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2015年中国药学大会暨第十五届中国药师周

作者：张娜窦玥莹刘璐毕重文宋丹青邓洪斌中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所

目的:内质网在真核细胞的蛋白质合成、折叠及运输过程中发挥重要的作用,各种环境刺激,生理、病理的损伤都会引起内质网应激反应(ERS)。此时,未折叠或错误折叠的蛋白会大量积累,激活未折叠蛋白反应(UPR)。槐定酸衍生物IMB-6G是具有我国... 详细信息

目的:内质网在真核细胞的蛋白质合成、折叠及运输过程中发挥重要的作用,各种环境刺激,生理、病理的损伤都会引起内质网应激反应(ERS)。此时,未折叠或错误折叠的蛋白会大量积累,激活未折叠蛋白反应(UPR)。槐定酸衍生物IMB-6G是具有我国自主知识产权、全新骨架结构的化合物。前期研究表明IMB-6G在多种肿瘤细胞系中表现出较强的抑制活性,并具有较好的安全性和成药性特征,然而其具体的抗肿瘤机制尚不明确。本研究以内质网应激诱导的未折叠蛋白反应通路分子为研究对象,探讨槐定酸衍生物IMB-6G抗肝癌作用的分子机制,为槐定酸类化合物抗肝癌作用研究提供有益借鉴。方法:MTT法检测不同浓度、不同时间点的IMB-6G作用肝癌细胞HepG2和SMMC7721后细胞存活率的变化,AnnexinⅤ/PI流式双染法检测细胞凋亡的变化情况。同时用免疫荧光的方法检测细胞中的细胞色素C以及Bax蛋白的转移变化,BH3家族蛋白BIM、PUMA等蛋白的表达变化。荧光素酶报告基因检测Bip和CHOP启动子活性的变化;Western blot及real time-PCR的方法检测IMB-6G作用肝癌细胞后ERS的3条信号通路(PERK、IRE1、ATF6)主要蛋白p-PERK、p-IRE1、ATF6α、CHOP、ASK1、Bip等蛋白的变化。siRNA或特异性小分子抑制剂分别降低PERK、IRE1和ATF6的活性,检测IMB-6G引起的细胞凋亡的变化情况。结果:MTT和流式结果表明,IMB-6G可剂量依赖性诱导肝癌细胞HepG2和SMMC7721细胞凋亡的发生。分析细胞质和线粒体中Bax的蛋白移位结果表明,IMB-6G能使Bax从细胞质移位到线粒体中,说明IMB-6G可引起线粒体途径的细胞凋亡。此外,IMB-6G可剂量和时间性地升高ERS标志蛋白Bip和CHOP的表达,证实IMB-6G可诱导肝癌细胞ERS的发生。深入的研究发现IMB-6G处理肝癌细胞后,PERK和IRE1的磷酸化水平均显著升高,而ATF6蛋白未被切割,说明IMB-6G激活了PERK和IRE1两条信号通路。用siRNA沉默肝癌细胞中PERK和IRE1的表达后,IMB-6G引起的细胞凋亡也明显减少,说明IMB-6G引起的ERS与细胞凋亡具有关联性。结论:IMB-6G是通过ERS介导的UPR途径诱导肝癌细胞凋亡,从而发挥其抗肿瘤的作用。IMB-6G是一个潜在的抗肿瘤候选药物。

关键词：内质网应激槐定酸未折叠蛋白反应细胞凋亡

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格尔德霉素类似物的合成和抗增殖活性研究

格尔德霉素类似物的合成和抗增殖活性研究

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中国药学会生化与生物技术药物专业委员会2015年学术年会暨抗体药物研发高峰论坛

作者：李艳萍陈金晶崔靖武临专王真李卓荣中国医学科学院/北京协和医学院医药生物技术研究所

目的:旨在比较不同类型GA类似物的抗肿瘤潜力。方法:以GA和19-硫甲基-格尔德霉素(19-S-methyl-GA)为原料,合成17-烷氨基-17-脱甲氧基格尔德霉素和17-烷氨基-19-硫甲基-17-脱甲氧基格尔德霉素类似物,并采用MTT法测定化合物在多种肿瘤细胞... 详细信息

