检索结果-内蒙古大学图书馆

结核病与胸部肿瘤 2021年第4期 322-326页

作者：杨瑞芳蒙建州李传友首都医科大学附属北京胸科医院北京市结核病胸部肿瘤研究所细菌免疫室北京101149 中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所国家新药(微生物)筛选实验室北京100050

结核病(tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)引起的慢性呼吸道传染病,是全球十大死因之一,也是由单一传染源导致死亡的主要原因,排名高于艾滋病。2019年因TB死亡的人数是120万人[1]。MTB具有特殊的生理特... 详细信息

结核病(tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)引起的慢性呼吸道传染病,是全球十大死因之一,也是由单一传染源导致死亡的主要原因,排名高于艾滋病。2019年因TB死亡的人数是120万人[1]。MTB具有特殊的生理特征,包括生长缓慢、自然状态下基因突变率较高以及用药后易形成持留菌株等,导致TB治疗用药周期较长。

关键词： tuberculosis 持留菌体内外活性艾滋病结核病抗结核化合物基因突变率生长缓慢

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小檗碱对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化的影响及机制研究

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药学学报 2019年第1期54卷 104-110页

作者：左璇罗金雀姜新海韩小婉王潇刘鹏李依宁王瑞海许艳妮司书毅中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所卫健委抗生素生物工程重点实验室国家新药(微生物)筛选实验室北京100050

本文旨在高脂喂养的ApoE^(-/-)小鼠模型中研究小檗碱(berberine, BBR)抗动脉粥样硬化的作用及可能的作用机制,为BBR的临床研究打下基础。将7周龄的雄性ApoE^(-/-)小鼠,随机分为对照组(普通饲料)、模型组、BBR组(BBR-L:50 mg·kg^(-1... 详细信息

本文旨在高脂喂养的ApoE^(-/-)小鼠模型中研究小檗碱(berberine, BBR)抗动脉粥样硬化的作用及可能的作用机制,为BBR的临床研究打下基础。将7周龄的雄性ApoE^(-/-)小鼠,随机分为对照组(普通饲料)、模型组、BBR组(BBR-L:50 mg·kg^(-1)、BBR-H:150 mg·kg^(-1))、阿托伐他汀组(5 mg·kg^(-1))。高脂饲料喂养ApoE^(-/-)小鼠12周建立实验性高脂血症动物模型,同时给予不同剂量的BBR。12周后,分离主动脉进行油红染色,统计各组ApoE^(-/-)小鼠主动脉斑块情况;采用悬液芯片试剂盒检测血清中炎症因子水平;应用试剂盒测定肝脏总胆固醇、甘油三酯和游离脂肪酸的含量, Western blot方法检测肝脏中炎症信号通路相关蛋白以及胆固醇转运相关基因的表达情况。所有动物实验均按照医药生物技术研究所实验室动物管理条例进行。结果表明,与模型组相比, BBR可以显著降低主动脉全长中的斑块面积,抑制血清中促炎性因子IL-1β等的表达,减少肝脏中总胆固醇等的聚积;机制研究结果显示, BBR能显著抑制MAPKs和NF-κB信号通路的活化,显著上调胆固醇代谢调节蛋白LDLR、ABCA1等的表达。总之,BBR能显著抑制高脂饮食喂养的ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块的形成,其作用机制与抑制炎症和降低胆固醇的聚积有关。

关键词：小檗碱动脉粥样硬化 ApoE^-/- 炎症胆固醇

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多肽UNAM的生物合成及其在DC-CIK细胞培养中的应用

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中国医药生物技术 2021年第4期16卷 316-321页

作者：史北辰冯茜韩强陈浩东孙越周国栋金媛媛张志斐杨兆勇华北理工大学药学院唐山063210 淄博市第四人民医院内科山东255067 淄博市第四人民医院肿瘤科山东255067 中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所代谢工程室北京100050

目的制备尿苷二磷酸-N-乙酰胞壁酸(UNAM),并研究其提升DC-CIK细胞识别及杀伤肿瘤细胞的作用。方法通过设计体外酶促反应合成多肽UNAM的路线,构建体外酶促反应体系,按照UNAM的路线图合成多肽产物,并采用制备液相纯化和收集最终产物。使... 详细信息

