检索结果-内蒙古大学图书馆

中国药理学通报 2020年第8期36卷 1134-1139页

作者：叶景静卢覃培贾舒涵郑红芸孙承航黄大林桂林医学院基础医学院微生物实验室广西桂林541004 中国医学科学院&北京协和医学院医药生物技术研究所微生物化学研究室北京100050

目的对分离自广西茅尾海红树林根际土壤的两株链霉菌B353和B486进行鉴定和抗菌活性研究。方法采用4种培养基分离放线菌,ISP2培养基纯化菌株;通过PCR扩增和测序获得菌株16S rRNA基因序列;采用邻接法(Neighbor-Joining)来构建系统进化树;... 详细信息

目的对分离自广西茅尾海红树林根际土壤的两株链霉菌B353和B486进行鉴定和抗菌活性研究。方法采用4种培养基分离放线菌,ISP2培养基纯化菌株;通过PCR扩增和测序获得菌株16S rRNA基因序列;采用邻接法(Neighbor-Joining)来构建系统进化树;采用纸片扩散法(K-B法)测定其抗菌活性;观察两株链霉菌的形态特征;利用薄层色谱法(thin layer chromatography,TLC)对活性物质进行初步研究。结果经16S rRNA基因序列比对发现,菌株B353和B486可能是Streptomyces seoulensis NRRL B-24310T的两个变种。抗菌活性筛选表明,B353和B486这两株链霉菌对不同的鉴定菌株都有较好的抗菌活性,其中对金黄色葡萄球菌的抗菌活性较强。TLC的分析结果表明,链霉菌B353和B486产对金黄色葡萄球菌有活性的物质。结论分离自广西茅尾海红树林根际土壤的放线菌有较强抗菌活性,存在从中发现有着天然活性的新抗生素的潜力。

关键词：放线菌链霉菌红树林茅尾海抗菌活性 16S rRNA TLC

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基于BLI技术的脂多糖转运蛋白LptA/LptC相互作用检测方法的建立

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生物工程学报 2021年第9期37卷 3300-3309页

作者：代晓伟朱小红司书毅李妍袁丽杰华北理工大学基础医学院河北省慢性疾病基础医学重点实验室唐山市慢性病临床基础研究重点实验室河北唐山063210 中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所国家新药(微生物)筛选实验室北京100050

革兰阴性菌脂多糖转运蛋白(Lipopolysaccharide transport,Lpt)LptA和LptC通过稳定的相互作用对脂多糖装配起到重要作用,它们相互作用的阻断会导致脂多糖层缺损和菌体死亡,因此具备成为抗菌药物筛选靶标的可行性。文中应用生物膜干涉(Bi... 详细信息

革兰阴性菌脂多糖转运蛋白(Lipopolysaccharide transport,Lpt)LptA和LptC通过稳定的相互作用对脂多糖装配起到重要作用,它们相互作用的阻断会导致脂多糖层缺损和菌体死亡,因此具备成为抗菌药物筛选靶标的可行性。文中应用生物膜干涉(Biolayer interferometry,BLI)技术对LptA/LptC相互作用进行检测,为建立体外的LptA/LptC蛋白相互作用阻断剂筛选方法奠定基础。首先在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中进行大肠杆菌LptA全长、LptA去信号肽和LptC蛋白的表达;纯化的蛋白使用生物素标记后结合到预先稀释液封闭的超级链霉亲和素(Super streptavidin,SSA)生物传感器,然后再检测与未标记蛋白之间的结合信号,同时做无蛋白的稀释液对照;使用同样的方法检测生物素化蛋白与小分子的结合以及相互作用的阻断;空白对照采用未结合生物素化蛋白的传感器,检测上述系列稀释样品。响应信号采用稳态分析(Steady state analysis)方式拟合,计算样品平衡常数(KD)值。本研究成功获得高纯度的LptA和LptC蛋白,并且检测到结合传感器的LptC蛋白与LptA全长蛋白和LptA去信号肽蛋白均具有良好的结合活性,KD值分别为2.9e–7±7.9e–8、6.0e–7±2.8e–8;结合传感器的LptA去信号肽蛋白与LptC蛋白具有良好的结合活性,KD值为9.6e–7±7.2e–9;所有结合曲线呈现出明显的快结合-快解离形态。小分子化合物IMB-881能够与LptA结合来阻断LptA/LptC之间的相互作用,与LptC之间无结合活性。文中首次建立了基于BLI技术的LptA/LptC相互作用检测方法,并且证实该方法能够用于小分子阻断剂阻断活性的评价,为后续的LptA/LptC蛋白相互作用阻断剂筛选奠定了基础。

