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粗糙脉孢霉昼夜钟核心因子WC-1的磷酸化调节光适应的机制

粗糙脉孢霉昼夜钟核心因子WC-1的磷酸化调节光适应的机制

引用

2009全国时间生物医学学术会议

作者：何琪杨中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所

目的:模式生物粗糙脉孢霉是研究昼夜钟的重要材料,因其生长快速、遗传操作简单,为阐明昼夜钟的分子调节机制提供了一个不可多得的模型。我们在国内外首次证实昼夜钟核心因子WC-1是光受体的基础上,深入研究其光适应的分子机制,以便更为... 详细信息

目的:模式生物粗糙脉孢霉是研究昼夜钟的重要材料,因其生长快速、遗传操作简单,为阐明昼夜钟的分子调节机制提供了一个不可多得的模型。我们在国内外首次证实昼夜钟核心因子WC-1是光受体的基础上,深入研究其光适应的分子机制,以便更为准确地了解其动态过程。方法:Western blot检测蛋白质磷酸化水平的变化、凝

关键词：磷酸化粗糙脉孢霉

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抗肿瘤抗生素与分子靶向治疗

抗肿瘤抗生素与分子靶向治疗

引用

2009医学前沿论坛暨第十一届全国肿瘤药理与化疗学术会议

作者：甄永苏中国医学科学院、北京协和医学院医药生物技术研究所

抗肿瘤抗生素是由微生物产生的具有抗肿瘤活性的化学物质。微生物的代谢产物极其复杂多样,是发现与研制抗肿瘤新药物的丰富资源。从已报道的抗肿瘤抗生素可以看到其化学结构是多种多样的,大致可分为:(1)醌类,其中又可分为:蒽环类,柔红... 详细信息

抗肿瘤抗生素是由微生物产生的具有抗肿瘤活性的化学物质。微生物的代谢产物极其复杂多样,是发现与研制抗肿瘤新药物的丰富资源。从已报道的抗肿瘤抗生素可以看到其化学结构是多种多样的,大致可分为:(1)醌类,其中又可分为:蒽环类,柔红霉素、阿霉素、

关键词：抗肿瘤抗生素分子靶点偶联物杀伤作用

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红景天有效成分HJT-1延缓衰老的作用及机制

红景天有效成分HJT-1延缓衰老的作用及机制

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2009全国抗衰老与老年痴呆学术会议

作者：毛根祥苑隆国王真李电东中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所

目的系统研究红景天有效成分HJT-1延缓衰老的作用及其机制。方法1)研究HJT-1对果蝇寿命的影响。2)采用自然衰老小鼠观察HJT-1对清除自由基相关酶的影响:测定超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱苷肽过氧化物酶（GSH-Px）活性,同时观察过氧化脂... 详细信息

目的系统研究红景天有效成分HJT-1延缓衰老的作用及其机制。方法1)研究HJT-1对果蝇寿命的影响。2)采用自然衰老小鼠观察HJT-1对清除自由基相关酶的影响:测定超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱苷肽过氧化物酶（GSH-Px）活性,同时观察过氧化脂质（LPO）产物丙二醛（MDA）水平的变化。3)以亚致死量HO诱导人胚肺二倍体成纤维细胞

关键词：衰老红景天有效成份果蝇氧化应激

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力达霉素抑制神经胶质瘤血管拟态和促细胞凋亡

力达霉素抑制神经胶质瘤血管拟态和促细胞凋亡

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2009医学前沿论坛暨第十一届全国肿瘤药理与化疗学术会议

作者：李兴起张胜华欧阳志钢甄永苏中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所

目的评价烯二炔类抗生素力达霉素抑制神经胶质瘤细胞体外血管拟态和促进细胞凋亡的效果。方法神经胶质瘤细胞C6细胞和U87细胞凋亡以Annexin V-FITC/PI法结合流式细胞仪法进行分析,小管形成实验分析药物对C6细胞和U87细胞的血管拟态的影... 详细信息

