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链霉菌CPCC 203702中抗结核分枝杆菌活性次级代谢产物的分离与鉴定

中国医药生物技术 2015年第4期10卷 351-355页

作者：张新明张德武庞旭徐建张丽蓉魏玉珍刘红宇余利岩中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所中国药学微生物菌种保藏管理中心北京100050

目的研究链霉菌CPCC 203702中的抗结核分枝杆菌活性次级代谢产物。方法发酵液离心后,上清液经乙酸乙酯萃取、正相硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和半制备HPLC等方法进行以抗耻垢分枝杆菌活性为导向的活性化合物分离纯化,通过质... 详细信息

目的研究链霉菌CPCC 203702中的抗结核分枝杆菌活性次级代谢产物。方法发酵液离心后,上清液经乙酸乙酯萃取、正相硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和半制备HPLC等方法进行以抗耻垢分枝杆菌活性为导向的活性化合物分离纯化,通过质谱和核磁共振波谱技术并结合文献数据进行化合物结构鉴定;分别采用平板纸片法和阿尔玛蓝法检测目的化合物的抗耻垢分枝杆菌以及抗结核分枝杆菌活性。结果从链霉菌CPCC 203702发酵液中分离到1个具有显著的抗结核分枝杆菌活性的伯尔尼霉素类化合物伯尔尼霉素C,其抗结核分枝杆菌MIC为2μg/ml;完成其核磁数据的完整归属。结论首次报道了伯尔尼霉素类抗生素具有显著的抗结核分枝杆菌活性,丰富了硫肽类抗生素的活性研究,也为抗结核药物的发现提供一个新的视角。

关键词：链霉菌属抗生素类,抗结核伯尔尼霉素C

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以蛋白激酶A为靶点的抗结核药物高通量筛选模型的建立和应用

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中国医药生物技术 2014年第6期9卷 417-425页

作者：罗睿徐建魏玉珍李海龙刘红宇苏静赵莉莉张玉琴余利岩中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所药用微生物菌种保藏管理中心北京100050

目的建立以蛋白激酶A为靶点的抗结核药物高通量筛选模型,应用该模型筛选具有特异性酶活抑制活性的微生物发酵液粗提物样品。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,扩增目的基因片段pkn A,构建表达载体p ET43.1a-pkn A,在大肠杆菌中... 详细信息

目的建立以蛋白激酶A为靶点的抗结核药物高通量筛选模型,应用该模型筛选具有特异性酶活抑制活性的微生物发酵液粗提物样品。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,扩增目的基因片段pkn A,构建表达载体p ET43.1a-pkn A,在大肠杆菌中克隆表达了重组MTB Pkn A蛋白;采用三步级联的反应方法 ,利用还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸到氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸这一反应最大吸光值波长的变化,建立和优化蛋白激酶A抑制剂高通量药物筛选模型。结果成功构建了表达载体p ET43.1a-pkn A;建立了稳定灵敏,可用于靶向结核分枝杆菌蛋白激酶A的抗结核药物高通量筛选模型;利用该模型对4000个微生物发酵液粗提物样品进行筛选,最终得到21个抑制蛋白激酶A活性的阳性样品,阳性率0.53%;以耻垢分枝杆菌和海分枝杆菌为检定菌,平板纸片法检测阳性样品的抗分枝杆菌活性,然后对阳性样品的细胞毒性和酶活抑制特异性进行评价后,最终得到8个阳性样品,其中I10AA-02916、I09AA-02717、I09AB-02729、I08AB-00801这4个阳性样品酶活抑制特异性、抗菌活性均较好,且细胞毒性较低。结论建立了高稳定性的以蛋白激酶A为靶点的抗结核药物高通量筛选模型,应用该模型所得到的发酵液阳性样品值得进一步研究。

关键词：环 AMP 依赖性蛋白激酶类药物评价,临床前抗结核药高通量筛选

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四合球菌属新种Tessaracoccus beijingensis ***.的初步鉴定

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第八届全国微生物资源学术暨国家微生物资源平台运行服务研讨会

作者：苏静刘红宇方晓梅闫冬余利岩国家微生物资源平台药学微生物资源子平台/中国药学微生物菌种保藏管理中心中国医学科学院/北京协和医学院医药生物技术研究所北京10050

CPCC 204149T(=DSM 102199T=NBRC 111972T)分离于2015年1月采集的北京空气样品,环境空气采样点的设置按照《环境空气质量监测规范(试行)》中的要求执行.按梅花形布点法将同一种培养基平板分放在5个点上,打开培养皿盖15分钟,利用自然沉...

