检索结果-内蒙古大学图书馆

中国抗生素杂志 2023年第3期48卷 343-350页

作者：侍媛媛武临专洪斌中国医学科学院、北京协和医学院医药生物技术研究所国家卫健委抗生素生物工程重点实验室中国医学科学院药物合成生物学重点实验室北京100050

创新霉素是中国科学家20世纪60年代发现的具有全新骨架结构的抗生素,由济南游动放线菌产生,具有良好的抗菌活性和新颖的作用靶点,但创新霉素的生物合成基因簇在其发现50多年后才得到解析。本文介绍了创新霉素研究的历史沿革,着重介绍了... 详细信息

创新霉素是中国科学家20世纪60年代发现的具有全新骨架结构的抗生素,由济南游动放线菌产生,具有良好的抗菌活性和新颖的作用靶点,但创新霉素的生物合成基因簇在其发现50多年后才得到解析。本文介绍了创新霉素研究的历史沿革,着重介绍了其生物合成机制的最新研究进展,从生物合成基因簇、生物合成途径、新颖的去泛素化酶样的硫转移酶催化的硫掺入机制、罕见的细胞色素P450酶催化的C-S键形成机制等角度进行阐述,这些研究进展为利用组合生物合成和合成生物学技术进行新药研发和高产优产奠定了理论基础。

关键词：创新霉素生物合成 C-S键形成硫掺入细胞色素P450酶

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可利霉素体外抗结肠癌活性的研究

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药物分析杂志 2022年第7期42卷 1142-1152页

作者：刘娟娟戴剑漉高晓杰赫卫清中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所卫健委抗生素生物工程重点实验室北京100050 中国医学科学院北京协和医学院、药物合成生物学重点实验室北京100050

目的:评价可利霉素(carrimycin, CAM)及其单组分异戊酰螺旋霉素Ⅰ(isovalerylspiramycinⅠ, ISPⅠ)对结肠癌细胞的抑制作用,初步探讨其抗肿瘤的作用机制。方法:选择结肠癌细胞系LoVo,评价CAM及其单组分ISPⅠ与螺旋霉素(spiramycin, SP)... 详细信息

目的:评价可利霉素(carrimycin, CAM)及其单组分异戊酰螺旋霉素Ⅰ(isovalerylspiramycinⅠ, ISPⅠ)对结肠癌细胞的抑制作用,初步探讨其抗肿瘤的作用机制。方法:选择结肠癌细胞系LoVo,评价CAM及其单组分ISPⅠ与螺旋霉素(spiramycin, SP)及其单组分螺旋霉素Ⅰ(spiramycinⅠ, SPⅠ)的抗肿瘤活性,采用CCK-8试剂盒检测对细胞增殖的影响;采用克隆形成实验分析对细胞克隆形成能力的影响;采用流式细胞术分析对细胞凋亡的影响;采用划痕实验检测对细胞迁移能力的影响。通过转录组分析CAM、ISPⅠ发挥抗肿瘤活性可能作用的信号通路。结果:CAM及其单组分ISPⅠ可以有效抑制结肠癌细胞的增殖、克隆形成,能促使细胞凋亡比例增加,但对细胞迁移能力影响不明显;在给药6 h和9 h后,CAM及其单组分ISPⅠ在细胞内的相对含量高于SP及其单组分SPⅠ;转录组测序分析发现CAM及ISPⅠ可能作用于细胞粘附相关信号通路和PI3K/Akt信号通路。结论:CAM及其单组分ISPⅠ具有体外抗结肠癌活性,且优于SP及其单组分SPⅠ,这可能与其更好的细胞穿透性相关,CAM及ISPⅠ的抗结肠癌活性可能是通过作用于细胞粘附相关信号通路和PI3K/Akt信号通路而发挥的,这为进一步研究CAM及其单组分的抗肿瘤作用机制奠定了基础。

