检索结果-内蒙古大学图书馆

柯萨奇病毒B组2型(CVB2)病毒蛋白转染上皮细胞后诱导的免疫应答信号分子的特征分析

中华微生物学和免疫学杂志 2019年第5期39卷 321-326页

作者：牟唐维吴化叶柳蕾王建斌张莹李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的分析柯萨奇病毒B组2型(coxsackievirus B2,CVB2)病毒蛋白转染上皮细胞后诱导的免疫应答信号分子特征。方法构建CVB2结构蛋白重组真核表达质粒转染16HBE细胞,收集转染后的16HBE细胞培养上清和裂解物。利用RT-Q-PCR技术检测转染后的16... 详细信息

目的分析柯萨奇病毒B组2型(coxsackievirus B2,CVB2)病毒蛋白转染上皮细胞后诱导的免疫应答信号分子特征。方法构建CVB2结构蛋白重组真核表达质粒转染16HBE细胞,收集转染后的16HBE细胞培养上清和裂解物。利用RT-Q-PCR技术检测转染后的16HBE细胞中与固有免疫应答相关的信号分子的mRNA表达水平。利用ELISPOT检测转染后的16HBE细胞上清和裂解物与T细胞共培养后该T细胞的增殖效应。结果CVB2结构蛋白VP1~VP4转染16HBE细胞后与固有免疫相关的信号分子如TAK、NIK、IKKα、IFN-β等基因表达量均发生了不同程度的上调;CVB2 VP1~VP4转染后的16HBE细胞上清和裂解物与T细胞共培养发现,均能刺激T细胞增殖。结论CVB2结构蛋白VP1~VP4可以不同程度地激活与固有免疫相关信号分子的表达,并且对适应性免疫的激活具有促进作用。

关键词：柯萨奇病毒B组2型结构蛋白免疫应答

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CXCL5对DSS诱导的小鼠炎症性肠病的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2018年第3期38卷 187-192页

作者：宋杰胡雅洁李嘉祺胡云光郭磊梅俊杰刘龙丁中国医学科学院&北京协和医学院、医学生物学研究所、云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的本研究旨在探究CXC趋化因子配体5[chemokine （C-X-C motif） ligand 5, CXCL5]在葡聚糖硫酸钠（dextran sulfate sodium，DSS）诱导的炎症性肠病（inflammatory bowel disease, IBD）中的作用及其机制。方法使用3%DSS自由饮用构建小鼠IBD模型，分析CXCL5敲除对小鼠体重、临床症状、存活率、病理损伤和炎性因子分泌的影响。结果研究结果发现，DSS诱导的急性肠炎小鼠血清中的CXCL5明显高于正常对照组，敲除CXCL5后，DSS对小鼠的影响为体重减轻、存活期延长、病理损伤减轻、炎症减弱、炎症因子释放减少。结论以上结果说明，CXCL5可能在DSS诱导的小鼠急性肠炎中促进了炎症因子的释放从而加剧了病理损伤，这一研究结果初步提示CXCL5可能是肠炎治疗的一个重要候选靶标。

关键词：炎症性肠病 CXC趋化因子配体5 炎症因子

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EV68中国分离株VP1基因高变区的特征分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2016年第5期36卷 333-339页

作者：王艳翠李嘉琪王晶晶郭磊宋杰宁若彤郑惠文王辉刘龙丁中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的了解肠道病毒68（EV68）中国流行株VP1基因序列的特征。方法通过Clustal W法与多个国家EV68的VP1核酸序列进行比对，邻接法（Neighbor-Joining）构建系统进化树，与标准株Fermon相比，对该段区域编码的氨基酸序列进行分析。结果截至... 详细信息

目的了解肠道病毒68（EV68）中国流行株VP1基因序列的特征。方法通过Clustal W法与多个国家EV68的VP1核酸序列进行比对，邻接法（Neighbor-Joining）构建系统进化树，与标准株Fermon相比，对该段区域编码的氨基酸序列进行分析。结果截至2015年底，中国已经分离出80株EV68。在进化上，突变主要发生在BC和DE环中，中国分离株VP1突变位置在83、89、91、94、96、97、98、102、109、139、141、142、143、144、147。并且大多数分离株VP1编码的氨基酸序列在140位置发生缺失。由进化树可以得出位于B、C进化分支的中国分离株分别为53株和21株。结论与标准株Fermon相比，发现在BC-loop和DE-loop发生了很大变化，然而BC-loop和DE-loop这两个区域与病毒的抗原性和毒力有关。中国EV68分离株位于B和C分支上。

