检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医药生物技术 2014年第2期9卷 95-102页

作者：杜郁贾晓健王丽王丽非姜华军杨帆司书毅杨媛洪斌中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所卫生部抗生素生物工程重点实验室北京100050 中国医学科学院国家新药(微生物)筛选实验室北京100050

目的筛选上调人载脂蛋白A-I(ApoA-I)基因表达的新型活性化合物,并在表达和功能水平对其作用进行研究。方法利用人ApoA-I基因表达上调剂筛选模型对化合物库进行筛选;对发现的活性化合物在ApoA-I启动子水平进行量效关系研究;利用实时荧光... 详细信息

目的筛选上调人载脂蛋白A-I(ApoA-I)基因表达的新型活性化合物,并在表达和功能水平对其作用进行研究。方法利用人ApoA-I基因表达上调剂筛选模型对化合物库进行筛选;对发现的活性化合物在ApoA-I启动子水平进行量效关系研究;利用实时荧光定量RT-PCR检测ApoA-I mRNA的表达水平;利用Western blot、ELISA和流式细胞技术检测ApoA-I的蛋白表达;利用胆固醇流出试验检测ApoA-I介导的巨噬细胞胆固醇外流的情况。结果从20 000样次化合物筛选中得到活性化合物5238B-69,在一定浓度范围内存在转录调控活性的量-效关系,当化合物浓度为0.30μg/ml时,上调ApoA-I表达活性达到最高值(408%),EC50为0.01μg/ml。5238B-69能显著上调HepG2细胞中ApoA-I mRNA的水平;同时,Western blot结果显示5238B-69能增加HepG2细胞ApoA-I蛋白的表达。ELISA结果显示,与对照相比,5238B-69作用48 h时,胞外ApoA-I水平增加了48%,流式细胞检测表明,5238B-69作用24 h后,胞内ApoA-I蛋白水平增加了21.4%。功能分析试验显示,5238B-69作用HepG2细胞上调生成的ApoA-I,能促进巨噬细胞RAW264.7内[3H]标记的胆固醇的流出。结论得到一个具有上调ApoA-I表达的活性化合物,在提高ApoA-I表达水平和生物学功能方面均有明显的效果。

关键词：载脂蛋白A-I 基因表达调控动脉粥样硬化转录水平

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西多福韦对人宫颈癌细胞CaSki内人乳头瘤病毒16抑制作用研究

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中国医药生物技术 2014年第5期9卷 347-352页

作者：韩芳陆巧妮徐力昆窦媛媛李玉环中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所生化室北京100050 中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071

目的从抗病毒角度探讨西多福韦对宫颈癌细胞CaSki内人乳头瘤病毒16(HPV16)的抑制作用及对细胞周期的影响。方法用MTT法检测西多福韦对细胞的毒性;用实时定量PCR法检测其对病毒E6、E7 mRNA水平的影响;用Western blot方法检测其对病毒蛋... 详细信息

目的从抗病毒角度探讨西多福韦对宫颈癌细胞CaSki内人乳头瘤病毒16(HPV16)的抑制作用及对细胞周期的影响。方法用MTT法检测西多福韦对细胞的毒性;用实时定量PCR法检测其对病毒E6、E7 mRNA水平的影响;用Western blot方法检测其对病毒蛋白E6、E7和细胞抑癌蛋白p53、pRb表达水平的影响;用流式细胞法检测其对宫颈癌细胞周期的影响。结果西多福韦对宫颈癌细胞毒性较正常细胞大。可使HPV16阳性宫颈癌细胞CaSki内E6、E7 mRNA和蛋白水平降低,最大抑制率分别为(33.38±8.00)%、(28.32±2.73)%和98.92%、97.46%;可以使p53、pRb蛋白水平升高,最大浓度时可以上调12.06和3.53倍;对HPV16阴性宫颈癌细胞C-33A p53蛋白表达无影响,但可提高pRb蛋白水平;可导致CaSki和C-33A细胞发生S期阻滞,最高浓度组细胞相对对照组S期分别增加22.83%和67.64%。结论西多福韦可以在对细胞无毒的浓度下,抑制宫颈癌细胞内的HPV16,诱导宫颈癌细胞发生S期阻滞。