关键词：生物膜干涉脂多糖脂多糖转运蛋白 LptA LptC LptA/LptC相互作用

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来源于Mangifera indica L.C-糖基转移酶MiCGTb的大肠杆菌原核表达、纯化、结晶化以及晶体学研究

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中国医药生物技术 2021年第5期16卷 385-390页

作者：樊帅吕广新刘凡金媛媛杨兆勇中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所微生物代谢工程研究室北京100050

目的获得来源于Mangifera indica L.C-糖基转移酶C-glycosyltransferase(MiCGTb)的晶体结构,为解析C-糖基转移酶催化机制提供结构基础。方法因MiCGTb较不稳定,构建MiCGTb截短蛋白MiCGTb1(Asn8-Lys465)表达质粒,利用大肠杆菌表达系统实现MiCGTb1可溶性表达,采用亲和层析、离子交换层析和分子排阻色谱纯化目的蛋白,选用气相扩散悬滴法,通过优化结晶条件获得可进行X-ray衍射的高质量晶体,获取衍射数据。结果运用分子生物学方法成功构建含MiCGTb1基因的重组质粒,转化BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL得到重组表达菌株。运用亲和层析和离子交换层析蛋白纯化技术,获得用于结晶化的蛋白样品。气相扩散悬滴法确定的结晶条件为:0.2 mol/L MgCl_(2)、0.1 mol/L Tris pH 8.0、40%MPD,结晶温度为23℃,添加剂为乙二醇(0.75%v/v),获得X-ray衍射分辨率为3.30Å的衍射数据。结论来源于Mangifera indica L.C-糖基转移酶截短蛋白MiCGTb1晶体的获得有望对解析C-糖基转移酶的晶体结构以及催化机制奠定基础。

关键词： C-糖基转移酶蛋白纯化结晶 X-射线衍射

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莽草酸激酶作为抗结核分枝杆菌药物发现靶标的研究进展

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中国医药生物技术 2021年第2期16卷 134-138页

作者：李蒙代晓伟卞聪朱小红司书毅李妍姜威中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所国家新药(微生物)筛选室北京100050

近年来,随着结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)单药耐药(SDR-TB)、多药耐药(MDR-TB)和广泛耐药(XDR-TB)菌株的不断出现和蔓延,使得传统抗结核药物的临床有效率不断下降,结核病也因此再次成为严重危害人类健康和公共安全的... 详细信息

近年来,随着结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)单药耐药(SDR-TB)、多药耐药(MDR-TB)和广泛耐药(XDR-TB)菌株的不断出现和蔓延,使得传统抗结核药物的临床有效率不断下降,结核病也因此再次成为严重危害人类健康和公共安全的传染性疾病[1-5]。研发新型抗结核药物,解决结核病治疗所面临的难题成为控制结核病疫情的当务之急。针对传统药物进行结构优化或是通过对现有药物进行组合获得新的组剂,相对而言是获得抗结核新药的捷径,由此获得的新药在特定情况下可提高治疗效率,但由于此类药物在化学结构和作用机制上与传统药物无明显差异,导致其不能有效地避开MTB的耐药机制,对高水平耐药结核菌无效,仍然不能有效地治疗耐药结核病[6-9]。因此发现新的药物靶标进而发现新的先导药物成为抗结核药物研发的重要方向。

关键词：结核病治疗抗结核新药耐药结核菌抗结核药物临床有效率广泛耐药 tuberculosis 药物靶标

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海洋青霉菌IMB17-009抗菌活性次级代谢产物研究

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中国医药生物技术 2021年第3期16卷 193-200页

作者：李芳李娇李莎莎郝晓萌关艳刘玉凤王保国甘茂罗中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所国家新药(微生物)筛选实验室北京100050 济宁医学院药学院山东日照276800

目的分离鉴定从红树林沉积物分离的海洋青霉菌IMB17-009产生的抗菌活性次级代谢产物。方法利用中压柱色谱、凝胶柱色谱和HPLC等多种色谱分离方法对菌株固体发酵产物进行分离纯化,通过紫外可见光谱、质谱和核磁共振谱对化合物进行结构鉴... 详细信息