关键词： EV68病毒 VP1基因 BC-loop DE—loop 系统进化树

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CVA16感染对m^6A甲基化相关蛋白表达和定位的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2020年第7期40卷 530-537页

作者：李卫宇蒋曦郑雪麟朱文兵刘卓航李慧张雪梅吴忠香宋杰董少忠中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的本研究旨在探究柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A 16,CVA16)感染后是否会影响N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)甲基化相关蛋白在人呼吸道上皮细胞(16HBE)、ICR乳鼠和SCARB2人源化小鼠中的表达,以及在细胞中的定位。方法病... 详细信息

目的本研究旨在探究柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A 16,CVA16)感染后是否会影响N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)甲基化相关蛋白在人呼吸道上皮细胞(16HBE)、ICR乳鼠和SCARB2人源化小鼠中的表达,以及在细胞中的定位。方法病毒分别以感染复数(MOI)=0.1感染16HBE和107 CCID50/ml感染小鼠,Western blot分析甲基转移酶、去甲基化酶和甲基化阅读蛋白的表达变化,免疫荧光观察这些蛋白质在细胞中的定位。结果研究结果发现,随着CVA16病毒感染时间的增加,m6A甲基化相关蛋白在细胞中表达水平逐渐下调,在ICR乳鼠和SCARB2小鼠中无明显变化;病毒感染后,m6A甲基化相关蛋白在细胞核与细胞质中重新分布,甚至发生降解。结论CVA16在宿主细胞中复制时可以改变m6A甲基化修饰相关蛋白的表达和细胞定位。本研究结果提示m6A修饰可能是肠道病毒治疗的潜在新靶点。

关键词：柯萨奇病毒A组16型(CVA16) m^6A甲基化相关蛋白

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联合使用米索前列醇和米非司酮以获取恒河猴胎猴样品

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基础医学与临床 2009年第9期29卷 908-910页

作者：赵理罕园园唐东红中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118

目的建立获取恒河猴早、中、晚期不同胎龄胎猴样品的新方法。方法通过B超确定恒河猴孕猴怀孕天数后,皮下注射米非司酮,在其阴道后穹窿放置米索前列醇以促使孕猴终止妊娠,获取胎猴样品。通过b ishop评分、孕猴终止妊娠率和胎猴脑组织总RN... 详细信息

目的建立获取恒河猴早、中、晚期不同胎龄胎猴样品的新方法。方法通过B超确定恒河猴孕猴怀孕天数后,皮下注射米非司酮,在其阴道后穹窿放置米索前列醇以促使孕猴终止妊娠,获取胎猴样品。通过b ishop评分、孕猴终止妊娠率和胎猴脑组织总RNA提取质量评估该新方法效果。结果实验组孕猴的宫颈评分和胎猴3日娩出率均高于对照组(P<0.05),从胎猴脑组织中提取的总RNA质量良好。结论联合使用米索前列醇和米非司酮是一种有效而安全的获取恒河猴胎猴样品的新方法。

关键词：恒河猴米非司酮米索前列醇

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HSV-1间层蛋白VP22转录调控功能的分析

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中国科学（C辑） 2008年第9期38卷 787-793页

作者：余娴李卫中刘龙丁车艳春寸伟吴文娟何春艳邵聪文李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所病毒免疫室昆明650118 川北医学院药物研究所南充637007

HSV-1间层蛋白是一类重要的功能蛋白,在病毒复制的多个环节中具有重要意义.为了解主要间层蛋白VP22在病毒复制过程中的生物学特性,本实验利用氯霉素乙酰转移酶系统,分析了VP22对病毒启动子的转录调控功能,结果表明VP22对HSV-1α4,TK和g... 详细信息

HSV-1间层蛋白是一类重要的功能蛋白,在病毒复制的多个环节中具有重要意义.为了解主要间层蛋白VP22在病毒复制过程中的生物学特性,本实验利用氯霉素乙酰转移酶系统,分析了VP22对病毒启动子的转录调控功能,结果表明VP22对HSV-1α4,TK和gC基因启动子明显具有剂量效应关系的转录抑制作用;VP22也能抑制病毒不同转录调控因子(VP16和ICP0)对启动子的转录激活作用,尤其明显抑制ICP0对TK和gC基因启动子的转录激活作用;VP22能明显抑制组蛋白乙酰转移酶PCAF对ICP0转录激活的促进作用,此抑制作用较VP22抑制ICP0的转录激活作用更为显著.VP22对其他病毒启动子的转录抑制效应,在内对照实验β-gal活性分析中也得到了证明.

