检索结果-内蒙古大学图书馆

塔克拉玛干沙生植物来源放线菌抗铜绿假单胞菌活性的筛选及菌株38-7L-1活性产物的研究

中国抗生素杂志 2015年第2期40卷 81-87,115页

作者：陈川刘佳萌蒋忠科李小俊刘少伟庹利戴素娟杨桂柳王飞飞黄大林姜明国孙承航中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所北京100050 河北北方学院医学检验学院张家口075000 广西民族大学海洋与生物技术学院广西高校微生物与植物资源利用重点实验室南宁530008 桂林医学院桂林541004

目的筛选来自塔克拉玛干沙漠沙生植物对铜绿假单胞菌具有抑制活性的内生放线菌菌株,对拟诺卡菌属菌株38-7L-1发酵液中活性化合物进行分析预测、分离纯化和结构验证。方法采用琼脂平板法进行抗菌活性筛选;基于16S r RNA基因序列对菌株38-... 详细信息

目的筛选来自塔克拉玛干沙漠沙生植物对铜绿假单胞菌具有抑制活性的内生放线菌菌株,对拟诺卡菌属菌株38-7L-1发酵液中活性化合物进行分析预测、分离纯化和结构验证。方法采用琼脂平板法进行抗菌活性筛选;基于16S r RNA基因序列对菌株38-7L-1进行初步分类鉴定;基于菌株38-7L-1 PKS I基因的KS域序列分析结果 ,结合活性峰的液-质联用数据,比对微生物天然产物数据库,预测活性化合物201的结构;通过色谱方法纯化化合物201;结合光谱数据分析及文献比对,确定和验证化合物201的结构。结果从81株沙生植物内生放线菌中获得7株活性菌株,包括链霉菌属菌株4株、考克菌属菌株1株、多形孢菌属菌株1株和拟诺卡菌属菌株1株。其中菌株38-7L-1活性最强并具有I型聚酮合酶基因,16S r RNA基因序列分析表明该菌株与Nocardiopsis alba DSM 43377T(X97883)的相似率为100%。菌株3 8-7L-1抗铜绿假单胞菌活性次级代谢产物,化合物201为十六元大环内酯类化合物,蔷薇霉素。结论首次从拟诺卡菌中分离到常见于小单孢菌的蔷薇霉素,多策略组合对次级代谢产物结构预测具有指导意义。

关键词：塔克拉玛干沙漠植物内生放线菌铜绿假单胞菌拟诺卡菌属蔷薇霉素

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BMP2表达上调剂E40071体外抗骨质疏松活性研究

BMP2表达上调剂E40071体外抗骨质疏松活性研究

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2015年中国药学大会暨第十五届中国药师周

作者：韩小婉宫世强李雪虹贺晓波姜威司书毅中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所国家新药(微生物)筛选实验室

骨形态发生蛋白Ⅱ(Bone morphogenetic protein 2, BMP2)在骨发育与重建中具有重要作用,本研究利用前期已构建的BMP2表达上调剂高通量筛选模型对20000个化合物进行了筛选,得到阳性化合物E40071[2-(4-(5-甲基-3-苯基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-... 详细信息

骨形态发生蛋白Ⅱ(Bone morphogenetic protein 2, BMP2)在骨发育与重建中具有重要作用,本研究利用前期已构建的BMP2表达上调剂高通量筛选模型对20000个化合物进行了筛选,得到阳性化合物E40071[2-(4-(5-甲基-3-苯基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)哌嗪-1-基)乙-1-醇],其EC50值为2.73μmol·L-1。体外活性研究表明,E40071能上调BMP2及其下游特异性转录因子Runx2、Osx的mRNA的表达,并通过促进Smad1/5/8蛋白磷酸化,上调Runx2蛋白的表达;对成骨细胞碱性磷酸酶活性具有一定的上调作用;茜素红染色结果表明,E40071能够促进成骨细胞钙化。进一步研究发现,E40071能够明显抑制RANKL诱导下小鼠巨噬细胞Raw264.7分化为破骨细胞,并降低破骨细胞分化标志MMP9和NFATc1蛋白的表达水平。研究结果表明,E40071可促进成骨细胞骨形成活性并抑制破骨细胞的分化。

