检索结果-内蒙古大学图书馆

病毒学报 2020年第3期36卷 385-393页

作者：郑惠文候东佩李嘉祺黄星杨谨溪刘龙丁中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 中国医学科学院病毒疫苗研发系统创新研究重点实验室昆明650118

建立基于重组荧光病毒CV-A16-EGFP的流式快速测定CV-A16感染或免疫动物血清中和抗体效价的方法。在Vero细胞上对不同感染时间点,不同病毒接种量情况下的CV-A16-EGFP病毒的增殖特性进行分析;随后,利用流式检测不同病毒滴度下的EGFP阳性... 详细信息

建立基于重组荧光病毒CV-A16-EGFP的流式快速测定CV-A16感染或免疫动物血清中和抗体效价的方法。在Vero细胞上对不同感染时间点,不同病毒接种量情况下的CV-A16-EGFP病毒的增殖特性进行分析;随后,利用流式检测不同病毒滴度下的EGFP阳性细胞数量、EGFP阳性细胞百分比(%)、及EGFP阳性细胞的平均荧光密度值,并换算出不同病毒滴度与三者之间分别的数值对应关系。最后,以平均荧光密度值作为替代判断病毒病变效应的指标,并利用流式荧光检测及传统微量中和方法对CV-A16感染恒河猴血清及CV-A16免疫的羊血清中和抗体效价进行检测,并对两种方法的检测结果进行比较。在感染后24h,不同的病毒滴度与对应的平均荧光密度值呈良好的线性关系。利用流式荧光检测的CV-A16中和抗体效价与传统的微量中和实验相比,两者检测结果具有较好的线性相关性,线性回归系数为R^2=0.8026;传统的微量中和实验检测的平均中和抗体效价略高于流式荧光检测的中和抗体效价,但是差异无统计学意义(P>0.05)。利用流式荧光检测可以迅速检测CV-A16中和抗体效价,并且实验结果与传统的微量中和实验具有较好的一致性。相比与传统方法,该方法更简单、快速、灵敏,为CV-A16抗血清的中和抗体检测提供参考。

关键词：柯萨奇病毒A组16型流式荧光检测病毒滴定微量中和实验中和抗体检测

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2009年云南省2株肠道病毒71型分离株全基因组序列遗传特性分析

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病毒学报 2012年第2期28卷 108-113页

作者：李华邵聪文潘玥柯华昕马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

对2009年云南省肠道病毒71型分离株KMM09和KM186-09进行全基因组序列测序,并与我国及其它国家流行的EV71基因型进行比较和进化分析。KMM09和KM186-09基因组长为7409bp,编码2193个氨基酸,VP1系统进化分析显示2009年云南分离株属于C4基因... 详细信息

对2009年云南省肠道病毒71型分离株KMM09和KM186-09进行全基因组序列测序,并与我国及其它国家流行的EV71基因型进行比较和进化分析。KMM09和KM186-09基因组长为7409bp,编码2193个氨基酸,VP1系统进化分析显示2009年云南分离株属于C4基因型的C4a亚型。在结构区,与其它基因型相比较,C基因型之间的核苷酸和氨基酸的同源性高于其它基因型;而在非结构区,C4与B基因型和CA16原型株G10同源性高于其它C基因亚型。通过RDP3重组软件和blast比对分析,发现EV71C4基因型与B3基因型,与CA16原型株G10的基因组在非结构区存在重组。EV71全基因组序列的比较和分析,对了解引起我国手足口病暴发或流行C4基因亚型EV71毒株的遗传特性具有重要意义。

关键词：肠道病毒71型全基因组遗传特性

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云南省人乳头状瘤病毒16型E6/E7基因的变异分析

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病毒学报 2012年第6期28卷 645-651页

作者：杨丽娟岳耀斐陈俊英潘玥赵玉娇马绍辉孙强明中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

研究人乳头状瘤病毒16型E6和E7基因在云南省的变异情况。采集获得2 000例妇科门诊样品,提取DNA,以MY09/MY11为外引物,GP5+/GP6+为内引物,采用nest-PCR法对样品HPV-DNA高变区L1区的相应基因进行扩增、测序和分型,筛选得到20例HPV-16型病... 详细信息

研究人乳头状瘤病毒16型E6和E7基因在云南省的变异情况。采集获得2 000例妇科门诊样品,提取DNA,以MY09/MY11为外引物,GP5+/GP6+为内引物,采用nest-PCR法对样品HPV-DNA高变区L1区的相应基因进行扩增、测序和分型,筛选得到20例HPV-16型病毒DNA,对其进行E6和E7基因特异性扩增,测序。结果显示20例HPV-16型E6基因中有10例在178位核苷酸发生碱基突变,突变频率为50%,E7基因中有10例在647位核苷酸发生碱基突变,突变频率为50%。进化树分析结果表明在云南省流行的HPV-16型中主要为亚洲变异型,没有发现非洲1型,非洲2型。