关键词：抗病毒药人乳头瘤病毒 16 宫颈肿瘤西多福韦

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新型尿苷肽类化合物Sansanmycin P的提取分离、结构鉴定及活性研究

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中国医药生物技术 2013年第4期8卷 264-268页

作者：王林林蔡强何宁姚恩泰陈汝贤许鸿章解云英中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所微生物化学室北京100050

目的从放线菌Streptomyces sp SS发酵液中分离新型活性尿苷肽类似物。方法发酵液经D4006大孔吸附树脂、DEAE-葡聚糖凝胶及制备液相分离纯化,获得单一化合物;根据UV、MS、MS/MS、1D和2D NMR确定化合物结构,并进行抗菌活性研究。结果分离... 详细信息

目的从放线菌Streptomyces sp SS发酵液中分离新型活性尿苷肽类似物。方法发酵液经D4006大孔吸附树脂、DEAE-葡聚糖凝胶及制备液相分离纯化,获得单一化合物;根据UV、MS、MS/MS、1D和2D NMR确定化合物结构,并进行抗菌活性研究。结果分离纯化得到1个N-末端含有1-甲基-6-羟基四氢异喹啉的尿苷肽类化合物Sansanmycin P。初步体外抗菌活性,抗铜绿假单胞菌MIC>32μg/ml,抗结核杆菌MIC>32μg/ml。结论 Sansanmycin P为全新结构Sansanmycins类似物,具有一定抗结核杆菌和铜绿假单胞菌活性。

关键词：抗生素类抗结核假单胞菌铜绿 Sansanmycin P

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人膜转运蛋白ABCA1及清道夫受体CLA-1表达上调剂的筛选和活性研究

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中国医药生物技术 2013年第3期8卷 161-165页

作者：许艳妮李永臻李霓刘畅冯婷婷司书毅中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所国家新药(微生物)筛选实验室北京100050

目的筛选上调人ATP结合盒转运体A1(ABCA1)和人清道夫受体(CLA-1)表达的新型活性化合物,为抗动脉粥样硬化药物提供先导化合物。方法应用本实验室已经建立的ABCA1和CLA-1表达上调剂的高通量筛选模型对20000个化合物进行筛选,从中获得能上... 详细信息

目的筛选上调人ATP结合盒转运体A1(ABCA1)和人清道夫受体(CLA-1)表达的新型活性化合物,为抗动脉粥样硬化药物提供先导化合物。方法应用本实验室已经建立的ABCA1和CLA-1表达上调剂的高通量筛选模型对20000个化合物进行筛选,从中获得能上调ABCA1和CLA-1表达的化合物,对其及结构类似物进行活性测定,并进行初步的构效关系研究。结果化合物5033171和5242411具有较好的上调ABCA1和CLA-1表达的活性,在ABCA1上调剂模型上的EC50分别为2.10和3.87μmol/L,在CLA-1上调剂模型上的EC50分别为1.37和1.57μmol/L。构效关系研究结果提示苯并噻唑的6位有长链烷基取代对增加活性有利。结论化合物5033171和5242411是活性很好的ABCA1和CLA-1上调剂。

关键词： ATP结合匣式转运子动脉粥样硬化高通量筛选

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应用人OPG表达上调剂高通量筛选模型筛选新型抗骨质疏松药物先导化合物

应用人OPG表达上调剂高通量筛选模型筛选新型抗骨质疏松药物先导...