目的:旨在比较不同类型GA类似物的抗肿瘤潜力。方法:以GA和19-硫甲基-格尔德霉素(19-S-methyl-GA)为原料,合成17-烷氨基-17-脱甲氧基格尔德霉素和17-烷氨基-19-硫甲基-17-脱甲氧基格尔德霉素类似物,并采用MTT法测定化合物在多种肿瘤细胞系(MCF7、Hela、HCT116和HepG2)中的抗增殖活性;通过流式细胞仪考察活性化合物对肿瘤细胞周期的影响;采用Western Blot方法检测GA及其类似物对肿瘤增殖相关蛋白表达的影响。结果:17-烷氨基-17-脱甲氧基格尔德霉素类化合物1b在MCF7、Hela和HCT116细胞中显示出了与GA相当甚至更强的抗肿瘤活性,而17-烷氨基-19-硫甲基-17-脱甲氧基格尔德霉素类化合物则在四个受试肿瘤细胞系中均显示出明显降低的抑制活性。化合物1b在多株肿瘤细胞中均显示出比GA和17-AAG更强的抗肿瘤活性,其可以引起PARP的裂解诱导细胞凋亡,并且对Hsp90客体蛋白Akt和Her2的降解具有诱导作用。当1b以每日15mg/kg剂量经静脉给药的方式连续三天给予小鼠后,肝功能生化指标相比空白组没有明显差异。结论:19位硫醚取代不利于化合物抗肿瘤作用的保持,化合物1b对多种肿瘤细胞具有强于GA和17-AAG的抗增殖活性,且体内毒性较低,值得进一步研究。

关键词：格尔德霉素类似物合成抗肿瘤肝毒性

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抗肿瘤抗体偶联药物(ADC)的研究进展与策略思考

抗肿瘤抗体偶联药物(ADC)的研究进展与策略思考

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2015医学前沿论坛暨第十四届全国肿瘤药理与化疗学术会议

作者：甄永苏中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所

抗体对相应的抗原具有高度特异性,可与特定的分子靶点结合,研制分子靶向药物。因此,抗体药物应用于治疗疾病有广阔前景。据报道,全球销售额居前10位药物中有6种为抗体药物,其中3种用于治疗类风湿性关节炎,另3种用于肿瘤治疗。当前,抗肿... 详细信息

抗体对相应的抗原具有高度特异性,可与特定的分子靶点结合,研制分子靶向药物。因此,抗体药物应用于治疗疾病有广阔前景。据报道,全球销售额居前10位药物中有6种为抗体药物,其中3种用于治疗类风湿性关节炎,另3种用于肿瘤治疗。当前,抗肿瘤抗体药物研发主要包括:(1)裸抗体,针对各种肿瘤相关分子靶点研制的单克隆抗体治疗剂。用于各种不同肿瘤的治疗;(2)抗体偶联药物,是指抗体与药物连接的偶联物(Antibody-drug conjiugate,ADC);(3)双功能抗体(Bispecific antibody);(4)修饰Fc段的抗体(Fc engineering)。近年来,抗体偶联药物(ADC)的研发与应用的取得新的重要进展,是抗体药物研究中备受关注的领域。迄今已批准临床使用的ADC有:brentuximabvedotin(靶点CD30,治疗霍奇金淋巴瘤,间变性大细胞淋巴瘤。2011年批准)。trastuzumab emtansine(靶点HER2,治疗HER2阳性的转移性乳腺癌。2013年批准)。gemtuzumab ozogamicin(靶点CD33,治疗急性髓细胞性白血病;2000年批准,2010年撤回)。目前处于临床研究III期的ADC有:Inotuzumab ozogamicin(靶点CD22,治疗急性淋巴细胞白血病,非霍奇金淋巴瘤)。Glembatumumabvedotin(靶点GPNMB,治疗乳腺癌,黑色素瘤)。另外,还有为数众多的处于临床研究I期和II期的ADC。ADC的疗效优于相应的裸抗体,这是研制ADC取得进展的基础。实验研究结果表明,ADC与相应的裸抗体比较,在人体癌瘤裸鼠移植模型显示更高的疗效。临床研究也有相似结果。据报道,抗CD30抗体cAC10对间变性大细胞淋巴瘤的总有效率为17%;而相应的ADC为86%。抗HER2抗体trastuzumab对转移性乳腺癌的总有效率为15%-26%;而相应的ADC为26%-64%。利用已在临床应用的抗体与药物偶联,是当前研发ADC的重要方向。ADC研究要考虑靶点的选择以及相应抗体的制备。目前研究ADC所针对的靶点多种多样,可能用于治疗各种各样的癌瘤,如:CD30(霍奇金淋巴瘤),HER2(转移性乳腺癌),CD22(急性淋巴细胞白血病,非霍奇金淋巴瘤),CD19(弥漫型大B细胞淋巴瘤,急性淋巴白血病),CD33(急性髓细胞白血病),CD74,CD138(多发性骨髓瘤),GPNMB(乳腺癌),等。针对两个靶点的双功能抗体的研究近年取得新进展。在双功能抗体基础上,可研究双靶向ADC。目前ADC研究中可用的"弹头"药物为数不多。选用的重要依据是对肿瘤靶细胞有强烈的杀伤活性。如,calicheamicin,auristatin(MMAE),maytansinoids(DM1,DM4),lidamycin,duocarmycin等。从作用机制考虑,目前使用的"弹头"药物均属作用于DNA或微管的活性物质。ADC研发需要扩充"弹头"药物的来源,重视"弹头"药物的多样性。需要探讨利用不同作用机制的活性物质,如:转录因子抑制药物,抑制肿瘤血管生成药物等。针对使用的"弹头"药物,要研究相应的连接方法,可通过化学偶联方法制备抗体药物偶联物或通过DNA重组技术制备抗体与药物构成的基因工程融合蛋白。在研制ADC技术中,确保"弹头"药物的有效载药量(payload)很重要。研制纳米ADC可能是提高有效载药量的新途径。

