检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医药生物技术 2022年第4期17卷 297-305页

作者：林茹李可萌刘娟娟戴剑漉赫卫清中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所卫健委抗生素生物工程重点实验室/医科院合成生物学重点实验室北京100050

目的确定螺旋霉素(SP)生物合成途径中编码两个N, N-二甲基转移酶的基因bsm9和bsm22的功能,并在基因阻断变株中分离纯化相应的SP前体物。方法利用抗性基因插入或CRISPR-Cas基因编辑的方法阻断bsm9和bsm22基因,并对其进行基因回复实验... 详细信息

目的确定螺旋霉素(SP)生物合成途径中编码两个N, N-二甲基转移酶的基因bsm9和bsm22的功能,并在基因阻断变株中分离纯化相应的SP前体物。方法利用抗性基因插入或CRISPR-Cas基因编辑的方法阻断bsm9和bsm22基因,并对其进行基因回复实验。利用薄层色谱(TLC)和高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)联用分析变株Δbsm9和Δbsm22的发酵产物。利用半制备液相色谱的方法分离纯化缺少甲基化修饰的SP前体物,经核磁共振波谱(NMR)数据分析确定其化学结构。结果成功构建了两个基因的阻断株Δbsm9和Δbsm22。Δbsm9变株的发酵液没有抗菌活性的物质产生,经HPLC-MS分析也未发现相应的SP前体物。而Δbsm22变株的发酵产物的抗菌活性下降50%以上,从Δbsm22变株发酵产物中分离出福洛胺糖缺少两个甲基的SP前体物。结论 bsm22基因负责SP生物合成中福洛胺糖上的N, N-二甲基的催化,而bsm9基因可能参与麦洛胺糖的N, N-二甲基化修饰,且两者在功能上不能互补。

关键词：螺旋霉素 N N-二甲基转移酶基因基因阻断

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嗜热脂肪芽胞杆菌色氨酰-tRNA合成酶BsTrpRS的表达、纯化及其与创新霉素复合物的单晶制备和X-射线衍射分析

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中国医药生物技术 2021年第3期16卷 222-228页

作者：樊帅吕广新金媛媛杨兆勇中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所微生物代谢工程室北京100050

目的获得来源于嗜热脂肪芽胞杆菌色氨酰-tRNA合成酶(BsTrpRS)与创新霉素复合物的晶体结构,为创新霉素的理性设计提供结构基础。方法利用大肠杆菌表达系统异源表达获得BsTrpRS可溶性表达,采用亲和层析色谱、离子交换色谱和分子排阻色谱... 详细信息

目的获得来源于嗜热脂肪芽胞杆菌色氨酰-tRNA合成酶(BsTrpRS)与创新霉素复合物的晶体结构,为创新霉素的理性设计提供结构基础。方法利用大肠杆菌表达系统异源表达获得BsTrpRS可溶性表达,采用亲和层析色谱、离子交换色谱和分子排阻色谱纯化目的蛋白,以期获得纯度在90%以上的BsTrpRS,通过等温滴定量热法检测BsTrpRS与创新霉素的亲和力。选用悬滴-水蒸汽扩散法筛选蛋白质结晶条件,通过优化结晶条件获得高质量晶体,利用上海光源蛋白质晶体学光束线站收集X-ray衍射数据。结果运用分子生物学方法成功构建含bstrprs基因的重组质粒,转化BL21(DE3)得到重组表达菌株。运用亲和层析、离子交换色谱和分子排阻色谱等蛋白纯化技术,获得高纯度BsTrpRS蛋白。利用ITC技术确证创新霉素与BsTrpRS之间亲和力为3.2μmol/L。通过晶体筛选优化,最佳结晶条件为1.8 mol/L K_(2)HPO_(4),pH 7.6,37℃,0.75%(v/v)1,3-丙二醇,最终获得X-ray衍射分辨率为2.06A的BsTrpRS/创新霉素二元复合物晶体,其晶胞参数为a=91.675A,b=91.675A,c=152.37A,α=90.000°,β=90.000°,γ=120.000°,晶体的马修斯系数为2.48A^(3)/Da,最小非对称单位内含有2个蛋白分子,溶剂百分比为50.46%。结论创新霉素与BsTrpRS复合物晶体结构的获得,有望对创新霉素小分子结构优化及设计提供指导方向及重要依据。

关键词：创新霉素色氨酰-tRNA合成酶共结晶 X-射线衍射

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莽草酸激酶作为抗结核分枝杆菌药物发现靶标的研究进展

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中国医药生物技术 2021年第2期16卷 134-138页

作者：李蒙代晓伟卞聪朱小红司书毅李妍姜威中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所国家新药(微生物)筛选室北京100050