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第十二届全国抗生素学术会议

作者：宫世强贺晓波韩小婉司书毅中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所国家新药(微生物)筛选实验室

背景骨质疏松是一种以骨量低下,骨微结构破坏,导致骨脆性增加,易发生骨折为特征的全身性代谢性骨病,严重影响着人们的健康和生活质量。药物治疗是骨质疏松治疗的最重要途径,但目前的抗骨质疏松药物大多成本较高,且有多种药物被证明存在... 详细信息

背景骨质疏松是一种以骨量低下,骨微结构破坏,导致骨脆性增加,易发生骨折为特征的全身性代谢性骨病,严重影响着人们的健康和生活质量。药物治疗是骨质疏松治疗的最重要途径,但目前的抗骨质疏松药物大多成本较高,且有多种药物被证明存在增加肿瘤或心血管疾病发生几率的风险。因此,开发高效、副作用小、低成本的新型抗骨质疏松药物势在必行。OPG是成骨细胞分泌的一种细胞因子,能够作为诱饵受体结合破骨细胞分化因子RANKL,在一定程度上抑制破骨细胞分化和活性,从而降低骨吸收速率,因此OPG是治疗骨质疏松的一个重要靶点。本实验室已经建立了人OPG表达上调剂的稳定转染模型细胞系,可用于新型抗骨质疏松药物的高通量筛选。目的筛选具有上调人OPG表达活性的新型化合物,为开发新型抗骨质疏松药物提供先导化合物。方法应用本实验室建立的人OPG表达上调剂高通量筛选模型对40 000个化合物进行了筛选,从中获得具有OPG上调活性的化合物,对其进行量效关系的测定,并利用western blot方法验证其中活性较好的两个化合物对成骨肉瘤细胞U2-OS和Saos-2的OPG蛋白表达及分泌的影响。结果获得具有OPG表达上调活性的化合物37个,其中最高上调活性为2.42倍,其EC为4.55μmol/L。化合物GO1-2和GO1-4在筛选模型上的上调倍数分别为1.91倍和1.54倍,EC分别为2.13μmol/L和2.70μmol/L。胞内及细胞培养上清的western blot结果表明,在0～5μmol/L,化合物GO1-2和GO1-4以剂量依赖的方式提高U2-OS和Saos-2细胞的OPG表达水平,且能够促进其向细胞外的分泌,化合物GO1-2较GO1-4效果更为明显。结论应用本实验室建立的人OPG表达上调剂高通量筛选模型能够筛选得到具有OPG表达上调活性的化合物,化合物GO1-2和GO1-4能够提高成骨肉瘤细胞的OPG表达及分泌水平,可以作为新犁抗骨质疏松药物的先导化合物进行进一步的研究和开发。

关键词： OPG 骨质疏松高通量筛选先导化合物

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提高可利霉素药代动力学研究中微生物法检测灵敏度的研究

提高可利霉素药代动力学研究中微生物法检测灵敏度的研究

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第十二届全国抗生素学术会议

作者：戴剑漉赵小峰赫卫清贾晓宇李慧宁王以光中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所微生物代谢工程室卫生部抗生素生物工程重点实验室沈阳同联集团有限公司中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所微生物代谢工程室卫生部抗生素生物工程重点实验室

目的为进行可利霉素（原名必特螺旋霉素-BT）药代动力学研究,研究影响微生物法检测敏感度的因素,以提高血浆中测定BT的灵敏度,为药代动力学研究中血药浓度的测定奠定基础。方法采用管碟法和纸片法,考察检定菌液浓度、培养基、缓冲液加N... 详细信息

目的为进行可利霉素（原名必特螺旋霉素-BT）药代动力学研究,研究影响微生物法检测敏感度的因素,以提高血浆中测定BT的灵敏度,为药代动力学研究中血药浓度的测定奠定基础。方法采用管碟法和纸片法,考察检定菌液浓度、培养基、缓冲液加NaCl、血浆等多种因素对检测灵敏度的影响,确定最适条件;建立测定人血浆中BT血药浓度的方法。结果以藤黄八叠球菌作检定菌,其菌浓为OD=0.3～1.0,采用检定培养基（3）制备单层检定平板,可以有效地提高BT检测灵敏度;从血浆中萃取BT,用纸片法制作标准曲线,其最低检测限度可达0.02μg/ml。结论通过研究,微生物法检测BT浓度灵敏度提高6倍,所建立的从血浆中萃取的纸片法,可用于BT药代动力学研究中血药浓度的微生物法检测。