关键词：可利霉素异戊酰螺旋霉素Ⅰ 螺旋霉素结肠癌LoVo细胞增殖凋亡迁移转录组

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URA3基因影响青蒿酸酿酒酵母工程菌中试发酵产量

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生物工程学报 2022年第2期38卷 737-748页

作者：郭未蔚艾丽梅胡栋陈亚军耿梦馨郑玲辉白利平中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所卫健委抗生素生物工程重点实验室/中国医学科学院药物合成生物学重点实验室北京100050 浙江海正药业股份有限公司浙江抗菌药物重点实验室浙江台州318000

CRISPR/Cas9基因编辑技术已经被广泛应用于工程酿酒酵母的基因插入、基因替换和基因敲除,通过使用选择标记进行基因编辑具有简单高效的特点。前期利用CRISPR/Cas9系统敲除青蒿酸生产菌株酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)1211半乳糖... 详细信息

CRISPR/Cas9基因编辑技术已经被广泛应用于工程酿酒酵母的基因插入、基因替换和基因敲除,通过使用选择标记进行基因编辑具有简单高效的特点。前期利用CRISPR/Cas9系统敲除青蒿酸生产菌株酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)1211半乳糖代谢负调控基因GAL80,获得菌株*** 1211-2,在不添加半乳糖诱导的情况下,青蒿酸摇瓶发酵产量达到了740 mg/L。但在50 L中试发酵实验中,*** 1211-2很难利用对青蒿酸积累起到决定性作用的碳源-乙醇,青蒿酸的产量仅为亲本菌株*** 1211的20%–25%。我们推测因遗传操作所需的筛选标记URA3突变,影响了其生长及青蒿酸产量。随后我们使用重组质粒pML104-KanMx4-u连同90 bp供体DNA成功恢复了URA3基因,获得了工程菌株*** 1211-3。*** 1211-3能够在葡萄糖和乙醇分批补料的发酵罐中正常生长,其青蒿酸产量超过20 g/L,与亲本菌株产量相当。研究不但获得了不加半乳糖诱导的青蒿酸生产菌株,同时首次发现了营养缺陷型标记URA3基因显著影响乙醇补料的中试发酵中青蒿酸的产生,也为酵母作为底盘来进行其他天然产物的生产提供了借鉴。

关键词：工程酿酒酵母青蒿酸 CRISPR/Cas9 URA3

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PCSK9转录后表达调控抑制剂的发现及活性研究

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中国医药生物技术 2024年第3期19卷 231-239页

作者：庞晨绪王雪蕾杨雨欣刘一婷王丽洪斌中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所中国医学科学院药物合成生物学重点实验室/国家卫生健康委抗生素生物工程重点实验室北京100050

目的建立PCSK9转录后表达调控抑制剂高通量筛选模型筛选获得靶向PCSK9转录后水平的小分子抑制剂,通过其活性研究发现具有潜在降脂活性的PCSK9抑制剂。方法将PCSK9 mRNA的3'UTR区连接至荧光素酶报告基因下游以构建PCSK9转录后调控抑... 详细信息

目的建立PCSK9转录后表达调控抑制剂高通量筛选模型筛选获得靶向PCSK9转录后水平的小分子抑制剂,通过其活性研究发现具有潜在降脂活性的PCSK9抑制剂。方法将PCSK9 mRNA的3'UTR区连接至荧光素酶报告基因下游以构建PCSK9转录后调控抑制剂高通量筛选模型,并对其进行优化与评价。应用该模型进行大规模筛选,进而利用荧光定量PCR、Western blot、流式细胞检测等方法对活性化合物调控PCSK9的表达及其介导的低密度脂蛋白受体(LDLR)的表达水平和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)摄取作用的变化进行检测。结果利用上述模型筛选获得6个活性化合物,并对其量效关系进行分析,结果显示这些化合物均可呈剂量依赖性下调筛选模型荧光素酶活性;利用HepG2细胞对其调控PCSK9的表达水平进行检测,结果显示化合物IMB-57可显著抑制PCSK9基因mRNA水平和蛋白水平;进而对LDLR表达水平及摄取功能进行检测,结果显示IMB-57可显著增加细胞LDLR蛋白水平及其介导的细胞对LDL-C的摄取作用;初步分子机制分析结果证实IMB-57通过影响PCSK9基因mRNA的稳定性从而抑制其表达。结论活性化合物IMB-57具有显著的PCSK9抑制活性且可显著增加肝细胞LDL-C的摄取,有望发展为潜在的具有降脂活性的PCSK9小分子抑制剂,同时也证实本工作构建模型的可靠性,可用于具有全新机制的PCSK9抑制剂的发现。

