检索结果-内蒙古大学图书馆

中国新药杂志 2010年第4期19卷 280-283+331页

作者：高瑞娟赵春燕王玉凤炼润梅李电东中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所

目的:测定抗Ⅳ型胶原酶单链抗体Fv和力达霉素辅基蛋白LDP在大肠杆菌中表达产生的融合蛋白Fv-LDP含量。方法:3瓶培养融合蛋白Fv-LDP表达菌,固定化金属亲和层析纯化融合蛋白Fv-LDP,分步透析使之复性,HPLC测其纯度。比色法测定菌体浓度,SDS... 详细信息

目的:测定抗Ⅳ型胶原酶单链抗体Fv和力达霉素辅基蛋白LDP在大肠杆菌中表达产生的融合蛋白Fv-LDP含量。方法:3瓶培养融合蛋白Fv-LDP表达菌,固定化金属亲和层析纯化融合蛋白Fv-LDP,分步透析使之复性,HPLC测其纯度。比色法测定菌体浓度,SDS-PAGE分离蛋白带,积分密度扫描法测定融合蛋白Fv-LDP表达百分比和含量。结果:在88.7~1 064 mg.L-1范围内,融合蛋白Fv-LDP浓度和积分密度值呈线性关系(r=0.998 8),精密度RSD为2.09%(n=8),平均回收率为95.18%。结论:SDS-PAGE-SpotDenso法操作简单,重复性好,灵敏度高,适用于发酵过程中对融合蛋白Fv-LDP表达产量的控制分析。

关键词：单链抗体力达霉素辅基蛋白积分密度扫描法含量发酵

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一株新的小单孢菌C-3509抗肿瘤活性成分的分离、纯化和结构鉴定

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中国新药杂志 2010年第7期19卷 564-568页

作者：赵春燕张文军高瑞娟金莲舫李电东邵荣光中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所

目的:分离纯化小单孢菌C-3509中的抗肿瘤活性成分,并阐明其结构特征。方法:采用多种层析法进行C-3509抗肿瘤活性成分的分离纯化;通过紫外扫描、高分辨电喷雾质谱和核磁共振氢谱揭示其结构特征;利用DNA断裂法检测其抗肿瘤活性。结果:通过... 详细信息

目的:分离纯化小单孢菌C-3509中的抗肿瘤活性成分,并阐明其结构特征。方法:采用多种层析法进行C-3509抗肿瘤活性成分的分离纯化;通过紫外扫描、高分辨电喷雾质谱和核磁共振氢谱揭示其结构特征;利用DNA断裂法检测其抗肿瘤活性。结果:通过对C-3609菌株发酵和活性检测,分离、纯化得到了抗肿瘤活性成分C-3509B;进一步对C-3509B组分进行初步光谱分析与结构鉴定,结果显示该组分结构特征与抗肿瘤抗生素calicheamicinγ1I一致。结论:C-3509B可能是十元环烯二炔calicheamicins的γ1I组分。

关键词：小单孢菌C-3509 烯二炔抗肿瘤抗生素 calicheamicin

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星形孢菌素诱导小鼠T细胞中Caspase非依赖性细胞死亡方式的研究

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中国新药杂志 2010年第8期19卷 691-695页

作者：毛根祥朱小飞王燕王真李电东邓洪斌中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所

目的:研究星形孢菌素(staurosporine,STS)诱导的小鼠T细胞中Caspase非依赖性细胞死亡方式,探讨T细胞死亡的分子机制。方法:在加入或不加Caspase抑制剂z-VAD-fmk(20μmol.L-1)情况下,检测STS(100 ***-1)刺激后小鼠T细胞的凋亡率,DNA ladd... 详细信息

目的:研究星形孢菌素(staurosporine,STS)诱导的小鼠T细胞中Caspase非依赖性细胞死亡方式,探讨T细胞死亡的分子机制。方法:在加入或不加Caspase抑制剂z-VAD-fmk(20μmol.L-1)情况下,检测STS(100 ***-1)刺激后小鼠T细胞的凋亡率,DNA ladder,线粒体膜电位变化以及凋亡相关蛋白AIF,细胞色素C和Bax等的变化。结果:STS诱导的小鼠T细胞凋亡中存在Caspase非依赖性细胞死亡方式,其DNA ladder改变与Caspase依赖性死亡方式不同,线粒体膜电位依然下降,AIF从线粒体转移到细胞质中要早于细胞色素C,且两者的转移需要Bax结合到线粒体上。结论:在STS诱导的小鼠T细胞死亡中,Caspase非依赖性死亡方式可能是Caspase依赖性死亡方式的替代途径,这对于维持T细胞的数量和保证免疫系统功能的正常发挥具有十分重要的意义。