目的制备尿苷二磷酸-N-乙酰胞壁酸(UNAM),并研究其提升DC-CIK细胞识别及杀伤肿瘤细胞的作用。方法通过设计体外酶促反应合成多肽UNAM的路线,构建体外酶促反应体系,按照UNAM的路线图合成多肽产物,并采用制备液相纯化和收集最终产物。使用常规培养方法和添加UNAM的方法分别对DC-CIK细胞进行诱导培养,观察培养后的DC-CIK细胞对荷瘤小鼠的治疗效果。结果利用大肠杆菌异源表达系统,获得了UNAM生物合成途径中的NahK、GlmU、MurA和MurB 4个酶,并成功合成了分枝杆菌细胞壁肽聚糖生物合成中的中间产物UNAM。在动物实验中,UNAM-DC-CIK细胞对荷瘤小鼠的治疗效果比常规方法的DC-CIK细胞更好,其带瘤生存期更长(43 d),优于DC-CIK治疗组(38 d)和对照组(25 d)。结论UNAM可以提升DC-CIK细胞的增殖能力和对肿瘤的杀伤能力。

关键词：多肽UNAM 生物合成 DC-CIK细胞抗肿瘤

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基于β-catenin/Lef1相互作用为靶标的新型抗肿瘤药物高通量筛选模型的建立

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生物工程学报 2019年第4期35卷 707-717页

作者：陈云雨牛夏忆李妍刘晓平皖南医学院药学院新药筛选与评价中心安徽芜湖241002 中国科学院长春应用化学研究所化学生物学实验室吉林长春130022 中国医学科学院-北京协和医学院医药生物技术研究所国家新药(微生物)筛选中心北京100050

旨在以β-catenin/Lef1相互作用为靶标,建立基于ELISA原理的适用于靶向β-catenin/Lef1相互作用小分子抑制剂筛选的高通量筛选模型。利用DNA重组技术,将构建的β-catenin-pET-30a(+)重组质粒转化大肠杆菌Escherichia coli Rosetta (DE3)... 详细信息

旨在以β-catenin/Lef1相互作用为靶标,建立基于ELISA原理的适用于靶向β-catenin/Lef1相互作用小分子抑制剂筛选的高通量筛选模型。利用DNA重组技术,将构建的β-catenin-pET-30a(+)重组质粒转化大肠杆菌Escherichia coli Rosetta (DE3),经诱导培养后进行β-catenin原核表达。采用亲和层析方法分离纯化β-catenin后,以GSTPulldown实验进行生物学活性鉴定。利用ELISA原理建立β-catenin/GST-Lef1结合的分子模型,通过优选GST-Lef1最佳包被浓度和β-catenin最佳反应浓度,建立适用于靶向β-catenin/Lef1相互作用小分子抑制剂筛选的高通量筛选模型。SDS-PAGE和Western blotting实验证实β-catenin的原核表达。GST Pulldown实验证实纯化的β-catenin具有良好的生物学活性。通过对基于ELISA原理建立的β-catenin/GST-Lef1结合的分子模型优化,选用10μg/mL GST-Lef1和6μg/mLβ-catenin建立ELISA高通量筛选模型,其Z?因子为0.76。本研究成功建立了基于ELISA原理的β-catenin/GST-Lef1结合的分子模型,为靶向β-catenin/Lef1相互作用小分子抑制剂的高通量筛选奠定了基础。

关键词： Wnt抑制剂 β-catenin β-catenin/Lef1相互作用酶联免疫吸附实验高通量筛选

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UDP-3-O-(R-羟基十四酰)-N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰基酶的表达、纯化及与ACHN-975复合物的X-射线衍射分析

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中国医药生物技术 2019年第5期14卷 406-411页

作者：李丹阳樊帅金媛媛杨兆勇中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所微生物代谢工程研究室

目的以 UDP-3-O-(R-羟基十四酰)-N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰基酶(LpxC)-ACHN-975 晶体复合物结构为基础,研究小分子与靶蛋白的结合位点与方式,进而依据复合物结构设计该化合物,以获得活性强、毒性低的药物小分子。方法运用大肠杆菌表达系... 详细信息

目的以 UDP-3-O-(R-羟基十四酰)-N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰基酶(LpxC)-ACHN-975 晶体复合物结构为基础,研究小分子与靶蛋白的结合位点与方式,进而依据复合物结构设计该化合物,以获得活性强、毒性低的药物小分子。方法运用大肠杆菌表达系统对超嗜热菌(Aquifex aeolicus)来源的 AaLpxC 进行异源表达,采用 Zn^2+-NTA 亲和层析、Q-HP 强阴离子交换色谱和 Superose 12 分子排阻色谱对重组蛋白进行分离纯化,对 AaLpxC 进行结构生物学研究,采用蒸汽扩散-悬滴法进行结晶条件筛选以及优化。结果获得纯度在 90%以上的超嗜热菌来源的 AaLpxC,经过结晶条件的优化获得分辨率为 1.21 А(1 А= 1 × 10^-10 m)的 AaLpxC 与 ACHN-975 的复合物晶体的衍射数据,其晶胞参数为 a = 65.569 А,b = 65.569 А,c = 131.595 А,α= 90.000°,β= 90.000°,γ= 120.000°。结论 ACHN-975 与 AaLpxC 复合物晶体结构的获得有望对 ACHN-975 小分子结构优化及设计提供指导方向及重要依据。