关键词： 2-(4-(5-甲基-3-苯基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)哌嗪-1-基)乙-1-醇骨形态发生蛋白Ⅱ 骨质疏松成骨分化破骨分化

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链霉菌CPCC 203702中抗结核分枝杆菌活性次级代谢产物的分离与鉴定

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中国医药生物技术 2015年第4期10卷 351-355页

作者：张新明张德武庞旭徐建张丽蓉魏玉珍刘红宇余利岩中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所中国药学微生物菌种保藏管理中心北京100050

目的研究链霉菌CPCC 203702中的抗结核分枝杆菌活性次级代谢产物。方法发酵液离心后,上清液经乙酸乙酯萃取、正相硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和半制备HPLC等方法进行以抗耻垢分枝杆菌活性为导向的活性化合物分离纯化,通过质... 详细信息

目的研究链霉菌CPCC 203702中的抗结核分枝杆菌活性次级代谢产物。方法发酵液离心后,上清液经乙酸乙酯萃取、正相硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和半制备HPLC等方法进行以抗耻垢分枝杆菌活性为导向的活性化合物分离纯化,通过质谱和核磁共振波谱技术并结合文献数据进行化合物结构鉴定;分别采用平板纸片法和阿尔玛蓝法检测目的化合物的抗耻垢分枝杆菌以及抗结核分枝杆菌活性。结果从链霉菌CPCC 203702发酵液中分离到1个具有显著的抗结核分枝杆菌活性的伯尔尼霉素类化合物伯尔尼霉素C,其抗结核分枝杆菌MIC为2μg/ml;完成其核磁数据的完整归属。结论首次报道了伯尔尼霉素类抗生素具有显著的抗结核分枝杆菌活性,丰富了硫肽类抗生素的活性研究,也为抗结核药物的发现提供一个新的视角。

关键词：链霉菌属抗生素类,抗结核伯尔尼霉素C

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北仑河红树林内生放线菌分离、鉴定及活性研究

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农业生物技术学报 2015年第7期23卷 894-904页

作者：杨桂柳杨立芳姜明国吴家法甘光华庹利孙承航广西民族大学海洋与生物技术学院/广西高校微生物与植物资源利用重点实验室广西民族大学化学化工学院/广西高校食品安全与药物分析化学重点实验室/广西林产化学与工程重点实验室中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所

放线菌是天然抗生素的重要来源,是寻找天然抗感染活性产物的出发菌。为了分离广西壮族自治区北仑河红树植物内生放线菌,检测其抗菌活性及初步确定活性菌株的分类地位,本研究采集5种红树植物共15份样品,用14种液体培养基富集培养4周后,... 详细信息

