检索结果-内蒙古大学图书馆

生物工程学报 2025年

作者：常悦樊帅郝天怡戴剑漉赫卫清中国医学科学院&北京协和医学院医药生物技术研究所卫健委微生物药物生物技术重点实验室

碳霉素（carbomycin）是在耐热链霉菌中产生的16元大环内酯类抗生素，包括碳霉素A（carbomycin A， CA）和碳霉素B（carbomycin B， CB）这2种成分，CB在C12-C13位环氧化后形成CA。在carbomycin生物合成基因簇中，cbm2813基因编码细胞色... 详细信息

碳霉素（carbomycin）是在耐热链霉菌中产生的16元大环内酯类抗生素，包括碳霉素A（carbomycin A， CA）和碳霉素B（carbomycin B， CB）这2种成分，CB在C12-C13位环氧化后形成CA。在carbomycin生物合成基因簇中，cbm2813基因编码细胞色素P450酶，推测其负责催化C12-C13位双键的环氧化。本研究旨在通过体内基因阻断和体外酶促反应鉴定carbomycin生物合成基因簇中的细胞色素P450酶Cbm2813的功能和酶学特征。利用CRISPR-Cas9基因编辑系统构建cbm2813基因敲除菌株Δcbm2813，在Δcbm2813的发酵产物中只发现CB，而无CA，在cbm2813回复菌株中又重新产生CA。在大肠杆菌中表达并纯化出Cbm2813，体外酶反应证实Cbm2813具有一定的底物特异性，能催化CB的C12-C13位进行环氧化生成CA，而不能催化交沙霉素、麦迪霉素、异戊酰螺旋霉素Ⅰ等其他结构类似的16元大环内酯类抗生素。酶学性质研究发现Cbm2813的最适pH为5.5，最适温度为36 ℃，米氏动力学研究表明Cbm2813的催化效率kcat/Km为4.39×103L/（mol·s）。通过Cbm2813与CB的分子对接结果推测C9位羰基能与酶反应中心的Fe形成配位键从而固定底物，使其具有较强的底物选择性。本研究鉴定的细胞色素P450酶Cbm2813对于丰富P450氧化酶库具有重要意义，且能为深入解析carbomycin的生物合成过程奠定基础。

关键词：大环内酯类抗生素碳霉素细胞色素P450酶环氧化

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吴茱萸次碱改善MAFLD小鼠脂肪肝和骨质疏松的作用

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药学学报 2025年第1期60卷 141-149页

作者：张煜皓李依宁姜新海王伟志李顺旺盛任雷丽娟张语嫣王晶锐魏欣玮许艳妮林燕唐琳司书毅中国医学科学院、北京协和医学院医药生物技术研究所卫健委微生物药物生物技术重点实验室天然药物活性物质与功能国家重点实验室国家新药(微生物)筛选实验室北京100050 首都医科大学附属北京地坛医院北京100015 首都医科大学附属北京中医医院北京市中医药研究所北京100010 盛实百草药业有限公司天津300301

代谢相关脂肪性肝病(metabolic-associated fatty liver disease,MAFLD)和骨质疏松症(osteoporosis,OP)是两种非常普遍的代谢性疾病。越来越多的实验证据支持MAFLD和OP之间有病理生理联系,MAFLD常伴随OP的发生。吴茱萸次碱(rutaecarpine,RUT)是中药吴茱萸的主要活性成分之一,课题组前期研究发现RUT具有降脂、抗炎和抗动脉粥样硬化作用,并且可以改善大鼠的OP。但是,RUT能否同时改善MAFLD小鼠的脂肪肝和OP症状,目前尚待研究。本研究利用高脂饲料饮食(high fat diet,HFD)4个月喂养的C57BL/6小鼠构建MAFLD模型。灌胃给予RUT低剂量(5 mg·kg^(-1))和高剂量(15 mg·kg^(-1))4周,实验结束时评价RUT在体内对肝脏脂肪变性和骨代谢的影响(本实验获得中国医学科学院医药生物技术研究所动物伦理委员会批准,批准号:IMB-20190124D303)。研究结果表明,RUT治疗显著减少了肝脏脂肪变性和脂质积累,同时显著减少骨丢失并促进了骨形成。综上,本研究表明RUT具有改善MAFLD小鼠的脂肪肝和OP的作用。

关键词：吴茱萸次碱非酒精性脂肪性肝病代谢相关脂肪性肝病骨质疏松症骨代谢

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基于基因组挖掘策略的链霉菌活性天然产物发现

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中国医药生物技术 2024年第3期19卷 197-205页

作者：韩昕贺海燕中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所卫健委微生物药物生物技术重点实验室北京100050

