检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医药生物技术 2024年第4期19卷 298-307页

作者：刘馨妍陈博蒋建东张靖溥中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所病毒室北京100050 中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所微生物代谢工程室北京100050

目的探讨小檗碱(BBR)对阿托伐他汀(ATV)诱导的斑马鱼脑出血模型的保护作用及其潜在机制。方法利用ATV诱导斑马鱼脑出血模型,同时给予BBR,观察其出血情况及神经损伤,并对其出血后炎症因子和运动神经功能进行检测。分离斑马鱼脑部组织进... 详细信息

目的探讨小檗碱(BBR)对阿托伐他汀(ATV)诱导的斑马鱼脑出血模型的保护作用及其潜在机制。方法利用ATV诱导斑马鱼脑出血模型,同时给予BBR,观察其出血情况及神经损伤,并对其出血后炎症因子和运动神经功能进行检测。分离斑马鱼脑部组织进行转录组测序分析,通过基因本体(GO)和基因与基因组百科全书(KEGG)数据库进行差异基因的功能分析,探寻BBR发挥作用的机制。结果2μmol/L的ATV可显著诱导斑马鱼幼鱼发生脑出血以及出血后损伤,80%斑马鱼在给药后48 h观察到严重出血,出血后神经元数量明显减少,斑马鱼运动距离缩短。在用BBR处理后平均出血面积由0.019 mm2下降至0.011 mm2,神经损伤及炎症情况有所缓解,运动距离比模型组明显增长。转录组测序发现,模型组和对照组的差异基因与BBR处理组和模型组的差异基因出现48个交集基因,对其进行KEGG分析,JAK/STAT信号通路显著富集,其中与脑出血相关的il11b、stat1b、lepa、lepb 4个基因发生显著变化,经qPCR验证与测序结果一致。结论BBR可以保护ATV诱导的斑马鱼脑出血及其出血后脑损伤,JAK/STAT信号途径可能是BBR发挥作用的潜在途径。

关键词：斑马鱼小檗碱脑出血 JAK/STAT信号通路

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AGK基因启动子重组质粒构建及其在T淋巴细胞白血病中转录活性的研究

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中国癌症防治杂志 2024年第5期16卷 586-592页

作者：肖晓依楠王瑞琨韩萌刘思含禚方圻陈敏宽杜祎萌车永胜徐小洁中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所微生物代谢工程研究室北京100050 首都医科大学基础医学院北京100069 军事科学院军事医学研究院生物工程研究所北京100071

目的研究T淋巴细胞白血病中酰基甘油激酶(acylglycerol kinase,AGK)上游转录机制,构建AGK基因启动子不同截短片段的重组质粒并检测其转录活性。方法利用TIMER2.0、The Human Protein Atlas、Gene Expression Profiling Interactive Analysis等公共数据库探索AGK在白血病中的作用,以pGL4.20-pAGK promoter-luciferase全长质粒为模板,利用PCR法分别扩增AGK启动子不同长度的截短片段;将扩增片段分别插入pGL4.20-basic载体,构建AGK启动子不同截短片段重组质粒;经双酶切及序列鉴定正确后,将重组质粒电击转染至人T淋巴细胞白血病细胞Jurkat中,采用双荧光素酶报告基因实验测定AGK启动子不同截短片段的双荧光素酶活性。结果AGK在多种类型肿瘤中表达上调(P<0.05),且在白血病细胞中处于较高水平。Log-rank检验结果显示AGK高表达患者的总生存期短于低表达患者(P=0.028)。JASPAR网站预测出3个评分高的转录因子TEAD与AGK的结合区域,并成功构建含AGK基因启动子不同截短片段重组质粒。双荧光素酶报告基因实验发现T淋巴细胞白血病细胞中AGK启动子转录活性在-540bp至-80 bp区域较高。结论人T淋巴细胞白血病细胞中AGK基因启动子在-540 bp至-80 bp区域的转录活性较高,可为进一步研究T淋巴细胞白血病中AGK的转录及其上游调控机制奠定基础。

关键词： T淋巴细胞白血病酰基甘油激酶转录因子重组质粒双荧光酶报告基因

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多肽IMB-P1的理性设计及活性评价

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中国医药生物技术 2022年第2期17卷 111-117页

作者：刘娟娟金媛媛邹森冯晓赫卫清杨兆勇中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所微生物代谢工程室北京100050