关键词：抗体偶联药物临床研究 ADC 策略思考

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创新霉素衍生物制备及抗菌活性研究

创新霉素衍生物制备及抗菌活性研究

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中国药学会生化与生物技术药物专业委员会2015年学术年会暨抗体药物研发高峰论坛

作者：刘宗英胡辛欣朱俊泰崔阿龙游雪甫李卓荣中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所

目的设计合成创新霉素前药衍生物,测定其体内外抗菌活性,期望获得药代特性更优、抗耐药菌活性更好的创新霉素衍生物。方法以发酵来源创新霉素为原料,经酯化或酰胺化制备创新霉素衍生物。结果合成创新霉素前药衍生物20个,化合物经核磁共... 详细信息

目的设计合成创新霉素前药衍生物,测定其体内外抗菌活性,期望获得药代特性更优、抗耐药菌活性更好的创新霉素衍生物。方法以发酵来源创新霉素为原料,经酯化或酰胺化制备创新霉素衍生物。结果合成创新霉素前药衍生物20个,化合物经核磁共振氢谱和质谱确证结构。结论创新霉素前药衍生物CV2、CV11对临床多种革兰氏阳性敏感菌及耐药菌的体外抗菌活性是创新霉素的4-64倍,相当或优于阳性对照药替加环素。

关键词：创新霉素衍生物耐药菌抗菌活性

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靶向细胞表面凋亡相关蛋白的抗肿瘤研究进展

靶向细胞表面凋亡相关蛋白的抗肿瘤研究进展

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2015医学前沿论坛暨第十四届全国肿瘤药理与化疗学术会议

作者：陈淑珍中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所

细胞凋亡又称细胞程序性死亡,是机体细胞在生理或病理状态下发生的、受到机体严密调控的、自发的、程序化的死亡过程,是机体胚胎发育和维持组织稳态所必须的。细胞凋亡的失调能诱发肿瘤。许多外界因素能引起细胞凋亡,如放射线、同位素... 详细信息

