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第六届全国微生物资源学术暨国家微生物资源平台运行服务研讨会

作者：许敏李小俊高春燕戴素娟刘佳萌王飞飞孙承航中国医学科学院&北京协和医学院医药生物技术研究所北京市天坛西里1号 100050 桂林医学院基础医学院广西桂林市环城北二路 541004 中国医学科学院&北京协和医学院医药生物技术研究所北京市天坛西里1号 100050 中国医学科学院&北京协和医学院医药生物技术研究所北京市天坛西里1号 100050 遵义医学院附属医院细胞工程重点实验室贵州遵义市大连路201号 563003

红树林作为特殊生态系统，具有丰富的生物多样性，红树植物为热带和亚热带海岸潮间带的一种独特植物群落，从其内生放线菌中己发现多种不同结构，具有重要生物活性的次级代谢产物。本研究以广东省高桥红树林植物为研究目标，采集来自白...

红树林作为特殊生态系统，具有丰富的生物多样性，红树植物为热带和亚热带海岸潮间带的一种独特植物群落，从其内生放线菌中己发现多种不同结构，具有重要生物活性的次级代谢产物。本研究以广东省高桥红树林植物为研究目标，采集来自白骨壤、海莲、木榄、红树、秋茄、海桑的根、茎、叶等样品共14份，从10种分离培养基中共获得161株放线菌菌株。基于形态特征和16S rRNA基因序列分析确认，以上放线菌菌株主要分布于：链霉菌属(Streptomyces)、小单孢菌属(Micromonospora)、分支杆菌属(Mycobacterium)、假诺卡氏菌属(Pseudonocardia)、微球菌属(Micrococcus)、微杆菌属(Microbacterium)、短状杆菌属(Brachybacterium)、红球菌属(Rhodococcus)、芽殖球菌属(Blastococcus)、中村氏菌属(Nakamurella)、戈登氏菌属(Gordonia)、短小杆菌属(Curtobacterium)、放线链孢菌属(Actinomycetospora)、威廉氏菌属(Williamsia)、考克氏菌属(Kocuria)、四联球状菌属(Tetrasphaera)、动球菌属(Kineococcus)、Actinoallomurus、Pseudokineococcus、Plantactinospora等共19个菌属，链霉菌属(Streptomyces)和小单孢菌属(Micromonospora)是优势菌属。

关键词：

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小鼠精原干细胞的分离培养及相关标记物检测

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中国医学科学院学报 2013年第3期35卷 243-248页

作者：郑艳波李毅甄永苏中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所肿瘤室北京100050

目的建立一套简单高效的小鼠精原干细胞(SSCs)分离及体外培养体系,检测相关干细胞标记物的表达,为将SSCs用于抗肿瘤干细胞药物的筛选及鉴定奠定基础。方法采用组织化学法比较DBA/2乳鼠(6～8天龄)和成年鼠(26～28周龄)曲细精管解剖结构... 详细信息

目的建立一套简单高效的小鼠精原干细胞(SSCs)分离及体外培养体系,检测相关干细胞标记物的表达,为将SSCs用于抗肿瘤干细胞药物的筛选及鉴定奠定基础。方法采用组织化学法比较DBA/2乳鼠(6～8天龄)和成年鼠(26～28周龄)曲细精管解剖结构的特点。选取乳鼠睾丸制备原代细胞,比较不同消化酶的消化效率。利用差异贴壁法即睾丸体细胞在明胶上贴壁而精原细胞不贴壁的特点,富集SSCs。比较以StemPro34和α-MEM为基础培养基的培养体系及明胶、血清等因素对细胞贴壁及生长性能的影响,观察不同培养时间的细胞形态,免疫荧光法鉴定SSCs及肿瘤干细胞(CSCs)相关标记物的表达。结果乳鼠睾丸中精原细胞含量相对较高,胰蛋白酶消化后能获得较多数量的原代细胞。在以StemPro34为基础培养基,含1%胎牛血清及明胶铺板的条件下体细胞贴壁较充分。分离的精原细胞在以丝裂霉素C处理过的体细胞为饲养层的环境中生长良好,呈现出典型的SSCs生长特性,13 d左右可形成明显的细胞球。免疫荧光结果显示,SSCs标记物胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)家族受体α1(GFRα1)及VASA蛋白在细胞球中高表达;CSCs标记物CD44在As、Apr、Aal各期细胞及细胞球的内部细胞中均有表达,而体细胞中则几乎不表达。结论初步建立了DBA/2小鼠SSCs的分离及体外培养体系,CD44在发育早期的精原细胞中表达较强。