目的分离鉴定从红树林沉积物分离的海洋青霉菌IMB17-009产生的抗菌活性次级代谢产物。方法利用中压柱色谱、凝胶柱色谱和HPLC等多种色谱分离方法对菌株固体发酵产物进行分离纯化,通过紫外可见光谱、质谱和核磁共振谱对化合物进行结构鉴定,采用微量液体稀释法评价化合物对革兰氏阳性菌、阴性菌和真菌的抗菌活性。结果从青霉菌IMB17-009固体发酵产物中分离获得11个化合物,其结构分别确定为meleagrin(1)、glandicoline B(2)、roquefortine C(3)、2-(2-(1H-吲哚-3-基)乙酰基)-L-苯基丙氨酸(4)、citreohybridonol(5)、andrastinA(6)、andrastin B(7)、macrophorin A(8)、purpurogemutantin(9)、desferricoprogen(10)和deferriferrichrome(11)。结论化合物1、3、8、9对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌或弯孢霉菌、交链孢菌、镰孢菌和白念珠菌等真菌具有一定的抗菌活性,最低抑菌浓度为8~64μg/ml。化合物4为一新的天然产物。

关键词：海洋微生物青霉属抗菌抗真菌分离纯化

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脐血来源NK细胞的体外扩增及其抗肿瘤细胞活性的研究

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中国医药生物技术 2022年第5期17卷 412-417页

作者：韩强张志刚刘坤朱贤兑金媛媛张志斐杨兆勇华北理工大学药学院唐山063210 沧州市人民医院病理科沧州061000 中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所代谢工程室北京100050

目的研究脐血单个核细胞来源NK细胞的培养方法及其对不同类型肿瘤细胞的杀伤活性。方法自脐静脉消毒后全封闭采集脐血,肝素抗凝,分离单个核细胞,用NK细胞培养基培养14 d,流式细胞仪检测其表面标志,并使用RTCA实时无标记细胞分析技术检... 详细信息

目的研究脐血单个核细胞来源NK细胞的培养方法及其对不同类型肿瘤细胞的杀伤活性。方法自脐静脉消毒后全封闭采集脐血,肝素抗凝,分离单个核细胞,用NK细胞培养基培养14 d,流式细胞仪检测其表面标志,并使用RTCA实时无标记细胞分析技术检测细胞增殖曲线,观察NK效应细胞按效靶比1:1、5:1与10:1对肿瘤细胞的杀伤作用。结果培养14 d的脐血单个核细胞,细胞总数扩增294倍,其中NK细胞扩增5580倍。NK细胞CD3^(-)CD56^(+)阳性率为97.93%,与杀伤功能相关的重要分子CD16、NKG2D、NKp30、NKp44的表达阳性率均在95%以上。对A549肺癌细胞株作用6 h的杀伤活性,在1:1~10:1效靶比范围内,随着效靶比增加,杀伤活性从(78.16±2.41)%逐渐增强到(95.71±3.21)%;并且在效靶比1:1的情况下,随着作用时间从6 h延长到24 h,杀伤活性也从(78.16±2.41)%逐渐增强到(96.33±2.15)%。结论建立了无需分选细胞、无需滋养层细胞、操作简单、通用性强的脐血NK细胞培养方法,获得的NK细胞纯度高,对肿瘤细胞的杀伤作用强。

关键词：自然杀伤细胞脐血表面标志实时无标记动态细胞分析技术体外扩增抗肿瘤

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抗分枝杆菌海洋微生物的分离与鉴定

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中国医药生物技术 2022年第1期17卷 4-11页

作者：关艳蒙建州刘忆霜肖春玲杨延辉中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所国家新药(微生物)筛选室北京100050 宁夏医科大学基础医学院病原生物学与医学免疫学系宁夏回族自治区常见传染病防治重点实验室银川750004

目的从海洋微生物中发现具有抗分枝杆菌活性的细菌,并对其进行鉴定。方法从印度洋热带地区的海底沉积物中分离海洋微生物。通过纸片法活性测定,发现了一株具有抗耻垢分枝杆菌活性的细菌。光学显微下观察细菌形态和菌落。测定细菌的理化... 详细信息