近年来,随着结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)单药耐药(SDR-TB)、多药耐药(MDR-TB)和广泛耐药(XDR-TB)菌株的不断出现和蔓延,使得传统抗结核药物的临床有效率不断下降,结核病也因此再次成为严重危害人类健康和公共安全的... 详细信息

近年来,随着结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)单药耐药(SDR-TB)、多药耐药(MDR-TB)和广泛耐药(XDR-TB)菌株的不断出现和蔓延,使得传统抗结核药物的临床有效率不断下降,结核病也因此再次成为严重危害人类健康和公共安全的传染性疾病[1-5]。研发新型抗结核药物,解决结核病治疗所面临的难题成为控制结核病疫情的当务之急。针对传统药物进行结构优化或是通过对现有药物进行组合获得新的组剂,相对而言是获得抗结核新药的捷径,由此获得的新药在特定情况下可提高治疗效率,但由于此类药物在化学结构和作用机制上与传统药物无明显差异,导致其不能有效地避开MTB的耐药机制,对高水平耐药结核菌无效,仍然不能有效地治疗耐药结核病[6-9]。因此发现新的药物靶标进而发现新的先导药物成为抗结核药物研发的重要方向。

关键词：结核病治疗抗结核新药耐药结核菌抗结核药物临床有效率广泛耐药 tuberculosis 药物靶标

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微生物来源的PCSK9转录抑制剂的发现及活性研究

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中国医药生物技术 2021年第6期16卷 492-498页

作者：何维杨雨欣李怡宏李晓茜李星星侍媛媛孙红敏王丽解云英洪斌中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所卫健委抗生素生物工程重点实验室北京100050 中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所医科院药物合成生物学重点实验室北京100050

目的拟通过筛选寻找具有PCSK9表达抑制活性的菌株发酵液及其活性组分,通过对其活性进行初步研究,以期获得能够用于治疗或预防动脉粥样硬化的先导化合物或药物候选物。方法利用前期工作构建的PCSK9转录抑制剂高通量筛选模型对国家新药(... 详细信息

目的拟通过筛选寻找具有PCSK9表达抑制活性的菌株发酵液及其活性组分,通过对其活性进行初步研究,以期获得能够用于治疗或预防动脉粥样硬化的先导化合物或药物候选物。方法利用前期工作构建的PCSK9转录抑制剂高通量筛选模型对国家新药(微生物)筛选中心发酵液样品库进行筛选,对阳性发酵液进行分离提取以获得具有PCSK9表达抑制活性的小分子化合物,利用蛋白免疫印迹方法检测化合物对相关蛋白表达的影响,利用流式细胞术检测肝细胞摄取LDL-C情况的变化。结果获得阳性菌株I03A-00300及其活性组分杀粉蝶菌素A1。杀粉蝶菌素A1在低浓度时即可显著抑制HepG2细胞中PCSK9的表达,进而增加LDLR的表达。还可以促进LDLR介导的肝细胞对LDL-C的摄取功能增加约一倍。结论杀粉蝶菌素A1作为PCSK9抑制剂,在细胞水平证实可上调PCSK9调控的下游基因LDLR的表达及其介导的LDL胆固醇的摄取作用,证明该化合物有望发展为新型抗动脉粥样硬化先导化合物。

关键词：动脉粥样硬化 PCSK9 高通量筛选低密度脂蛋白胆固醇杀粉蝶菌素A1

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脐血来源NK细胞的体外扩增及其抗肿瘤细胞活性的研究

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中国医药生物技术 2022年第5期17卷 412-417页

作者：韩强张志刚刘坤朱贤兑金媛媛张志斐杨兆勇华北理工大学药学院唐山063210 沧州市人民医院病理科沧州061000 中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所代谢工程室北京100050

目的研究脐血单个核细胞来源NK细胞的培养方法及其对不同类型肿瘤细胞的杀伤活性。方法自脐静脉消毒后全封闭采集脐血,肝素抗凝,分离单个核细胞,用NK细胞培养基培养14 d,流式细胞仪检测其表面标志,并使用RTCA实时无标记细胞分析技术检... 详细信息

目的研究脐血单个核细胞来源NK细胞的培养方法及其对不同类型肿瘤细胞的杀伤活性。方法自脐静脉消毒后全封闭采集脐血,肝素抗凝,分离单个核细胞,用NK细胞培养基培养14 d,流式细胞仪检测其表面标志,并使用RTCA实时无标记细胞分析技术检测细胞增殖曲线,观察NK效应细胞按效靶比1:1、5:1与10:1对肿瘤细胞的杀伤作用。结果培养14 d的脐血单个核细胞,细胞总数扩增294倍,其中NK细胞扩增5580倍。NK细胞CD3^(-)CD56^(+)阳性率为97.93%,与杀伤功能相关的重要分子CD16、NKG2D、NKp30、NKp44的表达阳性率均在95%以上。对A549肺癌细胞株作用6 h的杀伤活性,在1:1~10:1效靶比范围内,随着效靶比增加,杀伤活性从(78.16±2.41)%逐渐增强到(95.71±3.21)%;并且在效靶比1:1的情况下,随着作用时间从6 h延长到24 h,杀伤活性也从(78.16±2.41)%逐渐增强到(96.33±2.15)%。结论建立了无需分选细胞、无需滋养层细胞、操作简单、通用性强的脐血NK细胞培养方法,获得的NK细胞纯度高,对肿瘤细胞的杀伤作用强。