关键词： HSV-1 间层蛋白 VP22转录调控

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MiR-125b-1-3p在轮状病毒复制中的作用研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2021年第6期41卷 433-439页

作者：纳璐耿盼盼周艳姚石宝郭梅李鸿钧中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所分子生物室昆明650031 军事医学研究院辐射医学研究所实验血液学与生物化学研究室北京100850

目的研究miR-125b-1-3p在轮状病毒(rotavirus)复制过程中的作用和调控机制。方法将MA104细胞中的miR-125b-1-3p分别上调和下调后感染轮状病毒,通过RT-PCR分析miR-125b-1-3p的表达情况和轮状病毒拷贝数;免疫荧光分析miR-125b-1-3p对轮状... 详细信息

目的研究miR-125b-1-3p在轮状病毒(rotavirus)复制过程中的作用和调控机制。方法将MA104细胞中的miR-125b-1-3p分别上调和下调后感染轮状病毒,通过RT-PCR分析miR-125b-1-3p的表达情况和轮状病毒拷贝数;免疫荧光分析miR-125b-1-3p对轮状病毒蛋白表达情况的影响;Western blot分析miR-125b-1-3p参与调控的相关蛋白表达情况。结果轮状病毒感染细胞后,miR-125b-1-3p的表达水平明显上调,上调miR-125b-1-3p后,轮状病毒的VP7、NSP3基因拷贝数下降,下调miR-125b-1-3p后,轮状病毒的VP7、NSP3基因拷贝数明显升高;上调miR-125b-1-3p的表达水平后轮状病毒蛋白荧光数下降,下调miR-125b-1-3p后,病毒蛋白荧光数增加;轮状病毒感染细胞16 h后PI3K/Akt通路活性受到抑制,上调miR-125b-1-3p能够抑制PI3K/Akt通路的活化。结论miR-125b-1-3p通过调控PI3K/Akt通路抑制轮状病毒的复制。研究结果为探讨miR-125b-1-3p和PI3K/Akt通路之间的具体调控机制研究提供了实验基础,为轮状病毒抗感染治疗提供了靶点。

关键词：轮状病毒 miRNA PI3K/Akt 病毒复制抗病毒反应

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稳定表达α-Synuclein 4种选择性剪接异构体的PC12细胞对神经毒性剂MPP^+的敏感性研究

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中国药理学通报 2013年第6期29卷 814-817页

作者：马开利宋连昆苑玉和张莹陈乃宏中国医学科学院北京协和医学院药物研究所教育部生物活性物质与资源利用重点实验室药理学研究室北京100050 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118

目的研究稳定表达α-synuclein 4种选择性剪接体的PC12细胞对神经毒性剂MPP+的敏感性。方法 PCR获得α-synuclein的4个选择性剪切体,克隆入pcDNA3.1载体,转染PC12细胞,经G418筛选获得稳定表达这4个剪切体的PC12细胞株,采用细胞毒的方法... 详细信息

目的研究稳定表达α-synuclein 4种选择性剪接体的PC12细胞对神经毒性剂MPP+的敏感性。方法 PCR获得α-synuclein的4个选择性剪切体,克隆入pcDNA3.1载体,转染PC12细胞,经G418筛选获得稳定表达这4个剪切体的PC12细胞株,采用细胞毒的方法检测这4个稳定细胞株对神经毒性剂MPP+的敏感性。结果同全长相比,去除外显子5的选择性剪切体α-synuclein114和α-synuclein98对神经毒性剂MPP+的敏感性升高,表现为细胞活力的降低。结论去除外显子5的选择性剪切体α-synuclein114和α-synu-clein98对神经毒性剂MPP+的敏感性明显升高。抑制外显子5的选择性剪切,从而抑制选择性剪切异构体α-synucle-in114和α-synuclein98的产生可能是阻止神经元退行性丢失的一种策略。

