检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医药生物技术 2025年第2期20卷 123-132页

作者：丁晓添司书毅杜郁洪斌中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所中国医学科学院药物合成生物学重点实验室/国家卫生健康委微生物药物生物技术重点实验室北京100050

目的建立靶向脂滴包被蛋白2(PLIN2)基因转录水平的高通量筛选模型,筛选获得PLIN2抑制剂,进而寻找具有潜在抗动脉粥样硬化活性的小分子先导化合物。方法构建含有人PLIN2基因启动子区的荧光素酶报告基因重组质粒pGL4-PLIN2p。将其转染HepG... 详细信息

目的建立靶向脂滴包被蛋白2(PLIN2)基因转录水平的高通量筛选模型,筛选获得PLIN2抑制剂,进而寻找具有潜在抗动脉粥样硬化活性的小分子先导化合物。方法构建含有人PLIN2基因启动子区的荧光素酶报告基因重组质粒pGL4-PLIN2p。将其转染HepG2细胞,通过G418抗性筛选获得稳定转染细胞株PLIN2p-Luc HepG2。对构建的稳转细胞筛选模型进行条件优化和评价,大规模筛选获得活性化合物,进一步利用qRT-PCR、Western blot和油红O实验检测活性化合物对泡沫化巨噬细胞中Plin2 mRNA、蛋白表达以及脂滴形成的影响。结果成功构建了含有人PLIN2启动子区的细胞模型PLIN2p-Luc HepG2,符合高通量筛选的要求。筛选8000余样次化合物,经初筛和复筛,共获得6个剂量-效应关系良好的活性化合物。其中,化合物MK8722可以剂量依赖地抑制泡沫化巨噬细胞中Plin2 mRNA和蛋白表达,并显著减少细胞内脂滴的形成。结论建立可用于抑制剂高通量筛选的PLIN2p-Luc HepG2细胞模型,筛选获得活性化合物MK8722,为基于脂滴的抗动脉粥样硬化药物发现提供了新的思路和研究手段。

关键词：动脉粥样硬化泡沫细胞脂滴脂滴包被蛋白2 转录水平抑制剂

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丙型肝炎病毒蛋白酶抑制剂高通量筛选模型的建立及应用

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中国医学科学院学报 2011年第1期33卷 98-101页

作者：李健蕊武燕彬司书毅陈鸿珊蒋建东彭宗根中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所病毒室北京100050

目的应用荧光共振能量转移(FRET)法检测丙型肝炎病毒(HCV)丝氨酸蛋白水解酶(NS3-4A)活性,建立HCV蛋白酶抑制剂筛选模型。方法将质粒pMAL-c2/NS3-4A转化到大肠杆菌K12TB1中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,亲和层析柱纯化得... 详细信息

目的应用荧光共振能量转移(FRET)法检测丙型肝炎病毒(HCV)丝氨酸蛋白水解酶(NS3-4A)活性,建立HCV蛋白酶抑制剂筛选模型。方法将质粒pMAL-c2/NS3-4A转化到大肠杆菌K12TB1中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,亲和层析柱纯化得到麦芽糖结合的NS3-4A融合蛋白,用FRET法测定蛋白水解酶活性,建立特异性蛋白酶抑制剂筛选模型,优化反应体系,评价模型的可靠性。结果建立了HCV蛋白酶抑制剂高通量筛选模型,经优化确定了酶及底物用量。在模型可靠性评价中,Z因子高达0.80,变异系数为1.91%。蛋白酶的Km值为4.74μmol/L,测得已知HCV蛋白酶抑制剂BILN 2061的Ki值为0.30 nmol/L。结论建立的HCV丝氨酸蛋白酶抑制剂FRET法筛选模型稳定可靠,适用于高通量筛选。

关键词：丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白水解酶高通量筛选模型荧光共振能量转移

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逆转录转座子LINE-1与肿瘤的发生和发展

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遗传 2016年第2期38卷 93-102页

作者：刘茜王瑾晖李晓宇岑山中国医学科学院&北京协和医学院医药生物技术研究所免疫生物学室北京100050 中国医学科学院&北京协和医学院北京协和医院妇产科北京100730

LINE-1是现今人体内存在的唯一具有自主转座活性的转座子,约有500 000个拷贝,占人类基因组总量的17%。LINE-1是通过转录和逆转录在内的转座过程产生新的DNA拷贝,并使新产生的DNA拷贝插入基因组的不同位置。LINE-1转座会影响基因组中其... 详细信息