关键词： PCSK9 转录后表达调控低密度脂蛋白受体低密度脂蛋白胆固醇动脉粥样硬化

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可利霉素产生菌中糖基转移酶基因ssp803的功能鉴定及酶学特性分析

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中国医药生物技术 2024年第5期19卷 432-442页

作者：高晓杰李可萌赫卫清中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所卫健委抗生素生物工程重点实验室/医科院合成生物学重点实验室北京100050

目的通过体内基因阻断和体外酶促反应鉴定可利霉素产生菌中糖基转移酶基因ssp803功能和酶学特性,以及与可利霉素生物合成的关系。方法在可利霉素产生菌54-IA中利用CRISPR-Cas9基因编辑系统敲除ssp803基因,将组成型启动子kasOp*控制的s... 详细信息

目的通过体内基因阻断和体外酶促反应鉴定可利霉素产生菌中糖基转移酶基因ssp803功能和酶学特性,以及与可利霉素生物合成的关系。方法在可利霉素产生菌54-IA中利用CRISPR-Cas9基因编辑系统敲除ssp803基因,将组成型启动子kasOp*控制的ssp803及其同源基因oleD分别转化到54-IA和?803变株中进行回复和高表达实验,通过HPLC分析?803变株、回复株和高表达株中可利霉素主组分异戊酰螺旋霉素的产量变化。再将ssp803基因连接至冷休克表达载体pColdI上,利用大肠杆菌Transetta(DE3)中进行表达和纯化。以大环内酯类抗生素为糖苷配体和以UDP-葡萄糖为供体进行Ssp803催化反应,通过HPLC-MS检测酶催化后的产物,通过UDP-Glo试剂盒测定Ssp803的酶促动力学参数。结果利用PCR筛选出了ssp803基因框内缺失突变株?803,在?803中异戊酰螺旋霉素产量与54-IA出发菌株相似,而在54-IA和?803中高表达ssp803完整基因时,异戊酰螺旋霉素的含量明显下降,导入高表达oleD基因的质粒后产量下降得更多。通过体外酶促反应证实Ssp803催化的最适温度是37℃,最适pH是9.06。Ssp803对所测的大环内酯类抗生素都具有糖基化失活作用,对异戊酰螺旋霉素I等16元环的大环内酯类抗生素的催化活性要低于14元环大环内酯类抗生素,对索利霉素的催化效率最高。结论 Ssp803对大环内酯类抗生素具有糖基化失活作用,对14元环大环内酯类抗生素的活性更高,最适底物是索利霉素;在可利霉素产生菌中高表达ssp803和oleD基因会抑制异戊酰螺旋霉素的生物合成。

关键词：糖基转移酶可利霉素异戊酰螺旋霉素大环内酯类抗生素

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CD73:肿瘤免疫治疗的新靶点

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中国医药生物技术 2023年第5期18卷 440-446页

作者：司德豹王丽非洪斌中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所国家卫生健康委员会抗生素生物工程重点实验室/中国医学科学院药物合成生物学重点实验室北京100050

肿瘤免疫治疗是缓解甚至治愈某些类型肿瘤的有效策略,例如针对程序性细胞死亡蛋白-1(programmed death-1,PD-1)的纳武利尤单抗对非小细胞肺癌和霍奇金淋巴瘤等实体癌有治疗效果[1],以细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白-4(cytotoxic T-lymphocyt... 详细信息

