检索结果-内蒙古大学图书馆

3种ELISA方法与微量细胞中和试验检测SARS-CoV-2抗体滴度的相关性分析

中国生物制品学杂志 2023年第6期36卷 719-723页

作者：蒋国润赵恒廖芸范胜涛李丹丹张莹于丽王丽春李琦涵徐兴丽中国医学科学院、北京协和医学院医学生物学研究所、云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的分析不同方法检测严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARSCoV-2)疫苗免疫后抗体滴度的相关性,为其特异性抗体检测提供方法学依据。方法采用微量细胞中和试验及3种ELISA方法(分别以S蛋白... 详细信息

目的分析不同方法检测严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARSCoV-2)疫苗免疫后抗体滴度的相关性,为其特异性抗体检测提供方法学依据。方法采用微量细胞中和试验及3种ELISA方法(分别以S蛋白、N蛋白和灭活全病毒颗粒为抗原)检测SARS-CoV-2灭活疫苗临床试验血清样品的IgG抗体阳转率及中和抗体滴度,并进行微量细胞中和试验与3种ELISA方法的相关性分析。结果中和抗体、S抗体、N抗体和全病毒抗体检测所得抗体阳转率分别为84.3%、91.3%、65.2%和46.6%,抗体几何平均滴度分别为16.6、945.9、72.7和18.8。3种ELISA方法(分别以S蛋白、N蛋白和灭活全病毒颗粒为抗原)与微量细胞中和试验检测结果的相关系数(r)分别为0.494、0.371和0.181。结论检测SARS-CoV-2 S抗体水平能在很大程度上反映以抗体水平升高为特征的体液免疫反应的激活情况。

关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒2 中和抗体 S抗体 N抗体全病毒抗体

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肠道病毒71型灭活疫苗（人二倍体细胞）免疫儿童血清中抗脊髓灰质炎病毒及抗甲肝病毒抗体的动态观察

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中华微生物学和免疫学杂志 2017年第4期37卷 290-296页

作者：李菁梁燕林鸿呜张兆勇车艳春廖芸盛吉富赵志梅崔萍芳龙润乡李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所、云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 内蒙古阿荣旗疾病预防控制中心阿荣旗162750

目的观察适龄健康婴幼儿接种肠道病毒71型灭活疫苗（人二倍体细胞）后血清中抗EV71中和抗体、抗脊髓灰质炎病毒中和抗体及抗甲肝病毒IgG抗体的动态变化。方法收集接种EV71灭活疫苗后受试者的血清进行中和试验检测抗EV71、抗脊髓灰质炎... 详细信息

目的观察适龄健康婴幼儿接种肠道病毒71型灭活疫苗（人二倍体细胞）后血清中抗EV71中和抗体、抗脊髓灰质炎病毒中和抗体及抗甲肝病毒IgG抗体的动态变化。方法收集接种EV71灭活疫苗后受试者的血清进行中和试验检测抗EV71、抗脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中和抗体滴度：用ELISA方法检测抗甲肝病毒IgG抗体浓度。结果首剂接种EV7l灭活疫苗后引起儿童血清中抗EV71中和抗体平均几何滴度（GMTs）上升至4．85，第2剂免疫28d后GMTs明显上升至64．37。对这些受试儿童血清内抗脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中和抗体及抗甲肝病毒IgG抗体动态观察发现，0d（EV71疫苗接种前）相比，3个型别的抗脊髓灰质炎病毒中和抗体在28d（第1剂疫苗接种后28d）出现了轻微波动（P〈0．05），在56d（第2剂接种后28d）时I、Ⅲ型抗脊髓灰质炎病毒抗体也有轻微差异，但Ⅱ型已恢复至0d水平（P〉0．05）；抗甲肝病毒IgG抗体水平保持稳定，在观察期间内的波动差异无统计学意义（P〉O．05）。结论EV71灭活疫苗在两剂全程免疫并诱导特异性抗EV71中和抗体的过程中，对儿童体内原先存在的抗甲肝病毒IgG抗体无影响但对3个型别抗脊髓质炎病毒中和抗体有轻微干扰，总体来说抗体变化均不影响免疫应答的临床有效性。