LINE-1是现今人体内存在的唯一具有自主转座活性的转座子,约有500 000个拷贝,占人类基因组总量的17%。LINE-1是通过转录和逆转录在内的转座过程产生新的DNA拷贝,并使新产生的DNA拷贝插入基因组的不同位置。LINE-1转座会影响基因组中其他基因的表达或调控,因而会对基因组的稳定性产生影响,从而导致基因疾病或肿瘤的发生。本文总结了近年来国际上对LINE-1转座与肿瘤的发生和发展之间关系的研究进展,为肿瘤的治疗和机制研究提供一些线索。

关键词：转座逆转录转座子基因组 LINE-1 肿瘤基因稳定性逆转录酶

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Schlafen家族蛋白在肿瘤和病毒感染中的研究进展

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遗传 2020年第5期42卷 444-451页

作者：陈淑敏马铃岑山中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所免疫生物学室北京100050

Schlafen(SLFN)家族基因是在人类与小鼠中首先被发现的具有调控细胞生长及T细胞分化等诸多生物学功能的重要基因。该家族基因在小鼠、马和人等各个物种中广泛存在并具有较高的同源性。研究表明,SLFN蛋白在抑制细胞增殖、驱动减数分裂、... 详细信息

Schlafen(SLFN)家族基因是在人类与小鼠中首先被发现的具有调控细胞生长及T细胞分化等诸多生物学功能的重要基因。该家族基因在小鼠、马和人等各个物种中广泛存在并具有较高的同源性。研究表明,SLFN蛋白在抑制细胞增殖、驱动减数分裂、调控造血细胞、下调血小板数量及调节免疫应答等方面均起到重要的作用,同时还可抑制HIV-1和流感等病毒复制。此外,SLFN蛋白还被发现与肿瘤的治疗密切相关,可以作为预测肿瘤发展进程和化疗敏感性的分子标记。本文介绍了SLFN家族蛋白的分类、结构和主要特征、定位与功能,重点综述了其在肿瘤和病毒感染等相关领域的研究进展,以期为SLFN蛋白新功能的探究提供新思路,对蛋白发挥作用的可能机制给予提示,并为各相关领域的研究提供参考。

关键词： Schlafen 细胞生活周期肿瘤病毒

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HIV-1前体蛋白早成熟化激活剂筛选模型的建立及应用

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药学学报 2010年第2期45卷 247-252页

作者：张全李晓宇刘振龙贾平平魏晓露赵立勋蒋建东岑山中国医学科学院、北京协和医学院医药生物技术研究所免疫生物学室北京100050

HIV-1蛋白酶(PR)活性的严格调控对于病毒的生存至关重要。在病毒蛋白表达及病毒颗粒装配过程中,处于病毒前体蛋白Gag-Pol中的蛋白酶必须以无活性状态存在,避免前体蛋白Gag-Pol和Gag被提前酶切加工(前体蛋白早成熟化)。干扰HIV-1蛋白酶... 详细信息

HIV-1蛋白酶(PR)活性的严格调控对于病毒的生存至关重要。在病毒蛋白表达及病毒颗粒装配过程中,处于病毒前体蛋白Gag-Pol中的蛋白酶必须以无活性状态存在,避免前体蛋白Gag-Pol和Gag被提前酶切加工(前体蛋白早成熟化)。干扰HIV-1蛋白酶活性的调控机制,特异性的激活前体蛋白中的蛋白酶,诱导前体蛋白早成熟化,就可以直接抑制病毒的复制。根据这一设想,运用生物发光共振能量转移技术,建立细胞水平的HIV-1前体蛋白早成熟化激活剂筛选模型,并通过3000个化合物的试验性筛选对筛选模型进行评价。研究结果表明该筛选方法灵敏可靠,特异性高,重复性好(Z'因子为0.905)。

关键词：艾滋病抗HIV-1药物筛选模型蛋白酶前体蛋白早成熟化

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SLFN14抗LINE-1分子机制研究

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遗传 2020年第7期42卷 669-679页

作者：毛洋丁寄葳陈淑敏岑山李晓宇中国医学科学院&北京协和医学院医药生物技术研究所免疫生物学室北京100050

长散在核重复序列1 (long interspersed nuclear element-1, LINE-1)是迄今为止发现的人体基因组中唯一具有自主转座活性的逆转录转座子,其转座常引起宿主基因组不稳定,从而导致包括癌症在内的各种严重基因疾病的发生。宿主因子在宿主抗... 详细信息