关键词： α-synuclein 异构体 MPP+ PC12细胞敏感性帕金森病

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不稳定血红蛋白HbRush的血液学表型和基因型分析

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中华医学遗传学杂志 2017年第1期34卷 15-20页

作者：葛世军杨必清易薇黄铠刘红仙黄小琴褚嘉秸杨昭庆中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所医学遗传学研究室昆明650118 德宏州人民医院检验科云南芒市678400

目的分析不稳定异常血红蛋白HbRush及其合并地中海贫血病例的血液学表型和基因型特征。方法对3例不明病因的贫血病例进行血液学常规检测和血红蛋白电泳，并检测α和β珠蛋白基因、^Gγ启动子区-158XmnI多态性位点和7个β珠蛋白基因簇中... 详细信息

目的分析不稳定异常血红蛋白HbRush及其合并地中海贫血病例的血液学表型和基因型特征。方法对3例不明病因的贫血病例进行血液学常规检测和血红蛋白电泳，并检测α和β珠蛋白基因、^Gγ启动子区-158XmnI多态性位点和7个β珠蛋白基因簇中限制性酶切多态位点的单倍型。结果3例病例均具有小细胞低色素贫血表型，血红蛋白电泳HbF区域有定量值显著增高的异常条带（30．5％～59．2％），携带有不稳定血红蛋白Hb Rush突变（HBBCD101GAG〉CAG，Glu〉Gln），其中2例还携带有-α^3.7，CD17和HbE地中海贫血突变；HbRush突变有不同的β珠蛋白基因簇单倍型；未发现F区异常血红蛋白电泳条带与^Gγ启动子区多态和大片段β基因簇缺失的关联。结论本研究结果证实了中国不同人群中存在HbRush突变，是世界范围内第3个病例报告。HbRush异常血红蛋白可导致HbF区域电泳条带的定量值显著增高。单纯HbRush突变杂合子可产生小细胞低色素贫血及地中海贫血样临床症状，需进行产前诊断；对血红蛋白电泳HbF区域条带定量值明显增高的贫血病例及地中海贫血进行诊治时需考虑对HbRush的基因诊断和鉴别诊断。

关键词：异常血红蛋白 Hb Rush 地中海贫血基因型和表型 Hb F

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易发生聚集的重组HBcAg病毒样颗粒的纯化

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中国生物工程杂志 2020年第5期40卷 40-47页

作者：谢航航白红妹叶超陈永俊袁明翠马雁冰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的:探索针对易发生聚集的重组HBcAg病毒样颗粒(VLP)的有效纯化方案。方法:培养的大肠杆菌经IPTG诱导重组HBcAg蛋白的表达,菌体超声破碎后的离心沉淀用含有不同浓度尿素的PBS缓冲液重悬溶解,经密度梯度离心并结合电镜观察对VLPs行为进... 详细信息

目的:探索针对易发生聚集的重组HBcAg病毒样颗粒(VLP)的有效纯化方案。方法:培养的大肠杆菌经IPTG诱导重组HBcAg蛋白的表达,菌体超声破碎后的离心沉淀用含有不同浓度尿素的PBS缓冲液重悬溶解,经密度梯度离心并结合电镜观察对VLPs行为进行分析鉴定。以Sepharose 4 FF凝胶过滤层析在选定的尿素条件下纯化沉淀溶解液,纯化获得的目的蛋白进一步在含30%山梨醇的PBS中脱盐去除尿素。整个过程以SDS-PAGE及电镜进行各步骤样品中目的蛋白的分析。结果:含有1mol/L尿素的PBS缓冲溶液重悬超声沉淀,可有效溶解聚集的VLPs,在蔗糖密度梯度离心中显示典型HBcAg VLPs的行为,且电镜观察颗粒形态结构完整。经1mol/L尿素下凝胶过滤,VLPs进一步获得纯化。在脱尿素过程中流动相采用含30%山梨醇的PBS,有效避免了VLPs在尿素去除后重新聚集。结论:尿素与山梨醇的联合应用,为具有聚集现象的VLPs纯化制备提供了一种有效解决方案。

关键词：病毒样颗粒纯化聚集尿素山梨醇

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