目的通过对多肽IMB-P1进行截短设计并进行体内和体外抗肿瘤活性评价,确定多肽IMB-P1的最小功能片段。方法分别从N端和C端对多肽IMB-P1进行截短,经固相合成法制备目标多肽。测定这些多肽对PD-1/PD-L1结合的抑制活性,在荷B16黑色素瘤小鼠... 详细信息

目的通过对多肽IMB-P1进行截短设计并进行体内和体外抗肿瘤活性评价,确定多肽IMB-P1的最小功能片段。方法分别从N端和C端对多肽IMB-P1进行截短,经固相合成法制备目标多肽。测定这些多肽对PD-1/PD-L1结合的抑制活性,在荷B16黑色素瘤小鼠模型中评价它们的体内抗肿瘤活性,并测定活性好的多肽在血浆中的稳定性及其二级结构特征。结果设计合成了6条IMB-P1截短多肽IMB-P1-1~6。经PD-1/PD-L1结合的抑制活性评价,发现IMB-P1-2、IMB-P1-3和IMB-P1-6抑制活性较好,其中多肽IMB-P1-6的抑制率最高,可达90%。在小鼠体内抗肿瘤活性研究发现IMB-P1-2的抑瘤作用与IMB-P1相当,其他多肽的抑瘤活性都有所下降。经过HPLC检测发现多肽IMB-P1-2在血浆中的稳定性优于IMB-P1-3和IMB-P1-6。多肽IMB-P1无论是在水中还是在SDS环境中均呈无规则卷曲状态,而多肽IMB-P1-2在水中形成了α-螺旋结构。结论鉴定出与多肽IMB-P1体内抗肿瘤活性相当的更短多肽IMB-P1-2及其二级结构特征,为将来进一步提高多肽活性的修饰策略提供了锁定其α-螺旋构象的方向。

关键词：抗肿瘤活性肽过氧化物还原酶5 截短肽 PD-1/PD-L1 二级结构

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来源于Mangifera indica L.C-糖基转移酶MiCGTb的大肠杆菌原核表达、纯化、结晶化以及晶体学研究

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中国医药生物技术 2021年第5期16卷 385-390页

作者：樊帅吕广新刘凡金媛媛杨兆勇中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所微生物代谢工程研究室北京100050

目的获得来源于Mangifera indica L.C-糖基转移酶C-glycosyltransferase(MiCGTb)的晶体结构,为解析C-糖基转移酶催化机制提供结构基础。方法因MiCGTb较不稳定,构建MiCGTb截短蛋白MiCGTb1(Asn8-Lys465)表达质粒,利用大肠杆菌表达系统实现MiCGTb1可溶性表达,采用亲和层析、离子交换层析和分子排阻色谱纯化目的蛋白,选用气相扩散悬滴法,通过优化结晶条件获得可进行X-ray衍射的高质量晶体,获取衍射数据。结果运用分子生物学方法成功构建含MiCGTb1基因的重组质粒,转化BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL得到重组表达菌株。运用亲和层析和离子交换层析蛋白纯化技术,获得用于结晶化的蛋白样品。气相扩散悬滴法确定的结晶条件为:0.2 mol/L MgCl_(2)、0.1 mol/L Tris pH 8.0、40%MPD,结晶温度为23℃,添加剂为乙二醇(0.75%v/v),获得X-ray衍射分辨率为3.30Å的衍射数据。结论来源于Mangifera indica L.C-糖基转移酶截短蛋白MiCGTb1晶体的获得有望对解析C-糖基转移酶的晶体结构以及催化机制奠定基础。

关键词： C-糖基转移酶蛋白纯化结晶 X-射线衍射

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嗜热脂肪芽胞杆菌色氨酰-tRNA合成酶BsTrpRS的表达、纯化及其与创新霉素复合物的单晶制备和X-射线衍射分析

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中国医药生物技术 2021年第3期16卷 222-228页

作者：樊帅吕广新金媛媛杨兆勇中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所微生物代谢工程室北京100050

目的获得来源于嗜热脂肪芽胞杆菌色氨酰-tRNA合成酶(BsTrpRS)与创新霉素复合物的晶体结构,为创新霉素的理性设计提供结构基础。方法利用大肠杆菌表达系统异源表达获得BsTrpRS可溶性表达,采用亲和层析色谱、离子交换色谱和分子排阻色谱... 详细信息