关键词：可利霉素灵敏度抗生素药代动力学研究中微生物法测定

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提高可利霉素药代动力学研究中微生物法检测灵敏度的研究

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中国医药生物技术 2013年第6期8卷 420-424页

作者：戴剑漉赵小峰赫卫清贾晓宇李慧宁王以光中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所微生物代谢工程室/卫生部抗生素生物工程重点实验室北京100050 同联集团有限公司沈阳110042

目的研究影响可利霉素微生物法检测敏感度的因素,以提高血浆中测定可利霉素的灵敏度,为药代动力学研究中血药浓度的测定奠定基础。方法采用管碟法和纸片法,以抑菌圈大小为指标,考察检定菌液浓度,培养基配方,单、双层培养基检定平板,缓... 详细信息

目的研究影响可利霉素微生物法检测敏感度的因素,以提高血浆中测定可利霉素的灵敏度,为药代动力学研究中血药浓度的测定奠定基础。方法采用管碟法和纸片法,以抑菌圈大小为指标,考察检定菌液浓度,培养基配方,单、双层培养基检定平板,缓冲液加NaCl,胎牛血清,血浆等多种因素对检测灵敏度的影响;采用有机溶剂从人血浆中萃取可利霉素等方法测定血药浓度。结果检定菌浓度、培养基配方、检定平板厚度对检测灵敏度影响显著,含NaCl的缓冲液有利于提高检测灵敏度,人血浆对检测灵敏度有一定影响。以藤黄八叠球菌作检定菌,其菌浓为OD600=0.3~1.0,采用含牛肉蛋白胨0.5%,牛肉浸膏0.25%检定培养基制备单层检定平板,可以有效提高可利霉素检测灵敏度6倍;从血浆中萃取可利霉素,用纸片法进行测定,其最低检测限度可达0.02μg/ml。结论所建立的从血浆中萃取可利霉素的纸片法显著提高了微生物法检测血浆中可利霉素的灵敏度,可用于可利霉素药代动力学研究中血药浓度的微生物法检测。

关键词：微生物敏感性试验药代动力学可利霉素

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红景天苷调节人成骨肉瘤细胞MG63成骨分化及相关信号的研究

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中国医药生物技术 2013年第6期8卷 414-419页

作者：占跃晨张立鹏毛根祥贺晓波司书毅王真中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所生化室北京100050 煤炭总医院血液科北京100028 浙江省老年医学研究所杭州310013 国家新药(微生物)筛选实验室北京100050

目的探讨红景天苷对人成骨肉瘤细胞株MG63诱导成骨分化作用及相关分子机制。方法 MTT法测定不同浓度红景天苷对MG63细胞增殖活力的影响;PNPP法检测经红景天苷处理后成骨性标志物——碱性磷酸酶活性的变化;RT-PCR检测细胞内bmp2 mRNA水... 详细信息

目的探讨红景天苷对人成骨肉瘤细胞株MG63诱导成骨分化作用及相关分子机制。方法 MTT法测定不同浓度红景天苷对MG63细胞增殖活力的影响;PNPP法检测经红景天苷处理后成骨性标志物——碱性磷酸酶活性的变化;RT-PCR检测细胞内bmp2 mRNA水平的变化;Western blot及流式细胞术检测给药前后细胞内BMP2、IκBα蛋白表达水平的变化。结果红景天苷能显著促进MG63细胞的增殖并上调其ALP活性,其对ALP活性的上调呈现一定的时间和剂量依赖性,其中在5μmol/L、48 h条件下表现出最佳效果,证明红景天苷具有促成骨分化作用。此外,红景天苷能显著上调细胞内bmp2 mRNA及蛋白表达水平,并能时间依赖性激活IκBα,抑制NF-κB活性。结论红景天苷能促进人成骨肉瘤细胞成骨分化,具有潜在的骨代谢调节作用,其作用机制可能与抑制NF-κB活性并激活BMP2信号通路有关。