长散在核重复序列1 (long interspersed nuclear element-1, LINE-1)是迄今为止发现的人体基因组中唯一具有自主转座活性的逆转录转座子,其转座常引起宿主基因组不稳定,从而导致包括癌症在内的各种严重基因疾病的发生。宿主因子在宿主抗LINE-1转座中发挥着重要作用。宿主因子SLFN14作为免疫系统重要组成员,具有抗病毒活性。本实验室研究发现SLFN14对于LINE-1的转座具有抑制作用。为进一步探究其具体的作用机制,通过对LINE-1复制周期中的转录、翻译、逆转录、整合环节进行实验分析,证实SLFN14能够通过影响LINE-1 mRNA转录过程及其半衰期,降低LINE-1 mRNA的水平,从而影响LINE-1蛋白及cDNA表达水平,最终导致LINE-1复制受阻。同时,通过对SLFN14活性中心的定位,本研究还发现SLFN14的抗LINE-1活性与其核糖核酸内切酶结构域和核糖体结合结构域密切相关。上述研究结果展示了SLFN14调控LINE-1复制的机制,进一步完善了宿主因子调控网络,为控制因LINE-1复制引起的基因组不稳定提供了新思路。

关键词：转座逆转录转座子 LINE-1 SLFN14 5’-UTR内部启动子区

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以病毒RNA核转运为靶点的抗HIV-1药物筛选模型的建立及应用

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药学学报 2010年第2期45卷 257-262页

作者：刘振龙李晓宇张全贾平平杨亮魏晓露蒋建东岑山中国医学科学院、北京协和医学院医药生物技术研究所免疫生物学室北京100050

目前,临床使用的抗AIDS一线药物主要是HIV逆转录酶抑制剂和蛋白质酶抑制剂。但是,由于这类药物价格昂贵、严重的副作用、毒性、耐药性等问题日益严重,发展新作用机制的抗HIV-1药物已成当务之急。因此,本课题以HIV-1病毒RNA核转运关键蛋... 详细信息

目前,临床使用的抗AIDS一线药物主要是HIV逆转录酶抑制剂和蛋白质酶抑制剂。但是,由于这类药物价格昂贵、严重的副作用、毒性、耐药性等问题日益严重,发展新作用机制的抗HIV-1药物已成当务之急。因此,本课题以HIV-1病毒RNA核转运关键蛋白Rev为靶点,建立了新型抗HIV药物筛选模型,以期寻找具有新作用机制的抗病毒药物。在筛选模型中,选择了由HIV-1病毒偏爱性密码子所编码的GFP(GFPHIV)作为报告基因,用于快速简便地分析样品对Rev依赖的RNA核转运的影响。选取抑制剂来普霉素B作为模型的阳性对照对本模型进行了初步评价,计算出Z'因子为0.8220。上述结果初步证明了该模型可用于新型抗HIV药物的筛选。对3000个化合物进行初筛,阳性率为9.3%,复筛阳性率为7.3%。通过抗病毒活性的测定实验以及对阳性化合物进行免疫印迹检测,最后发现IMB7C7这个化合物以病毒RNA核转运为靶点,是具有较好效果的特异性抑制剂。

关键词：艾滋病抗HIV-1药物筛选模型核转运 Rev

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LINE-1在肿瘤早期诊断和治疗中的研究与应用

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遗传 2021年第6期43卷 571-579页

作者：寇艳妮岑山李晓宇中国医学科学院&北京协和医学院医药生物技术研究所免疫生物学室北京100050

长散布元件-1(long interspersed elements-1,LINE-1)约占人类基因组的17%,是人类基因组中唯一具有自主转座能力的转座子。LINE-1可通过逆转录转座过程插入到新的基因位点上,从而会导致基因组的不稳定。因而机体对LINE-1的复制和转座有... 详细信息