放线菌是天然抗生素的重要来源,是寻找天然抗感染活性产物的出发菌。为了分离广西壮族自治区北仑河红树植物内生放线菌,检测其抗菌活性及初步确定活性菌株的分类地位,本研究采集5种红树植物共15份样品,用14种液体培养基富集培养4周后,涂布于相应固体培养基进行分离纯化;以6种细菌和20株白色念珠菌(Candida albicans)为指示菌,采用点植法和滤纸片法对分离到的菌株进行抗菌活性检测;选取其中有抗菌活性的菌株进行16S r RNA基因测序,在属水平初步确定其分类地位。结果表明,共分离到菌株200株,其中从白骨壤(Avicennia marina)、秋茄(Kandelia candel)、红海榄(Rhizophora stylosa)、苦郎树(Clerodendrum inerme)和海漆(Excoecaria agallocha)中分别获得62、43、38、29和28株。根据培养和形态学特征初步剔除重复后得到106株,其中活性菌株52株,阳性率为49.1%,包括21株链霉菌属(Streptomyces)、26株拟诺卡氏菌属(Nocardiopsis)、2株假诺卡氏菌属(Pseudonocardia)、2株壤球菌属(Agrococcus)和1株栖白蚁菌属(Isoptericola)。其中菌株UMBR 1016和UMBR 1034与已知菌株Nocardiopsis alba DSM 43377T的相似度分别为98.27%和98.37%;菌株UMBR 1008与Nocardiopsis flavescens SA6T的相似度为98.36%,菌株UMBR 1028与Streptomyces pratensis ch24T的相似度为98.49%,这4株内生放线菌的相似度都低于98.6%,可能为拟诺卡氏菌属和链霉菌属的潜在新种。有38株对至少一株细菌有抑菌作用,35株对至少一株白色念珠菌有抑菌作用,阳性率分别达到35.8%和33.0%。广西北仑河红树植物内生放线菌资源丰富,抗菌活性较高,值得深入研究。研究结果将促进我国红树林植物资源的保护与红树植物内生放线菌药用资源的深入开发。

关键词：红树植物内生放线菌分离抗菌活性

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化合物IMB-1680体外抗动脉粥样硬化的活性研究

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药学学报 2014年第5期49卷 602-607页

作者：冯婷婷李永臻李霓刘畅王潇许艳妮司书毅中国医学科学院、北京协和医学院医药生物技术研究所国家新药(微生物)筛选实验室北京100050

探讨化合物IMB-1680的体外抗动脉粥样硬化活性。利用已构建的高表达人CD36细胞株Sf9[hCD36]和CHO[hCD36]测定量效曲线,荧光显微照相法和流式细胞实验检测细胞对变性低密度脂蛋白(modified low density lipoprotein,mLDL)的摄取,巨噬细... 详细信息

探讨化合物IMB-1680的体外抗动脉粥样硬化活性。利用已构建的高表达人CD36细胞株Sf9[hCD36]和CHO[hCD36]测定量效曲线,荧光显微照相法和流式细胞实验检测细胞对变性低密度脂蛋白(modified low density lipoprotein,mLDL)的摄取,巨噬细胞泡沫化实验检测细胞内脂质积聚。结果表明:IMB-1680在Sf9[hCD36]、CHO[hCD36]模型上IC50值分别为2.80及8.79μmol·L-1;IMB-1680能显著抑制细胞摄取DiI-AcLDL,同时能显著减少巨噬细胞RAW264.7摄取脂质。本研究为开发新型抗动脉粥样硬化药物奠定了基础。

关键词： IMB-1680 CD36 拮抗剂动脉粥样硬化高通量筛选

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广西红树林根际土壤放线菌的原位培养分离及其活性筛选

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海洋学报 2015年第2期37卷 55-64页

作者：姜明国甘光华杨立芳李西妮杨桂柳庹利孙承航黄玲蓝金枝广西红树林保护与利用重点实验室广西北海536000 广西民族大学广西高校微生物与植物资源利用重点实验室广西南宁530008 广西民族大学化学化工学院广西林产化学与工程重点实验室广西南宁530008 中国医学科学院/北京协和医学院医药生物技术研究所北京100050

为了发掘广西红树林根际土壤的放线菌资源,本文利用原位培养装置,埋于根际土壤中俘获放线菌,30d后取回实验室,采用平板涂布法对4个地点的原位培养样品于15种培养基上进行分离纯化;对分离株基于16SrRNA基因序列进行系统发育分析;进一步... 详细信息

