心脑血管疾病是当前病死率最高的疾病,动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是心脑血管疾病的主要病理基础,世界销量最大药物-他汀类药物通过抑制胆固醇的生物合成,上调LDL受体的表达来降血脂,是当今公认有效的抗动脉粥样硬化药物。但该类药也仅能降低不到40%的心血管事件,且有横纹肌溶解、肝毒性等毒副作用,亟需研发新型药物。动脉粥样硬化的发病机制研究表明,当内皮细胞受损,单核细胞及LDL透过内皮细胞,经氧化诱导分化成巨噬细胞和氧化变性的Ox-LDL,血管平滑肌细胞受炎症因子的诱导破裂分化成巨噬细胞。分化的巨噬细胞大量表达清道夫受体SR-A和CD36,无限制摄取变性LDL形成泡沫细胞。泡沫细胞及其所含的大量胆固醇酯是动脉粥样硬化早起病灶的主要细胞和成分组成。临床研究表明血浆中高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)的水平与动脉粥样硬化及心血管疾病的发病率呈负相关。因此,适度升高功能性HDL,能够增强由HDL执行的胆固醇逆转运(reve rse cho l este ro l t ransport,RCT)过程,从而促进胆固醇外排,最终起到预防和治疗基于AS的心脑血管疾病。寻找提高高密度脂蛋白(HDL)的药物一直是人们希望的新的治疗途径。研究表明,HDL抗动脉粥样硬化的核心机制就是参与巨噬细胞的胆固醇逆转运。巨噬细胞的RCT过程是指胆固醇从血管壁上已经泡沫化的巨噬细胞中流出,介导此过程以及肝细胞摄取胆固醇的主要分子包括三磷酸腺苷结合盒转运体蛋白家族(ATP binding cassette transporter,ABC)中的ABCA1、ABCG1,高密度脂蛋白受体家族(SR-BI等)以及调节脂蛋白表达的核受体及核因子(如PPARs、LXRs)等。这些功能蛋白或者受体均能接受小分子化合物的调控,并且它们不是独立地发挥作用,而是相互协调以及通过细胞信号转导式地网络调节。针对胆固醇逆转运过程,我们建立了一系列的基于分子靶标及高表达靶蛋白细胞的抗动脉粥样硬化药物高通量筛选模型,通过大量筛选,及分子与细胞活性评价,获得若干个阳性化合物如吴茱萸次碱及其衍生物等,利用apoE敲除小鼠高脂饮食动脉粥样硬化模型,在体内外证明了这些化合物的确具有优异的动脉粥样化防治作用,而且是通过促进胆固醇逆转运而起作用。因此,我们进一步通过小分子药物先导物为探针系统地通过体内外实验证明胆固醇逆转运途径中的ABCA1、SRBI及相关核受体是新型抗动脉粥样硬化药物的靶标。
目的研究野黄芩苷的体外促成骨分化作用。方法利用荧光素酶报告基因系统检测野黄芩苷对稳定转染bmp2启动子的MC3T3-bmp2-Luc细胞中bmp2转录活性的影响;体外培养小鼠颅骨来源的前体成骨细胞系MC3T3-E1和小鼠多能间充质干细胞样成纤维细胞C3H10T1/2,采用MTT的方法检测野黄芩苷对细胞增殖的影响;p-NPP法检测野黄芩苷对成骨细胞内碱性磷酸酶活性的影响以及通过茜素红染色的方法考察野黄芩苷对钙化结节形成的影响;Real-time PCR进一步验证野黄芩苷长时间诱导后对成骨细胞bmp2 m RNA水平的影响。结果野黄芩苷可以在20μmol/L显著上调bmp2转录活性（P〈0.001）;在1~20μmol/L的剂量浓度范围内,野黄芩苷作用72 h后对MC3T3-E1细胞增殖不明显但也无杀伤作用。野黄芩苷在两种实验用细胞中均能剂量依赖地上调ALP的活性,其中10μmol/L和20μmol/L最为显著（P〈0.05）,并且在C3H10T1/2细胞中该作用呈时间依赖性。同时也观察到24 d诱导后,野黄芩苷（5~10μmol/L）可以增加成骨细胞钙化结节的数目,且诱导12 d后,在5~20μmol/L浓度下上调bmp2 m RNA的水平。结论野黄芩苷具有体外促成骨分化的活性,有潜力成为抗骨质疏松候选化合物。
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