关键词：肠道病毒71型灭活疫苗(人二倍体细胞) 接种儿童抗体动态观察

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云南株埃可病毒6型的全基因序列分析

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中国病原生物学杂志 2023年第8期18卷 869-874页

作者：陈俊薇张名刘煜菡郭伟冯昌增马绍辉云南大学生命科学学院云南昆明650504 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

目的对分离自云南省手足口病患者粪便的8株埃可病毒6型(Echovirus 6,E6)进行全基因组遗传特征分析,为E6基因组的变异和重组研究提供数据参考。方法分别采用人横纹肌肉瘤细胞(human rhabdomyosarcoma cells,RD)、人胚肺二倍体成纤维细胞(... 详细信息

目的对分离自云南省手足口病患者粪便的8株埃可病毒6型(Echovirus 6,E6)进行全基因组遗传特征分析,为E6基因组的变异和重组研究提供数据参考。方法分别采用人横纹肌肉瘤细胞(human rhabdomyosarcoma cells,RD)、人胚肺二倍体成纤维细胞(human embryonic lung diploid fibroblasts,KMB17)以及非洲绿猴肾细胞(Vero)对云南省2019年从手足口病患者粪便样分离的8株E6进行增殖培养。提取病毒RNA,RT-PCR扩增其VP1序列,并鉴定其血清型。设计针对E6的引物,分段扩增获得全基因组并测序,使用Mega 7.0、Geneious 9.1.4及Simplot 3.5.1等软件对其全基因组序列进行分析。结果8株E6分离株中RD细胞分离的病毒6株,KMB17细胞分离的病毒2株,Vero细胞未分离到病毒。8株E6病毒分离株基因组全长为7440~7450个核苷酸,编码2191个氨基酸,8个分离株之间全基因组核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.6%~99.8%和99.4%~99.9%。VP1序列分析显示,8个E6分离株均属于中国流行的优势基因型F。基于P1、P2、P3系统进化与重组分析显示:在P1区,8个E6分离株与E6原型株D􀆳Amori聚在一起,与VP1分型结果一致;在P2区,与柯萨奇病毒B组5型(Coxsackievirus B5,CVB5)、埃可病毒16型(Echovirus 16,E16)以及2个中国E6毒株聚类在一起;在P3区,与柯萨奇病毒A组9型(Coxsackievirus A9,CVA9)、E16和其他中国E6病毒分离株聚类在一起,表明8个E6病毒分离株与EV-B的其他血清型病毒之间可能发生过重组。结论8个云南分离株E6病毒均属于中国流行的优势基因型F,且与EV-B的其他血清型之间可能发生过重组事件。

关键词：埃可病毒6型全基因组序列系统进化分析

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Ⅳ型登革病毒中国株LD34在KMB17细胞上的适应性及其生物学特性

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中国生物制品学杂志 2012年第9期25卷 1135-1138页

作者：赵玉娇龙海亭潘玥陈俊英杨丽娟岳耀斐孙强明中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的研究Ⅳ型登革病毒中国株LD34在人胚肺二倍体细胞KMB17上的传代适应性及其生物学特性。方法将Ⅳ型登革病毒中国株LD34在C6/36细胞上扩增,并采用微量细胞病变法测定病毒的感染性滴度。以2.0 MOI的病毒接种KMB17细胞传代培养,筛选KMB1... 详细信息

目的研究Ⅳ型登革病毒中国株LD34在人胚肺二倍体细胞KMB17上的传代适应性及其生物学特性。方法将Ⅳ型登革病毒中国株LD34在C6/36细胞上扩增,并采用微量细胞病变法测定病毒的感染性滴度。以2.0 MOI的病毒接种KMB17细胞传代培养,筛选KMB17细胞适应株,并进行培养条件的优化。将Ⅳ型登革病毒中国株LD34 KMB17细胞适应株连续传10代,测定病毒的感染性滴度,免疫荧光法检测病毒的抗原性,RT-PCR法扩增登革病毒的特异性基因。结果筛选出的Ⅳ型登革病毒中国株LD34在KMB17细胞上的最佳培养条件为病毒接种MOI 0.4,培养基血清浓度5%;其感染KMB17细胞后可产生明显的细胞病变(CPE),连续传10代,病毒滴度达7.75 CCID50/ml;第10代病毒的抗原性呈阳性;第10代病毒能扩增出511 bp的登革病毒特异性基因和393 bp的Ⅳ型登革病毒特异性基因。结论获得了Ⅳ型登革病毒中国株LD34 KMB17细胞适应株,病毒保持了原始毒株的基本生物学特性,且具有较好的抗原性。