CPCC 204149T(=DSM 102199T=NBRC 111972T)分离于2015年1月采集的北京空气样品,环境空气采样点的设置按照《环境空气质量监测规范(试行)》中的要求执行.按梅花形布点法将同一种培养基平板分放在5个点上,打开培养皿盖15分钟,利用自然沉降法收集微生物.所选用的分离培养基是胰蛋白大豆琼脂TSA(Oybean-Casein digest agar, 236950,Difco)加入抗真菌抗生素(制霉菌素40mg/L).CPCC 204149T为革兰氏阳性菌,在TSA培养基上生长时,菌落为圆形,光滑,表面稍凸,黄白色.菌株的生长温度范围4-42℃,最适生长温度为28℃;生长pH范围为7-11,最适生长pH为8;NaCl耐受范围为0％-5％,在APIZYM反应中酯酶(C4),类脂酯酶(C8),白氨酸芳胺酶,缬氨酸芳胺酶,胱氨酸芳胺酶,α-半乳糖甙酶,β-半乳糖甙酶,β-糖醛酸甙酶,α-葡萄糖甙酶,N-乙酰-葡萄糖胺酶呈阳性.细胞壁含有LL-DAP,主要的脂肪酸为anteiso-C15∶0,细胞膜主要呼吸醌为MK-9(H4). 16SrRNA序列比对结果表明,其与四合球菌属中的成员有很高的相似性,与Tessaracoccus flavescensSST-39T,Tessaracoccusoleiagri SL014B-20A1T,Tessaracoccus profundi CB 31T的相似性分别为97.22％,96.02％,95.87％.CPCC CPCC 204149T在基于丙酸杆菌科内相关菌株的16S rRNA基因序列构建的系统进化树中,与Tessaracoccus属成员共同形成了一个稳定独立的分支.综合基因型和表型特征,CPCC204149T代表了Tessaracoccus属中的一个新种.命名为Tessaracoccus beijingensis ***.,CPCC 204149T为典型株.

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微生物来源抗甲型流感病毒的活性筛选

微生物来源抗甲型流感病毒的活性筛选

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第八届全国微生物资源学术暨国家微生物资源平台运行服务研讨会

作者：赵建元庞旭方晓梅刘红宇苏静张玉琴张涛岑山余利岩国家微生物资源平台药学微生物资源子平台/中国药学微生物菌种保藏管理中心中国医学科学院/北京协和医学院医药生物技术研究所北京10050

目前，流感病毒的防治主要依赖于疫苗和药物.由于流感病毒自身的重组变异和抗原漂移能力，加上病毒耐药株的出现，使得目前的疫苗和药物很难应对流感病毒的爆发.因此，迫切需要寻找新的药物靶标或新型抗流感药物.微生物次级代谢产物具...

目前，流感病毒的防治主要依赖于疫苗和药物.由于流感病毒自身的重组变异和抗原漂移能力，加上病毒耐药株的出现，使得目前的疫苗和药物很难应对流感病毒的爆发.因此，迫切需要寻找新的药物靶标或新型抗流感药物.微生物次级代谢产物具有结构种类复杂多样、易于培养、可重复利用以及环境友好等特点，是寻找新型抗流感病毒先导化合物的重要资源.本研究利用国家微生物资源平台药学微生物资源子平台丰富的微生物资源，采用含有gluc报告基因的抗流感化合物高通量筛选模型，对1638份海洋和植物内生菌来源的发酵液粗提品进行了抗甲型流感病毒(A/WSN/33(H1N1)株)活性的筛选;同时，为了排除由于细胞毒性造成的假阳性结果，我们选用CCK8细胞毒性检测试剂盒对高活性菌株进行了细胞毒性评价.初筛得到了抗甲型流感病毒活性大于95％，细胞存活率大于40％的活性菌株43株，初筛阳性率为2.6％.通过对阳性菌株重新发酵，复筛得到了抗甲型流感病毒活性大于90％，细胞存活率大于40％的菌株16株，其中1株来源于海洋环境，其他15株分离自药用植物.本研究通过对微生物发酵液粗提品抗流感病毒活性以及细胞毒性的双重评价，获得了多株抗流感病毒活性较好且细胞毒性较小的菌株，为进一步挖掘微生物活性次级代谢产物，寻找新型抗流感病毒药物奠定了基础.

关键词：

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北京地区不同空气颗粒物相关细菌多样性的研究

北京地区不同空气颗粒物相关细菌多样性的研究

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第八届全国微生物资源学术暨国家微生物资源平台运行服务研讨会

作者：闫冬苏静张涛余利岩国家微生物资源平台药学微生物资源子平台/中国药学微生物菌种保藏管理中心中国医学科学院/北京协和医学院医药生物技术研究所北京10050

近年来，雾霾频发，多项研究表明雾霾空气中存在着大量微生物.本研究采用可培养与免培养相结合的方法，旨在揭示北京空气颗粒物相关细菌群落的多样性、组成及在空气颗粒物中的分布，探讨空气细菌群落变化及其与环境因子之间的关系，收...

