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中华微生物学和免疫学杂志 2021年第2期41卷 149-153页

作者：高杨李雪琦李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)感染常引起口唇疱疹,但近年来其引发的生殖器疱疹越来越多,且与阿尔茨海默病等神经系统疾病的发生密切相关。阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是一种慢性进行性的中枢神经系统变... 详细信息

单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)感染常引起口唇疱疹,但近年来其引发的生殖器疱疹越来越多,且与阿尔茨海默病等神经系统疾病的发生密切相关。阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是一种慢性进行性的中枢神经系统变性病,其发病机制尚未完全阐明,目前也缺乏能够明确改善该疾病的药物。关于AD的HSV-1致病假说由来已久,但一直没有确切的证据证明两者之间的联系,本文将对HSV-1导致AD发病机制的研究进展进行简单综述。

关键词：单纯疱疹病毒1型阿尔茨海默病 β淀粉样蛋白 tau蛋白

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2009年云南省柯萨奇病毒B5：分离株A210／KM／09全基因序列分析

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中华流行病学杂志 2014年第3期35卷 307-311页

作者：刘建生邵聪文赵卫中张云昆吉玛朱艳菊马忠飞马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

目的分析柯萨奇病毒B5（CVB5）云南分离株A210／K2~I／09全基因序列及其遗传特性。方法设计针对CVB5引物，提取病毒RNA，RT-PCR扩增和产物直接测序获得序列，利用Mega4．1、RDP3和SimPlot3．5．1软件分析全基因序列。结果CVB5A210／KM... 详细信息

目的分析柯萨奇病毒B5（CVB5）云南分离株A210／K2~I／09全基因序列及其遗传特性。方法设计针对CVB5引物，提取病毒RNA，RT-PCR扩增和产物直接测序获得序列，利用Mega4．1、RDP3和SimPlot3．5．1软件分析全基因序列。结果CVB5A210／KM／09全基因组核苷酸序列长度为7372bp，编码含2185个氨基酸残基的多聚蛋白；A210／KM／09全基因组核苷酸及所推导的氨基酸与CVB5／CCl0／10同源性最高，其同源性分别为92．5％和97.3％；而与其他CVB5毒株如17Y、19CSF、20CSF、1954／85／US、2000／CSF／KOR、03001N、CoxB5／Henard2010、CVB5／SD／09和Faulkner核苷酸和氨基酸同源性分别为80．1％～92．5％和95．0％～97.3％；A210／KM／09与其他CVB5毒株的各区段核苷酸和氨基酸同源性分别为75.3％～96.3％和85．3％～100．O％，其中与VP3、3D区段核苷酸的同源性最低。基于CVB5全长VPl基因序：列进行种系进化分析，可将CVB5分为A、B、C和D4个基因型，其中C基因型可再分为C1～C4基因亚型，D基因型可再分为D1～D4基因亚型。中国CVB5流行株主要聚集在C4基因亚型，国外流行株主要聚集在D1、C2亚型。结论A210／KM／09分离株为C4基因型。

关键词：柯萨奇B组5型病毒全基因组序列分析进化树图

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LPS/D-gal诱导小鼠急性肝炎模型及mTOR信号的变化

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中国实验动物学报 2015年第3期23卷 306-311页

作者：李晓菲陶玉芬刘建生李超梁新新叶尤松唐东红刘红旗中国医学科学院和北京协和医学院医学生物学研究所感染与免疫学实验室昆明650118 中国医学科学院医学生物学研究所小动物实验部昆明650118

目的探索LPS/D-gal诱导的急性肝炎中mTOR信号的变化。方法LPS/D-gal通过腹腔注射ICR雌性小鼠诱导急性肝炎模型。观察记录24h内的存活率或在注射后6h收集血清和肝脏组织样本,进行相关的分析。结果LPS/D-gal注射24h内引起小鼠急性死亡。... 详细信息

目的探索LPS/D-gal诱导的急性肝炎中mTOR信号的变化。方法LPS/D-gal通过腹腔注射ICR雌性小鼠诱导急性肝炎模型。观察记录24h内的存活率或在注射后6h收集血清和肝脏组织样本,进行相关的分析。结果LPS/D-gal注射24h内引起小鼠急性死亡。注射后6h,引起血清中转氨酶水平明显升高。肝脏组织炎性因子Tnfa和Il6表达水平上调。HE染色显示明显的炎症细胞浸润,研究结果表明LPS/D-gal可诱导ICR小鼠成为急性肝炎动物模型。此外,肝脏组织免疫印迹分析发现,mTOR和NF-κB信号通路被激活,凋亡相关蛋白Caspase-3的活性增加,凋亡特征性的DNA片段化也显著增强。然而mTOR信号的抑制剂雷帕霉素并不能控制LPS/D-gal引起的肝脏凋亡和提高存活率。结论mTOR信号在LPS/D-gal诱导的急性肝炎的致病机制中可能发挥多重作用。