关键词：登革病毒人胚肺二倍体细胞适应性生物学特性

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两株不同表型的CA16毒株(B基因型)的生物学性状比较分析

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中国科学：生命科学 2012年第5期42卷 390-397页

作者：杨二霞赵恒张莹刘建生廖芸王丽春崔萍芳杨丽仙刘龙丁董承红董少忠邵聪文姜莉孙乐李琦涵中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 江苏康淮生物科技有限公司泰州225300

CA16病毒作为手足口病主要病原之一,其病原学性状与感染引起的病理过程具有可能的相关意义.对分离自一名重症手足口病(HFMD)患者咽拭子的两株呈现不同蚀斑形态的CA16毒株所做的生物学分析表明,它们在增殖动力学、免疫原性等生物学性状... 详细信息

CA16病毒作为手足口病主要病原之一,其病原学性状与感染引起的病理过程具有可能的相关意义.对分离自一名重症手足口病(HFMD)患者咽拭子的两株呈现不同蚀斑形态的CA16毒株所做的生物学分析表明,它们在增殖动力学、免疫原性等生物学性状上的差异与其对乳鼠致病能力的差异具有相关性,而这些共同的差异与病毒基因非编码区5′端序列及结构区的VP1区域中的序列之间存在着可能的对应关系,所有这些结果提示了CA16病毒生物学及遗传学性状与其致病能力的相关性.

关键词： CA16毒株增殖动力学免疫原性致病能力

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小鼠resistin基因慢病毒表达载体构建及在KMB17细胞中的表达

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生物技术 2016年第2期26卷 119-125,135页

作者：陈瑜赵远岳俊李鸿钧和占龙马开利马进吴正存唐东红鲁帅尧中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所中国医学科学院医学灵长类动物研究中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

[目的]构建携带小鼠resistin基因的慢病毒表达载体,并高效转导靶细胞。[方法]从小鼠脂肪组织提取总RNA,经PCR扩增、酶切、连接、转化后构建重组质粒;通过293T细胞包装为重组慢病毒颗粒,然后感染KMB17细胞,检测小鼠resistin基因在靶细胞... 详细信息

[目的]构建携带小鼠resistin基因的慢病毒表达载体,并高效转导靶细胞。[方法]从小鼠脂肪组织提取总RNA,经PCR扩增、酶切、连接、转化后构建重组质粒;通过293T细胞包装为重组慢病毒颗粒,然后感染KMB17细胞,检测小鼠resistin基因在靶细胞中的表达。[结果]PCR扩增到预期的342 bp大小的resistin基因目的片段;构建的重组质粒经酶切得到了342 bp大小的目的片段,测序鉴定为小鼠resistin基因序列;重组慢病毒包装可观察到很强的绿色荧光,说明具有较高的质粒转染效率;重组慢病毒感染KMB17后可检测到小鼠resistin基因转录水平和蛋白水平的表达,证明resistin基因得到有效转导并可在靶细胞中高水平表达。[结论]成功构建了携带小鼠resistin基因的慢病毒表达载体并可在KMB17靶细胞中获得高效表达。

关键词： resistin 慢病毒载体靶细胞表达小鼠

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人类与部分实验动物RETN基因同源性分析

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中国实验动物学报 2012年第5期20卷 69-73页

作者：鲁帅尧龙海亭禹文海和占龙赵远杨凤梅李鸿钧中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所、云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的分析人类与部分实验动物的RETN基因同源性,为人类RETN基因相关疾病及基因功能研究对理想实验动物的选择提供依据。方法提取猕猴、大鼠、小鼠和树鼩的脂肪组织总RNA,用相应的RETN引物进行RT-PCR,对其产物进行双向测序;同时在GenBank... 详细信息