近年来，雾霾频发，多项研究表明雾霾空气中存在着大量微生物.本研究采用可培养与免培养相结合的方法，旨在揭示北京空气颗粒物相关细菌群落的多样性、组成及在空气颗粒物中的分布，探讨空气细菌群落变化及其与环境因子之间的关系，收集并保藏空气微生物资源.本研究采集了北京地区秋冬季节的三种不同粒径的空气颗粒物样本(PM2.5、PM10、总悬浮颗粒)，通过可培养的方法分离菌株716株，归属于厚壁菌门(Firmicutes)、放线菌门(Actinobacteria)、变形菌门(Proteobacteria)、异常球菌-栖热菌门(Deinococcus-Thermus)及拟杆菌门(Bacteroidetes)，优势菌属为芽孢杆菌属(Bacillus)、链霉菌属(Streptomyces)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)、微杆菌属(Microbaeterium)、诺卡氏菌属(Noeardia).

关键词：

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蜘蛛抱蛋属(Aspidistra)植物内生细菌的多样性及其抗菌活性筛选

蜘蛛抱蛋属(Aspidistra)植物内生细菌的多样性及其抗菌活性筛选

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第八届全国微生物资源学术暨国家微生物资源平台运行服务研讨会

作者：方晓梅张玉琴魏玉珍郭宝林余利岩国家微生物资源平台药学微生物资源子平台/中国药学微生物菌种保藏管理中心中国医学科学院/北京协和医学院医药生物技术研究所北京100050 中国医学科学院&北京协和医学院药用植物研究所北京100193

[目的]研究蜘蛛抱蛋属(Aspidistra)内生细菌的多样性,探索药用植物内生细菌在药用活性产物方面的开发潜力,以期发现具有抗菌活性的次级代谢产物.[方法]对新鲜的蜘蛛抱蛋植物进行表面消毒,采用5种分离培养基分离内生细菌;根据菌落形态特... 详细信息

[目的]研究蜘蛛抱蛋属(Aspidistra)内生细菌的多样性,探索药用植物内生细菌在药用活性产物方面的开发潜力,以期发现具有抗菌活性的次级代谢产物.[方法]对新鲜的蜘蛛抱蛋植物进行表面消毒,采用5种分离培养基分离内生细菌;根据菌落形态特征选择代表性菌株测定16S rRNA基因序列,构建系统进化树分析内生细菌的多样性;使用耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis ATCC700044),水稻白叶枯菌(Xanthomonas oryzae PXO99A),白色念珠菌(Candida albicans ATCC 100231),肺炎雷伯菌(Klebsiella pneumoniae ATCC 700603)和耐药粪肠球菌HH22 (Enterococcus faecalis HH22)5种检定菌对分离菌株的液体发酵粗提品进行抑菌活性筛选.[结果]从植物组织中分离得到了322株内生细菌,根据形态初步排重,得到260株植物内生细菌;70个代表菌株分属于3门,10目,17科,23属;43株内生细菌的发酵粗提品具有抑菌活性,初筛阳性率为16.5％.[结论]该研究显示,蜘蛛抱蛋植物组织中存在着种类多样的内生细菌,它们是抗菌生物活性次级代谢产物的有效来源之一.

关键词：蜘蛛抱蛋内生菌多样性抑菌活性

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高脂饮食诱导的肥胖小鼠肝脏转录组分析

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中国医药生物技术 2023年第5期18卷 385-392页

作者：王玉全孙烨陶思名陈菁青邱业峰谢实勇刘宁中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所中国药学微生物菌种保藏管理中心北京100050 中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所编辑部北京100021 中国农业大学动物营养学国家重点实验室北京100293 军事医学研究院实验动物中心北京100071 北京市畜牧总站 100101

目的对长期高脂饮食饲喂构建的肥胖小鼠肝脏组织进行转录组分析,探讨肝脏功能对肥胖发生的作用机制。方法利用长期高脂饮食饲喂构建小鼠肥胖模型,通过形态观察,体重、体脂及血糖检测进行模型评价。建模成功后对小鼠脂肪组织和肝脏组织进... 详细信息

目的对长期高脂饮食饲喂构建的肥胖小鼠肝脏组织进行转录组分析,探讨肝脏功能对肥胖发生的作用机制。方法利用长期高脂饮食饲喂构建小鼠肥胖模型,通过形态观察,体重、体脂及血糖检测进行模型评价。建模成功后对小鼠脂肪组织和肝脏组织进行HE染色,观察组织病理改变,并通过转录组检测小鼠肝脏组织基因表达变化。结果高脂饮食饲喂小鼠8周后小鼠体重及血糖水平明显增加,脂肪组织脂质累积,脂肪细胞肥大,呈现肥胖表型。对肝脏组织进行转录组测序分析发现肥胖小鼠肝脏组织基因表达存在明显改变,基于P_adjust≤0.05和log2FC值筛选获得一些关键差异表达基因供后续深入研究。结论肝脏功能在肥胖及其相关疾病发生发展中发挥重要作用。

关键词：高脂饮食小鼠肥胖肝脏转录组学

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