目的评价烯二炔类抗生素力达霉素抑制神经胶质瘤细胞体外血管拟态和促进细胞凋亡的效果。方法神经胶质瘤细胞C6细胞和U87细胞凋亡以Annexin V-FITC/PI法结合流式细胞仪法进行分析,小管形成实验分析药物对C6细胞和U87细胞的血管拟态的影响。结果0.1nM、0.5nM和1nM力达霉素可使C6神经胶质瘤细胞凋亡率分别为17.79%±1.43%、34.12%±2.13%和56.42%±2.96%,与对照组相比,显著性差异分别为P<0.01、P<0.001及P<0.001;同样浓度的力达霉素处理U87神经胶质瘤细胞后其凋亡率分别为25.11%±2.69%、50.11%±2.56%和71.79%±1.83%,与对照组相比,显著性差异分别为P<0.05、P<0.001及P<0.001。2nM、10nM和20nM新制癌菌素处理的C6细胞和U87细胞其凋亡率与力达霉素具有相同的效应。血管拟态实验显示,0.1nM、0.5nM和1nM力达霉素对神经胶质瘤C6细胞细胞形成的血管拟态具有明显的抑制作用,对照相比,显著性差异分别为P<0.05、P<0.05及P<0.01;U87细胞在同样浓度的药物作用下,对照相比,显著性差异均为P<0.05;2nM、10nM和20nM新制癌菌素则与力达霉素的具有相同的作用趋势。结论力达霉素与新制癌菌素可以促进神经胶质瘤细胞凋亡及抑制神经胶质瘤细胞形成血管拟态,但力达霉素要比新制癌菌素明显有效。烯二炔类抗生素有希望用于临床治疗神经胶质瘤,力达霉素比新制癌菌素更易于为临床实验所接受。

关键词：力达霉素神经胶质瘤细胞凋亡率神经胶质瘤细胞凋亡

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白藜芦醇增强吉西他滨抗肝癌活性的机制

白藜芦醇增强吉西他滨抗肝癌活性的机制

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2009医学前沿论坛暨第十一届全国肿瘤药理与化疗学术会议

作者：史卫卫刘秀筠张秀敏何琪杨北京协和医学院中国医学科学院医药生物技术研究所

目的:研究白藜芦醇（Resveratrol,RES）增强吉西他滨（Gemcitabine,GEM）抗肝癌活性的机制。方法:利用小鼠H22肝癌模型,随机分为5组,每组10只:生理盐水对照组、RES单药组（10mg/kg）、GEM低剂量组（25mg/kg）、低剂量合用组（GEM 25mg/k... 详细信息

目的:研究白藜芦醇（Resveratrol,RES）增强吉西他滨（Gemcitabine,GEM）抗肝癌活性的机制。方法:利用小鼠H22肝癌模型,随机分为5组,每组10只:生理盐水对照组、RES单药组（10mg/kg）、GEM低剂量组（25mg/kg）、低剂量合用组（GEM 25mg/kg+RES10mg/kg）、GEM高剂量组（50mg/kg）、高剂量合用组（GEM 50mg/kg+RES 10mg/kg）;以肿瘤的体积变化及其最终的瘤重,作为体内抗肿瘤增效作用的指标。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法,检测药物对细胞增殖的抑制作用。流式细胞仪（FCM）检测两药合用对HepG2细胞周期的影响,采用Western blot法,检测药物作用HepG2细胞后的信号通路相关蛋白的表达变化。结果:在小鼠体内实验中,RES单药组的抑瘤率为18.2%,GEM单药低剂量组抑瘤率为37.2%,RES与GEM低剂量合用组抑瘤率为62.2%（与GEM单药组比P<0.01）,两药合用CDI为0.73;GEM单药高剂量组抑瘤率为69.7%,RES与GEM高剂量合用组抑瘤率为86.2%（与GEM单药组比P<0.05）,两药合用CDI为0.56,体内实验表明RES与GEM合用抑瘤协同作用非常显著。MTT结果显示,0.2μM GEM与20μM RES合用,对HepG2细胞的生长抑制具有显著协同增效作用,但对人结肠癌HCT116的增效作用不明显;RES不能增强GEM对人正常肝细胞（L02）及人胚肺成纤维细胞（2BS）的抑制作用。FCM结果也表明:RES增加了GEM诱导HepG2细胞的凋亡率。RES导致HepG2细胞周期阻滞于S期,GEM将HepG2细胞周期阻滞于G期,两药合用时,HepG2细胞周期停滞于S期。Western blot结果表明两药合用时,细胞凋亡指标PARP被降解蛋白增加,P53表达增加,细胞周期调控因子CylinD1表达降低。结论:RES在体内外明显地增强GEM的抗肝癌活性,但对正常细胞的增效作用不明显。其增效机制与增加GEM诱导的细胞凋亡有关,影响信号通路的分子机制正在研究当中。