目的利用基因组挖掘策略在链霉菌中发现活性天然产物。方法首先,全测序获得马来西亚链霉菌(Streptomyces malaysiensis DSM 41697)全基因组序列。利用antiSMASH等在线工具对马来西亚链霉菌编码的潜在次级代谢产物生物合成基因簇进行初... 详细信息

目的利用基因组挖掘策略在链霉菌中发现活性天然产物。方法首先,全测序获得马来西亚链霉菌(Streptomyces malaysiensis DSM 41697)全基因组序列。利用antiSMASH等在线工具对马来西亚链霉菌编码的潜在次级代谢产物生物合成基因簇进行初步预测。利用Blast、2ndFind等网站,确认基因簇中各基因的边界并对其功能进行注释,寻找目标基因簇。其次,尝试不同的发酵条件,并通过HPLC、LC-MS初步确定目标化合物是否产生。最后,分离和纯化目标化合物,并鉴定其结构。结果来自马来西亚链霉菌基因组的两个基因簇分别被命名为帕达酰胺生物合成基因簇和苯扎他汀生物合成基因簇。结合Blast和2ndFind软件分析,对基因簇进行边界确定和功能注释。通过尝试多种发酵条件,分离纯化获得了3种帕达酰胺类化合物和1种苯扎他汀类化合物。它们分别被鉴定为帕达酰胺A、帕达酰胺B、帕达酰胺A'和马来霉素。结论以基因组挖掘策略为指导,从微生物基因组中发现可能的天然产物生物合成基因簇,并通过多种发酵条件确定目标基因簇对应的产物是可行的。该策略为解决各类天然产物的来源及发现新结构天然产物提供了新思路,为活性化合物的寻找及其合成生物学奠定了基础。

关键词：基因组挖掘帕达酰胺苯扎他汀马来西亚链霉菌

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脂滴包被蛋白2基因转录水平抑制剂筛选模型的建立和应用

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中国医药生物技术 2025年第2期20卷 123-132页

作者：丁晓添司书毅杜郁洪斌中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所中国医学科学院药物合成生物学重点实验室/国家卫生健康委微生物药物生物技术重点实验室北京100050

目的建立靶向脂滴包被蛋白2(PLIN2)基因转录水平的高通量筛选模型,筛选获得PLIN2抑制剂,进而寻找具有潜在抗动脉粥样硬化活性的小分子先导化合物。方法构建含有人PLIN2基因启动子区的荧光素酶报告基因重组质粒pGL4-PLIN2p。将其转染HepG... 详细信息

目的建立靶向脂滴包被蛋白2(PLIN2)基因转录水平的高通量筛选模型,筛选获得PLIN2抑制剂,进而寻找具有潜在抗动脉粥样硬化活性的小分子先导化合物。方法构建含有人PLIN2基因启动子区的荧光素酶报告基因重组质粒pGL4-PLIN2p。将其转染HepG2细胞,通过G418抗性筛选获得稳定转染细胞株PLIN2p-Luc HepG2。对构建的稳转细胞筛选模型进行条件优化和评价,大规模筛选获得活性化合物,进一步利用qRT-PCR、Western blot和油红O实验检测活性化合物对泡沫化巨噬细胞中Plin2 mRNA、蛋白表达以及脂滴形成的影响。结果成功构建了含有人PLIN2启动子区的细胞模型PLIN2p-Luc HepG2,符合高通量筛选的要求。筛选8000余样次化合物,经初筛和复筛,共获得6个剂量-效应关系良好的活性化合物。其中,化合物MK8722可以剂量依赖地抑制泡沫化巨噬细胞中Plin2 mRNA和蛋白表达,并显著减少细胞内脂滴的形成。结论建立可用于抑制剂高通量筛选的PLIN2p-Luc HepG2细胞模型,筛选获得活性化合物MK8722,为基于脂滴的抗动脉粥样硬化药物发现提供了新的思路和研究手段。

关键词：动脉粥样硬化泡沫细胞脂滴脂滴包被蛋白2 转录水平抑制剂

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前蛋白转化酶枯草溶菌素9抑制剂的研究进展

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中国动脉硬化杂志 2022年第8期30卷 645-653页

作者：王伟志司书毅许艳妮中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所国家新药(微生物)筛选实验室卫健委抗生素生物工程重点实验室北京市100050

前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)是一种主要在肝细胞中表达的分泌型丝氨酸蛋白酶。PCSK9能够与低密度脂蛋白受体(LDLR)结合形成复合物,并通过溶酶体途径使LDLR降解,从而减少细胞表面LDLR的数量,最终导致血浆低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)水... 详细信息