关键词：子宫颈癌 HPV-16 进化树分析基因变异 E6基因 E7基因

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柯萨奇B组1型云南分离株MSH／KM9／2009全基因组序列分析

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病毒学报 2013年第3期29卷 293-298页

作者：刘建生邵聪文潘玥朱艳菊邓新强廖宏玮刘雅灵马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

对2009年分离自云南省昆明市脑膜脑炎儿童的1株柯萨奇B组1型病毒MSH-KM9-09,进行了全基因组的序列测定,并对其分子变异和进化特点进行了分析。采用逆转录-聚合酶链反应(Reverse transcription-polymerasechain reaction,RT-PCR),分段扩... 详细信息

对2009年分离自云南省昆明市脑膜脑炎儿童的1株柯萨奇B组1型病毒MSH-KM9-09,进行了全基因组的序列测定,并对其分子变异和进化特点进行了分析。采用逆转录-聚合酶链反应(Reverse transcription-polymerasechain reaction,RT-PCR),分段扩增覆盖病毒全长序列的8个重叠片段(未包括多聚腺苷酸尾),并进行序列测定和分析。CVB1MSH-KM9-09病毒株基因组全长7 384个核苷酸(nt),5'端和为3'端分别为741nt和94nt的非编码区,5'和3'非编码区间为一个6 549nt长的开放阅读框,编码一个含2 183个氨基酸的多聚蛋白,编码区内未见核苷酸的插入或缺失。与GenBank库中现有CVB1全基因组序列M16560、pmMC、Tucson B1和CVB1/Nm相比对,整个基因组的核苷酸同源性分别为80.9%、81.6%、80.5%和80%,氨基酸同源性分别为95.6%、95.8%、96.2%和95.6%。首次完成中国CVB1病毒全基因组核苷酸序列的测定,经核苷酸序列同源性比对和进化树分析,证实MSH/KM9/2009株属于CVB1基因型。

关键词：柯萨奇病毒B组1型全基因组同源性序列分析

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柯萨奇病毒A16型灭活疫苗保护效果研究

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药物分析杂志 2016年第6期36卷 986-990页

作者：贾双双刘悦越杜加亮赵荣荣刘艳国泰孙茂盛中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 中国食品药品检定研究院北京100050

目的:研究柯萨奇病毒A 16型候选疫苗株(CA 16-KM)经灭活后免疫小鼠,对病毒攻击的保护效果。方法:用Vero细胞进行CA 16-KM株培养,病毒收获后经浓缩、蔗糖密度梯度离心进行纯化及β-丙内酯灭活,用酶联免疫吸附法(ELISA法)对灭活后的CA 16... 详细信息

目的:研究柯萨奇病毒A 16型候选疫苗株(CA 16-KM)经灭活后免疫小鼠,对病毒攻击的保护效果。方法:用Vero细胞进行CA 16-KM株培养,病毒收获后经浓缩、蔗糖密度梯度离心进行纯化及β-丙内酯灭活,用酶联免疫吸附法(ELISA法)对灭活后的CA 16-KM病毒液进行抗原含量的测定并在Vero细胞上盲传3代对灭活后CA 16-KM毒株的残余毒力进行检测。灭活后的病毒加入氢氧化铝佐剂(质量浓度为1 mg·mL^(-1)),经离心及PBS重悬,制成实验性灭活疫苗。分别于第0天和第14天经肌肉注射免疫8周龄ICR母鼠,对照组用等体积PBS代替。分娩后24 h内的新生乳鼠用100 LD_(50)的CA 16强毒株(CA16-CC)经颅内注射进行攻毒,攻毒后连续21 d观察其临床症状,研究该灭活疫苗对新生乳鼠的保护效果。结果:经β-丙内酯灭活后的CA 16-KM在Vero细胞上盲传3代均无细胞病变效应(CPE)出现,灭活后的CA 16-KM抗原含量为320 EU·mL^(-1)。经注射实验性疫苗的乳鼠攻毒后全部存活,表明CA 16-KM株制备的灭活疫苗诱导的免疫反应可对新生乳鼠产生100%的保护作用。结论:β-丙内酯对CA 16-KM毒株的灭活效果较好;CA 16-KM疫苗候选株灭活后具有良好的免疫原性,可以保护新生乳鼠抵抗CA 16病毒的攻击,也许是研制CA 16灭活疫苗的理想毒株。

关键词：柯萨奇病毒A16型(CA 16) 肠道病毒71型(EV 71) 灭活疫苗保护效果新生乳鼠手足口病 β-丙内酯氢氧化铝佐剂半数致死量(LD_(50))