目的获得来源于嗜热脂肪芽胞杆菌色氨酰-tRNA合成酶(BsTrpRS)与创新霉素复合物的晶体结构,为创新霉素的理性设计提供结构基础。方法利用大肠杆菌表达系统异源表达获得BsTrpRS可溶性表达,采用亲和层析色谱、离子交换色谱和分子排阻色谱纯化目的蛋白,以期获得纯度在90%以上的BsTrpRS,通过等温滴定量热法检测BsTrpRS与创新霉素的亲和力。选用悬滴-水蒸汽扩散法筛选蛋白质结晶条件,通过优化结晶条件获得高质量晶体,利用上海光源蛋白质晶体学光束线站收集X-ray衍射数据。结果运用分子生物学方法成功构建含bstrprs基因的重组质粒,转化BL21(DE3)得到重组表达菌株。运用亲和层析、离子交换色谱和分子排阻色谱等蛋白纯化技术,获得高纯度BsTrpRS蛋白。利用ITC技术确证创新霉素与BsTrpRS之间亲和力为3.2μmol/L。通过晶体筛选优化,最佳结晶条件为1.8 mol/L K_(2)HPO_(4),pH 7.6,37℃,0.75%(v/v)1,3-丙二醇,最终获得X-ray衍射分辨率为2.06A的BsTrpRS/创新霉素二元复合物晶体,其晶胞参数为a=91.675A,b=91.675A,c=152.37A,α=90.000°,β=90.000°,γ=120.000°,晶体的马修斯系数为2.48A^(3)/Da,最小非对称单位内含有2个蛋白分子,溶剂百分比为50.46%。结论创新霉素与BsTrpRS复合物晶体结构的获得,有望对创新霉素小分子结构优化及设计提供指导方向及重要依据。

关键词：创新霉素色氨酰-tRNA合成酶共结晶 X-射线衍射

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UDP-3-O-(R-羟基十四酰)-N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰基酶的表达、纯化及与ACHN-975复合物的X-射线衍射分析

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中国医药生物技术 2019年第5期14卷 406-411页

作者：李丹阳樊帅金媛媛杨兆勇中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所微生物代谢工程研究室

目的以 UDP-3-O-(R-羟基十四酰)-N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰基酶(LpxC)-ACHN-975 晶体复合物结构为基础,研究小分子与靶蛋白的结合位点与方式,进而依据复合物结构设计该化合物,以获得活性强、毒性低的药物小分子。方法运用大肠杆菌表达系... 详细信息

目的以 UDP-3-O-(R-羟基十四酰)-N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰基酶(LpxC)-ACHN-975 晶体复合物结构为基础,研究小分子与靶蛋白的结合位点与方式,进而依据复合物结构设计该化合物,以获得活性强、毒性低的药物小分子。方法运用大肠杆菌表达系统对超嗜热菌(Aquifex aeolicus)来源的 AaLpxC 进行异源表达,采用 Zn^2+-NTA 亲和层析、Q-HP 强阴离子交换色谱和 Superose 12 分子排阻色谱对重组蛋白进行分离纯化,对 AaLpxC 进行结构生物学研究,采用蒸汽扩散-悬滴法进行结晶条件筛选以及优化。结果获得纯度在 90%以上的超嗜热菌来源的 AaLpxC,经过结晶条件的优化获得分辨率为 1.21 А(1 А= 1 × 10^-10 m)的 AaLpxC 与 ACHN-975 的复合物晶体的衍射数据,其晶胞参数为 a = 65.569 А,b = 65.569 А,c = 131.595 А,α= 90.000°,β= 90.000°,γ= 120.000°。结论 ACHN-975 与 AaLpxC 复合物晶体结构的获得有望对 ACHN-975 小分子结构优化及设计提供指导方向及重要依据。

关键词： LpxC ACHN-975 蛋白纯化结晶,X-射线衍射

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人类线粒体肌酸激酶的固定化及酶学性质研究

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中国医药生物技术 2019年第4期14卷 302-307页

作者：吕广新史北辰樊帅杨兆勇张志斐陈静华北理工大学基础医学院唐山063210 华北理工大学药学院唐山063210 中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所微生物代谢工程室北京100050

目的人源肌酸激酶uMtCK具有良好的催化肌酸生成磷酸肌酸的活性,开发固定化uMtCK酶法生成磷酸肌酸,实现其工业化应用价值。方法将异源表达的uMtCK固定在纳米磁性材料Fe3O4@Histidine-Ni上,制备固定化酶Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK,并进行... 详细信息