为了发掘广西红树林根际土壤的放线菌资源,本文利用原位培养装置,埋于根际土壤中俘获放线菌,30d后取回实验室,采用平板涂布法对4个地点的原位培养样品于15种培养基上进行分离纯化;对分离株基于16SrRNA基因序列进行系统发育分析;进一步进行抗菌活性和产酶活性检测。共分离得到113株放线菌。对其中33株放线菌进行测序,结果表明20株属于链霉菌属,11株属于拟诺卡氏菌属,1株属于伦兹氏菌属,1株与拟诺卡氏菌属相似性最高为90%,很可能属于放线菌一个新属。抗菌实验结果显示其中有7株、4株、18株、6株、10株、3株实验菌株分别对大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、普通变形杆菌、乙型溶血性链球菌和肺炎克雷伯氏菌具有抑制作用;有55株、62株、24株、72株的实验菌株分别具有纤维素酶活性、淀粉酶活性、胶原蛋白酶活性、酯酶活性。原位培养可以丰富对广西红树林根际土壤的认识,分离到了新种甚至可能是新属的放线菌,分离得到的部分放线菌菌株具有较高生物活性,为后续工作提供了良好的实验材料。

关键词：原位培养红树林根际土壤放线菌生物活性

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双特异性融合蛋白EGF-LDP-IGF-AE的构建及抗非小细胞肺癌活性研究

双特异性融合蛋白EGF-LDP-IGF-AE的构建及抗非小细胞肺癌活性研究

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2015医学前沿论坛暨第十四届全国肿瘤药理与化疗学术会议

作者：郭晓芳朱小飞钟根深曹海英苗庆芳新乡医学院基础医学院微生物学教研室新乡医学院医学检验学院临床免疫学教研室新乡医学院第一附属医院中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所肿瘤室

目的表皮生长因子受体（EGFR）和胰岛素样生长因子受体I（IGF-IR）在人非小细胞肺癌中呈过表达状态,且二者之间可发生多种形式的相互作用,是非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）治疗的理想靶点;力达霉素（LDM）是一种强... 详细信息

目的表皮生长因子受体（EGFR）和胰岛素样生长因子受体I（IGF-IR）在人非小细胞肺癌中呈过表达状态,且二者之间可发生多种形式的相互作用,是非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）治疗的理想靶点;力达霉素（LDM）是一种强效的抗肿瘤抗生素,它与抗体或配体的偶联物显示了良好的抗肿瘤疗效。本研究的目的是构建一种以EGFR和IGF-1R为靶点的双特异性融合蛋白,并探讨其对NSCLC的体内外抗肿瘤活性。方法将EGFR和IGF-1R的配体EGF和IGF-1基因与LDM辅基蛋白基因LDP通过拼接PCR进行连接,并克隆至pET30a得到重组表达载体pET-egf-ldp-igf,将其转化到大肠杆菌中进行诱导表达,获得融合蛋白EGF-LDP-IGF。采用ELISA检测融合蛋白与EGFR和IGF-1R的亲和活性。融合蛋白与LDM发色团分子（AE）体外组装,得到强化融合蛋白EGF-LDP-IGF-AE。采用MTT法检测强化融合蛋白EGF-LDP-IGF-AE对NSCLC细胞的体外杀伤活性,并与两种单靶向性强化融合蛋白EGF-LDP-AE和LDP-IGF-AE的体外细胞毒活性进行比较。PI染色法检测EGF-LDP-IGF-AE对细胞周期的影响以及Annexin V-FITC/PI双染法检测EGF-LDP-IGF-AE蛋白对细胞凋亡的诱导活性。结果重组载体pET-egf-ldp-igf转化到大肠杆菌BL21（DE3）中进行诱导表达,SDS-PAGE结果显示EGF-LDP-IGF以包涵体形式存在于大肠杆菌胞质中。提取包涵体组分采用Ni亲和层析技术对融合蛋白进行纯化,经复性后获得有活性的EGF-LDP-IGF蛋白。经ELISA检测EGF-LDP-IGF蛋白与EGFR和IGF-1R均有很高的亲和活性。将AE分子与EGF-LDP-IGF体外组装后,HPLC检测在350nm处出现了特定的吸收峰,表明分子组装成功获得了强化融合蛋白EGF-LDP-IGF-AE。MTT试验显示EGF-LDP-IGF-AE对A549、H520、H460和H1299细胞的IC值分别为:3.15×10mol/L、7.51×10mol/L、3.38×10mol/L和2.51×10mol/L,其杀伤活性显著高于LDM和两种单靶向性的强化融合蛋白EGF-LDP-AE和LDP-IGF-AE。细胞周期检测显示,EGF-LDP-IGF-AE导致细胞显著的G2/M期阻滞。细胞凋亡结果显示,EGF-LDP-IGF-AE在O.1nM、0.5nM、1nM和2nM的浓度下,A549细胞的凋亡比率分别为13.35%±1.39%、15.39%±0.81%、22.39%±3.35%、55.95%±9.26%,与对照组相比均具有显著性差异。结论本研究以EGFR和IGF-IR的天然配体EGF和IGF作为导向载体,以LDM作为弹头药物,制备了一种兼具双靶向、小型化和高效化的新型融合蛋白EGF-LDP-IGF-AE。该融合蛋白可高亲和性地与EGFR和IGF-1R结合,对体外培养的NSCLC细胞具有强烈杀伤作用,并可显著诱导NSCLC细胞发生周期阻滞与细胞凋亡。