细胞凋亡又称细胞程序性死亡,是机体细胞在生理或病理状态下发生的、受到机体严密调控的、自发的、程序化的死亡过程,是机体胚胎发育和维持组织稳态所必须的。细胞凋亡的失调能诱发肿瘤。许多外界因素能引起细胞凋亡,如放射线、同位素、抗肿瘤化疗药物等,细胞凋亡已经成为肿瘤治疗的靶点。死亡受体或配体信号传导途径包括CD95信号传导途径、肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)信号传导途径、DR3信号传导途径、TRAIL(TNF-related apoptosis-inducing ligand,肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体)信号传导途径,这几种死亡信号传导通路都有各自的特点,其中CD95和CD95L主要在生理性的凋亡中发挥重要作用,TNFR1在各种组织中广泛表达,DR3主要在脾、胸腺和激活的T淋巴细胞中表达,这些受体分布的特点决定了它们配体应用的局限性。如TNF启动严重的炎症反应,CD95L引起严重的肝损伤,由于它们的严重毒副作用而很难进入临床应用。TRAIL信号传导通路是指以TRAIL为配体,通过与死亡受体结合而启动凋亡信号,最终诱导细胞凋亡。TRAIL受体属于肿瘤坏死因子受体超家族,分为死亡受体和诱捕受体两大类。诱捕受体包括TRAILR3(又称诱捕受体1,decoy receptor 1,DcR1)、TRAILR4(又称诱捕受体2,decoy receptor 2,DcR2)、OPG;死亡受体是指TRAIL-R1和TRAIL-R2,因它们含有死亡结构域而又称为死亡受体4(DR4)和死亡受体5(DR5)。其中,TRAIL与死亡受体(DR4,DR5)结合,可引起细胞凋亡;TRAIL与诱捕受体(DcR1,DcR2)结合不能引起细胞凋亡;OPG能够以自分泌或旁分泌的方式释放;与TRAIL,结合后促进前列现腺癌细胞和多发性骨髓瘤细胞的生长,OPG在某些情况下作为成活因子的形式与TRAIL结合。TRAIL对肿瘤细胞具有选择性杀伤作用,目前有关TRAIL及其受体的激动剂型抗体的研究正在进行。我们针对TRAIL的联合抗肿瘤作用机制及其TRAIL蛋白的改造进行了研究。我们研究结果表明,TRAIL能够与抗肿瘤药物(如硼替佐米)联用产生协同抗肿瘤作用,也能够与小分子肺抗肿瘤药物(和厚朴酚,塞来昔布等)产生协同抗肿瘤作用,同时,我们也构建和表达了一系列以TRAIL为中心的融合蛋白,为以TRAIL为基础的抗肿瘤药物研究打下了基础。目前,细胞凋亡在以免疫为基础的肿瘤治疗中的作用已经成为抗肿瘤治疗的热点,这涉及到程序性死亡分子1及其配体。程序性死亡分子1(programmed death-1,PD-1)主要表达于活化的巨噬细胞、T淋巴细胞和B淋巴细胞表面,程序性死亡分子1配体-1(programmeddeath 1 ligand 1,PD-L1),又称B7同源分子1(B7homologue 1,B7-H1)是PD-1的配体,PD-L1与PD-1结合后,由PD-1传递抑制性信号,调控淋巴细胞的功能。据报道,PD-L1在多种肿瘤细胞表面高表达,通过与浸润到肿瘤部位的淋巴细胞表面的PD-1分子结合,抑制淋巴细胞的功能,是肿瘤发生免疫逃逸的重要原因之一。如果阻断PD-1/PD-L1信号通路,就可能阻止肿瘤发生免疫逃逸,从而有利于肿瘤的治疗。2014年7月,抗PD-1药物nivolumab获准在日本上市销售,这是该药物首次赢得主要市场药监机构的批准,用于治疗不能手术切除黑色素瘤患者。2014年9月,美国FDA批准由默沙东公司开发生产的Keytruda(Pembrolizumab)治疗不再对其它药物响应的晚期或无法切除的黑色素瘤患者,这是阻断PD-1细胞通路的药物;2015年3月4日,美国食品药品监督管理局(以下简称FDA)批准扩大PD-1抑制剂nivolumab的适应症,用于治疗在接受铂类化疗期间或铂类化疗后出现疾病进展的晚期(转移性)鳞状非小细胞肺癌(NSCLC)患者。靶向PD-1抗体的上市引起了科学家及企业家对PD-1/PD-L1通路的研究热潮。总之,针对细胞凋亡相关受体或配体的研究已经在肿瘤治疗方面取得了突破性的进展,也引起科学家的密切关注。