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二株不同基因型树鼩呼肠孤病毒的分离和鉴定

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中国实验动物学报 2015年第4期23卷 365-370页

作者：刘建生陶玉芬李晓菲李超李晓飞孙晓梅代解杰刘红旗中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所感染和免疫实验室云南昆明650118 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南昆明650118

目的从腹泻树鼩的粪便样本中分离和鉴定病毒。方法树鼩腹泻粪便样本分别接种Vero、LLCMK2和KMB17细胞,经连续传代,观察记录细胞病变,并对培养上清进行透射电镜检查、病毒RNA-PAGE电泳分析、轮状病毒鉴别筛查、S1全长基因片段扩增和生物... 详细信息

目的从腹泻树鼩的粪便样本中分离和鉴定病毒。方法树鼩腹泻粪便样本分别接种Vero、LLCMK2和KMB17细胞,经连续传代,观察记录细胞病变,并对培养上清进行透射电镜检查、病毒RNA-PAGE电泳分析、轮状病毒鉴别筛查、S1全长基因片段扩增和生物信息学分析。结果树鼩腹泻粪便样品在KMB17、Vero和LLC-MK2细胞上经连续3代次传代后,均能产生细胞病变。经电镜检查、病毒RNA-PAGE电泳分析和轮状病毒鉴别筛查,推测其为呼肠孤病毒。病毒基因组全长S1基因扩增、序列测定和分析结果表明,KMB17培养上清中获得的病毒与I型原型株T1L同源性最高,核苷酸和氨基酸同源性分别为85%和90%,因此该病毒定义为呼肠孤病毒I型。而LLC-MK2和Vero细胞上清中的病毒S1基因与III型原型株T3D核苷酸和氨基酸同源性分别为85%和92%,因此为呼肠孤病毒III型。结论对今后树鼩和其他宿主呼肠孤病毒的分离鉴定有一定的指导意义。

关键词：哺乳动物呼肠孤病毒树鼩基因型 S1基因血清型

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肠道病毒71型灭活疫苗在婴猴保护性实验中的病理性炎症反应

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中华医学杂志 2011年第28期91卷 1977-1981页

作者：张雪梅赵红玲王晶晶廖芸纳锐雄王丽春刘龙丁高家红唐东红王从章李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的分析肠道病毒71型（EV71）灭活疫苗（人二倍体细胞）对动物的免疫是否能够导致由抗病毒免疫反应所引起的免疫病理损伤,以确定该实验性疫苗的安全性.方法利用恒河猴婴猴作为实验动物,未经免疫的对照组（n=4）和经EV71灭活疫苗免疫... 详细信息

目的分析肠道病毒71型（EV71）灭活疫苗（人二倍体细胞）对动物的免疫是否能够导致由抗病毒免疫反应所引起的免疫病理损伤,以确定该实验性疫苗的安全性.方法利用恒河猴婴猴作为实验动物,未经免疫的对照组（n=4）和经EV71灭活疫苗免疫的疫苗免疫组（n=4）同时接受EV71病毒攻击后,以临床观察、外周血和脑脊液的抗体和相关炎性因子监测、动物各组织器官的病理学检查分析为指标,判断动物在免疫反应过程中的病理性炎症反应.结果疫苗免疫组婴猴的特异性中和抗体滴度达到1：32,无论病毒攻击与否,其外周血及脑脊液中的不同炎性因子均无明显变化.直接感染组在病毒攻击后,其外周血中嗜碱性粒细胞相比正常值有4～5倍的一过性上升;病毒攻击后第7天外周血中白细胞介素6（IL-6）和γ干扰素（IFN-γ）出现明显上升,直接感染组（平均数分别为18.5、12.7 pg/ml）均高于疫苗免疫组（10.2、7.6 pg/ml）.直接感染组脑脊液中IL-6达到了正常值的4～5倍,7 d时,直接感染组和疫苗免疫组分别为102.0 pg/ml和12.4 pg/ml.病理检查提示,疫苗免疫组所有动物中,中枢神经系统的各个部位及其他组织均未见明显病理改变.但在直接感染组中可见到明显的、由病毒感染所导致的病理损伤,包括神经细胞的退行性变、炎细胞浸润、血管袖套等典型的脑炎病理特征,动物支气管及肺组织也出现明显炎症反应.结论 EV71灭活疫苗可以在恒河猴婴猴体内诱导良好的免疫反应,保护恒河猴婴猴在感染EV71时,不发生严重的炎症反应和组织病理损伤.同时,EV71灭活疫苗具有良好的安全性.