关键词：自然杀伤细胞脐血表面标志实时无标记动态细胞分析技术体外扩增抗肿瘤

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6-无氟喹诺酮类抗菌药物药理学及临床研究进展

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中国医药生物技术 2021年第1期16卷 32-40页

作者：陈虹彤卢芸李国庆游雪甫杨信怡中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所抗感染药物研究北京市重点实验室北京100050

早期喹诺酮品种如萘啶酸、吡哌酸化学结构中均不含氟,但自1984年日本杏林制药株式会社开发的首个具有6-氟-7-哌嗪基结构的喹诺酮药物——诺氟沙星(norfloxacin,氟哌酸)成功上市以来,以4-喹酮为母核(结构见图1),6位碳(C-6)有氟原子(F)取... 详细信息

早期喹诺酮品种如萘啶酸、吡哌酸化学结构中均不含氟,但自1984年日本杏林制药株式会社开发的首个具有6-氟-7-哌嗪基结构的喹诺酮药物——诺氟沙星(norfloxacin,氟哌酸)成功上市以来,以4-喹酮为母核(结构见图1),6位碳(C-6)有氟原子(F)取代为特征的6-氟喹诺酮类抗菌药因抗菌谱广、疗效可靠、使用方便等优点,一直是新药开发的主流[1-2]。以我国为例,截至2017年,上市的17个全身用喹诺酮药物品种均为6-氟喹诺酮[3];而近30年来,美国FDA批准的喹诺酮新药品种中6-氟喹诺酮药物亦占绝对多数[4]。

关键词：临床研究进展新药品种哌嗪基萘啶酸喹诺酮新药开发吡哌酸氟原子

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靶向革兰氏阴性菌生物膜的糖苷水解酶挖掘及功能研究

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中国医药生物技术 2021年第4期16卷 289-296页

作者：姜羽黄星宇白利平中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所卫健委抗生素生物工程重点实验室北京100050

目的挖掘对革兰氏阴性菌生物膜具有抑制和破坏作用,特别是具有跨种活性的糖苷水解酶。方法利用已有基因组数据,通过序列相似性比对及基因注释分析寻找新型糖苷水解酶,通过基因克隆和蛋白表达纯化获得一系列不同革兰氏阴性菌来源的糖苷... 详细信息

目的挖掘对革兰氏阴性菌生物膜具有抑制和破坏作用,特别是具有跨种活性的糖苷水解酶。方法利用已有基因组数据,通过序列相似性比对及基因注释分析寻找新型糖苷水解酶,通过基因克隆和蛋白表达纯化获得一系列不同革兰氏阴性菌来源的糖苷水解酶。以靶向铜绿假单胞菌生物膜的糖苷水解酶PslG31-442作为阳性对照酶,构建靶向铜绿假单胞菌生物膜的药物筛选模型,并进一步构建靶向肺炎克雷伯杆菌生物膜的药物筛选模型。利用自行构建的筛选模型对上述不同糖苷水解酶进行活性筛选。结果筛选得到一种具有跨种活性的、来自克雷伯菌属糖苷水解酶19家族的糖苷水解酶KPGH3。KPGH3能够有效抑制铜绿假单胞菌PAO1、PA14菌株以及肺炎克雷伯ATCC 700603菌株生物膜的形成,EC_(50)分别为36.85、43.34和82.58 nmol/L;并能够在1 h内有效破坏3种菌株形成的成熟生物膜,EC_(50)分别为45.35、29.3和18.23 nmol/L。结论糖苷水解酶KPGH3不但能在纳摩尔级浓度抑制多种致病性革兰氏阴性菌生物膜的形成,并能有效破坏上述菌株已经形成的陈旧生物膜,具有潜在应用价值。

关键词：生物膜糖苷水解酶铜绿假单胞菌肺炎克雷伯杆菌 KPGH3

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结核分枝杆菌CYP143A1基因(Rv1785c)敲除菌株的构建

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中国医药生物技术 2021年第5期16卷 400-406页

作者：陈虹彤卢芸李国庆李聪然游雪甫杨信怡中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所抗感染药物研究北京市重点实验室北京100050

目的为深入了解和探索结核分枝杆菌CYP143A1基因(Rv1785c)功能,构建针对该基因的敲除菌株。方法采用噬菌体介导的基因敲除技术,设计并采用聚合酶链反应(PCR)扩增待敲除基因Rv1785c左、右臂,与p0004s质粒连接,构建同源重组质粒p0004s-△R... 详细信息