关键词：死亡受体抗肿瘤作用 TRAIL 凋亡相关蛋白细胞凋亡肿瘤研究靶向细胞

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防御素的抗肿瘤活性及其作用机制研究

防御素的抗肿瘤活性及其作用机制研究

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2015医学前沿论坛暨第十四届全国肿瘤药理与化疗学术会议

作者：杜玥尚伯杨盛唯瑾甄永苏中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所

目的防御素(defensins)是一类进化保守的小分子多肽,属于内源性抗微生物多肽。人的防御素主要由粒细胞和上皮细胞产生,具有很强的抗菌、抗病毒及肿瘤细胞毒作用,是人类天然免疫系统的重要组成部分:而在获得性免疫方面主要表现为化学诱... 详细信息

目的防御素(defensins)是一类进化保守的小分子多肽,属于内源性抗微生物多肽。人的防御素主要由粒细胞和上皮细胞产生,具有很强的抗菌、抗病毒及肿瘤细胞毒作用,是人类天然免疫系统的重要组成部分:而在获得性免疫方面主要表现为化学诱导剂诱导或者激活免疫细胞。近年研究发现防御素在肿瘤的发生和发展过程中也发挥着重要的作用,如能够有效的抑制肿瘤细胞增殖,避免肿瘤细胞的免疫逃逸,参与到肿瘤相关的免疫反应调控过程等,因而受到广泛的关注。基于上述,本文主要探讨防御素作为一种新颖的抗肿瘤"弹头"药物的可行性。方法本研究通过基因工程方法构建含有六聚组氨酸标签的防御素,毕赤酵母分泌表达系统制备目的蛋白,并采用HisTrap HP亲和层析柱进行纯化。分别通过细胞克隆形成以及MTT实验检测蛋白抑制胰腺癌细胞MIA PaCa-2和bxPC-3以及肺癌细胞H460和A549的增殖情况。AnnexinV-FITC/PI双染结合流式细胞仪检测蛋白诱导细胞凋亡作用。激光共聚焦分析FITC标记的防御素与MIA PaCa-2细胞和bxPC-3细胞共孵育后,蛋白在细胞中的定位情况。结果构建表达的防御素产量约为20 mg/L,SDS-PAGE检测纯度较高。细胞克隆形成及MTT实验结果均表明防御素能有效的抑制MIAPaCa-2、bxPC-3及H460细胞的增殖,其中MIAPaCa-2细胞最为敏感。Annexin V-FITC/PI双染结合流式细胞仪检测结果表明,MIA PaCa-2细胞和bxPC-3细胞分别经过蛋白处理24 h后,前者表现出显著的浓度依赖性的细胞凋亡和坏死,而对后者无明显作用。此外,激光共聚焦检测结果表明,MIA PaCa-2细胞对蛋白的摄取效果明显优于bxPC-3。结论本文通过毕赤酵母分泌表达系统制备的防御素蛋白具有较好的生物学活性,有效抑制MIA PaCa-2细胞和bxPC-3细胞的增殖,并能够显著诱导MIA PaCa-2细胞的凋亡。初步的实验结果为利用防御素作为抗肿瘤"弹头"药物或者开展相关的肿瘤治疗研究提供一定的依据。

关键词：防御素弹头药物肿瘤治疗

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表没食子儿茶素没食子酸酯与西妥昔单抗联用的体内外抗食管癌细胞Eca-109的作用研究

表没食子儿茶素没食子酸酯与西妥昔单抗联用的体内外抗食管癌细胞...

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2015医学前沿论坛暨第十四届全国肿瘤药理与化疗学术会议

作者：商悦刘旭杰陈淑珍中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所

目的研究表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）与西妥昔单抗联用的体内外抗食管癌Eca-109的作用。方法采用MTT法检测化合物对肿瘤细胞增殖的影响;采用克隆形成法检测EGCG对肿瘤细胞克隆形成的影响;采用流式细胞术检测化合物对肿瘤细胞凋亡... 详细信息