关键词： EGFR IGF-1R 双特异性融合蛋白 NSCLC

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以胰岛新生相关蛋白启动子为靶点的基因表达上调剂筛选模型的建立与初步应用

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中国医药生物技术 2014年第5期9卷 335-340页

作者：张许萌王林林任浩何琪杨陈汝贤解云英中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所微生物化学室北京100050

目的建立以胰岛新生相关蛋白启动子为靶点的高通量筛选模型,用于胰岛新生相关蛋白基因表达上调剂的筛选。方法以叙利亚金黄地鼠基因组DNA为模板扩增胰岛新生相关蛋白核心启动子序列,克隆至pGL4.17质粒载体构建重组质粒。采用脂质体介导... 详细信息

目的建立以胰岛新生相关蛋白启动子为靶点的高通量筛选模型,用于胰岛新生相关蛋白基因表达上调剂的筛选。方法以叙利亚金黄地鼠基因组DNA为模板扩增胰岛新生相关蛋白核心启动子序列,克隆至pGL4.17质粒载体构建重组质粒。采用脂质体介导的方法将重组质粒和内参质粒pRL-TK共转染金黄地鼠胰岛β细胞HIT-T15,双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶的表达活性。对瞬时转染条件进行优化,以豆蔻酸-佛波醇-乙酸酯作为阳性对照来评价模型的有效性,并利用该细胞模型对本研究所的化合物库进行筛选。结果构建了重组荧光素酶报告基因质粒pGL4.17-INGAP,并成功转染HIT-T15细胞株。对模型进行优化后,应用阳性对照对其进行评价,Z'因子为0.57,适用于进行高通量筛选。用该模型筛选了本所化合物库,其中白藜芦醇显示出较好的上调作用,EC50为1.6μg/ml。结论成功建立了以胰岛新生相关蛋白启动子为靶点的基因表达上调剂筛选模型。

关键词：转录启动子药物评价,临床前胰岛新生相关蛋白

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以丙氨酸消旋酶为靶点的高通量抗结核药物筛选模型的建立及应用

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中国医药生物技术 2014年第2期9卷 116-123页

作者：周爽蒙建洲关艳胡辛欣司书毅肖春玲中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所国家新药(微生物)筛选实验室北京100050

目的建立以结核分枝杆菌丙氨酸消旋酶为靶点的新型高通量抗结核药物筛选模型，筛选丙氨酸消旋酶的抑制剂，获得以丙氨酸消旋酶为靶点的新型抗结核药物先导物。方法以结核分枝杆菌 H37Rv 基因组为模板，pET28a表达质粒为载体，将 alr ... 详细信息