关键词： LpxC ACHN-975 蛋白纯化结晶,X-射线衍射

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以莽草酸激酶为靶点的新型抗结核先导化合物的发现

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药学学报 2018年第6期53卷 878-886页

作者：王霞朱宁屿姜威司书毅中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所国家新药(微生物)筛选实验室北京100050

莽草酸激酶是莽草酸途径中的关键蛋白,对结核分枝杆菌的生存至关重要。本研究首先建立了结核分枝杆菌莽草酸激酶(Mycobacterium tuberculosis shikimate kinase,Mt SK)抑制剂筛选模型,然后与耻垢分枝杆菌表型筛选方法联用,对12万个化合... 详细信息

莽草酸激酶是莽草酸途径中的关键蛋白,对结核分枝杆菌的生存至关重要。本研究首先建立了结核分枝杆菌莽草酸激酶(Mycobacterium tuberculosis shikimate kinase,Mt SK)抑制剂筛选模型,然后与耻垢分枝杆菌表型筛选方法联用,对12万个化合物进行筛选,最终发现了1个对Mt SK蛋白有抑制作用且同时抑制耻垢分枝杆菌生长的化合物—IMB-T5297[(E)-3-(3-(3-氯-5-甲氧基-4-(丙-2-炔-1-基氧基)苯基)丙烯酰基)-6-甲基-2H-吡喃-2,4(3H)-二酮]。体外酶促反应抑制实验表明,化合物IMB-T5297对Mt SK的半数抑菌浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)为1.745μg·mL^(-1)。表面等离子共振(surface plasmon resonance,SPR)实验结果显示化合物IMB-T5297与Mt SK蛋白的亲和力KD值为2.151×10-5 mol·L-1。通过计算机软件模拟化合物与蛋白的分子对接模型,初步分析了化合物IMB-T5297与Mt SK的作用位点,并对其中预测的5个关键氨基酸位点进行了突变研究。3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]实验表明,化合物IMB-T5297对哺乳动物细胞的毒性很低。体外抗结核活性实验表明,化合物IMB-T5297对结核分枝杆菌标准株H37Rv最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)为49.723μg·mL^(-1)。综上所述,虽然化合物IMB-T5297的抗结核活性较弱,但对Mt SK抑制作用较强,通过结构改造可能成为新的抗结核先导化合物。

关键词：结核分枝杆菌莽草酸激酶药物筛选抗结核药物

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人类线粒体肌酸激酶的固定化及酶学性质研究

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中国医药生物技术 2019年第4期14卷 302-307页

作者：吕广新史北辰樊帅杨兆勇张志斐陈静华北理工大学基础医学院唐山063210 华北理工大学药学院唐山063210 中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所微生物代谢工程室北京100050

目的人源肌酸激酶uMtCK具有良好的催化肌酸生成磷酸肌酸的活性,开发固定化uMtCK酶法生成磷酸肌酸,实现其工业化应用价值。方法将异源表达的uMtCK固定在纳米磁性材料Fe3O4@Histidine-Ni上,制备固定化酶Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK,并进行... 详细信息

目的人源肌酸激酶uMtCK具有良好的催化肌酸生成磷酸肌酸的活性,开发固定化uMtCK酶法生成磷酸肌酸,实现其工业化应用价值。方法将异源表达的uMtCK固定在纳米磁性材料Fe3O4@Histidine-Ni上,制备固定化酶Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK,并进行催化反应。与游离酶uMtCK比对酶学性质和动力学参数,测定固定化酶Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK的重复使用次数。结果与游离酶uMtCK相比,固定化酶Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK的最适反应温度提高5℃,最适pH降低0.5个单位,在50℃、pH7.5下孵育2h,残余酶活为51%,而游离酶仅为27%;uMtCK的KmCr为10.7mmol/L,为Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK的1.1倍;Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK的kcat/KmCr值是5.3L/(mmols),是uMtCK的1.3倍;Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK在经历9次循环使用后,活力还能保持50%以上,显示了良好的稳定性和重复使用性。结论与uMtCK相比,Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK具有良好的热稳定性和重复使用性,具有一定的工业化价值。

关键词：酶类,固相肌酸激酶磷酸肌酸

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靶向肝X受体的抗动脉粥样硬化药物研究进展

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中国动脉硬化杂志 2019年第3期27卷 254-263页

作者：付育李霓河北科技大学生物科学与工程学院河北省石家庄市050018 中国医学科学院北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室北京市100050 中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所国家新药微生物筛选实验室北京市100050