目的为深入了解和探索结核分枝杆菌CYP143A1基因(Rv1785c)功能,构建针对该基因的敲除菌株。方法采用噬菌体介导的基因敲除技术,设计并采用聚合酶链反应(PCR)扩增待敲除基因Rv1785c左、右臂,与p0004s质粒连接,构建同源重组质粒p0004s-△Rv1785c。再将p0004s-△Rv1785c质粒与phAE159质粒连接,构建phAE159-△Rv1785c噬菌粒。将获得的噬菌粒导入耻垢分枝杆菌mc^(2)155,获得整合有同源交换位点的重组噬菌体,经体外扩增收集高滴度噬菌体,转染结核分枝杆菌H37Rv,筛选阳性克隆并通过PCR法及基因测序验证敲除株构建结果。结果成功构建了包含Rv1785c上下游同源臂的等位交换质粒,并将该质粒与含有分枝杆菌温敏型噬菌体元件的穿梭质粒phAE159连接获得重组噬菌粒,最终经转染进入H37Rv。PCR及基因测序结果表明H37Rv CYP143A1基因敲除菌株构建成功。结论首次成功构建了结核分枝杆菌H37Rv CYP143A1基因敲除菌株,为后续CYP143A1基因功能研究提供了关键材料,奠定了重要的物质基础。

关键词：结核分枝杆菌基因敲除细胞色素P450 CYP143A1

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海洋青霉菌IMB17-009抗菌活性次级代谢产物研究

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中国医药生物技术 2021年第3期16卷 193-200页

作者：李芳李娇李莎莎郝晓萌关艳刘玉凤王保国甘茂罗中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所国家新药(微生物)筛选实验室北京100050 济宁医学院药学院山东日照276800

目的分离鉴定从红树林沉积物分离的海洋青霉菌IMB17-009产生的抗菌活性次级代谢产物。方法利用中压柱色谱、凝胶柱色谱和HPLC等多种色谱分离方法对菌株固体发酵产物进行分离纯化,通过紫外可见光谱、质谱和核磁共振谱对化合物进行结构鉴... 详细信息

目的分离鉴定从红树林沉积物分离的海洋青霉菌IMB17-009产生的抗菌活性次级代谢产物。方法利用中压柱色谱、凝胶柱色谱和HPLC等多种色谱分离方法对菌株固体发酵产物进行分离纯化,通过紫外可见光谱、质谱和核磁共振谱对化合物进行结构鉴定,采用微量液体稀释法评价化合物对革兰氏阳性菌、阴性菌和真菌的抗菌活性。结果从青霉菌IMB17-009固体发酵产物中分离获得11个化合物,其结构分别确定为meleagrin(1)、glandicoline B(2)、roquefortine C(3)、2-(2-(1H-吲哚-3-基)乙酰基)-L-苯基丙氨酸(4)、citreohybridonol(5)、andrastinA(6)、andrastin B(7)、macrophorin A(8)、purpurogemutantin(9)、desferricoprogen(10)和deferriferrichrome(11)。结论化合物1、3、8、9对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌或弯孢霉菌、交链孢菌、镰孢菌和白念珠菌等真菌具有一定的抗菌活性,最低抑菌浓度为8~64μg/ml。化合物4为一新的天然产物。

关键词：海洋微生物青霉属抗菌抗真菌分离纯化

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Plazomicin的药理学研究及临床应用进展

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中国抗生素杂志 2020年第2期45卷 122-130页

作者：陈虹彤李国庆游雪甫杨信怡中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所抗感染药物研究北京市重点实验室北京100050

Plazomicin是美国Achaogen公司开发的新一代氨基糖苷类药物,商品名Zemdri■,近期在美国经FDA批准用于肠杆菌科细菌引起,且其他药物治疗无效的尿路感染及急性肾盂肾炎成人患者的治疗。研究显示,plazomicin抗菌谱广,对多数病原菌中携带的... 详细信息

Plazomicin是美国Achaogen公司开发的新一代氨基糖苷类药物,商品名Zemdri■,近期在美国经FDA批准用于肠杆菌科细菌引起,且其他药物治疗无效的尿路感染及急性肾盂肾炎成人患者的治疗。研究显示,plazomicin抗菌谱广,对多数病原菌中携带的氨基糖苷类修饰酶有良好稳定性,血浆蛋白结合率低,与人体主要肝药酶无相互作用。治疗剂量下,plazomicin对受治感染病例的临床疗效不劣于美罗培南、黏菌素。常见不良反应为轻、中度恶心、呕吐、头晕、腹泻,停药后可恢复。

关键词： Plazomicin 药效学药动学临床疗效不良反应

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