目的建立以结核分枝杆菌丙氨酸消旋酶为靶点的新型高通量抗结核药物筛选模型，筛选丙氨酸消旋酶的抑制剂，获得以丙氨酸消旋酶为靶点的新型抗结核药物先导物。方法以结核分枝杆菌 H37Rv 基因组为模板，pET28a表达质粒为载体，将 alr 基因克隆至 pET28a ，构建pET28a：alr 重组表达质粒，表达并纯化得到重组结核分枝杆菌丙氨酸消旋酶；通过测定反应产物 NADH 在340 nm处光密度变化速率，检测酶反应活性，构建并优化该酶抑制剂的高通量筛选模型；应用该模型对化合物库进行筛选；测定活性化合物 IC50以及对结核分枝杆菌的 MIC。结果成功构建了结核分枝杆菌 alr 基因的表达载体；得到了纯度较高的重组丙氨酸消旋酶，测得该酶的比活力为13.53 kU/mg；所建立的丙氨酸消旋酶高通量筛选模型稳定性高，符合高通量筛选的要求；通过对70000个化合物进行筛选，得到了5个活性较高的化合物，其中，IMB-XZ5对结核分枝杆菌的 MIC 为4-8μg/ml，且对结核分枝杆菌的作用具有较高的特异性。结论建立了稳定性好、灵敏度较高的结核分枝杆菌丙氨酸消旋酶抑制剂高通量筛选模型，应用该模型筛选得到了具有较好抗结核活性的丙氨酸消旋酶抑制剂。

关键词：丙氨酸消旋酶抗结核药酶抑制剂高通量筛选

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以蛋白激酶A为靶点的抗结核药物高通量筛选模型的建立和应用

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中国医药生物技术 2014年第6期9卷 417-425页

作者：罗睿徐建魏玉珍李海龙刘红宇苏静赵莉莉张玉琴余利岩中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所药用微生物菌种保藏管理中心北京100050

目的建立以蛋白激酶A为靶点的抗结核药物高通量筛选模型,应用该模型筛选具有特异性酶活抑制活性的微生物发酵液粗提物样品。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,扩增目的基因片段pkn A,构建表达载体p ET43.1a-pkn A,在大肠杆菌中... 详细信息

目的建立以蛋白激酶A为靶点的抗结核药物高通量筛选模型,应用该模型筛选具有特异性酶活抑制活性的微生物发酵液粗提物样品。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,扩增目的基因片段pkn A,构建表达载体p ET43.1a-pkn A,在大肠杆菌中克隆表达了重组MTB Pkn A蛋白;采用三步级联的反应方法 ,利用还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸到氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸这一反应最大吸光值波长的变化,建立和优化蛋白激酶A抑制剂高通量药物筛选模型。结果成功构建了表达载体p ET43.1a-pkn A;建立了稳定灵敏,可用于靶向结核分枝杆菌蛋白激酶A的抗结核药物高通量筛选模型;利用该模型对4000个微生物发酵液粗提物样品进行筛选,最终得到21个抑制蛋白激酶A活性的阳性样品,阳性率0.53%;以耻垢分枝杆菌和海分枝杆菌为检定菌,平板纸片法检测阳性样品的抗分枝杆菌活性,然后对阳性样品的细胞毒性和酶活抑制特异性进行评价后,最终得到8个阳性样品,其中I10AA-02916、I09AA-02717、I09AB-02729、I08AB-00801这4个阳性样品酶活抑制特异性、抗菌活性均较好,且细胞毒性较低。结论建立了高稳定性的以蛋白激酶A为靶点的抗结核药物高通量筛选模型,应用该模型所得到的发酵液阳性样品值得进一步研究。

关键词：环 AMP 依赖性蛋白激酶类药物评价,临床前抗结核药高通量筛选

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