前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)是一种主要在肝细胞中表达的分泌型丝氨酸蛋白酶。PCSK9能够与低密度脂蛋白受体(LDLR)结合形成复合物,并通过溶酶体途径使LDLR降解,从而减少细胞表面LDLR的数量,最终导致血浆低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)水平升高。近年来,PCSK9抑制剂成为一个治疗高胆固醇血症及动脉粥样硬化性心血管疾病(ASCVD)药物研发的新热点。目前全球上市了三款PCSK9抑制剂,包括依洛尤单抗(Evolocumab)、阿利珠单抗(Alirocumab)及小干扰RNA药物Inclisiran(Leqvio)。本文对PCSK9的结构、功能、抑制剂的研究进展进行了综述。

关键词：前蛋白转化酶枯草溶菌素9 动脉粥样硬化低密度脂蛋白受体高胆固醇血症

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常压室温等离子体-紫外复合诱变选育新硫肽类抗生素166A高产菌株

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中国抗生素杂志 2022年第5期47卷 514-520页

作者：李艳青戴剑漉蒋忠科罗辉孙承航广东医科大学南方海洋科学与工程广东省实验室湛江524023 中国医学科学院&北京协和医学院医药生物技术研究所微生物化学研究室北京100050 中国医学科学院&北京协和医学院医药生物技术研究所国家卫健委抗生素生物工程重点实验室北京100050

目的通过对新硫肽类抗生素166A产生菌小单孢菌TMD166进行诱变选育研究,以期获得产166A的高产菌株。方法使用多功能等离子体诱变系统(multifunctional plasma mutagenesis system,MPMS)对出发菌株TMD166的孢子进行等离子体-紫外(MPMS-UV... 详细信息

目的通过对新硫肽类抗生素166A产生菌小单孢菌TMD166进行诱变选育研究,以期获得产166A的高产菌株。方法使用多功能等离子体诱变系统(multifunctional plasma mutagenesis system,MPMS)对出发菌株TMD166的孢子进行等离子体-紫外(MPMS-UV)复合诱变,单孢子悬液经照射处理、涂布培养后获得单菌落,并以牛津杯固体发酵高通量筛选方法对菌株进行初筛,之后对高产菌株进行摇瓶复筛,利用突变株摇瓶发酵的化学效价筛选出正突变菌株。结果对比MPMS-UV不同诱变剂量发现,MPMS105s-UV60s复合诱变剂量获得的正突变率最高,达到41.43%,相应致死率为99.88%。最终筛选出一株166A高产突变株TMD166-MU1,在培养温度为28℃、210 r/min的条件下,经过96~120 h培养后,166A产量相比出发菌株提高了7.47倍。结论采用MPMS-UV复合诱变方式,再结合牛津杯固体发酵高通量筛选方法和摇瓶复筛,可高效筛选获得166A高产菌株。

关键词：新硫肽类抗生素166A 多功能等离子体诱变系统复合诱变选育高产菌株

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Krüppel样转录因子在动脉粥样硬化中的作用

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中国医药生物技术 2023年第1期18卷 39-45页

作者：雷丽娟陈渝川陈明华司书毅许艳妮中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所国家新药(微生物)筛选实验室/卫健委抗生素生物工程重点实验室北京100050

动脉粥样硬化是一种涉及脂质代谢、炎症、氧化应激等过程的复杂疾病,是多种严重心血管疾病(cardiovascular disease,CVD)的病理基础[1-2]。根据《2020年中国心血管健康与疾病报告》,心血管病是导致我国城乡居民总死亡的首要原因。据推算... 详细信息

动脉粥样硬化是一种涉及脂质代谢、炎症、氧化应激等过程的复杂疾病,是多种严重心血管疾病(cardiovascular disease,CVD)的病理基础[1-2]。根据《2020年中国心血管健康与疾病报告》,心血管病是导致我国城乡居民总死亡的首要原因。据推算,我国现有心血管病患者约3.30亿,且心血管病的患病率及死亡率仍处于上升阶段,给人们带来了严重的疾病负担[3]。尽管我们已经有了以他汀类药物为代表的治疗动脉粥样硬化等心血管疾病的药物,但仍有较多患者的治疗效果不理想,因此发现新型抗动脉粥样硬化药物具有重大的意义。

关键词：心血管病患者动脉粥样硬化心血管疾病疾病负担健康与疾病上升阶段他汀类药物氧化应激

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西伯利亚Gudzhirganskoe盐湖土壤放线菌多样性、新颖性及抗菌活性研究

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中国抗生素杂志 2023年第4期48卷 403-412页

作者：杨芹郭普宇 Elena Y.Abidueva 刘少伟李飞娜薛春梅孙承航中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所微生物化学研究室北京100050 佳木斯大学生命科学学院佳木斯154000 俄罗斯科学院西伯利亚分院实验与普通生物研究所俄罗斯670047 国家儿童医学中心国家呼吸系统疾病临床医学研究中心教育部儿科重大疾病研究重点实验室首都医科大学附属北京儿童医院北京市儿科研究所儿童呼吸道感染性疾病研究北京市重点实验室呼吸疾病研究室北京100045 中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所国家卫健委抗生素生物工程重点实验室北京100050

