疫1次。分别于免疫后第4、8、12、16周，采用间接ELISA法检测小鼠血清中抗-HAV IgG水平，并进行安全性试验。结果除生理盐水对照组外，其他各组小鼠血清在各时间点均能检测到抗.HAVIgG；除DFO 0.6mg组外，抗体滴度均在第8周达峰值；不同剂量DFO组的抗体水平均明显高于HAV抗原对照组，其中DFO4mg和8mg组在8～16周时抗体水平显著高于HAV抗原对照组，且差异有统计学意义（P〈0.05），但与铝佐剂对照组比较，差异无统计学意义（P〉0.05）；在8～16周时，同一时间DFO4mg、DFO8mg和复合佐剂组的抗体水平较高，并能维持较长时间，至第16周时仍能达到与铝佐剂对照组相当的水平。结论DFO佐剂能显著增强HAV抗原诱导小鼠的体液免疫应答，有望开发为一种可替代铝佐剂的新型佐剂。

关键词：甲磺酸去铁胺佐剂甲型肝炎病毒抗原体液免疫

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新生树鼩多巴胺神经元的体外培养

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中国比较医学杂志 2018年第7期28卷 82-86页

作者：李娟曾晓锋杨根梦仝品芬代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 昆明医科大学法医学院昆明650500

目的分离培养鉴定树鼩多巴胺神经元,为进一步建立多巴胺神经元功能异常疾病研究的细胞模型打下基础。方法应用神经元专用培养基添加B27和Glutamax的培养液对新生树鼩多巴胺神经元进行体外培养。采用免疫荧光法对培养细胞进行鉴定。结果... 详细信息

目的分离培养鉴定树鼩多巴胺神经元,为进一步建立多巴胺神经元功能异常疾病研究的细胞模型打下基础。方法应用神经元专用培养基添加B27和Glutamax的培养液对新生树鼩多巴胺神经元进行体外培养。采用免疫荧光法对培养细胞进行鉴定。结果成功培养出树鼩原代多巴胺神经元,免疫荧光法检测酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)免疫阳性神经元达到(88.49±2.4)%。结论使用本方法可以培养出高纯度的树鼩多巴胺神经元。

关键词：多巴胺神经元原代培养树鼩

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腺病毒载体表达轮状病毒G1型外壳蛋白VP7及其诱导的免疫应答研究

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现代免疫学 2015年第2期35卷 96-101页

作者：谢力闫姗姗欧霞郭莉莉吴晋元周艳李鸿钧孙茂盛昆明学院医学院昆明650214 中国医学科学院医学生物学研究所、北京协和医学院、云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 昆明医科大学昆明650503

构建表达地方流行株轮状病毒G1型外壳蛋白VP7的复制缺陷型重组腺病毒,免疫小鼠评价其体液及细胞免疫反应效果,探讨基因工程轮状病毒疫苗的实验基础及可行性。RT-PCR扩增轮状病毒VP7基因并克隆至pshuttle-CMV穿梭质粒,pshuttle-VP7与腺... 详细信息

构建表达地方流行株轮状病毒G1型外壳蛋白VP7的复制缺陷型重组腺病毒,免疫小鼠评价其体液及细胞免疫反应效果,探讨基因工程轮状病毒疫苗的实验基础及可行性。RT-PCR扩增轮状病毒VP7基因并克隆至pshuttle-CMV穿梭质粒,pshuttle-VP7与腺病毒骨架质粒同源重组后转染293细胞包装重组腺病毒rAd-VP7。RT-PCR、western blot检测rAdVP7在体外细胞中的转录及表达。rAd-VP7经肌注或滴鼻免疫小鼠后检测其血清IgG、肠道IgA及中和抗体效价;流式、ELISPOT检测淋巴细胞亚群变化及IFN-γ分泌情况。结果显示ELISA可检测到免疫小鼠血清IgG和滴鼻组肠道IgA抗体的产生;肌注和滴鼻免疫组中和抗体平均滴度分别为228和322.5;免疫小鼠脾细胞IFN-γ的分泌增加。表达轮状病毒VP7的重组腺病毒不但能够激发体液及细胞免疫反应,滴鼻免疫途径还可诱导粘膜免疫应答。

关键词：轮状病毒 VP7 重组腺病毒免疫原性

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HPV 16 L1天然变异体在毕赤酵母中的可溶性表达及病毒样颗粒装配

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中国生物制品学杂志 2018年第5期31卷 462-466页

作者：杨旭黄惟巍姚宇峰刘存宝孙文佳白红妹马雁冰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发国家地方联合工程研究中心云南昆明650118

目的在毕赤酵母中表达两个临床人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16型毒株主要衣壳蛋白L1(HPV 16 L1),并分析表达产物的可溶性及病毒样颗粒(virus-like parcticle,VLP)装配差异。方法将编码两个不同HPV 16毒株L1蛋白的全长基因序... 详细信息

目的在毕赤酵母中表达两个临床人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16型毒株主要衣壳蛋白L1(HPV 16 L1),并分析表达产物的可溶性及病毒样颗粒(virus-like parcticle,VLP)装配差异。方法将编码两个不同HPV 16毒株L1蛋白的全长基因序列M16和Y16分别重组于毕赤酵母表达载体p Pink LC,构建重组表达质粒Y16LC和M16LC,转化表达菌株p Pink strain 1。重组菌经甲醇诱导后,Western blot分析L1蛋白的表达水平及可溶性。经密度梯度离心结合透射电镜观察,分析VLP装配情况。通过软件pubmed在线Alignment分析两个序列的氨基酸排列。结果两个重组表达质粒经酶切鉴定及测序分析证明构建正确。两个序列获得了相似的蛋白表达水平,但Y16的可溶性较差,几乎且无VLP形成;而M16呈现较好的蛋白可溶性及VLP装配能力。Y16与M16有5个氨基酸的差异(H202D、T266A、Δ424S、D441Δ、K452Q)。结论 HPV 16 L1氨基酸的微小改变尽管未对重组蛋白的表达水平产生影响,但显著影响有功能的预期产物的获得。提示在基因重组病毒疫苗研发中,制备VLP时需考虑毒株的选择,甚至主动进行抗原的特定氨基酸的改造。

关键词：人乳头瘤病毒主要衣壳蛋白L1 毕赤酵母病毒样颗粒

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