关键词：肠道病毒感染灭活疫苗免疫反应炎症反应

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2009年云南省 Echo30分离株 KM／A363／09全基因组序列分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2014年第5期34卷 388-392页

作者：白巍陈俊英潘玥朱艳菊邵聪文刘建生马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的：对2009年从中国云南省1名脑炎患儿粪便标本中分离到的Echo30云南分离株KM／A363／09进行全基因组测序和分析，了解该株病毒的遗传特性。方法设计针对Echo30引物，提取病毒RNA、RT-PCR扩增和产物直接测序获得全基因组序列，利用Gen... 详细信息

目的：对2009年从中国云南省1名脑炎患儿粪便标本中分离到的Echo30云南分离株KM／A363／09进行全基因组测序和分析，了解该株病毒的遗传特性。方法设计针对Echo30引物，提取病毒RNA、RT-PCR扩增和产物直接测序获得全基因组序列，利用Geneious和Mega5．1软件进行核苷酸、氨基酸序列比对及其系统进化分析，应用RDP3和SimPlot3．5．1重组软件对序列进行重组分析。结果该分离株全基因组核苷酸序列长度为7425 bp，编码2194个氨基酸。其核苷酸和氨基酸序列与其原型株Bastianni的同源性分别为81．2％和95．8％；与其他Echo30型毒株的各区段核苷酸和氨基酸同源性分别为81．2％～88．6％和95．8％～97．8％；进化分析发现KM／A363／09毒株属于中国Echo30分支中的一支。而且发现KM／A363／09株基因序列在非结构区可能存在重组事件。结论云南分离株KM／A363／09属于中国Echo30分支中的一支，而中国分离株已经发生一定的进化。

关键词： Echo30 全基因序列序列分析 Echovirus 30

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2009年云南省柯萨奇病毒B5：分离株A210／KM／09全基因序列分析

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中华流行病学杂志 2014年第3期35卷 307-311页

作者：刘建生邵聪文赵卫中张云昆吉玛朱艳菊马忠飞马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

目的分析柯萨奇病毒B5（CVB5）云南分离株A210／K2~I／09全基因序列及其遗传特性。方法设计针对CVB5引物，提取病毒RNA，RT-PCR扩增和产物直接测序获得序列，利用Mega4．1、RDP3和SimPlot3．5．1软件分析全基因序列。结果CVB5A210／KM... 详细信息

目的分析柯萨奇病毒B5（CVB5）云南分离株A210／K2~I／09全基因序列及其遗传特性。方法设计针对CVB5引物，提取病毒RNA，RT-PCR扩增和产物直接测序获得序列，利用Mega4．1、RDP3和SimPlot3．5．1软件分析全基因序列。结果CVB5A210／KM／09全基因组核苷酸序列长度为7372bp，编码含2185个氨基酸残基的多聚蛋白；A210／KM／09全基因组核苷酸及所推导的氨基酸与CVB5／CCl0／10同源性最高，其同源性分别为92．5％和97.3％；而与其他CVB5毒株如17Y、19CSF、20CSF、1954／85／US、2000／CSF／KOR、03001N、CoxB5／Henard2010、CVB5／SD／09和Faulkner核苷酸和氨基酸同源性分别为80．1％～92．5％和95．0％～97.3％；A210／KM／09与其他CVB5毒株的各区段核苷酸和氨基酸同源性分别为75.3％～96.3％和85．3％～100．O％，其中与VP3、3D区段核苷酸的同源性最低。基于CVB5全长VPl基因序：列进行种系进化分析，可将CVB5分为A、B、C和D4个基因型，其中C基因型可再分为C1～C4基因亚型，D基因型可再分为D1～D4基因亚型。中国CVB5流行株主要聚集在C4基因亚型，国外流行株主要聚集在D1、C2亚型。结论A210／KM／09分离株为C4基因型。

关键词：柯萨奇B组5型病毒全基因组序列分析进化树图

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单纯疱疹病毒1型与阿尔茨海默病的研究进展

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中华微生物学和免疫学杂志 2021年第2期41卷 149-153页

作者：高杨李雪琦李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)感染常引起口唇疱疹,但近年来其引发的生殖器疱疹越来越多,且与阿尔茨海默病等神经系统疾病的发生密切相关。阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是一种慢性进行性的中枢神经系统变... 详细信息

单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)感染常引起口唇疱疹,但近年来其引发的生殖器疱疹越来越多,且与阿尔茨海默病等神经系统疾病的发生密切相关。阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是一种慢性进行性的中枢神经系统变性病,其发病机制尚未完全阐明,目前也缺乏能够明确改善该疾病的药物。关于AD的HSV-1致病假说由来已久,但一直没有确切的证据证明两者之间的联系,本文将对HSV-1导致AD发病机制的研究进展进行简单综述。

关键词：单纯疱疹病毒1型阿尔茨海默病 β淀粉样蛋白 tau蛋白

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