目的探究西伯利亚Gudzhirganskoe盐湖土壤放线菌多样性、新颖性和活性菌株的次级代谢产物,为放线菌新物种和新抗生素的发现储备菌种资源。方法采用10种分离培养基,利用稀释涂布法进行放线菌的分离纯化;通过PCR扩增和测序,比对16S rRNA... 详细信息

目的探究西伯利亚Gudzhirganskoe盐湖土壤放线菌多样性、新颖性和活性菌株的次级代谢产物,为放线菌新物种和新抗生素的发现储备菌种资源。方法采用10种分离培养基,利用稀释涂布法进行放线菌的分离纯化;通过PCR扩增和测序,比对16S rRNA序列进行放线菌多样性和新颖性分析;采用纸片扩散法对潜在放线菌新物种发酵液的酯相萃取物、水相和菌体相进行抗菌活性筛选;采用反相柱层析、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20和半制备HPLC方法分离纯化菌株Hoyosella sp.S15b3-3粗提物的活性成分,通过ESI-MS、NMR波谱数据,并结合文献确定化合物的结构;采用微量稀释法评价化合物1和2的抗菌活性。结果从15份样品中分离获得1343株放线菌,分属于10目23科42属,其中涅斯捷连科菌属、拟诺卡菌属和链霉菌属为优势菌属;15株放线菌与近缘菌株的16S rRNA基因的最高相似度≤98.65%;5株潜在新物种对至少1株检定菌表现出抗菌活性;从Hoyosella sp.S15b3-3中分离鉴定2个已知化合物1(3-吲哚甲醛)和2(2-羟基-1-(3-吲哚)乙酮),化合物1对2株鲍曼不动杆菌(2799和ATCC19606)有一定的抑制作用,MIC值分别为64和32μg/mL。结论西伯利亚Gudzhirganskoe盐湖土壤含有丰富的放线菌资源,且新颖性较高,具有从中发现放线菌新物种和新抗生素的潜力,值得深入研究。

关键词：盐湖放线菌多样性新颖性次级代谢产物

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小檗碱对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化的影响及机制研究

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药学学报 2019年第1期54卷 104-110页

作者：左璇罗金雀姜新海韩小婉王潇刘鹏李依宁王瑞海许艳妮司书毅中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所卫健委抗生素生物工程重点实验室国家新药(微生物)筛选实验室北京100050

本文旨在高脂喂养的ApoE^(-/-)小鼠模型中研究小檗碱(berberine, BBR)抗动脉粥样硬化的作用及可能的作用机制,为BBR的临床研究打下基础。将7周龄的雄性ApoE^(-/-)小鼠,随机分为对照组(普通饲料)、模型组、BBR组(BBR-L:50 mg·kg^(-1... 详细信息

本文旨在高脂喂养的ApoE^(-/-)小鼠模型中研究小檗碱(berberine, BBR)抗动脉粥样硬化的作用及可能的作用机制,为BBR的临床研究打下基础。将7周龄的雄性ApoE^(-/-)小鼠,随机分为对照组(普通饲料)、模型组、BBR组(BBR-L:50 mg·kg^(-1)、BBR-H:150 mg·kg^(-1))、阿托伐他汀组(5 mg·kg^(-1))。高脂饲料喂养ApoE^(-/-)小鼠12周建立实验性高脂血症动物模型,同时给予不同剂量的BBR。12周后,分离主动脉进行油红染色,统计各组ApoE^(-/-)小鼠主动脉斑块情况;采用悬液芯片试剂盒检测血清中炎症因子水平;应用试剂盒测定肝脏总胆固醇、甘油三酯和游离脂肪酸的含量, Western blot方法检测肝脏中炎症信号通路相关蛋白以及胆固醇转运相关基因的表达情况。所有动物实验均按照医药生物技术研究所实验室动物管理条例进行。结果表明,与模型组相比, BBR可以显著降低主动脉全长中的斑块面积,抑制血清中促炎性因子IL-1β等的表达,减少肝脏中总胆固醇等的聚积;机制研究结果显示, BBR能显著抑制MAPKs和NF-κB信号通路的活化,显著上调胆固醇代谢调节蛋白LDLR、ABCA1等的表达。总之,BBR能显著抑制高脂饮食喂养的ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块的形成,其作用机制与抑制炎症和降低胆固醇的聚积有关。

关键词：小檗碱动脉粥样硬化 ApoE^-/- 炎症胆固醇

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