肿瘤免疫治疗是缓解甚至治愈某些类型肿瘤的有效策略,例如针对程序性细胞死亡蛋白-1(programmed death-1,PD-1)的纳武利尤单抗对非小细胞肺癌和霍奇金淋巴瘤等实体癌有治疗效果[1],以细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白-4(cytotoxic T-lymphocyte-associated protein-4,CTLA-4)为靶点的伊匹木单抗也在黑色素瘤、前列腺癌患者的临床试验中显示了较好的疗效[2]。然而,这些药物仅在少数患者中有效,且在相当一部分患者中观察到对免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitors,ICIs)的耐药性[3]。这种现象的产生是因为肿瘤细胞可以通过多种免疫抑制途径发生免疫逃逸[4]。因此,对肿瘤免疫逃逸机制更深入和全面的研究将有利于人们应用肿瘤免疫疗法来对抗癌症。

关键词：肿瘤免疫治疗肿瘤免疫疗法霍奇金淋巴瘤细胞毒性T淋巴细胞程序性细胞死亡实体癌黑色素瘤非小细胞肺癌

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以人载脂蛋白B为靶点的基因表达下调剂筛选模型的建立与应用

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中国抗生素杂志 2021年第10期46卷 922-927页

作者：张秀敏王雪蕾王丽杜郁洪斌国家卫健委抗生素生物工程重点实验室中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所北京100050 中国医学科学院药物合成生物学重点实验室中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所北京100050

目的构建以人ApoB为靶点的基因表达调节剂的高通量筛选模型,筛选apoB基因表达下调剂。方法以人基因组DNA为模板,通过PCR扩增apoB基因上游的启动子序列,将扩增的DNA片段克隆至荧光素酶报告基因质粒pGL4.17,采用脂质体介导的方法将重组质... 详细信息

目的构建以人ApoB为靶点的基因表达调节剂的高通量筛选模型,筛选apoB基因表达下调剂。方法以人基因组DNA为模板,通过PCR扩增apoB基因上游的启动子序列,将扩增的DNA片段克隆至荧光素酶报告基因质粒pGL4.17,采用脂质体介导的方法将重组质粒转染人肝癌细胞HepG2,经G418抗性筛选,获得稳定转染细胞株。应用槲皮素对筛选模型进行评价,进而基于检测荧光素酶的表达活性变化筛选人apoB基因表达下调剂。结果PCR扩增得到人apoB基因上游的启动子序列,构建完成相应的重组荧光素酶报告基因质粒pGL4-apoB-P,建立了稳定转染细胞株ApoB-Luc HepG2。以槲皮素为阳性化合物进行模型评价,Z'因子为0.77,符合高通量筛选的要求。应用该模型对5688个微生物发酵液粗提物进行筛选,获得了2株阳性菌株。结论建立了人apoB基因表达下调剂筛选模型,并应用于微生物来源样品的筛选。

关键词：载脂蛋白B 动脉粥样硬化报告基因启动子高通量筛选微生物发酵液

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抗SARS-CoV-2药物研究进展

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中国医药生物技术 2022年第3期17卷 193-200页

作者：白晓明王丽非洪斌中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所国家卫生健康委员会抗生素生物工程重点实验室/中国医学科学院药物合成生物学重点实验室北京100050

过去二十年全球曾经发生了两次重大的冠状病毒(coronavirus,CoVs)感染事件,分别是2003年暴发的严重急性呼吸窘迫综合征(severe acute respiratory syndromes,SARS)和2012年暴发的中东呼吸综合征(middleeast respiratorysyndrome,MERS)。2019年,第三次冠状病毒感染事件暴发,新型冠状病毒SARS-CoV-2在全球大流行并造成了巨大的社会危害。最新数据显示,SARS-CoV-2已导致全球超过5.2亿人感染,628万人死亡;。鉴于疫情的严重形势,多个抗SARS-CoV-2药物已被各国政府紧急批准临床应用,如莫努匹韦、瑞德西韦、法匹拉韦、洛匹那韦/利托那韦等,世界卫生组织(WHO)也将7种SARS-CoV-2疫苗纳入紧急使用清单。