关键词：精原干细胞分离培养肿瘤干细胞 CD44

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微生物药物合成生物学研究进展

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药学学报 2013年第2期48卷 155-160页

作者：武临专洪斌中国医学科学院、北京协和医学院医药生物技术研究所卫生部抗生素生物工程重点实验室北京100050

微生物次级代谢产物结构复杂多样,具有抗细菌、抗真菌、抗肿瘤、抗病毒和免疫抑制等多种生物活性,是微生物药物开发的源泉。当前,微生物药物研究面临一些挑战:快速发现结构新颖、生物活性突出的化合物;理性化提高产生菌的发酵效价;以及... 详细信息

微生物次级代谢产物结构复杂多样,具有抗细菌、抗真菌、抗肿瘤、抗病毒和免疫抑制等多种生物活性,是微生物药物开发的源泉。当前,微生物药物研究面临一些挑战:快速发现结构新颖、生物活性突出的化合物;理性化提高产生菌的发酵效价;以及以微生物为新宿主,实现一些重要天然药物的工业生产。合成生物学是在系统生物学和代谢工程等基础上发展起来的一门学科。本文对合成生物学在发现微生物新次级代谢产物、提高现有微生物药物合成水平和创制微生物次级代谢产物方面的研究进展进行了阐述。

关键词：微生物药物合成生物学次级代谢产物生物合成

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依博素对THP-1细胞炎症细胞因子的作用

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药学学报 2013年第5期48卷 661-667页

作者：张洋郭连宏李元中国医学科学院、北京协和医学院医药生物技术研究所卫生部抗生素生物工程重点实验室北京100050

在THP-1细胞中,研究依博素对炎症细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子α(TNFα)的作用,以探讨其抗炎作用机制。采用荧光标记底物,证明了依博素对IL-1β转化酶(ICE)和TNFα转化酶(TACE)活性的抑制作用;应... 详细信息

在THP-1细胞中,研究依博素对炎症细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子α(TNFα)的作用,以探讨其抗炎作用机制。采用荧光标记底物,证明了依博素对IL-1β转化酶(ICE)和TNFα转化酶(TACE)活性的抑制作用;应用实时定量PCR(real-time PCR)确定了依博素对上述炎症细胞因子mRNA表达水平的降低作用;利用酶联免疫吸附方法 (ELISA)及Western blotting检测证明,依博素对3种炎症细胞因子分泌水平的抑制作用。上述结果表明,在THP-1细胞中,依博素可通过抑制ICE酶和TACE酶活性、降低炎症细胞因子mRNA合成作用而使各炎症细胞因子的生成量下降。本研究在细胞水平初步考察了依博素的抗炎作用机制,为治疗类风湿性关节炎新药研究奠定了相关基础。

关键词：依博素抗炎作用 THP-1细胞白细胞介素1 白细胞介素6 肿瘤坏死因子α

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叶酸受体介导pH敏感型分子靶向阿霉素脂质体的表征与含量测定法的建立

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药物分析杂志 2013年第2期33卷 181-184页

作者：夏桂民安智娇赵晨刘彤李眉中国医学科学院/北京协和医学院医药生物技术研究所北京100050 中国医学科学院/北京协和医学院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室北京100781

目的:表征叶酸受体介导pH敏感型分子靶向阿霉素脂质体,建立RP-HPLC法进行含量测定。方法:采用动态光散射法测定脂质体的粒径;采用液相色谱法开展含量测定的方法学研究与验证。选用Agilent HC-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相... 详细信息

目的:表征叶酸受体介导pH敏感型分子靶向阿霉素脂质体,建立RP-HPLC法进行含量测定。方法:采用动态光散射法测定脂质体的粒径;采用液相色谱法开展含量测定的方法学研究与验证。选用Agilent HC-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为1.23%醋酸钠水溶液(用冰醋酸调pH至3.3)-甲醇(55∶45),等度洗脱,流速为1.0 ***-1,检测波长233 nm,柱温30℃。结果:自制的新型脂质体粒径(120±20)nm(PDI<0.200),包封率不小于91.0%。建立的RP-HPLC法中,自制脂质体的辅料对主峰无干扰,且各杂质峰与主成分峰均能达到基线分离,检测限为0.2 ng(S/N=3),定量限为1.0 ng(S/N=10),主成分的浓度在1.0～40.0μ***-1范围内线性良好(r=0.9991)。结论:本文所建方法简便易行,专属性强,灵敏,耐用性好,适于本脂质体中阿霉素的含量测定。

关键词：受体介导 pH敏感盐酸阿霉素靶向脂质体表征高效液相色谱含量测定

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大八角根中二萜类化学成分及其抗柯萨奇病毒活性

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国际药学研究杂志 2013年第6期40卷 772-777页