关键词： GEM 低剂量吉西他滨抗肝癌活性抑瘤率白藜芦醇

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基于HCV ns5b聚合酶活性的报告基因检测系统的细胞模型的建立

基于HCV ns5b聚合酶活性的报告基因检测系统的细胞模型的建立

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第十一届全国抗生素(微生物药物)学术会议

作者：丁存宝赵晔张靖溥中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所北京 100050

目的：丙型肝炎病毒(HCV)是导致慢性肝炎的主要因素之一，具有一条正链ssRNA，编码一个大的多聚蛋白。产生HCV病毒粒子的细胞培养系统已经开发出来，目前主要用来研究HCV的生活史和抗HCV药物。然而，在HCV病毒感染或复制系统中，HCV病... 详细信息

目的：丙型肝炎病毒(HCV)是导致慢性肝炎的主要因素之一，具有一条正链ssRNA，编码一个大的多聚蛋白。产生HCV病毒粒子的细胞培养系统已经开发出来，目前主要用来研究HCV的生活史和抗HCV药物。然而，在HCV病毒感染或复制系统中，HCV病毒滴度的检测只能依靠RT-PCR方法或免疫荧光法，这些方法在高通量药物筛选中相当麻烦。
　　方法：为了克服以上问题，我们构建了一个双顺反子报告基因质粒，pHIG3NCR，其包含CMV启动子调控下的HCV的5'IRES-Core的反向序列，后面以EMCV的IRES-EGFP的反向序列，最后连接HCV的3'NCR。利用此报告质粒和pIRESDsRed-NS5B质粒共转染Huh7细胞,NS5B聚合酶能够以报告质粒产生的反向mRNA为模版合成出相应的正向序列，因而可以产生GFP绿色荧光，其强弱代表了NS5B活性。利用相应的已知NS5B抑制剂作为阳性药物，检测此报告系统的检测灵敏度。
　　结果：将pHIG3NCR和pIRESDsRed-NS5B共转染Huh7细胞后，通过荧光显微镜观察，能够看到红色荧光和绿色荧光，证明有GFP和DsRed的表达。同时，利用NS5B和Core的特异抗体，通过细胞免疫组化方法检测，都能检测到NS5B和Core蛋白的表达。通过RT-PCR方法能够检测到NS5B和Core的RNA表达。利用NS5B抑制剂R1626检测，与对照组相比最高达到68.1％的抑制率，并呈剂量依赖性。这些结果证明构建的NS5B抑制剂细胞筛选模型能够应用于抗HCV药物的高通量筛选，并可以支持在活体检测。
　　结论：本实验首次构建了适于高通量筛选的抗HCV药物的细胞模型。

关键词：丙型肝炎病毒 NS5B RdRp聚合酶活性基因检测系统细胞模型免疫荧光法抗HCV药物高通量筛选

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红景天有效成分HJT-1延缓衰老的作用及机制

红景天有效成分HJT-1延缓衰老的作用及机制

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第二届全国衰老与抗衰老学术大会

作者：毛根祥苑隆国王真李电东中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所北京 100050

目的：系统研究红景天有效成分HJT-1延缓衰老的作用及其机制。方法：1)研究HJT-1对果蝇寿命的影响。2)采用自然衰老小鼠观察HJT-1对清除自由基相关酶活性及过氧化脂质(LPO)产物丙二醛(MDA)水平的影响。3)以亚致死量H2O2诱导人胚肺... 详细信息