长散布元件-1(long interspersed elements-1,LINE-1)约占人类基因组的17%,是人类基因组中唯一具有自主转座能力的转座子。LINE-1可通过逆转录转座过程插入到新的基因位点上,从而会导致基因组的不稳定。因而机体对LINE-1的复制和转座有着严格的限制,在正常体细胞中几乎检测不到LINE-1的表达。然而,在绝大多数的肿瘤组织或癌组织中LINE-1的表达却普遍存在,提示LINE-1的表达和转座与肿瘤的发生发展密切相关。LINE-1在肿瘤细胞中的差异表达可以作为肿瘤早期诊断的标志物,同时也可作为肿瘤治疗预后评价的重要指标。与此同时,LINE-1作为肿瘤治疗潜在靶点的可行性也在评估和验证中。本文介绍了在临床方面LINE-1作为肿瘤诊断、预后方面的应用,以及作为肿瘤治疗潜在靶点的研究进展,以期为临床上肿瘤的诊断和治疗提供一些参考。

关键词：长散布元件-1 肿瘤诊断治疗预后

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N^(6)-腺苷甲基化修饰及其对LINE-1的调控机制

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遗传 2024年第3期46卷 209-218页

作者：张傲岑山李晓宇中国医学科学院&北京协和医学院医药生物技术研究所免疫生物学室北京100050

长散布元件-1(long interspersed elements-1,LINE-1)是现今在人类基因组中唯一具有自主转座能力的转座子,其转座会引起细胞基因组结构和功能的改变,是导致多种严重疾病的重要因素。在转座过程中,LINE-1 mRNA是转座中间体的核心,宿主细... 详细信息

长散布元件-1(long interspersed elements-1,LINE-1)是现今在人类基因组中唯一具有自主转座能力的转座子,其转座会引起细胞基因组结构和功能的改变,是导致多种严重疾病的重要因素。在转座过程中,LINE-1 mRNA是转座中间体的核心,宿主细胞对其进行相关修饰直接影响转座。N^(6)-腺苷甲基化修饰(m^(6)A)是真核细胞RNA上最丰富且动态可逆的表观遗传修饰。目前发现m^(6)A修饰也存在于LINE-1 mRNA上,参与LINE-1整个生命周期的调控,影响其转座和基因组中LINE-1相邻基因的表达,进而影响基因组稳定性、细胞自我更新与分化潜能,在人类发育和疾病中具有重要作用。本文介绍了LINE-1 m^(6)A修饰的位置、功能以及相关机制,并总结了LINE-1的m^(6)A修饰对其转座调控的研究进展,以期为相关疾病发生发展的机制研究和治疗提供新的思路。

关键词： m^(6)A修饰逆转录转座子 LINE-1 基因组基因组稳定性

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HPLC-MS法鉴定制霉素和制霉菌素中成分及其潜在毒性预测

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现代药物与临床 2022年第6期37卷 1234-1238页

作者：常格牛霞李桂玲中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所制剂室北京100050

目的采用HPLC-MS法鉴定制霉素和制霉菌素中组分,并对其潜在毒性进行预测。方法采用HPLC-MS法测定,Sepax Bio-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:[0.38%乙酸铵溶液–乙腈(71∶29)]–[0.38%乙酸铵溶液–乙腈(40∶60)],梯度洗... 详细信息

目的采用HPLC-MS法鉴定制霉素和制霉菌素中组分,并对其潜在毒性进行预测。方法采用HPLC-MS法测定,Sepax Bio-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:[0.38%乙酸铵溶液–乙腈(71∶29)]–[0.38%乙酸铵溶液–乙腈(40∶60)],梯度洗脱;检测波长305 nm;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;进样量20μL。采用电喷雾正离子化(ESI),扫描范围m/z 100~1700,碎裂电压100 V,毛细管电压3500 V,雾化气压45 psi,干燥气流速10 psi,干燥气温度325℃;无二级质谱。结果制霉素中主要成分为制霉菌素A3、多真菌素B、制霉菌素A1和白诺菌素,制霉菌素A3、多真菌素B分子中具有L-洋地黄毒糖结构,白诺菌素分子中具有2,5-二酮哌嗪结构。制霉菌素以制霉菌素A为主要成分,制霉菌素A分子中无洋地黄毒糖或2,5-二酮哌嗪结构。结论制霉素、制霉菌素中主要成分和含量均不相同,制霉素组分中的L-洋地黄毒糖结构和2,5-二酮哌嗪结构可能分别导致心脏毒性和生殖毒性。

关键词：制霉素制霉菌素制霉菌素A3 制霉菌素A1 HPLC-MS 心脏毒性生殖毒性

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