关键词： LPS/D-gal 急性肝炎凋亡小鼠模型

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云南地区HLA-G基因3’非翻译区三个位点多态性与系统性红斑狼疮的关联研究

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中华医学遗传学杂志 2014年第2期31卷 228-232页

作者：陈婷婷林俊晋松马莎于亮黄铠黄小琴褚嘉祐杨昭庆中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所医学遗传室昆明650118 云南省第一人民医院风湿免疫科

目的探讨云南地区人群系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）与HLA-G基因3qE翻译区（3’untranslated region，3’UTR）3个位点（＋296014bp插入／缺失、＋3035C／T和＋3142C／G）多态性的关联性。方法应用DNA序列测序... 详细信息

目的探讨云南地区人群系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）与HLA-G基因3qE翻译区（3’untranslated region，3’UTR）3个位点（＋296014bp插入／缺失、＋3035C／T和＋3142C／G）多态性的关联性。方法应用DNA序列测序法对云南地区206例SLE患者及212名健康对照者的HLA-G基因上述3个多态性位点进行基因分型。结果HLA-G3’UTR区14bp插入／缺失和＋3142c／G等位基因和基因型频率在SLE组和对照组间的差异均无统计学意义（P〉0．05），＋3035T等位基因在SLE组的频率显著高于对照组，差异有统计学意义（P=0．002，OR=1．604，95％CI：1．186～2．169）。在显性遗传模式下，SLE组中（CT＋TT）的OR值为2．004（95％CI：1．345～2．987，P=0．0006）。结论HLA—G14bp插入／缺失和＋3142c／G多态性与云南地区人群SLE易感性无显著相关性，而＋3035C／T多态性与云南地区系统性红斑狼疮易感性相关，＋3035T等位基因可能是云南地区SLE发生的危险因素。

关键词： HLA—G基因系统性红斑狼疮关联分析多态性

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EMILIN1基因多态性与蒙古族原发性高血压相关性研究

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中华医学遗传学杂志 2011年第2期28卷 160-164页

作者：米冬青王步云孙浩黄小琴陈晓晨宗迪于亮史磊杨昭庆史荔褚嘉祐中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所遗传室昆明650118 内蒙古科技大学包头医学院生物化学与分子生物学教研室

目的探讨蒙古族人群中EMILIN1基因的3个单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）位点与原发性高血压的关系.方法在内蒙古自治区蒙古族人群中选取201例原发性高血压患者和202名血压正常者进行病例对照研究,应用聚合酶链... 详细信息

目的探讨蒙古族人群中EMILIN1基因的3个单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）位点与原发性高血压的关系.方法在内蒙古自治区蒙古族人群中选取201例原发性高血压患者和202名血压正常者进行病例对照研究,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态方法检测rs3754734、rs2011616和rs2304682这3个SNP位点的等位基因和基因型分布,并构建单倍型.结果在这3个SNP位点中,rs2304682位点的基因频率和基因型频率在高血压组和对照组间差异有统计学意义（P＜0.05）,并且在rs3754734和rs2304682这2个SNP位点构建的单倍型中,G-C和G-G单倍型在高血压组和对照组之间差异有统计学意义（P＜0.05）.在舒张压偏高组和舒张压正常组间,rs2304682位点的基因型和等位基因分布差异有统计学意义（P＜0.05）,而在收缩压偏高组和收缩压正常组间,各个SNP的基因型和等位基因分布差异无统计学意义（P＞0.05）.结论在蒙古族人群中,EMILIN1基因rs2304682多态性位点以及rs3754734和rs2304682这2个SNP位点构建的G-G单倍型可能与原发性高血压的易感相关联,rs2304682的多态性与蒙古族原发性高血压的舒张压的高低可能有关联.