关键词：星形孢菌素小鼠T细胞 Caspase非依赖性凋亡诱导因子

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绿脓杆菌SecA ATPase抑制剂筛选模型的建立和应用

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微生物学通报 2010年第12期37卷 1771-1778页

作者：王宇赵莉莉李秋萍魏玉珍张玉琴余利岩中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所北京100050

Sec途径(分泌途径,Secretion pathway)是蛋白质转运的主要途径。其中,SecA ATPase是蛋白质转运途径中的"动力泵",它通过ATP的水解循环驱使蛋白质前体穿过细菌内膜。SecA蛋白在细菌中是独有且不可缺少的。克隆和高效表达绿脓杆... 详细信息

Sec途径(分泌途径,Secretion pathway)是蛋白质转运的主要途径。其中,SecA ATPase是蛋白质转运途径中的"动力泵",它通过ATP的水解循环驱使蛋白质前体穿过细菌内膜。SecA蛋白在细菌中是独有且不可缺少的。克隆和高效表达绿脓杆菌PasecAN75蛋白(绿脓杆菌SecA蛋白N端645个氨基酸残基组成的片段,大小约75 kD)并优化其ATPase酶活测定体系,在此基础上建立了更为灵敏的SecA蛋白ATPase活性抑制剂的筛选模型。运用该模型从化合物库的3220个样品中筛选得到可抑制绿脓杆菌SecA ATP酶的活性阳性化合物4个,从7196个微生物发酵液中得到66个阳性样品,筛选阳性率为0.67%(以抑制率大于30%为筛选阳性标准)。而后通过已建立的细胞水平筛选模型对其抗菌活性进行验证。研究结果表明3个化合物样品和6个发酵液样品在酶水平和细胞水平对绿脓杆菌SecA ATPase均有较好的抑制作用,值得进一步研究。

关键词：药物筛选模型绿脓杆菌SecA蛋白化合物发酵液

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喹诺酮抗肿瘤活性及构效关系研究进展

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中国医药工业杂志 2010年第6期41卷 456-463页

作者：吕凯冯连顺刘明亮郭慧元中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所北京100050

通过对喹诺酮的N-1、C-2、C-3、C-6和C-7位等进行结构改造,成功地将其经典的抗菌作用转化为对哺乳动物的细胞毒性,并筛选出若干具有潜在抗肿瘤活性的化合物,其中有数个候选物已处于临床研究或临床前评价阶段。本文综述了近年来喹诺酮在... 详细信息

通过对喹诺酮的N-1、C-2、C-3、C-6和C-7位等进行结构改造,成功地将其经典的抗菌作用转化为对哺乳动物的细胞毒性,并筛选出若干具有潜在抗肿瘤活性的化合物,其中有数个候选物已处于临床研究或临床前评价阶段。本文综述了近年来喹诺酮在抗肿瘤活性及其构效关系、作用机制等方面的研究进展。

关键词：喹诺酮抗肿瘤活性构效关系作用机制综述

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几种抑制HIV-1复制酶的植物成分

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药学学报 2010年第2期45卷 235-240页

作者：彭宗根许利嘉叶文才肖培根陈鸿珊中国医学科学院、北京协和医学院医药生物技术研究所北京100050 中国医学科学院、北京协和医学院药用植物研究所北京100193 暨南大学药学院广东广州510632

植物活性成分结构多样性和其作用多靶点的特点,已使其成为寻找抗HIV-1药物的重要来源之一。为从植物中获得结构新颖的抗HIV-1活性先导化合物,本文应用HIV-1蛋白酶(PR)、逆转录酶(RT)和整合酶(IN)筛选模型,对45个来源于毛茛科、芸香科和... 详细信息

植物活性成分结构多样性和其作用多靶点的特点,已使其成为寻找抗HIV-1药物的重要来源之一。为从植物中获得结构新颖的抗HIV-1活性先导化合物,本文应用HIV-1蛋白酶(PR)、逆转录酶(RT)和整合酶(IN)筛选模型,对45个来源于毛茛科、芸香科和五味子科等植物的结构清楚的化合物进行了体外活性测定。12个三萜类化合物中8个具有抑制HIV-1PR活性,其中2个还具有抑制IN活性;15个木脂素类化合物中2个具有抑制HIV-1RT活性。6个生物碱类、7个黄酮类及5个其他结构类型的化合物都无明显抑制3种复制酶的作用。植物来源的三萜类化合物抑制PR或IN的活性较好,值得深入研究。