目的研究表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）与西妥昔单抗联用的体内外抗食管癌Eca-109的作用。方法采用MTT法检测化合物对肿瘤细胞增殖的影响;采用克隆形成法检测EGCG对肿瘤细胞克隆形成的影响;采用流式细胞术检测化合物对肿瘤细胞凋亡的影响;采用动物实验评价药物或EGCG对移植于裸鼠的移植瘤的生长抑制作用;同时采用免疫组化的方法检测药物或EGCG对血管形成的影响。结果 EGCG能够剂量依赖性地抑制Eca-109细胞增殖,其IC值为43.22μmol/L。经克隆形成法检测结果表明,EGCG能够明显抑制Eca-109细胞的克隆形成,IC值为28.49μmol/L。EGCG能够显著引起Eca-109细胞凋亡,60μmol/L和80μmol/L EGCG诱导的凋亡百分率分别为（21.70±0.62）%、（57.13±9.09）%。EGCG和西妥昔单抗联用对Eca-109细胞的增殖抑制作用较单独用药组强,具有相加作用。体内实验结果表明,EGCG和西妥昔单抗均能抑制Eca-109裸鼠移植瘤的生长,二者联用存在相加作用。EGCG和西妥昔单抗均能抑制裸鼠移植瘤的血管形成,二者联用血管形成抑制作用较单用组更强。结论 EGCG能够抑制食管癌Eca-109的细胞增殖和克隆形成,具有诱导Eca-109细胞的凋亡作用,与西妥昔单抗联用在体内外均具有相加作用。

关键词：儿茶酚类药物筛选试验抗肿瘤食管肿瘤西妥昔单抗

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环状抗菌肽的合成及活性研究

环状抗菌肽的合成及活性研究

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中国药学会生化与生物技术药物专业委员会2015年学术年会暨抗体药物研发高峰论坛

作者：崔阿龙胡辛欣高岩金洁游雪甫李卓荣中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所

目的设计一条全新的合成路线,通过在2-Cl-Trt树脂上固相环化合成多粘菌素单一组分及衍生物,并测定部分化合物体外抗菌活性。方法采用标准的Fmoc保护策略,以2-Cl-Trt树脂为固相载体,制备该类抗生素。结果合成多粘菌素单一组分4个及衍生物... 详细信息

目的设计一条全新的合成路线,通过在2-Cl-Trt树脂上固相环化合成多粘菌素单一组分及衍生物,并测定部分化合物体外抗菌活性。方法采用标准的Fmoc保护策略,以2-Cl-Trt树脂为固相载体,制备该类抗生素。结果合成多粘菌素单一组分4个及衍生物1个,化合物的结构经质谱和旋光确证。结论该路线可以高效率、高收率合成多粘菌素及衍生物,部分化合物的体外抗阴性菌活性相当于或优于阳性对照药黏菌素(多粘菌素E)。

关键词：环状抗菌肽多粘菌素固相环化抗菌活性

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BMP-2表达上调剂的筛选及其抗骨质疏松活性研究

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中国医药生物技术 2015年第3期10卷 236-241页

作者：李雪虹宫世强韩小婉司书毅王艳宏黑龙江中医药大学药学院哈尔滨150040 中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所北京100050 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所北京100005

目的筛选上调骨形态发生蛋白2（BMP-2）表达的新型小分子活性化合物，为研发抗骨质疏松药物提供先导化合物。方法应用国家新药（微生物）筛选实验室前期建立的BMP-2表达上调剂的高通量筛选模型，对化合物库中10000余个化合物进行筛选，... 详细信息

目的筛选上调骨形态发生蛋白2（BMP-2）表达的新型小分子活性化合物，为研发抗骨质疏松药物提供先导化合物。方法应用国家新药（微生物）筛选实验室前期建立的BMP-2表达上调剂的高通量筛选模型，对化合物库中10000余个化合物进行筛选，以染料木素作为阳性对照；应用实时定量 PCR 和 Western blot 方法检测活性化合物对 U-2OS 细胞 BMP-2 mRNA 和蛋白表达水平的影响。在mRNA 水平考察了活性化合物对 Runx2表达的影响， Western blot 法检测活性化合物对 Smad1/5/8蛋白磷酸化水平的影响；用 PNPP 法检测碱性磷酸酶活性，验证活性化合物体外促进成骨细胞分化的作用。结果在 BMP-2表达上调剂模型细胞上筛选得到活性化合物 E19773，其在模型细胞上的 EC50为46.2μmol/L；实时定量 PCR 结果显示，化合物 E19773能够提高 U-2OS细胞 BMP-2和 Runx2的 mRNA 表达水平；Western blot结果显示，Smad1/5/8蛋白磷酸化水平明显升高；碱性磷酸酶结果表明 E19773能够在体外促进成骨细胞的分化。结论化合物 E19773在0.75~50μmol/L 浓度范围内能明显上调 BMP-2的表达，主要通过 Smads 通路来调控细胞成骨分化，是活性较好的 BMP-2上调剂。