作者：王亚丹张贵杰屈晶李玉环蒋建东庾石山中国医学科学院&北京协和医学院药物研究所、天然药物活性物质与功能国家重点实验室北京100050 中国医学科学院&北京协和医学院医药生物技术研究所北京100050

目的研究大八角根（RadixIlliciiMaji）中二萜类化学成分及其抗B3型柯萨奇病毒的活性。方法采用硅胶、C18反相硅胶、SephadexLH-20柱色谱以及制备HPLC等方法对二萜类化合物进行分离纯化，通过波谱学方法以及Mo（OAc）。诱导的圆二色谱... 详细信息

目的研究大八角根（RadixIlliciiMaji）中二萜类化学成分及其抗B3型柯萨奇病毒的活性。方法采用硅胶、C18反相硅胶、SephadexLH-20柱色谱以及制备HPLC等方法对二萜类化合物进行分离纯化，通过波谱学方法以及Mo（OAc）。诱导的圆二色谱法鉴定其结构，并采用细胞病变效应（cytopathiceffect，CPE）法对分离得到的化合物进行抗柯萨奇病毒B3的活性评价。结果分离鉴定了12个二萜类化合物，分别为4-表-脱氢松香酸（4-epi—dehydroabieticacid，1）、8，11，13，15-四烯松香烷-19-烷酸（8，11，13，15-abietatraen-19-oicacid，2）、jiadifenoicacidsB（3）、C（4）、G（5）和I（6）、majusanicacidsB（7）和D（8）、lamberticacid（9）、angustanoicacidsF（10）和G（11），及13-hydroxy-8，11，13-podocarpatrien-19-oicacid（12），经活性筛选发现，这些化合物具有较好的抗柯萨奇病毒B3的活性，IC50值为3．3—66．7μmol／ml。结论大八角根中的二萜类化合物抗B3型柯萨奇病毒的活性及毒性与其分子中的含氧取代密切相关，化合物3—6和9为首次从该植物中分离得到的化合物。

关键词：大八角二萜抗柯萨奇病毒活性

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IL3融合蛋白稳定性分析、改造及活性研究

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中国生物工程杂志 2013年第3期33卷 117-122页

作者：张砚君刘荣张梦楠苗庆芳甄永苏熊冬生张益芝中国医学科学院/北京协和医学院血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020 河南省院士工作站郑州人民医院河南450053 中国医学科学院/京协和医学院医药生物技术研究所北京100050

白细胞介素3受体α链(IL-3Rα链)即CD123抗原在急性髓系白血病(AML)干细胞表面高表达,在正常造血干细胞表面几乎不表达,可用做白血病治疗靶点。本实验室构建融合蛋白IL3-LDM靶向杀伤CD123+的肿瘤干细胞,针对其结构不稳定部位进行质谱鉴... 详细信息

白细胞介素3受体α链(IL-3Rα链)即CD123抗原在急性髓系白血病(AML)干细胞表面高表达,在正常造血干细胞表面几乎不表达,可用做白血病治疗靶点。本实验室构建融合蛋白IL3-LDM靶向杀伤CD123+的肿瘤干细胞,针对其结构不稳定部位进行质谱鉴定,发现IL3第131位丙氨酸和第132异亮氨对融合蛋白稳定性起关键作用,经分子克隆改造后,IL3融合蛋白的稳定性得以显著提高,蛋白产量、靶向结合能力没有变化,这一发现有望广泛应用于相关蛋白产品中,有效提高IL3融合蛋白类药物的稳定性。

关键词： IL3 融合蛋白基因改造蛋白质谱急性髓系白血病

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靶向CD123的重组白细胞介素-3-力达霉素融合蛋白对白血病M07e细胞的杀伤机制

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白血病．淋巴瘤 2013年第3期22卷 136-138页

作者：张砚君李真真胡蕴慧袁向飞范冬梅齐怀丰高雪孙长海苗庆芳甄永苏中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020 天津红日药业股份有限公司中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所

目的研究白细胞介素-3-力达霉素（IL-3-LDM）融合蛋白靶向杀伤CD＋123 肿瘤细胞的作用机制。方法用CCK-8检测IL-3-LDM融合蛋白靶向杀伤人类原巨核细胞白血病MO7e细胞的作用，用IC20浓度的IL-3-LDM及LDM分别与MO7e靶细胞培养后，利用An... 详细信息