关键词：植物成分 HIV-1 复制酶活性筛选

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植物内生阿维链霉菌I06A-01716次生代谢产物的研究

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中国抗生素杂志 2010年第3期35卷 175-180,205页

作者：李舟郑光辉闫蕾蕾张玉琴余利岩魏玉珍李秋萍姜翠霞韩宁宁何琪杨刘少伟高红孙承航中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所北京100050 桂林医学院药学院桂林541004

目的分离鉴定阿维链霉菌I06A-01716发酵液中抗植物病原真菌活性成分,并进行抗真菌、抗肿瘤和免疫抑制活性研究。方法在抗真菌活性指导下,采用硅胶柱层析、凝胶柱层析、HPLC等分离手段对活性组分进行分离;通过高分辨质谱,1D-NMR和2D-NMR... 详细信息

目的分离鉴定阿维链霉菌I06A-01716发酵液中抗植物病原真菌活性成分,并进行抗真菌、抗肿瘤和免疫抑制活性研究。方法在抗真菌活性指导下,采用硅胶柱层析、凝胶柱层析、HPLC等分离手段对活性组分进行分离;通过高分辨质谱,1D-NMR和2D-NMR对其结构进行鉴定;采用琼脂平板纸片法,进行抗植物病原真菌的最低抑制浓度测定;采用MTT法检测其对肿瘤细胞生长的抑制作用;采用流式细胞仪测定其对细胞周期的影响。结果分离得到2个活性组分:1716-1和1716-2。1716-1和1716-2对人肝癌细胞HepG2的IC50值分别为2.42μg/mL和3.42μg/mL;对人口腔上皮癌细胞KB的IC50值分别为1.64μg/mL和6.73μg/mL。细胞周期研究表明,随着1716-2的浓度增加,在KB细胞中,G2/M期比例由对照组的15.23%逐步升高到36.53%;在HepG2细胞中,G2/M期比例由对照组的4.39%升高到35.78%。结论1716-1和1716-2结构分别与寡霉素B和寡霉素A一致。1716-1和1716-2有抗多种植物病原真菌活性。1716-1和1716-2在较低浓度下能够抑制人肝癌细胞HepG2和人口腔上皮癌细胞KB生长。1716-2使HepG2细胞和KB细胞阻滞在G2/M期。

关键词：寡霉素A 寡霉素B 抗肿瘤活性抗真菌活性

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活体成像分析异硫氰酸荧光素标记Rituximab在荷淋巴瘤裸鼠体内的生物分布

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中华医学杂志 2010年第33期90卷 2367-2370页

作者：张胜华程昕钟根深熊冬生邵荣光中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所肿瘤研究室 100050 中国医学科学院北京协和医学院实验血液学国家重点实验室

目的应用活体动物体内光学成像系统观察抗体药物Rituximab在荷淋巴瘤裸鼠体内的生物分布。方法制备FITC标记的Rituximab（FITC—Rituximab），用激光扫描共聚焦显微镜和流式细胞仪体外分析***与人淋巴瘤Raji细胞的亲和力；建立裸鼠淋巴... 详细信息

目的应用活体动物体内光学成像系统观察抗体药物Rituximab在荷淋巴瘤裸鼠体内的生物分布。方法制备FITC标记的Rituximab（FITC—Rituximab），用激光扫描共聚焦显微镜和流式细胞仪体外分析***与人淋巴瘤Raji细胞的亲和力；建立裸鼠淋巴瘤皮下移植瘤模型，应用活体动物体内光学成像系统观察FITC—Rituximab在荷瘤小鼠体内的分布。结果流式细胞仪和激光扫描共聚焦显微镜检测证明FITC—Rituximab与淋巴瘤Raji细胞有较好的亲合活性，主要结合在细胞膜表面。体内活体动物光学成像分析表明，FITC—Rituximab在1h内即可特异性地在肿瘤部位富集，3～4h即可进入肿瘤组织内部并达到最大浓度富集，8～10h后在肿瘤组织仍可观察到FITC—Rituximab的特异性的富集，而在其他组织器官没有可见的荧光存在；双侧皮下移植瘤模型再次证明FITC—Rituximab具有对CD20抗原过表达的淋巴瘤特异性结合能力。结论动物活体成像系统能够准确地监测FITC标记Rituximab在荷瘤裸鼠体内的动态分布情况，该技术对实时分析抗体药物在荷瘤小鼠体内的靶向效果具有参考价值和指导意义。