关键词：骨质疏松高通量筛选骨形态发生蛋白质2

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以CD30为靶点的抗体药物

以CD30为靶点的抗体药物

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2015医学前沿论坛暨第十四届全国肿瘤药理与化疗学术会议

作者：王蓉苗庆芳甄永苏中国医学科学院/北京协和医学院医药生物技术研究所肿瘤室

CD30是肿瘤坏死因子受体超家族(Tumor necrosis factor receptor superfamily,TNFRSF)成员之一,属于Ⅰ型跨膜糖蛋白,过表达于霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma,HL)和间变性大细胞淋巴瘤(Anaplastic large cell lymphomas,ALCL);低表达于正常激活的T细胞和B细胞表面;但在正常细胞不表达。早期研究指出CD30参与细胞的活化和分化、NF-κB等信号传导途径,以及T细胞等的免疫激活过程。近年研究发现CD30与细胞的增殖和死亡密切相关,特别是其胞内结构部分可与TNFR相关因子家族(TNFRassociated factor,TRAF)的多个成员相互作用,不仅能够通过JNK和p38途径诱导细胞凋亡,还可以依赖NF-κB途径介导细胞活化。临床上,对恶性和易复发性HL和ALCL的治疗一直未取得良好的效果,而对CD30生物学功能的进一步认识及其较高表达于HL和ALCL细胞表面的重要特征,为开展基于抗CD30的靶向性免疫治疗提供依据。自1997年美国食品药品监督管理局(FDA)批准的第一个单克隆抗体药物利妥昔单抗(Rituximab)用于肿瘤治疗后,基于抗体的免疫治疗逐渐成为该领域的重要策略之一。针对CD30的抗体研究始于20世纪90年代初,Falini等将抗CD30单克隆抗体Ber-H2应用于6位晚期HL患者的治疗性研究,发现放射性同位素标记的Ber-H2可特异性的靶向霍奇金淋巴瘤HRS细胞,但无明显的抗肿瘤效果。之后,Tarrari和Falini等又将Ber-H2与Ⅰ型核糖体失活蛋白Sapofin(S06)连接,获得一种新型的抗CD30的免疫毒素,并且取得较好的肿瘤治疗效果,但明显的人抗鼠抗体反应(HAMA)限制了其广泛的临床应用。为提高抗CD30抗体的临床治疗效果,随后又发展了许多修饰型抗体,包括双特异性抗体、抗体药物偶联物以及人源化抗体等;其中,以SGN-35为代表的抗CD30抗体药物偶联物在临床研究中表现出显著的抗肿瘤效果。2011年8月,FDA批准靶向CD30的SGN-35抗体药物偶联物(Brentuximab Vedotin,商品名为:Adcetris)用于治疗自体干细胞移植失败或两次既往化疗失败且不能接受自体干细胞移植的HL以及一次既往化疗失败的ALCL患者。CD30是恶性血液肿瘤的一个重要分子靶点,因此SGN-35的成功研制具有里程碑意义,为更多新型抗体药物偶联物的开发及应用奠定了重要的基础,并进一步促进免疫治疗研究的发展。基于以上背景并结合我室多年研究抗体药物的工作基础,我们成功的研发了一种新型抗CD30抗体药物偶联物,初步研究结果表明该偶联物与亲本抗体具有一致的抗原结合活性并对CD30阳性的肿瘤细胞有良好的靶向作用和强烈的杀伤活性。该偶联物的成功研发将为我国提供一种具有自主知识产权的新型淋巴瘤候选药物,目前相关研究正在进行中。

关键词：抗体药物偶联物细胞表面

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