目的分析人类与部分实验动物的RETN基因同源性,为人类RETN基因相关疾病及基因功能研究对理想实验动物的选择提供依据。方法提取猕猴、大鼠、小鼠和树鼩的脂肪组织总RNA,用相应的RETN引物进行RT-PCR,对其产物进行双向测序;同时在GenBank中查询人类、猪、牛的RETN基因序列;再运用ORF Finder软件调取其ORF核苷酸序列和氨基酸序列,用DANMAN软件对所获得的序列进行比对,分析其同源性。结果人类RETN的核苷酸序列与猕猴、小鼠、树鼩、大鼠、猪、牛的同源性分别为95.4%、65.4%、65.4%、66.4%、81.0%、81.0%;氨基酸序列分别为91.7%、55.6%、55.6%、53.7%、75.9%、72.2%。;系统进化树结果表明,就RETN基因而言,人与猕猴的亲缘关系较近。结论基于同源性分析结果,在RETN的进化上猕猴与人类存在较近的亲缘关系,是研究人类RETN生物学功能及其相关疾病的最佳实验动物。

关键词： RETN 同源性人类实验动物小鼠大鼠猴猪狗树鼩牛

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氢氧化锌与硫酸乙酰肝素复合佐剂对狂犬病疫苗诱导的小鼠体液免疫应答的作用

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中国生物制品学杂志 2013年第5期26卷 608-610,620页

作者：蔡泓志孙静王海漩胡凝珠胡云章中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所疫苗研究室云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南昆明650118

目的探讨氢氧化锌与硫酸乙酰肝素(Heparan sulfate,HS)复合佐剂对狂犬病疫苗诱导的小鼠体液免疫应答的影响。方法取64只ICR小鼠随机分为8组,每组8只,分别为复合佐剂(0.27 mg氢氧化锌,100μg HS,0.125 IU狂犬病疫苗)1、2、3次免疫组,狂... 详细信息

目的探讨氢氧化锌与硫酸乙酰肝素(Heparan sulfate,HS)复合佐剂对狂犬病疫苗诱导的小鼠体液免疫应答的影响。方法取64只ICR小鼠随机分为8组,每组8只,分别为复合佐剂(0.27 mg氢氧化锌,100μg HS,0.125 IU狂犬病疫苗)1、2、3次免疫组,狂犬病疫苗1、2、3次免疫组,狂犬病疫苗常规5次免疫组,生理盐水对照组。均经小鼠胫骨前肌免疫,除狂犬病疫苗常规5次免疫组于0、3、7、14、28 d进行免疫外,其他各组均为隔周免疫。分别于初免疫后1、2、3、4、8、12、16周经尾静脉采血,分离血清,ELISA法检测小鼠血清中抗-狂犬病毒(Rabies virus,RABV)IgG水平。结果初免后1周,除生理盐水对照组小鼠血清未检测到抗-RABV IgG外,各实验组均产生抗-RABV特异性IgG;所有复合佐剂组在初免后3周均可产生高水平的IgG,初免后12周反弹性升高达到峰值,第16周仍维持较高水平。初免后1、2、3、4、8、12、16周,复合佐剂1、2、3次免疫组IgG水平均高于狂犬病疫苗相同次数免疫组,差异均有统计学意义(P均<0.05),且IgG水平持续时间较长。初免后2周,复合佐剂2、3次免疫组的IgG水平均高于狂犬病疫苗常规5次免疫组(3次免疫后);初免后3周,复合佐剂3次免疫组的IgG水平高于狂犬病疫苗常规5次免疫组(4次免疫后)(P均<0.05)。结论氢氧化锌和HS复合佐剂能增强狂犬病疫苗诱导的小鼠体液免疫应答。

关键词：氢氧化锌硫酸乙酰肝素佐剂狂犬病疫苗体液免疫

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BALB/c小鼠在HSV-1不同条件感染下的临床与病理及病原差异分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2017年第3期37卷 200-207页

作者：汤贝贝张小龙何玉凤段永忠王丽春徐兴丽胡雅洁周巨民李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 中国科学院昆明动物研究所中国科学院和云南省动物模型与人类疾病机理重点实验室昆明650223