关键词：蒙古族原发性高血压 EMILIN1基因遗传多态性

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以重配技术制备H1N1流感病毒Vero细胞适应株

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中国生物制品学杂志 2009年第6期22卷 529-532页

作者：张英伟李卫东马娜姚忠萍燕景恩张勇刘雅灵杨佳吴忠香廖国阳杨净思李长贵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所生物制品五室昆明650118 中国药品生物制品检定所疫苗三室北京100050

目的以重配技术制备H1N1流感病毒Vero细胞适应株,为以Vero细胞为基质生产流感疫苗奠定基础。方法以流感病毒Vero细胞适应株A/Yunnan/1/2005Va(H3N2)为母本株,与WHO推荐的2007～2008年度北半球流感疫苗生产用毒株A/Caledonia/20/99(H1N1... 详细信息

目的以重配技术制备H1N1流感病毒Vero细胞适应株,为以Vero细胞为基质生产流感疫苗奠定基础。方法以流感病毒Vero细胞适应株A/Yunnan/1/2005Va(H3N2)为母本株,与WHO推荐的2007～2008年度北半球流感疫苗生产用毒株A/Caledonia/20/99(H1N1)共同感染SPF鸡胚和Vero细胞,用抗A/Yunnan/1/2005Va(H3N2)抗体筛选重配病毒,在Vero细胞连续传12代,采用血凝抑制试验和RT-PCR鉴定病毒型别。将重配病毒经Vero细胞大量培养,重配前的病毒经鸡胚大量培养,分别经甲醛灭活,制备灭活疫苗,免疫ICR小鼠,检测其免疫原性。结果获得了1株Vero细胞适应的高产H1N1流感病毒株,连续传9代后,病毒血凝滴度维持在512,免疫原性与重配前的毒株相比,差异无统计学意义。结论通过流感病毒Vero细胞适应株与流行株的重配和抗体筛选,可以获得H1N1流感病毒Vero细胞适应株。

关键词：流感病毒 H1N1亚型遗传重配 Vero细胞

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二价轮状病毒灭活疫苗的免疫效果评价

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中华微生物学和免疫学杂志 2012年第9期32卷 820-824页

作者：张标佟琳易山张光明谢天宏李鸿钧孙茂盛李璐胡利陈东广东医学院组织学与胚胎学教研室湛江524023 广东医学院附属医院危重医学科中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所分子生物学研究室昆明650118

目的评价二价轮状病毒灭活疫苗免疫效果，探讨其开发的可行性。方法首先将G1型和G3型轮状病毒灭活疫苗等量混合制备二价疫苗，设立抗原量相等的G1型、G3型单价疫苗对照及PBS阴性对照，然后肌内注射免疫小鼠，通过ELISA检测血清和肠道中... 详细信息

目的评价二价轮状病毒灭活疫苗免疫效果，探讨其开发的可行性。方法首先将G1型和G3型轮状病毒灭活疫苗等量混合制备二价疫苗，设立抗原量相等的G1型、G3型单价疫苗对照及PBS阴性对照，然后肌内注射免疫小鼠，通过ELISA检测血清和肠道中病毒特异性IgG和IgA、微量中和实验检测血清中病毒特异性中和抗体，ELISPOT分析免疫小鼠脾细胞中病毒特异性IFN-γ分泌细胞和IL-4分泌细胞的数量，评价二价疫苗的免疫效果。结果与阴性对照组相比，二价疫苗显著诱发了GI和G3特异性血清IgG、IgA、中和抗体和肠道IgG、IgA。与单价疫苗组相比，二价疫苗诱发的G1特异性血清IgG和IgA、肠道IgG和IgA及血清中和抗体与G1单价疫苗组诱发的相应抗体间差异无统计学意义；但二价疫苗组诱发的G3特异性血清IgG（t=2．691，P〈0．05）及中和抗体（t=2．561，P〈0．05）却显著高于G3单价疫苗组诱发的相应抗体水平，其余G3特异性抗体水平两者无差异。同时，与阴性对照组相比，二价疫苗免疫小鼠脾细胞中IFN-γ和IL4分泌细胞的数量均显著增加。与单价疫苗组相比，G1刺激产生的IFN-γ和IL-4分泌细胞的数量，二价疫苗组与G1单价疫苗组无显著差异；但在二价疫苗组，G3刺激产生的IL-4分泌细胞的数量显著高于G3单价疫苗组（t=2．327，P〈0．05），而IFN-γ分泌细胞的数量两组无显著性差异。结论二价疫苗可以有效的诱发免疫应答，疫苗不同成分诱发的免疫应答未发生干扰抑制，这些结果为临床二价轮状病毒灭活疫苗的开发提供了实验依据。

关键词：轮状病毒灭活疫苗联合疫苗免疫效果

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嗜血杆菌属CODEHOP PCR检测方法的建立及在树鼩检测中的应用

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中国人兽共患病学报 2015年第11期31卷 994-1000页

作者：邢进冯育芳岳秉飞贺争鸣孙晓梅代解杰中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所北京100050 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118

目的建立树鼩中嗜血杆菌的CODEHOP PCR快速检测方法,为树鼩微生物质量控制提供参考。方法应用CODEHOP在线简并引物设计工具,比对NCBI中6株嗜血杆菌的外膜蛋白序列设计简并引物。通过4株嗜血杆菌标准菌株和24株它属菌株进行特异性和敏感... 详细信息