肝X受体(LXR)是机体胆固醇稳态维持的重要调控因子,通过调控下游靶基因表达,参与调节各组织中的胆固醇代谢。LXR激动剂能够促进胆固醇逆向转运,发挥抗动脉粥样硬化作用,具有潜在治疗心血管疾病的作用。本文围绕近年来新型LXR激动剂,从... 详细信息

肝X受体(LXR)是机体胆固醇稳态维持的重要调控因子,通过调控下游靶基因表达,参与调节各组织中的胆固醇代谢。LXR激动剂能够促进胆固醇逆向转运,发挥抗动脉粥样硬化作用,具有潜在治疗心血管疾病的作用。本文围绕近年来新型LXR激动剂,从不同来源、特点和作用机制等角度对其发挥抗动脉粥样硬化作用进行综述。

关键词：肝X受体激动剂动脉粥样硬化胆固醇代谢

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Plk1 PBD蛋白原核表达、分离纯化与活性鉴定

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重庆医科大学学报 2018年第11期43卷 1453-1457页

作者：陈云雨刘刚张晶刘晓平皖南医学院药学院新药筛选与评价中心芜湖241002 中国医学科学院-北京协和医学院医药生物技术研究所国家新药(微生物)筛选中心北京100050

目的:原核表达保罗样激酶1底物结合域(Polo-like kinase 1 Polo-box domain,Plk1 PBD)蛋白,经分离纯化后进行生物学活性鉴定。方法:以HeLa cDNA为模板经PCR反应扩增Plk1 PBD基因,利用DNA重组技术与pET-28a载体连接构建重组质粒。将重组... 详细信息

目的:原核表达保罗样激酶1底物结合域(Polo-like kinase 1 Polo-box domain,Plk1 PBD)蛋白,经分离纯化后进行生物学活性鉴定。方法:以HeLa cDNA为模板经PCR反应扩增Plk1 PBD基因,利用DNA重组技术与pET-28a载体连接构建重组质粒。将重组质粒转化到*** Rosetta(DE3),经诱导培养后进行Plk1 PBD蛋白原核表达。采用亲和层析方法分离纯化Plk1PBD蛋白后,以酶联免疫吸附测定实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和荧光偏振实验(fluorescence polarization,FP)进行生物学活性鉴定。结果:测序与重组质粒酶切结果表明,成功构建了pET-28a-Plk1 PBD原核表达质粒。SDS-PAGE电泳和Western blot实验证实了Plk1 PBD蛋白的原核表达。ELISA实验和FP实验表明Plk1 PBD蛋白具有良好的生物学活性。结论:成功进行了Plk1 PBD蛋白的原核表达、分离纯化与活性鉴定,为其生物学功能研究及以Plk1 PBD蛋白为靶标的新型抗肿瘤药物发现奠定了基础。

关键词： Plk1 PBD蛋白原核表达亲和层析荧光偏振

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海洋链霉菌IMB3-202产生的吲哚咔唑生物碱

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中国医药生物技术 2018年第2期13卷 137-144页

作者：王冕郝晓萌李娇胡媛媛关艳王以光甘茂罗肖春玲中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所国家新药微生物筛选实验室北京100050

目的分离鉴定海洋链霉菌IMB3-202产生的抗菌和抗肿瘤活性产物。方法利用Anti SMASH对菌株基因组进行生物信息学分析;运用多种色谱手段分离纯化IMB3-202的活性产物;通过波谱学方法鉴定化合物的化学结构;采用微量肉汤稀释法和MTT法分别测... 详细信息

目的分离鉴定海洋链霉菌IMB3-202产生的抗菌和抗肿瘤活性产物。方法利用Anti SMASH对菌株基因组进行生物信息学分析;运用多种色谱手段分离纯化IMB3-202的活性产物;通过波谱学方法鉴定化合物的化学结构;采用微量肉汤稀释法和MTT法分别测定化合物的抗菌和细胞毒活性。结果菌株IMB3-202基因组含有一条吲哚咔唑类生物合成基因簇。通过发酵条件优化,从中分离鉴定了4个吲哚咔唑类化合物,结构分别确定为星形孢菌素、3'-O-去甲基星形孢菌素、holyrine A和K252c。星形孢菌素、3'-O-去甲基星形孢菌素和holyrine A对HeLa细胞、HCT116和MCF-7等肿瘤细胞具有很强的抑制活性,IC_(50)值为0.75~1192.8 nmol/L。星形孢菌素对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌显示出较弱的抗菌活性,最低抑菌浓度值为128μg/ml。结论通过基因组序列分析,可以在基因水平上预测产物结构,快速识别特定类型产物。

关键词：海洋放线菌吲哚咔唑星形孢菌素基因组分析细胞毒活性

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