目的探讨BALB/c小鼠模型在不同条件下感染HSV-1后的临床表现、病理现象及组织器官中的病毒分布特性，为HSV-1不同毒株感染模式小鼠的研究提供综合的参考指标体系。方法本研究利用HSV-1 17＋和McKrae毒株，经滴鼻和角膜途径感染不同周龄... 详细信息

目的探讨BALB/c小鼠模型在不同条件下感染HSV-1后的临床表现、病理现象及组织器官中的病毒分布特性，为HSV-1不同毒株感染模式小鼠的研究提供综合的参考指标体系。方法本研究利用HSV-1 17＋和McKrae毒株，经滴鼻和角膜途径感染不同周龄的BALB/c小鼠，建立急性感染模式；经皮下和足垫途径感染不同周龄的BALB/c小鼠，建立慢性感染模式。结果实验小鼠的临床、病理学、病原学指标的观察结果表明：虽然小鼠临床症状均表现为倒毛、弓背，但在不同条件下感染不同毒株的动物其体重和死亡率指标存在差异；定量PCR技术检测结果证实神经组织（脑、脊髓、三叉）内病毒载量的增殖趋势不同；病理学检查提示急性感染组仅脑组织中出现明显病理损伤，慢性感染组仅三叉神经中表现病理损伤。而慢性感染组动物的三叉神经组织，虽未检测到具有指标意义的潜伏相关转录本（latency associated transcript, LAT），但是其组织块与Vero细胞共培养却可导致细胞出现感染性病变。结论HSV-1不同毒株经不同攻毒途径感染小鼠后，小鼠在体重、死亡率，毒株在机体内的复制模式等方面存在明显差异。因此，基于不同感染模式的相关研究，其观察指标侧重点应该不同。

关键词：单纯疱疹病毒1型小鼠差异

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人乳头瘤病毒16型L1基因在毕赤酵母中表达的影响因素分析

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中国生物工程杂志 2017年第10期37卷 1-7页

作者：杨旭黄惟巍姚宇峰刘存宝孙文佳白红妹马雁冰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发国家地方联合工程研究中心昆明650118

目的:优化人乳头瘤病毒16型主要衣壳蛋白L1(human papillomavirus type 16 major capsid protein L1,HPV16L1)在毕赤酵母中的表达,并考察可能的影响因素。方法:四个不同序列特征的HPV16L1基因M16、Y16、P16、W16(其中,M16和Y16按酵母密... 详细信息

目的:优化人乳头瘤病毒16型主要衣壳蛋白L1(human papillomavirus type 16 major capsid protein L1,HPV16L1)在毕赤酵母中的表达,并考察可能的影响因素。方法:四个不同序列特征的HPV16L1基因M16、Y16、P16、W16(其中,M16和Y16按酵母密码子优化,P16为哺乳动物细胞密码子优化,而W16为野生型序列)分别克隆于毕赤酵母表达质粒p PinkTM-HC(高基因拷贝菌落筛选)和p PinkTM-LC(低基因拷贝菌落筛选),并转化不同蛋白酶缺陷的宿主菌。甲醇诱导24小时后,取菌体样品经Western blot分析L1蛋白的表达。结果:M16显示了最高的表达水平,其次是Y16与P16,而W16几乎无表达。基因序列密码子应用特征分析显示,4个基因的密码子适应指数从高到低依次为Y16、M16、W16和P16。通过自由能和GC含量分析4个序列的mRNA二级结构,Y16为-409.40 kcal/mol和43.85%;M16为-451.50 kcal/mol和47.83%;P 16为-606.50kcal/mol and 64.10%;W16为-384.70 kcal/mol and 38.01%。蛋白酶缺陷菌株L1表达高于野生型菌株,质粒p PinkTM-HC与p PinkTM-LC介导的表达无明显区别。结论:密码子优化操作显著改善了HPV16L1在毕赤酵母中的表达,但表达水平与密码子利用优劣并不完全对应,提示密码子优化仅是部分原因,而mRNA结构与稳定性变化值得探讨。蛋白酶缺陷菌株提高了HPV16L1蛋白的稳定性,显著影响了表达水平。研究证明基因剂量对HPV16L1的表达未产生明显影响。

关键词：表达重组人乳头瘤病毒16主要衣壳蛋白L1 毕赤酵母

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