目的人源肌酸激酶uMtCK具有良好的催化肌酸生成磷酸肌酸的活性,开发固定化uMtCK酶法生成磷酸肌酸,实现其工业化应用价值。方法将异源表达的uMtCK固定在纳米磁性材料Fe3O4@Histidine-Ni上,制备固定化酶Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK,并进行催化反应。与游离酶uMtCK比对酶学性质和动力学参数,测定固定化酶Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK的重复使用次数。结果与游离酶uMtCK相比,固定化酶Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK的最适反应温度提高5℃,最适pH降低0.5个单位,在50℃、pH7.5下孵育2h,残余酶活为51%,而游离酶仅为27%;uMtCK的KmCr为10.7mmol/L,为Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK的1.1倍;Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK的kcat/KmCr值是5.3L/(mmols),是uMtCK的1.3倍;Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK在经历9次循环使用后,活力还能保持50%以上,显示了良好的稳定性和重复使用性。结论与uMtCK相比,Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK具有良好的热稳定性和重复使用性,具有一定的工业化价值。

关键词：酶类,固相肌酸激酶磷酸肌酸

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提高可利霉素药代动力学研究中微生物法检测灵敏度的研究

提高可利霉素药代动力学研究中微生物法检测灵敏度的研究

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第十二届全国抗生素学术会议

作者：戴剑漉赵小峰赫卫清贾晓宇李慧宁王以光中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所微生物代谢工程室卫生部抗生素生物工程重点实验室沈阳同联集团有限公司中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所微生物代谢工程室卫生部抗生素生物工程重点实验室

目的为进行可利霉素（原名必特螺旋霉素-BT）药代动力学研究,研究影响微生物法检测敏感度的因素,以提高血浆中测定BT的灵敏度,为药代动力学研究中血药浓度的测定奠定基础。方法采用管碟法和纸片法,考察检定菌液浓度、培养基、缓冲液加N... 详细信息

目的为进行可利霉素（原名必特螺旋霉素-BT）药代动力学研究,研究影响微生物法检测敏感度的因素,以提高血浆中测定BT的灵敏度,为药代动力学研究中血药浓度的测定奠定基础。方法采用管碟法和纸片法,考察检定菌液浓度、培养基、缓冲液加NaCl、血浆等多种因素对检测灵敏度的影响,确定最适条件;建立测定人血浆中BT血药浓度的方法。结果以藤黄八叠球菌作检定菌,其菌浓为OD=0.3～1.0,采用检定培养基（3）制备单层检定平板,可以有效地提高BT检测灵敏度;从血浆中萃取BT,用纸片法制作标准曲线,其最低检测限度可达0.02μg/ml。结论通过研究,微生物法检测BT浓度灵敏度提高6倍,所建立的从血浆中萃取的纸片法,可用于BT药代动力学研究中血药浓度的微生物法检测。

关键词：可利霉素灵敏度抗生素药代动力学研究中微生物法测定

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提高可利霉素药代动力学研究中微生物法检测灵敏度的研究

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中国医药生物技术 2013年第6期8卷 420-424页

作者：戴剑漉赵小峰赫卫清贾晓宇李慧宁王以光中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所微生物代谢工程室/卫生部抗生素生物工程重点实验室北京100050 同联集团有限公司沈阳110042

目的研究影响可利霉素微生物法检测敏感度的因素,以提高血浆中测定可利霉素的灵敏度,为药代动力学研究中血药浓度的测定奠定基础。方法采用管碟法和纸片法,以抑菌圈大小为指标,考察检定菌液浓度,培养基配方,单、双层培养基检定平板,缓... 详细信息

目的研究影响可利霉素微生物法检测敏感度的因素,以提高血浆中测定可利霉素的灵敏度,为药代动力学研究中血药浓度的测定奠定基础。方法采用管碟法和纸片法,以抑菌圈大小为指标,考察检定菌液浓度,培养基配方,单、双层培养基检定平板,缓冲液加NaCl,胎牛血清,血浆等多种因素对检测灵敏度的影响;采用有机溶剂从人血浆中萃取可利霉素等方法测定血药浓度。结果检定菌浓度、培养基配方、检定平板厚度对检测灵敏度影响显著,含NaCl的缓冲液有利于提高检测灵敏度,人血浆对检测灵敏度有一定影响。以藤黄八叠球菌作检定菌,其菌浓为OD600=0.3~1.0,采用含牛肉蛋白胨0.5%,牛肉浸膏0.25%检定培养基制备单层检定平板,可以有效提高可利霉素检测灵敏度6倍;从血浆中萃取可利霉素,用纸片法进行测定,其最低检测限度可达0.02μg/ml。结论所建立的从血浆中萃取可利霉素的纸片法显著提高了微生物法检测血浆中可利霉素的灵敏度,可用于可利霉素药代动力学研究中血药浓度的微生物法检测。

关键词：微生物敏感性试验药代动力学可利霉素

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