目的：系统研究红景天有效成分HJT-1延缓衰老的作用及其机制。方法：1)研究HJT-1对果蝇寿命的影响。2)采用自然衰老小鼠观察HJT-1对清除自由基相关酶活性及过氧化脂质(LPO)产物丙二醛(MDA)水平的影响。3)以亚致死量H2O2诱导人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS)早熟性衰老为模型，研究HJT-1对模型细胞形态、细胞周期、衰老相关的β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)和DNA损伤修复等方面的影响，并探索HJT-1延缓衰老的分子机制。结果：1)HJT-1明显延长果蝇的平均寿命，雄蝇延长10.5天,增加19.9％，具有显著性差异(P<0.05);雌蝇延长15.8天，增加26.3％，差异非常显著(P<0.01)。2)老年小鼠在给予HJT-1后，血清、心、肝和脑组织中的SOD活力明显升高(P<0.05);血清和肝脏中的GSH-PX活性明显升高(P<0.05)，分别达45.57±1.39U/mg和38.62±2.30U/mg;血清、心、肝和肾组织的过氧化脂质产物MDA含量显著降低(P<0.05)，分别平均降低27％、34％、71％和20％左右。3)HJT-1能有效逆转模型细胞的衰老表型，衰老相关的β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色率由70％降至30％左右，细胞活力上调，形态上也向"年轻化"转变，DNA损伤减少,并剂量依赖性和时间依赖性下调p53、p21和p16蛋白质表达水平,这与其能抑制G1期阻滞、驱动细胞进入S期相关。结论：HJT-1具有显著的延缓衰老作用，能上调机体内抗氧化系统的活性，降低氧化应激水平，减少氧化损伤;分子水平上HJT-1下调p21和p16等细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子，促进G1细胞释放，从而延缓细胞衰老。

关键词：抗衰老机制红景天有效成份植物药

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昼夜钟影响衰老进程的机制

昼夜钟影响衰老进程的机制

引用

第二届全国衰老与抗衰老学术大会

作者：单永强何琪杨中国医学科学院/北京协和医学院医药生物技术研究所北京 100050

应对人口老龄化的挑战,尤其是面对我国经济欠发达时就已将进入老龄化社会的现实,迫切需要加强老年医学的研究，为健康老龄化提供理论和应用基础。本文介绍了昼夜钟的调控机制和分子调节机制，研究表明昼夜钟作为一种具有广泛调节作用的... 详细信息

应对人口老龄化的挑战,尤其是面对我国经济欠发达时就已将进入老龄化社会的现实,迫切需要加强老年医学的研究，为健康老龄化提供理论和应用基础。本文介绍了昼夜钟的调控机制和分子调节机制，研究表明昼夜钟作为一种具有广泛调节作用的生理和病理调控机制参与了衰老进程的调控，对昼夜钟及其功能的研究必然能够对衰老与抗衰老研究起到有意义的推动作用。

关键词：衰老进程昼夜钟调控机制分子调节机制

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基因工程重组力达霉素的构建及抗肿瘤活性

基因工程重组力达霉素的构建及抗肿瘤活性

引用

第十一届全国抗生素(微生物药物)学术会议

作者：茹琴陈红霞尚伯扬郑艳波甄永苏中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所北京 100050

力达霉素(lidamycin，LDM，又称C-1027)是从链霉菌代谢产物中筛选出的具有高效抗肿瘤活性的烯二炔类抗生素，由发色团AE和110个氨基酸残基组成的辅基蛋白LDP以非共价键组成，两者通过发色团核心和疏水氨基酸残基的疏水相互作用结合，可... 详细信息