目的从海洋微生物中发现具有抗分枝杆菌活性的细菌,并对其进行鉴定。方法从印度洋热带地区的海底沉积物中分离海洋微生物。通过纸片法活性测定,发现了一株具有抗耻垢分枝杆菌活性的细菌。光学显微下观察细菌形态和菌落。测定细菌的理化特性,提取其基因组,荧光法测定基因组的T_(m)值,扩增其16S rDNA并进行测序。将序列提交NCBI和EzTaxon网站进行搜索比对,使用MEGA 7.0软件构建系统进化树。结果分离得到的菌株IMBGY10-46的发酵产物具有抗耻垢分枝杆菌活性;其与Pseudomonas sabulinigriJ64的16S rDNA相似性最高,但菌体形态和基因组的Tm值相差较大,并且过氧化氢酶试验呈阴性。将该菌株命名为假单胞菌属新菌株。该细菌的16S rDNA序列提交GenBank,收录号为JQ362457。结论从海底沉积物中获得了具有抗耻垢分枝杆菌作用的海洋微生物新菌株。

关键词：海洋微生物次级代谢产物抗菌活性耻垢分枝杆菌 16S rDNA

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天然产物来源的金属β-内酰胺酶抑制剂

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中国医药生物技术 2020年第3期15卷 305-310页

作者：刘琛楠刘忆霜肖春玲中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所国家新药(微生物)筛选实验室北京100050

近年来,随着包括耐万古霉素肠球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌、耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌、耐碳青霉烯铜绿假单胞菌、耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌在内的多重耐药菌的出现和传播[1-12],临床使用的抗生素逐渐对其失... 详细信息

近年来,随着包括耐万古霉素肠球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌、耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌、耐碳青霉烯铜绿假单胞菌、耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌在内的多重耐药菌的出现和传播[1-12],临床使用的抗生素逐渐对其失效,使得细菌耐药形势越发严峻。

关键词：耐万古霉素肠球菌多重耐药菌耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌耐甲氧西林金黄色葡萄球菌细菌耐药铜绿假单胞菌耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌

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NDM-1抑制剂研究进展

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中国医药生物技术 2020年第6期15卷 608-614页

作者：王倩刘忆霜中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所国家新药(微生物)筛选实验室北京100050

抗生素的发现是人类抵御细菌感染性疾病的重大突破。然而随着抗生素的广泛使用和滥用,细菌多药耐药问题日益严峻,对人类健康构成了巨大的威胁。碳青霉烯类抗生素一度被视为革兰氏阴性菌感染的"最后一道防线",但随着碳青霉烯... 详细信息

抗生素的发现是人类抵御细菌感染性疾病的重大突破。然而随着抗生素的广泛使用和滥用,细菌多药耐药问题日益严峻,对人类健康构成了巨大的威胁。碳青霉烯类抗生素一度被视为革兰氏阴性菌感染的"最后一道防线",但随着碳青霉烯酶的出现,碳青霉烯耐药的革兰氏阴性菌(如大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌)在全球范围内快速蔓延,为临床治疗带来了新的挑战[1-3].

关键词：细菌感染性疾病碳青霉烯类抗生素碳青霉烯酶鲍曼不动杆菌铜绿假单胞菌革兰氏阴性菌感染肺炎克雷伯菌碳青霉烯耐药

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新型抗结核化合物体内外活性评价方法的研究进展

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中国医药生物技术 2021年第3期16卷 256-259页

作者：杨瑞芳蒙建州李传友首都医科大学附属北京胸科医院北京市结核病胸部肿瘤研究所细菌免疫室北京101149 中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所国家新药(微生物)筛选实验室北京100050

结核病(tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)引起的慢性呼吸道传染病,是全球十大死因之一,也是由单一传染源导致死亡的主要原因,排名高于艾滋病。2019年因TB死亡的人数是120万人[1]。MTB具有特殊的生理特... 详细信息

结核病(tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)引起的慢性呼吸道传染病,是全球十大死因之一,也是由单一传染源导致死亡的主要原因,排名高于艾滋病。2019年因TB死亡的人数是120万人[1]。MTB具有特殊的生理特征,包括生长缓慢、自然状态下基因突变率较高以及用药后易形成持留菌株等,导致TB治疗用药周期较长、患者的依从性较差,因此耐药MTB的检出率不断攀升。

关键词：结核分枝杆菌 tuberculosis 持留菌艾滋病体内外活性结核病依从性基因突变率

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