关键词：冠状病毒感染数据显示药物研究进展暴发感染事件

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螺旋霉素生物合成基因簇中N,N-二甲基转移酶基因功能的鉴定

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中国医药生物技术 2022年第4期17卷 297-305页

作者：林茹李可萌刘娟娟戴剑漉赫卫清中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所卫健委抗生素生物工程重点实验室/医科院合成生物学重点实验室北京100050

目的确定螺旋霉素(SP)生物合成途径中编码两个N, N-二甲基转移酶的基因bsm9和bsm22的功能,并在基因阻断变株中分离纯化相应的SP前体物。方法利用抗性基因插入或CRISPR-Cas基因编辑的方法阻断bsm9和bsm22基因,并对其进行基因回复实验... 详细信息

目的确定螺旋霉素(SP)生物合成途径中编码两个N, N-二甲基转移酶的基因bsm9和bsm22的功能,并在基因阻断变株中分离纯化相应的SP前体物。方法利用抗性基因插入或CRISPR-Cas基因编辑的方法阻断bsm9和bsm22基因,并对其进行基因回复实验。利用薄层色谱(TLC)和高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)联用分析变株Δbsm9和Δbsm22的发酵产物。利用半制备液相色谱的方法分离纯化缺少甲基化修饰的SP前体物,经核磁共振波谱(NMR)数据分析确定其化学结构。结果成功构建了两个基因的阻断株Δbsm9和Δbsm22。Δbsm9变株的发酵液没有抗菌活性的物质产生,经HPLC-MS分析也未发现相应的SP前体物。而Δbsm22变株的发酵产物的抗菌活性下降50%以上,从Δbsm22变株发酵产物中分离出福洛胺糖缺少两个甲基的SP前体物。结论 bsm22基因负责SP生物合成中福洛胺糖上的N, N-二甲基的催化,而bsm9基因可能参与麦洛胺糖的N, N-二甲基化修饰,且两者在功能上不能互补。

关键词：螺旋霉素 N N-二甲基转移酶基因基因阻断

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链霉菌Streptomyces *** 204095产生原黄醇酮C的固态发酵及制备

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中国医药生物技术 2021年第4期16卷 302-306页

作者：刘晓岩李书芬黎林丽刘佳昌江冰娅武临专中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所卫健委抗生素生物工程重点实验室/中国医学科学院药物合成生物学重点实验室北京100050

目的以链霉菌Streptomyces *** 204095为产生菌,建立小规模发酵培养及分离纯化制备原黄醇酮C的方法。方法HPLC测定原黄醇酮C发酵效价;利用改进的发酵培养基配方对链霉菌Streptomyces *** 204095进行固态发酵培养,经乙酸乙酯提取、正相... 详细信息

目的以链霉菌Streptomyces *** 204095为产生菌,建立小规模发酵培养及分离纯化制备原黄醇酮C的方法。方法HPLC测定原黄醇酮C发酵效价;利用改进的发酵培养基配方对链霉菌Streptomyces *** 204095进行固态发酵培养,经乙酸乙酯提取、正相硅胶色谱柱和反相ODS色谱柱分离纯化制备原黄醇酮C。结果采用改进的发酵培养基配方(葡萄糖4 g/L,麦芽提取物25 g/L,酵母提取物4 g/L,黄豆饼粉6 g/L,琼脂粉15 g/L,pH自然),原黄醇酮C发酵效价达到300 mg/L;从5 L发酵培养基出发,经发酵培养和分离纯化后,收获原黄醇酮C样品656 mg,HPLC检测纯度91%。结论建立了一种简便高效的原黄醇酮C小规模发酵和制备工艺流程,为开展原黄醇酮C化学衍生物和生物活性等研究奠定了基础。

关键词：链霉菌CPCC 204095 原黄醇酮C 固态发酵分离制备

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