关键词：碱性磷酸酶骨形态发生蛋白质类 NF-κB 红景天苷

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链霉菌I06A-00625发酵产物的提取分离、结构鉴定及活性研究

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中国医药生物技术 2012年第2期7卷 116-119页

作者：贾贝何宁赵莉莉余利岩蒋忠科姜蓉中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所微生物化学室北京100050

目的从链霉菌I06A-00625(cpcc201504)的代谢产物中分离得到具有抑菌活性的抗生素,并进行结构鉴定。方法通过大孔吸附树脂X-5、葡聚糖凝胶LH-20和HPLC色谱对发酵液中活性成分进行分离纯化;根据紫外、高分辨质谱并结合1H-NMR和13C-NMR数... 详细信息

目的从链霉菌I06A-00625(cpcc201504)的代谢产物中分离得到具有抑菌活性的抗生素,并进行结构鉴定。方法通过大孔吸附树脂X-5、葡聚糖凝胶LH-20和HPLC色谱对发酵液中活性成分进行分离纯化;根据紫外、高分辨质谱并结合1H-NMR和13C-NMR数据确定化合物结构,并进行抗菌活性研究。结果分离纯化得到6个单一组分,分别为化合物I06A625A、206A和206B及3个四烯大环内酯类抗生素Tetramycin A、Tetramycin B和Tetrin A。其中206A为首次从天然产物中分离得到。I06A625A具有抗铜绿色假单胞菌活性;Tetramycin A、Tetramycin B和Tetrin A具有抗真菌活性。结论链霉菌I06A-00625可产生抗铜绿色假单胞菌的核苷类化合物及抗真菌的四烯类化合物等多种活性成分。

关键词：链霉菌属抗生素类抗真菌发酵

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以肽脱甲酰基酶为靶点的抗结核药物高通量筛选模型的建立和应用

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中国医药生物技术 2012年第2期7卷 110-115页

作者：张丽蓉赵莉莉魏玉珍李秋萍王莉宁余利岩中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所药用微生物菌种保藏中心北京100050

目的建立以肽脱甲酰基酶(PDF)为靶点的抗结核药物高通量筛选模型,应用该模型筛选得到活性微生物发酵液粗提物样品。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,扩增肽脱甲酰基酶的基因片段def,构建表达载体pET-28a-def,表达并纯化结核分枝杆... 详细信息

目的建立以肽脱甲酰基酶(PDF)为靶点的抗结核药物高通量筛选模型,应用该模型筛选得到活性微生物发酵液粗提物样品。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,扩增肽脱甲酰基酶的基因片段def,构建表达载体pET-28a-def,表达并纯化结核分枝杆菌PDF酶;基于PDF水解三肽底物for-Met-Ala-Ser释放出游离NH2,而游离NH2可与荧光胺反应产生荧光的原理,利用测定所产生荧光值的方法,建立高通量药物筛选模型;使用该模型对12400个微生物发酵液粗提物样品进行筛选,同时以耻垢分枝杆菌为检定菌,平板纸片法检测样品的抗菌活性,并检测所得阳性样品的细胞毒性。结果成功构建了表达载体pET-28a-def;所建立的模型稳定可行,可用于以肽脱甲酰基酶为靶点的抗结核药物的高通量筛选;用该模型对12400个微生物发酵液粗提物样品进行筛选,最终得到8个对肽脱甲酰基酶抑制活性和抗耻垢分枝杆菌活性均较好的阳性样品,阳性率0.06%;其中5个样品的细胞毒性较小。结论建立了灵敏度好、稳定性高的结核分枝杆菌肽脱甲酰基酶抑制剂高通量药物筛选模型,应用该模型所得到的阳性样品具有进一步深入研究的意义。

关键词：分枝杆菌结核抗结核药药物筛选临床前 N-甲酰甲硫氨酸

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