目的研究白细胞介素-3-力达霉素（IL-3-LDM）融合蛋白靶向杀伤CD＋123 肿瘤细胞的作用机制。方法用CCK-8检测IL-3-LDM融合蛋白靶向杀伤人类原巨核细胞白血病MO7e细胞的作用，用IC20浓度的IL-3-LDM及LDM分别与MO7e靶细胞培养后，利用AnnexinV-FITC及碘化丙啶（PI）染色经流式细胞分选术检测分析细胞凋亡率和周期分布变化。结果 LDM、IL-3-LDM对MO7e细胞的IC50分别为116、50 pmol／L。经IC20浓度的IL-3-LDM（12 pmol／L）融合蛋白与LDM（30 pmol／L）分别处理MO7e细胞后，在24、48、72 h分别检测到细胞凋亡率呈逐渐上升趋势（IL-3-LDM组分别为26.1 %、59.3 %和62.1 %，LDM组分别为34.4 %、43.3 %和55.2 %），且细胞在处理48和72 h后出现明显的G2／M期阻滞现象，与没有靶向的LDM药物作用机制一致。结论 IL-3-LDM融合蛋白作用机制与LDM一致，通过引起细胞G2／M期阻滞导致细胞凋亡进而死亡，证明IL-3靶向作用及其携带的高效药物LDM杀伤作用的有效性。

关键词：重组融合蛋白质类力达霉素白细胞介素-3 白血病细胞周期细胞凋亡

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新型核苷衍生物十八烷氧乙基替诺福韦酯的体内外抗乙型肝炎病毒作用研究

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中国医药生物技术 2013年第3期8卷 173-177页

作者：李思阳李壮陈淑珍章天王淑琴李毅陶佩珍李卓荣中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所化学合成室北京100050 中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所病毒室北京100050 中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所肿瘤室北京100050

目的评价新型核苷衍生物十八烷氧乙基替诺福韦酯(ODE-TFV)在体外及体内的抗乙型肝炎病毒的活性并研究其改善肝脏病理的作用。方法分别以乙型肝炎病毒基因转染的人肝癌2.2.15细胞和DHBV感染的1日龄北京鸭为体外和体内模型,评价ODE-TFV抑... 详细信息

目的评价新型核苷衍生物十八烷氧乙基替诺福韦酯(ODE-TFV)在体外及体内的抗乙型肝炎病毒的活性并研究其改善肝脏病理的作用。方法分别以乙型肝炎病毒基因转染的人肝癌2.2.15细胞和DHBV感染的1日龄北京鸭为体外和体内模型,评价ODE-TFV抑制乙型肝炎病毒复制的活性。结果 2.2.15细胞培养法实验结果显示,ODE-TFV抑制HBV DNA复制的IC50值为(0.38±0.18)μmol/L,抑制活性较阳性药TFV-DF和3TC分别强约18倍和13倍;ODE-TFV 100mg/kg和200mg/kg组,在给药7d和停药3d显示有显著性的DHBV-DNA抑制活性(P<0.01、P<0.05);在鸭体内模型中,ODE-TFV 100mg/kg和200mg/kg能够明显改善DHBV引起的肝细胞坏死和炎细胞浸润,有一定量效关系。结论 ODE-TFV不仅在2.2.15细胞内对HBV-DNA有抑制活性,而且能有效地抑制鸭体内DHBV-DNA的复制,并具有改善肝脏病理的作用。

关键词：肝炎病毒,乙型,鸭抗病毒药 ODE—TFV

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I03A-00723菌株发酵产物95-3的分离纯化及其体外活性

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中国新药杂志 2013年第16期22卷 1882-1885页

作者：董国霞马宵张玉琴贺晓波余利岩田霖谭亚军侯启明张月琴中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所

目的:研究游动放线菌I03A-00723发酵产物95-3的分离纯化与体外生物学活性。方法:发酵I03A-00723菌株,收集菌丝体,用丙酮浸泡、乙酸乙酯萃取,通过硅胶柱色谱、半制备HPLC进行纯化。采用微稀释法和高通量荧光检测法分别测定化合物95-3的... 详细信息

目的:研究游动放线菌I03A-00723发酵产物95-3的分离纯化与体外生物学活性。方法:发酵I03A-00723菌株,收集菌丝体,用丙酮浸泡、乙酸乙酯萃取,通过硅胶柱色谱、半制备HPLC进行纯化。采用微稀释法和高通量荧光检测法分别测定化合物95-3的抗菌活性和对PDF酶的抑制活性。结果:确定了化合物95-3的分离纯化条件,HPLC显示其纯度达100%。体外活性实验结果表明:化合物95-3对粪肠球菌、屎肠球菌的敏感菌株和万古霉素耐药菌株均有较好的抗菌活性,对耐万古霉素屎肠球菌ATCC700221的MIC达到了3μ***-1;化合物95-3对PDF酶有较好的抑制活性。结论:化合物95-3具有较好的抗VRE活性和PDF酶抑制活性,有深入研究价值。

关键词： I03A-00723菌株发酵产物化合物95-3 分离纯化活性研究

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