目的建立树鼩中嗜血杆菌的CODEHOP PCR快速检测方法,为树鼩微生物质量控制提供参考。方法应用CODEHOP在线简并引物设计工具,比对NCBI中6株嗜血杆菌的外膜蛋白序列设计简并引物。通过4株嗜血杆菌标准菌株和24株它属菌株进行特异性和敏感性评价,将建立CODEHOP PCR检测方法,应用于树鼩嗜血杆菌的检测。结果简并引物HF1/HR8和HF3/HR3扩增标准菌株副鸡嗜血杆菌(ATCC 29545)、溶血嗜血杆菌(ATCC 33390)、流感嗜血杆菌(ATCC33391)、副流感嗜血杆菌(ATCC 33392)的目的片段分别为506bp^535bp和344bp^390bp,经测序和NCBI Blast比对,结果准确。两对引物组合,能够有效的区分嗜血杆菌属菌株与它属菌株,检测限最低可达2.1pg/μL。在受试的野生树鼩呼吸道样本中嗜血杆菌阳性率为33.3%(20/60)。结论所建立的方法具有较好的特异性和敏感性,操作简便,能够用于动物样品的嗜血杆菌检测。

关键词：嗜血杆菌 CODEHOP PCR 树鼩简并引物检测

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云南地区汉族人群PSMB8、PSMB9及TAP2基因多态性与类风湿关节炎的关联研究

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中华医学遗传学杂志 2013年第2期30卷 222-226页

作者：于亮李芹林俊俞娟李倩易薇孙浩褚嘉祐杨昭庆中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所遗传室昆明650118 云南省第一人民医院风湿免疫科

目的研究云南汉族人群中PSMB8、PSMB9及TAP2基因多态性与类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）的相关性。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法对177例RA患者及288名健康对照PSMB8基因的rs2071543、rs55745125、rs13863540... 详细信息

目的研究云南汉族人群中PSMB8、PSMB9及TAP2基因多态性与类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）的相关性。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法对177例RA患者及288名健康对照PSMB8基因的rs2071543、rs55745125、rs138635403位点和PSMB9基因的rs17587多态性位点进行基因分型，应用多聚酶链反应扩增阻碍系统法对TAP2基因的rs2228396多态性位点进行基因分型。计算基因型及等位基因频率。采用EpiInfo7软件计算上述多态位点在RA组及正常对照组之间的比值比（OR值）。结果rs138635403及rs17587位点的等位基因及基因型频率在RA组和对照组间差异有统计学意义（P〈0．05），其中RA组rs17587的GG基因型频率（0．672）高于对照组（0．524）（OR=1．862，95％CI：1．261～2．749）。结论云南汉族人群PSMB9基因的rs17587位点多态性与RA存在关联。

关键词：类风湿关节炎遗传多态性 PSMB基因 TAP基因

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携带hFGF21基因慢病毒的制备及鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第12期29卷 1258-1261,1266页

作者：鲁帅尧严敏王晓囡和占龙周艳赵远禹文海李鸿钧中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的包装人成纤维细胞生长因子21(hFGF21)慢病毒颗粒、确定包装细胞人胚肾293T(HEK293T)细胞的形态特征以及对目的基因的转导能力。方法对慢病毒重组质粒Lv105-hFGF21进行测序鉴定,在HEK293T细胞中包装为慢病毒颗粒并浓缩,经反转录PCR(R... 详细信息

目的包装人成纤维细胞生长因子21(hFGF21)慢病毒颗粒、确定包装细胞人胚肾293T(HEK293T)细胞的形态特征以及对目的基因的转导能力。方法对慢病毒重组质粒Lv105-hFGF21进行测序鉴定,在HEK293T细胞中包装为慢病毒颗粒并浓缩,经反转录PCR(RT-PCR)和电镜检测鉴定后,利用实时定量PCR测定病毒滴度。然后感染Vero细胞,经RT-PCR检测hFGF21 mRNA的表达、免疫荧光检测hFGF21蛋白的表达。结果 RT-PCR结果表明重组慢病毒能转录hFGF21 mRNA,电镜检测结果可以看到典型的慢病毒颗粒形态特征,其直径在40～70 nm;重组病毒原液的滴度是3.68×108VG/mL、浓缩液的滴度是1.25×109VG/mL;重组慢病毒感染Vero细胞后经RT-PCR检测到细胞中有hFGF21mRNA表达,免疫荧光测到Vero细胞中有hFGF21蛋白表达。结论成功包装了hFGF21慢病毒颗粒并在靶细胞中获得表达。

关键词：人成纤维细胞生长因子-21 慢病毒颗粒细胞表达

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