关键词：抗体,单克隆组织分布淋巴瘤,B细胞

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链霉菌调控蛋白DasRABC的研究进展

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微生物学通报 2010年第9期37卷 1369-1373页

作者：白利平李元中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所北京100050

越来越多的研究证明DasR及其相邻的DasABC转运蛋白超家族在链霉菌代谢和形态分化中发挥重要调控作用。就DasR的结构、调控序列特点及其与DasABC的关系、DasRABC调控链霉菌发育及次生代谢、DasRABC与链霉菌营养利用等几方面讨论调控蛋白D... 详细信息

越来越多的研究证明DasR及其相邻的DasABC转运蛋白超家族在链霉菌代谢和形态分化中发挥重要调控作用。就DasR的结构、调控序列特点及其与DasABC的关系、DasRABC调控链霉菌发育及次生代谢、DasRABC与链霉菌营养利用等几方面讨论调控蛋白DasRABC的研究进展。

关键词： DasR DasABC 链霉菌

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雷帕霉素聚乳酸-聚乙醇酸共聚物纳米粒子对人脐动脉平滑肌细胞细胞周期时相、p27蛋白表达及细胞增殖的影响

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中国医学科学院学报 2010年第1期32卷 32-38,139页

作者：苗立夫黄超联陈连凤朱文玲杨菁王以光张华刘佩毛佘铭鹏宋存先清华大学第一附属医院心脏中心北京100016 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院心脏内科北京100730 中国医学科学院北京协和医学院生物医学工程研究所天津市生物材料重点实验室天津300192 中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所卫生部抗生素生物工程重点实验室北京100050 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所病理室北京100005

目的评估本实验室自制包载雷帕霉素(RPM)的聚乳酸-聚乙醇酸共聚物(PLGA)纳米粒子(NPs)对离体培养的人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC)细胞周期时相、p27蛋白表达和细胞增殖的影响。方法按不同浓度RPM-PLGA NPs设定药物作用组,并设立RPM组、PLG... 详细信息

目的评估本实验室自制包载雷帕霉素(RPM)的聚乳酸-聚乙醇酸共聚物(PLGA)纳米粒子(NPs)对离体培养的人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC)细胞周期时相、p27蛋白表达和细胞增殖的影响。方法按不同浓度RPM-PLGA NPs设定药物作用组,并设立RPM组、PLGA组和M231培养基及平滑肌细胞生长添加剂(M231-SMGs)组作为对照。采用细胞免疫组织化学染色比较不同处理组HUASMC p27蛋白表达阳性率和表达水平的差异,流式细胞技术评价各处理组对HUASMC细胞周期时相的影响,噻唑蓝(MTT)比色法观察不同浓度RPM和RPM-PLGA NPs对HUASMC存活率的影响。结果10μg/L及以上浓度的RPM和50μg/L及以上浓度的RPM-PLGA NPs可明显抑制HUA-smc生长,并呈浓度依赖性。细胞计数绘制生长-时间曲线显示,100μg/L RPM和500μg/L RPM-PLGA NPs作用于HUASMC 24 h后细胞计数值明显低于M231-SMGs对照组;单纯PLGA NPs对细胞生长无明显影响;与PLGA组和M231-SMGs培养基对照组相比,RPM组和RPM-PLGA NPs组G_0/G_1期细胞比例明显增多,S期及G_2/M期细胞比例明显减少(P均<0.01),但两组间细胞周期时相比例差异无统计学意义(P>0.05)。细胞免疫组织化学染色结果显示,100μg/LRPM和500μg/L RPM-PLGA NPs组的HUASMC p27蛋白表达阳性率和表达水平与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),但均较PLGA组和M231-SMGs培养基组明显增加(P<0.01)。结论RPM-PLGA NPs抑制体外培养的HUASMC生长效果与RPM相似,并可显著抑制体外培养HUASMC p27蛋白表达,阻抑其细胞周期进程于G_1/S期而抑制其细胞增殖。

关键词：雷帕霉素聚乳酸-聚乙醇酸共聚物纳米粒子人脐动脉平滑肌细胞细胞周期细胞增殖 p27蛋白

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