力达霉素(lidamycin，LDM，又称C-1027)是从链霉菌代谢产物中筛选出的具有高效抗肿瘤活性的烯二炔类抗生素，由发色团AE和110个氨基酸残基组成的辅基蛋白LDP以非共价键组成，两者通过发色团核心和疏水氨基酸残基的疏水相互作用结合，可以拆分与重建。目前以力达霉素作为“弹头”药物构建的抗体导向药物都是将抗体基因和力达霉素辅基蛋白基因重组，导入大肠杆菌中进行表达，产生具有与抗原结合特性的融合蛋白，再与发色团体外组装形成强化融合蛋白，将LDM的低分子量、分子可拆分、强效抗肿瘤作用的优势与单链抗体靶向强、组织穿透能力强、清除快等优势相结合，达到高效抗肿瘤的目的。但是大肠杆菌表达产生的蛋白与链霉菌表达产生的蛋白结构是否完全相同，与发色团组装后能否实现力达霉素的高效抗肿瘤效果，蛋白表达时所带的His-Tag标签是否影响力达霉素的抗肿瘤活性，目前尚不清楚。本实验构建完整力达霉素辅基蛋白表达载体，表达重组辅基蛋白rLDP,分离纯化后与发色团组装形成重组力达霉素rLDM，对其活性进行了初步研究。

关键词：力达霉素烯二炔类抗生素基因工程重组抗肿瘤活性抗体基因分离纯化

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抗EGFR单链抗体与力达霉素辅基蛋白融合蛋白的构建及其抗肿瘤活性

抗EGFR单链抗体与力达霉素辅基蛋白融合蛋白的构建及其抗肿瘤活性

引用

第十一届全国抗生素(微生物药物)学术会议

作者：商悦盛唯瑾甄永苏中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所北京 100050

目的：利用基因重组技术构建表达抗EGFR单链抗体与力达霉素辅基蛋白的融合蛋白ER(Fv-LDP)，研究其对EGFR高表达肿瘤细胞的体外抑制作用和体内抗肿瘤活性。　　方法：用PCR方法扩增抗EGFR单链抗体基因，并将其连接至含有力达霉素辅基蛋... 详细信息

目的：利用基因重组技术构建表达抗EGFR单链抗体与力达霉素辅基蛋白的融合蛋白ER(Fv-LDP)，研究其对EGFR高表达肿瘤细胞的体外抑制作用和体内抗肿瘤活性。
　　方法：用PCR方法扩增抗EGFR单链抗体基因，并将其连接至含有力达霉素辅基蛋白基因的重组质粒pET-LDP，构建含有融合蛋白基因的重组质粒pET-Fv-LDP。转化到大肠杆菌BL21(DE3)starTM中，IPTG诱导表达带有组氨酸标签肽(His-tag)的融合蛋白ER(Fv-LDP)。用Ni离子亲和柱对融合蛋白进行纯化。运用ELISA、流式细胞术和MTT方法研究融合蛋白对EGFR不同表达水平肿瘤细胞的亲和能力及体外抑制作用。用人鳞状上皮癌A431裸鼠移植瘤进行融合蛋白体内抗肿瘤活性研究。
　　结果：(1) SDS-PAGE电泳显示融合蛋白ER(Fv-LDP)分子量约为38kDa，主要以包涵体形式表达，表达量约为全菌蛋白的8%。ELISA检测结果表明融合蛋白与EGFR高表达的鳞癌A431细胞和肺癌A549细胞有较强的结合能力，亲和常数分别为1.0×lO8M-1和1.8×108M-1。流式细胞周期测定结果表明融合蛋白可将细胞周期阻滞于G2/M期。MTT结果显示，融合蛋白对EGFR高表达肿瘤细胞的生长具有明显的抑制作用，其作用于A431和A549细胞的IC50值分别为1.3×10-7M和8.4×10-8M。 O.5mg/kg和5mg/kg两个剂量的融合蛋白对人鳞状上皮癌A431裸鼠移植瘤的抑制率分别为51.4%和67.5%，高于力达霉素辅基蛋白组(5 mg/kg)的抑制率16.3%，且裸鼠体重未有明显差异。
　　结论：融合蛋白ER(Fv-LDP)对EGFR高表达的肿瘤细胞具有较强的亲和力，能够引起细胞周期G2/M期阻滞，对EGFR高表达肿瘤细胞A431和A549具有体外杀伤作用;对EGFR高表达的人鳞状上皮癌A431裸鼠移植瘤有显著抑制作用，有望成为一种具有应用前景的抗体导向药物。

关键词：抗EGFR单链抗体力达霉素融合蛋白抗肿瘤活性细胞周期

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